目的:研究miRNA-206通过Akt信号通路抑制失神经肌肉萎缩的机制。方法:构建小鼠失神经支配肌肉萎缩模型，荧光定量PCR检测miRNA-206变化；小鼠肌肉原位注射miRNA-206 agomir或miRNA-206 sponge，3 d后小鼠建造肌肉失神经支配模型，7 d后免疫印迹检测肌肉萎缩标志蛋白Fbx32和TRIM63的表达量；以荧光素酶报告实验验证miRNA-206和Akt 3′UTR区域结合。结果:荧光定量PCR结果显示，miRNA-206在失神经导致的肌肉萎缩中下调。小鼠肌肉原位注射miRNA-206 agomir，免疫印迹实验结果显示，肌肉萎缩标志蛋白Fbx32和TRIM63表达明显降低；失神经支配小鼠肌肉原位注射miRNA-206 sponge，Fbx32和TRIM63表达明显升高。通过荧光素酶实验证明了miRNA-206和Akt 3′UTR区域结合。进一步的免疫印迹实验结果显示，抑制miRNA-206表达时，Akt表达下调；过表达miRNA-206时，Akt表达上调。结论:miRNA-206通过Akt信号通路抑制失神经肌肉萎缩。

目的:探讨OA发病机制中潜在的Hub基因、关键miRNAs、生物过程及相关信号通路，为OA的发病机制及治疗提供生物信息学依据。方法:从基因表达综合数据库（GEO）下载OA滑膜组织样本的表达谱芯片，鉴定差异表达基因DEGs，并进行功能富集分析。构建蛋白-蛋白相互作用网络（PPI），STRING和Cytoscape进行模块分析，进一步鉴定Hub基因，并对Hub基因进行更深一步的miRNAs挖掘。结果:最终鉴定出与OA进展相关的9个Hub基因[细胞因子信号转导抑制因子（SOCS）3、转导素重复序列包含蛋白（BTRC）、F-框蛋白32（FBXO32）、KLHL22、UBE3A、HUWE1、UBR4、ANAPC5、TRIM50]和2个关键miRNAs（hsa-miR-103a-3P、hsa-miR-107），可能是OA发病机制中的潜在生物标志物。信号转导、RNA聚合酶Ⅱ启动子的转录正调控和蛋白丝氨酸/苏氨酸酶活性与OA的发病机制具有一定的相关性。此外，分析结果表明cAMP信号通路和Rap1信号通路也参与了OA的进展。结论:潜在生物学分子、生物过程及相关通路对于OA的病因研究及治疗研究具有重要的指导意义。

目的:分析保留子宫圆韧带及补片完整的经腹腹膜前疝修补术（TAPP）的可行性和有效性，解决女性腹股沟疝TAPP修补的子宫圆韧带是否保留的问题。方法:回顾性分析2015年3月至2019年3月广东省中医院行TAPP术式的32例女性腹股沟疝患者的临床资料，根据术中使用裸化子宫圆韧带及T型切开腹膜两种手术方法分成裸化子宫圆韧带组（试验组）和T型切开腹膜组（对照组），术中技术要求需达到既保留子宫圆韧带同时不修剪补片。对比2组手术时间、术中出血量、术后疼痛发生率及术后复发率。结果:试验组患者20例，对照组患者12例。试验组单侧手术时间（69.21±30.51）min，对照组（44.67±16.72）min，差异有统计学意义（P<0.05）。试验组和对照组术中出血量[（10.05±11.51）ml比（10.58±8.45）ml]，平均住院时间[（4.05±2.33）d比（4.42±2.64）d]比较，差异均无统计学意义（P>0.05）；2和3分患者占比和并发症发生率比较，差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:女性腹股沟疝行TAPP手术可保留子宫圆韧带，同时不必修剪补片，手术方法可行，手术效果良好。

TRIM32(tripartite motif protein 32)在细胞分化和增殖过程中发挥重要作用,并且参与了多种生物学过程,包括信号转导、细胞凋亡和基因表达调控等.本课题组前期研究发现,TRIM32基因敲除小鼠对甲基苯丙胺(methamphetamine,MA)不易成瘾,但具体机制尚不清楚.本研究旨在探讨siRNA(small interfering RNA)转染沉默TRIM32基因对甲基苯丙胺成瘾致神经细胞凋亡的影响及其机制.本文以PC12细胞为研究对象,利用siRNA转染技术沉默TRIM32基因的表达,建立分组:正常对照组,MA处理组,沉默TRIM32组,沉默TRIM32+MA处理组.采用原位末端转移酶标记技术(terminal deoxynucleotyl transferase-mediated dUTP-biotin nick end labeling assay,TUNEL 染色)检测各组细胞的凋亡情况,结果显示,沉默TRIM32+MA处理组细胞较MA处理组凋亡比例下降(P＜0.01),说明沉默TRIM32基因可以抑制MA诱导的细胞凋亡.采用线粒体膜电位试剂盒检测各组线粒体膜电位的变化,结果显示,沉默TRIM32+MA处理组细胞较MA处理组线粒体膜电位升高(P＜0.05),表明沉默TRIM32基因可以调节MA诱导的线粒体膜电位的降低.细胞免疫荧光和West-ern 印迹结果显示,沉默TRIM32+MA处理组较MA处理组胱天蛋白酶-3(caspase-3)、剪切胱天蛋白酶-3(cleaved-caspase-3)和细胞色素C(Cytochrome c,Cyt-C)蛋白质水平显著下调(P＜0.01),磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)、磷酸化蛋白质激酶 B(phospho-protein kinase B,p-AKT)显著上调(P＜0.01),说明沉默TRIM32基因抑制细胞凋亡可能通过调控PI3K/AKT信号通路来实现.在此基础上深入研究,实验中加入PI3K/AKT抑制剂LY294002,Western印迹检测结果证实,LY294002可部分阻断沉默TRIM32基因对细胞凋亡的调控作用(P＜0.05),进一步证实了沉默TRIM32基因通过激活PI3K/AKT信号通路抑制MA诱导的线粒体途径凋亡.综上,沉默TRIM32基因可抑制MA成瘾引发的线粒体凋亡途径,从而发挥神经保护作用,其机制可能与PI3K/AKT信号通路有关.

胰腺癌是一种恶性程度很高的肿瘤,往往预后较差,其形成和发展的病理生理学分子机制尚不完全清楚.最新的研究表明,mTOR/p70S6K信号通路在胰腺癌的发生、发展进程中发挥了重要作用,例如TEOA可通过抑制mTOR/p70S6K信号通路从而诱导胰腺导管腺癌细胞的自噬性细胞死亡;ibr-7抑制TRIM32的过程可通过mTOR/p70S6K信号通路增加胰腺癌细胞对吉西他滨的敏感性;CENPM的表达增加可通过mTOR/p70S6K信号通路促进胰腺肿瘤的转移;胜田高良姜可通过调节癌细胞中AMPK和Akt/mTOR/p70S6K信号通路诱导胰腺癌细胞的生长抑制、凋亡和自噬;人阳性辅激活因子4可通过mTOR/p70S6K信号通路影响胰腺导管腺癌的病理进展和预后等.mTOR/p70S6K信号通路有望成为胰腺癌治疗的一个重要靶点.

目的 探讨TRIM32在皮肤黑色素瘤(CMM)中的表达及其临床病理价值.方法 应用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(RT-PCR)检测TRIM32在人黑色素瘤细胞系(A375,MV3)以及人正常皮肤细胞系(HACAT)中的表达情况;回顾性分析31例CMM患者,应用免疫组化方法检测TRIM32在CMM患者癌组织和癌旁组织中的表达,统计患者的临床资料,分析TRIM32表达与临床特征的相关性,采用Kaplan-Meier生存分析和Cox回归模型进行预后分析.结果 与HACAT正常皮肤细胞相比,TRIM32 mRNA表达水平在A375黑色素瘤细胞中明显升高(P＜0.001),在MV3黑色素瘤细胞中无明显差异(P＞0.05).CMM癌组织中TRIM32蛋白表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.001).CMM患者中TRIM32的表达水平与肿瘤Breslow厚度(r=0.771,P＜0.001)、Clark分级呈显著的正相关(r=0.635,P＜0.001),与患者的性别、有无溃疡、年龄、肿瘤原发部位均无明显相关性(P＞0.05).TRIM32表达水平、肿瘤Breslow厚度、Clark分级与CMM患者生存时间相关(P＜0.01),建立COX回归模型,TRIM32表达水平与CMM患者预后关联显著(P＜0.05).结论 TRIM32在A375黑色素瘤细胞和CMM患者癌组织中呈高表达.TRIM32表达水平是影响CMM患者预后的独立风险因素,TRIM32可作为CMM预后判断的参考指标.

目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠骨骼肌萎缩可能存在的分子机制.方法 按随机数字表法将6～8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组和COPD模型组,每组各10只,均在标准环境下饲养.COPD模型组用香烟烟熏12周,正常组不予特殊干预,通过肺脏病理验证COPD小鼠造模是否成功.免疫组化分析两组小鼠骨骼肌中自噬相关蛋白Beclin1及P62的表达和肌肉萎缩相关分子标记物FBXO32及TRIM63的表达;免疫荧光分析炎症标志物NF-κB P65入核表达情况.结果 烟熏12周造模成功,肺脏病理结果提示COPD模型组平均肺泡间隔里衬(83.00±12.71)明显高于正常对照组(30.60±4.39),差异有统计学意义(P<0.001).免疫组化分析显示,在COPD模型组小鼠骨骼肌中,自噬相关分子Beclin1较正常对照组升高,P62较正常对照组下降,肌肉萎缩相关分子标记物FBXO32及TRIM63均明显高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.001).免疫荧光分析显示,在COPD模型小鼠骨骼肌中,NF-κB P65入核表达(18.00±2.55)明显高于正常对照组(7.60±1.52),差异有统计学意义(P<0.001).结论 COPD小鼠骨骼肌萎缩潜在的分子机制可能与香烟烟雾激活的自噬调控炎症因子表达有关.

目的 探讨三结构域蛋白14(TRIM14)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 应用免疫组织化学的方法测定TRIM14在32例胰腺癌及相应的癌旁组织的表达,应用Western blot方法检测TRIM14在8例胰腺癌及癌旁组织中的表达,探讨TRIM14和胰腺癌生物学特性及预后之间的关系.结果 TRIM14在胰腺癌组织的表达明显上调(t=19.520,P＜0.05),TRIM14在胰腺癌组的阳性表达率为56.2％(18/32),显著高于其在癌旁组织的阳性表达率(P＜0.05).TRIM14在胰腺癌组的阳性表达与胰腺癌患者的性别、年龄及肿瘤部位无明显相关(P＞0.05),而与胰腺癌的临床分期、分化程度及肿瘤大小明显相关(P＜0.05).TRIM14的高表达的胰腺癌患者的生存期明显低于阴性表达(x2=5.180,P＜0.05).结论 TRIM14在胰腺癌中的表达升高,其在胰腺癌的发生,发展和侵袭中发挥作用.TRIM 14的阳性表达提示胰腺癌患者预后不良.

目的 观察三结构域蛋白28(TRIM28)基因及蛋白在肝癌组织及癌旁肝组织中的表达,探讨其与肝癌患者临床病理特征之间的相关性.方法 收集20例在广州红十字会医院手术切除的肝癌与相应癌旁组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测TRIM28基因在这些标本中的表达水平,记录相关结果并加以统计学分析;收集广州红十字会医院近年手术切除的肝癌石蜡标本40例,并记录该40例肝细胞癌(HCC)患者的临床病理特征,每例患者分别选取2张石蜡切片(肝癌组织与相应的癌旁肝组织)以免疫组织化学方法检测TRIM28蛋白的表达水平,整理相关结果并分析TRIM28蛋白的表达上调与HCC患者临床病理特征之间的相关性.结果 TRIM28在肝癌组织中的表达量明显上调(肝癌组织16.25±7.39对比癌旁组织5.83 ±5.00,P＜0.01);肝癌组织中TRIM28阳性表达率(86％)高达明显高于癌旁组织(32％);TRIM28可能参与肝癌的侵袭转移过程(x2=5.090,P＜0.05).结论 TRIM28在肝癌组织中表达上调,其表达上调与肝癌的TNM分期的侵袭转移潜能相关.

目的:观察电针对糖尿病大鼠腓肠肌中肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1/Trim63)、肌肉萎缩盒F蛋白32(Fbxo32)、肌球蛋白重链-Iia(Myh2)、肌球蛋白重链-Iib(Myh4)及肌球蛋白重链-I(Myh7)表达的影响,探讨电针延缓糖尿病肌萎缩的机制.方法:Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组12只.腹腔注射链脲佐菌素制备大鼠糖尿病肌萎缩模型.电针组造模3周后电针双侧"足三里""阴陵泉""肾俞"穴,每次10 min,每日1次,每周6次,连续干预2周.各组分别在造模第0、1、2、3、4、5周测定大鼠体质量、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).造模后第5周称取大鼠双侧腓肠肌湿重,HE染色测定腓肠肌纤维横截面积,实时荧光定量PCR检测各组大鼠腓肠肌中MuRF1、Fbxo32、Myh2、Myh4和Myh7 Mrna的相对表达量.结果:与对照组比较,造模后第1至5周,模型组大鼠FBG水平、HOMA-IR显著升高(P<0.05),FINS水平和体质量显著降低(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠FBG和HOMA-IR降低(P<0.05),体质量显著增加(P<0.05).造模5周后,与对照组比较,模型组大鼠腓肠肌湿重、肌纤维横截面积,Myh2、Myh4和Myh7 Mrna的相对表达量显著降低(P<0.05),MuRF1和Fbxo32 Mrna的相对表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠腓肠肌湿重、肌纤维横截面积显著增加,Myh2、Myh4和Myh7 Mrna的相对表达量上调(P<0.05),MuRF1和Fbxo32 Mrna相对表达量降低(P<0.05).结论:电针干预大鼠双侧"足三里""阴陵泉""肾俞"穴可能通过调控MuRF1、Fbxo32、Myh2、Myh4和Myh7 Mrna的表达,延缓肌球蛋白重链的降解,进而延缓糖尿病肌萎缩的发展.