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单细胞测序揭示Ly6E分子对乳腺癌4T1细胞移植瘤微环境中DC浸润及功能的抑制作用
编辑人员丨1周前
目的:本研究利用单细胞RNA测序分析技术(scRNA-seq)初步探索乳腺癌4T1细胞表达淋巴细胞抗原6复合物E(Ly6E)调控肿瘤免疫微环境(TIME)的潜在机制.方法:利用CRISPR-Cas9技术构建Ly6e基因敲除小鼠乳腺癌4T1细胞(Ly6E-KO),观察其和野生型细胞(Ly6E-WT)体外增殖和体内生长能力的差异.流式细胞术分选两类肿瘤组织中的CD45阳性细胞,再进行scRNA-seq分析.对于测序结果,首先利用Seurat软件包筛选差异表达基因谱,根据标记基因进行注释;再利用Cellchat和Monocle2软件分析细胞互作关系和特定免疫细胞的演化轨迹.结果:与Ly6E-WT相比,Ly6E-KO体外增殖能力无显著差异,但体内生长能力显著降低(P<0.001).ScRNA-seq分析显示,Ly6E-KO移植瘤浸润DC比例显著高于Ly6E-WT,且DC处于更加活跃的增殖和分裂状态;三种DC亚群(pDC、cDC1和cDC3)与T细胞均存在显著的互作关系.同时发现,Ly6E-KO肿瘤中浸润T淋巴细胞增殖、活化及效应相关的基因表达水平均升高,提示Ly6E-KO具有更强抗肿瘤能力.最后,本研究对人类乳腺癌队列的scRNA-seq数据进行了分析,进一步证实了上述发现.结论:肿瘤细胞Ly6e基因敲除后可通过增加TIME中DC活化及浸润,继而增强机体抗肿瘤免疫应答.
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编辑人员丨1周前
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恩沃利单抗治疗晚期微卫星高度不稳定/错配修复缺陷结肠癌长获益后再发小细胞肺癌1例
编辑人员丨1周前
患者男,61岁,因"腹胀、腹泻伴右下腹疼痛1个月"于2017年5月8日就诊。既往体健,吸烟史10年(平均20支/d),饮酒史8年(平均100 ml/d),一妹妹有乳腺癌病史。初诊时腹部CT示,回盲部占位性病变,肠系膜淋巴结肿大。癌胚抗原(carcinoembryonic antigen, CEA)7.29 ng/ml。5月21日行剖腹探查+右半结肠切除+腹腔淋巴结清扫+末段回肠横结肠吻合术。术后病理诊断:(结肠)黏液腺癌,部分呈印戒细胞癌,侵及肠壁全层。免疫组化染色:癌细胞错配修复蛋白同源物1(mutL protein homolog 1, MLH1)、减数分裂后分离增强蛋白2弱阳性,错配修复蛋白同源物2(mutS protein homolog 2, MSH2)、错配修复蛋白同源物6阴性,Ki-67指数约为70%,肠周淋巴结可见转移癌(5/17)。术后病理分期为T3N2aM0 ⅢB期。术后3个月复查肿瘤标志物CEA,在正常范围。6—12月接受奥沙利铂+卡培他滨方案辅助化疗8个周期。末次化疗后3个月(2018年3月6日)常规复查腹部增强CT,见腹主动脉旁增大淋巴结,转移不除外。进一步行正电子发射计算机断层显像(positron emission tomography-computed tomography, PET-CT)检查,示腹腔多发增大淋巴结,代谢异常增高,考虑转移(图1)。患者当时无特殊不适症状,未接受进一步治疗。2018年6月患者开始出现腰腹部疼痛并逐渐加重,伴体重减轻,口服阿片类止痛药物症状缓解。8月21日行腹部增强CT检查,示吻合口周围肠管扩张,腔内积液,并可见气液平面,考虑肠梗阻;腹主动脉旁淋巴结较前明显增大,局部呈肿块样改变,与邻近降主动脉及脊柱分界不清(图2)。对手术标本进行基因检测,结果提示为微卫星高度不稳定(high frequency microsatellite instability, MSI-H),肿瘤突变负荷为36.67个/Mb,检测到MLH1 K196fs、MSH2 Y757X基因突变,未检测到Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物、神经母细胞瘤RAS病毒癌基因同源物、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B基因突变。遗传性肿瘤变异基因检测未见致病性胚系突变。患者入组了恩沃利单抗纳米抗体Ⅰb期临床试验,于9月3日开始接受恩沃利单抗治疗,180 mg(2.5 mg/kg体重),皮下注射,每周1次。11月21日(治疗后3个月)首次疗效评价达部分缓解(partial remission, PR)。之后恩沃利单抗维持治疗2年,末次用药日期为2020年10月12日,后停药观察,维持PR,截至影像学末次疗效评价日期(2022年7月20日)依然未见复发(图2),期间未出现明显的免疫治疗相关不良反应。
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编辑人员丨1周前
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银屑病患者皮损间充质干细胞的培养鉴定及其表达HES1和CXCL6的研究
编辑人员丨1周前
目的:培养鉴定银屑病患者皮损处真皮间充质干细胞(DMSC),并研究DMSC的发状分裂相关增强子1(HES1)和趋化因子配体6(CXCL6)表达情况。方法:分离培养15例银屑病患者皮损及18例健康人(健康对照组)皮肤的DMSC,利用流式细胞仪进行表型鉴定,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹(Western blot)检测HES1和CXCL6的mRNA及蛋白表达水平,两组间比较采用 t检验。 结果:银屑病组DMSC形态与健康对照组无差异,但HES1和CXCL6基因的mRNA水平分别是对照组的3.56和3.44倍,且差异有统计学意义( P < 0.05)。在蛋白水平,银屑病组DMSC中HES1和CXCL6的表达明显高于对照组( P < 0.05)。 结论:银屑病患者皮肤DMSC HES1及CXCL6表达升高可能参与银屑病的发病。
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编辑人员丨1周前
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热疗通过下调Notch1/Jagged1/Hes1诱导舌鳞癌细胞凋亡的初步研究
编辑人员丨1周前
目的:观察舌鳞癌细胞Cal-27短时多次热疗的最佳间隔时间并探究Notch信号通路在热疗诱导舌鳞癌细胞凋亡中的作用。方法:将Cal-27细胞置入42℃培养箱热疗45 min,分别在6、12、24、48、72 h后进行第2次热疗,并在热疗结束后0、12、24 h通过CCK-8实验检测细胞增殖能力变化。确定最佳热疗间隔时间后进行多次热疗,分别通过CCK-8实验及流式细胞术检测热疗对Cal-27细胞增殖及凋亡能力的影响。通过实时反转录PCR实验及蛋白质印迹法实验分析Notch1、Jagged1、发状分裂相关增强子1(Hes1)的mRNA及蛋白表达变化。实验数据以 xˉ±s表示,两组间比较采用单因素方差分析。 结果:每隔12 h给予42℃ 45 min热疗1次可持续抑制舌鳞癌Cal-27细胞的增殖( P<0.05)。在热疗持续进行7次后与对照组相比,热疗可明显抑制舌鳞癌Cal-27细胞的增殖并诱导其凋亡( P<0.05),且热疗组细胞的Notch1、Jagged1、Hes1的mRNA及蛋白表达均显著降低( P值均<0.05)。 结论:12 h热疗1次为抑制舌鳞癌Cal-27细胞增殖的最佳间隔时间,其机制可能与热疗通过抑制Notch信号通路的表达诱导舌鳞癌Cal-27细胞凋亡有关。
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编辑人员丨1周前
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电针百会穴和大椎穴对脑瘫大鼠学习记忆能力及miR-126介导的血管内皮生长因子/Notch1通路的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨电针百会穴和大椎穴对脑瘫大鼠学习记忆能力及miR-126介导的血管内皮生长因子(VEGF)/Notch1通路的影响。方法:选取健康7日龄SD雄性大鼠54只,按照随机数字表法将其分为假手术组、模型组、电针组,每组18只。模型组、电针组采用左颈总动脉(LCCA)结扎结合缺氧的方法制备脑瘫大鼠模型。造模后24 h,电针组大鼠予以百会穴和大椎穴电针干预,共14次,隔日1次,持续至第28天。造模后第29天,采用Morris水迷宫法检测3组大鼠的学习记忆能力。采用免疫组化染色法观察大鼠海马组织VEGF及血管内皮细胞生长因子受体-2(VEGFR-2)的表达量。采用Western blot法检测大鼠海马组织Notch1、发状分裂相关增强子1(Hes1)蛋白水平。采用RT-qPCR法检测大鼠海马组织miR-126的表达水平。结果:与假手术组比较,模型组大鼠的学习记忆能力明显降低( P<0.05),miR-126的表达水平下调,VEGF、VEGFR-2的表达水平上调,Notch1、Hes1蛋白表达水平上调( P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠的学习记忆能力明显改善( P<0.05),miR-126的表达水平上调,VEGF、VEGFR-2的表达水平上调,Notch1、Hes1蛋白表达水平上调( P<0.05)。 结论:电针百会穴和大椎穴可以改善脑瘫大鼠的学习记忆能力,其机制可能与miR-126调控VEGF/Notch1通路,进而促进血管新生有关。
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编辑人员丨1周前
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Notch1/Hes1信号通路在高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用
编辑人员丨1周前
目的:评价缺刻基因1(Notch1)/发状分裂相关增强子1(Hes1)信号通路在高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用。方法:取H9c2心肌细胞在含10%胎牛血清的低糖DMEM培养基中培养、传代,采用随机数字表法分为6组( n=12):对照组(C组)用低糖培养基孵育72 h;缺氧复氧组(H/R组)用低糖培养基孵育72 h后,置于37 ℃、95%N 2-5%CO 2培养箱中缺氧24 h,然后立即置于37 ℃、95%O 2-5%CO 2培养箱中复氧6 h;缺氧复氧+Jagged-1组(H/R+J组)在低糖培养基中加入Notch1/Hes1信号通路特异性激动剂Jagged-1 5 μg/ml孵育72 h,然后进行缺氧复氧处理;高糖组(HG组)用高糖培养基(葡萄糖浓度33 mmol/L)孵育72 h;高糖+缺氧复氧组(HG+H/R组)用高糖培养基孵育72 h,然后进行缺氧复氧处理;高糖+缺氧复氧+Jagged-1组(HG+H/R+J组)用高糖培养基和Jagged-1 5 μg/ml共孵育72 h,然后进行缺氧复氧处理。于复氧6 h时,收集细胞培养液上清,测定SOD和LDH的活性,采用CCK-8法测定细胞活力,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率,采用Western blot法检测Notch1、Hes1和c-caspase-3表达水平。 结果:与C组比较,H/R组、H/R+J组和HG组细胞活力和SOD活性降低,细胞凋亡率和LDH活性升高,H/R组和H/R+J组细胞Notch1、Hes1和c-caspase-3表达上调,HG组细胞Notch1和Hes1表达下调,c-caspase-3表达上调( P<0.05);与H/R组比较,H/R+J组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和LDH活性降低,细胞Notch1和Hes1表达上调,c-caspase-3表达下调,HG+H/R组细胞活力和SOD活性降低,细胞凋亡率和LDH活性升高,细胞Notch1和Hes1表达下调,c-caspase-3表达上调( P<0.05);与HG组比较,HG+H/R组和HG+H/R+J组细胞活力和SOD活性降低,细胞凋亡率和LDH活性升高( P<0.05),HG+H/R组细胞Notch1和Hes1表达下调,c-caspase-3表达上调( P<0.05);与HG+H/R组比较,HG+H/R+J组细胞活力和SOD活性升高,细胞凋亡率和LDH活性降低,细胞Notch1和Hes1表达上调,c-caspase-3表达下调( P<0.05);与H/R+J组比较,HG+H/R+J组细胞活力和SOD活性降低,细胞凋亡率和LDH活性升高,细胞Notch1和Hes1表达下调,c-caspase-3表达上调( P<0.05)。 结论:Notch1/Hes1信号通路激活是高糖心肌细胞缺氧复氧损伤的内源性保护机制。
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编辑人员丨1周前
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微小RNA-195靶向调控Delta样配体4抗结直肠癌分子机制研究
编辑人员丨1周前
目的:观察微小RNA(microRNA,miR)-195调控结直肠癌中Notch通路配体Delta样配体4(Dll4)表达,探讨其作用靶点,明确miR-195通过Notch通路抗结直肠癌的分子机制。方法:收集北京大学人民医院胃肠外科2010年11月至2011年2月56例行结直肠癌根治术切除的标本,3、应用芯片技术筛选6例结直肠肿瘤组织和正常肠黏膜组织中micro-RNA的表达差异,用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-195在组织中相对表达量,应用固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测56例结直肠癌组织及其邻近正常肠黏膜中Notch通路中Dll4蛋白表达;采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-195与Dll4 3’端非编码区(3’UTR)区的相互作用及活性,采用基因过表达miR-195(40 pmol/L)处理结肠癌细胞系SW480,运用流式细胞仪观察其对细胞凋亡的影响,Western blot检测通路相关蛋白Dll4、锯齿状蛋白1(Jagged1)、Notch受体胞内段(NICD)、细胞周期蛋白(Cyclin) D1、转录因子发状分裂相关增强子1(HES1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)、核因子-κB(NF-κB)的表达。组间比较采用方差分析(ANOVA),独立样本 t检验比较蛋白表达量差异,统计学方法分别采用独立样本 t检验、配对样本 t检验及单因素方差分析。 结果:结直肠癌组织中miR-195表达水平明显低于正常肠黏膜,而Dll4蛋白表达水平高于正常肠黏膜,分别为正常肠黏膜的0.34倍(0.341±0.008)及1.92倍(1.922±0.003) ( t=3.116、2.374, P<0.05),差异均有统计学意义,体外转入miR-195后,Dll4荧光素酶活性低于对照组(0.442±0.010、1.010±0.002, t=4.305, P<0.01),差异有统计学意义,miR-195和γ-分泌酶抑制剂(DAPT)都可阻断Notch1通路,抑制SW480细胞的增殖(3.1%比17.3%, t=4.232, P<0.01),差异有统计学意义,诱导其凋亡(13.7%比48.3%, t=8.355, P<0.01),两者具有协同作用( t=7.474, P<0.01),差异有统计学意义。同时Notch通路相关蛋白NICD、Hes-1随作用时间延长而表达下降。 结论:结直肠癌中miR-195及Dll4呈拮抗性表达,与其病理学特征密切相关,Dll4为miR-195调控的下游靶基因,miR-195通过负性调控Dll4/Notch信号通路抗结直肠癌。
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编辑人员丨1周前
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短程抗精神病药治疗对首次发病未服药精神分裂症患者丘脑-皮质环路的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨短程抗精神病药治疗对首次发病未服药精神分裂症患者丘脑-皮质环路的影响。方法:在短程抗精神病药治疗前后,采集83例首次发病未服药精神分裂症患者的静息态功能磁共振成像数据,同时招募匹配的117名健康对照,评估药物治疗前后的丘脑-皮质环路与临床症状的变化。采用左右两侧半球丘脑为种子点,与全脑体素行功能连接分析。使用Spearman相关分析探索丘脑-皮质环路功能连接变化与临床症状变化之间的关系。结果:(1)基线期,与健康对照相比,精神分裂症患者丘脑-前额叶环路(包括额中回/下回、扣带中回/后回、顶下小叶等)的功能连接显著降低,同时丘脑-感觉运动区环路(包括中央前回、颞上回/中回/下回、海马旁回、枕中回等)的功能连接显著增强(均 P<0.05,FDR校正)。(2)短程抗精神病药治疗后,精神分裂症患者基线期异常降低的丘脑-前额叶连接显著增强,而基线期异常增强的丘脑-感觉运动区连接显著降低(均 P<0.05,FDR校正)。(3)进一步相关分析显示,治疗后丘脑-前额叶环路的连接增强及丘脑-感觉运动区环路的连接降低均与阳性与阴性症状量表总分的降低显著相关( r=0.435, P=0.014; r=0.394, P=0.028,未校正)。 结论:首次发病未服药精神分裂症患者丘脑-皮质环路异常以丘脑-前额叶环路连接降低和丘脑-感觉运动区环路连接增强为特征;短程抗精神病药治疗能部分改善丘脑-皮质环路的功能异常,且与临床症状的缓解相关。
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编辑人员丨1周前
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儿童原发性右心室滑膜肉瘤1例
编辑人员丨1周前
男,13岁2个月,因"活动后胸闷7 d"就诊于昆明市儿童医院,平日不能耐受长跑。入院查体:心率50次/min,呼吸20次/min,血压120/79 mmHg (1 mmHg=0. 133 kPa),体重48.5 kg;一般情况可,口周无发绀,头颈部未触及肿块,心前区可闻及收缩期杂音,心界无扩大。双肺呼吸音清,腹平软,无压痛,胸腹部未触及包块,四肢活动正常。经胸超声心动图提示右心室内,三尖瓣前叶、隔叶交界处有50 mm× 43 mm×29 mm不均匀团块样回声(图1A),致右室流出道中度梗阻,三尖瓣轻至中度关闭不全;心脏增强CT提示肺动脉近端、右心室内多发团片状病灶,最大直径约49 mm(图1B)。术前心电图提示窦性心律过缓、窦性心律不齐。血常规、肝肾功能、心肌酶、头颈胸CT及腹部B型超声未见异常。患儿右心室占位性病变诊断明确,因存在右室流出道梗阻风险,完善术前检查后行手术治疗。建立体外循环后,经右心房切口进入心腔,暴露右心室,见右心室面室间隔靠近三尖瓣前瓣、隔瓣交界处有一55 mm×50 mm×30 mm肿块,呈不规则分叶状灰白色组织,基底与三尖瓣隔瓣、前瓣及室间隔组织融合,肿瘤向右心室流出道生长,致使右室流出道狭窄。术中沿肿瘤边缘切除肿瘤,尽量保留室间隔、三尖瓣等重要组织,解除右室流出道狭窄,手术切除肿物组织送检。手术顺利,术后病理检查报告显示:镜下肿瘤细胞呈束状、交织状或旋涡状排列,细胞核为梭形、短梭形或圆形,可见细胞核分裂,部分细胞核为空泡状,细胞密集,部分细胞呈腺样排列(图2)。免疫组织化学检查:上皮细胞膜抗原(epithelial membrane antigen,EMA)(±)、细胞角蛋白(cytokeratin,CK)7(±)、CK19(±)、B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, BCL2)(+)、增殖细胞核抗原Ki67(±)、波形蛋白(+)、白细胞分化抗原(cluster of differentiation,CD) 99(+)、转导样增强子-1 (transduction-like enhancer-1, TLE 1)(+)、钙视网膜蛋白(+)。基因检测提示SS18基因断裂(图3)。最终确诊为右心室滑膜肉瘤(双向分化型)。患儿术后第1天复查心电图提示:窦性心动过速、不完全性右束支传导阻滞、部分导联ST~T段改变、Q~T波间期延长。术后恢复良好,无胸闷、气促症状。建议行放化疗进一步治疗,但被家属拒绝,后接受5个疗程安罗替尼治疗,随诊至术后6个月复查心脏彩色超声发现位于三尖瓣隔瓣根部存在约29 mm× 19 mm肿块(图4),考虑肿瘤复发,行全身正电子发射计算机X线断层扫描技术未见肿瘤其他部位转移,后改用阿帕替尼继续治疗。
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编辑人员丨1周前
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胸膜孤立性纤维瘤
编辑人员丨1周前
患者,55岁女性,因“胸闷、右胸痛5 d”就诊于潍坊市第二人民医院,查体:右下肺叩诊浊音,右肺呼吸音低。胸部增强CT示右侧胸膜占位,大小约88 mm×90 mm,密度不均,内见低密度影(图1),增强扫描可见明显强化,内见低密度无强化区,周围组织受压,右侧胸腔积液,右肺膨胀不全(图2),邻近右侧第6肋骨骨质破坏。彩超示右侧胸腔积液3.5 cm。胸水生化提示渗出液。胸膜肿物活检病理示肿瘤组织可见瘤细胞弥漫分布,细胞较丰富,瘤细胞梭形,核不规则形,深染,偶见核分裂,坏死不明显;免疫组化:钙结合蛋白抗体(-)、WT-1(-)、波形蛋白(+)、结蛋白(-)、胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3(-)、信转导和转录激活因子6(+)、CD34(+)、B淋巴细胞瘤-2基因(+)、Ki-67为5%、S-100(-),诊断:符合恶性潜能未定或低度恶性梭形细胞肿瘤-孤立性纤维性肿瘤。临床诊断胸膜孤立性纤维瘤(SFTP)。SFTP是起源于胸膜间皮下组织中树突状间质细胞的肿瘤,多为良性或交界性,10%~20%为恶性。常见临床症状有咳嗽、胸痛、呼吸困难、发热、体重下降等。胸部CT表现具有一定特征性,病灶多单发,多有包膜,边界清楚,恶性征象为边界不清、部分坏死、邻近组织侵犯,较小病变密度多均匀,较大病变可见黏液囊性变,增强扫描呈“地图样”强化、瘤内葡样血管、瘤周血管蒂。
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编辑人员丨1周前
