目的:探讨紫草素(SK)对糖皮质激素性骨质疏松症的潜在治疗作用和调控机制。方法:按照1 mg/kg剂量给予雄性C57BL/6小鼠肌注地塞米松(DEX)诱导构建糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)模型，micro-CT检测骨微结构，免疫组织化学检测骨小梁osterix(OSX)和osteocalcin(OCN)表达；蛋白质印迹法(Western blot)检测骨组织中Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号相关蛋白表达。培养小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)，用DEX(1 mol/L)、SK(50、100、200 mol/L)处理BMSCs；细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性；茜素红染色法检测成骨矿化能力；用Wnt信号抑制剂XAV939评估紫草素通过Wnt/β-catenin信号通路治疗GIOP。两组间比较采用 t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:Micro-CT结果显示，对照组、DEX组和DEX+SK组小鼠骨体积分数分别为(24.66±16.31)%、(14.76±3.99)%、(21.04±9.73)%，组间比较差异有统计学意义( F＝10.03， P<0.05)；皮质骨厚度分别为(0.60±0.01)、(0.30±0.01)、(0.52±0.01) mm，组间比较差异有统计学意义( F＝11.13， P<0.05)；骨小梁数量分别为(2.92±0.38)、(1.34±0.10)、(2.66±0.27)/mm，组间比较差异有统计学意义( F＝12.54， P<0.05)；骨小梁厚度分别为(0.210±0.002)、(0.100±0.001)、(0.190±0.001) mm，组间比较差异有统计学意义( F＝13.48， P<0.05)；骨小梁间隙分别为(0.280±0.003)、(0.530±0.003)、(0.340±0.004) mm，组间差异有统计学意义( F＝21.80， P<0.05)；免疫组织化学结果显示，与对照组比较、DEX组OSX和OCN表达下调；与DEX组比较，DEX+SK组OSX和OCN表达上调，差异有统计学意义( F＝60.42，56.38， P<0.05)。Western blot结果显示DEX组小鼠Wnt1和磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)蛋白表达下降，而DEX+SK组小鼠Wnt1和p-GSK-3β蛋白表达上调。CCK-8结果显示，与对照组[(97.33±1.61)%]比较，DEX组细胞活性受到抑制[(47.30±3.98)%]，与DEX组比较，DEX+SK(50 mol/L)组、DEX+SK(100 mol/L)组和DEX+SK(200 mol/L)组细胞活性上调，差异有统计学意义( t＝36.87、5.16、30.93、50.89， P<0.05)；对照组、DEX组、DEX+SK组中成骨矿化结节吸光度( A)值分别为0.440±0.004、0.150±0.001、0.370±0.003，组间差异有统计学意义( F＝158.00， P<0.05)；与DEX+SK组比较，DEX+SK+XAV939组BMSCs中OSX和OCN蛋白表达显著下调；与DEX+SK组(0.430±0.002)比较，DEX+SK+XAV939组(0.200±0.002)成骨矿化下降，差异有统计学意义( t＝7.97， P<0.05)。 结论:紫草素通过激活Wnt/-catenin信号改善GIOP小鼠骨量。

目的:探讨长链非编码RNA（lncRNA）SNHG6对宫颈癌SiHa细胞增殖和放疗敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法:检测lncRNA SNHG6、miR-485-3p在宫颈癌组织、癌旁组织、SiHa细胞及X线照射的SiHa细胞中的表达。分析lncRNA SNHG6与miR-485-3p之间的关系。过表达或敲降SNHG6、miR-485-3p后，MTT、Transwell迁移实验和流式细胞仪检测细胞增殖能力、侵袭数目和凋亡率。分析miR-485-3p对Wnt/β-catenin通路的影响以及XAV939对SiHa细胞增殖及放疗敏感性的影响。结果:lncRNA SNHG6在宫颈癌组织和SiHa细胞中高表达，在X线照射的SiHa细胞中低表达，miR-485-3p在宫颈癌组织和SiHa细胞中低表达，在X线照射的SiHa细胞中高表达。lncRNA SNHG6靶向miR-485-3p。下调lncRNA SNHG6表达抑制了细胞增殖和侵袭，增强了其对X线的放疗敏感性，而miR-485-3p抑制剂转染细胞后则起到相反作用。上调lncRNA SNHG6通过miR-485-3p促进了SiHa细胞的增殖与侵袭，降低了放疗敏感性。下调miR-485-3p激活了Wnt/β-catenin通路，促进了SiHa的细胞增殖和侵袭，降低了其对X线的放疗敏感性。结论:过表达lncRNA SNHG6靶向miR-485-3p激活Wnt/β-catenin通路调控SiHa细胞的增殖及其放疗敏感性。

目的:观察川续断皂苷Ⅵ对胫骨骨折模型大鼠骨折的修复作用及其可能机制。方法:30只SD大鼠经锯开法建立胫骨骨折大鼠模型，随机分为模型组、干预组、联合组，每组各10只。术后第2天模型组每天腹腔注射生理盐水、DMSO溶液各0.2 ml；干预组每天腹腔注射川续断皂苷Ⅵ生理盐水溶液0.2 ml(10 mg/kg)，DMSO溶液0.2 ml；联合组每天腹腔注射川续断皂苷Ⅵ生理盐水溶液0.2 ml(10 mg/kg)，XAV939 DMSO溶液0.2 ml(1 mg/只)，均连续干预14 d。干预后2、4周采用Micro-CT扫描、X线片扫描观察骨折愈合情况；干预后4周检测胫骨湿重；苏木素-伊红(HE)染色观察骨痂组织病理学改变；Western blot法检测骨痂组织β-连环蛋白(β-catenin)、p-β-catenin、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、Runt相关转录因子2(Runx2)蛋白表达量。结果:干预组干预后2、4周骨体积分数(BV/TV)及骨小梁数量(Tb.N)、Lane-Sandhu评分、骨痂体积均高于模型组(均 P<0.05)；联合组干预后2、4周BV/TV及Tb.N、Lane-Sandhu评分、骨痂体积均低于干预组(均 P<0.05)。干预组干预后4周胫骨湿重高于模型组( P<0.05)；联合组胫骨湿重低于干预组( P<0.05)。HE染色结果显示，模型组有纤维组织增生，较多骨小梁生成，但成熟度不高、增粗不明显；干预组形成较多骨性骨痂，骨小梁排列有序、部分成熟，且矿化明显，与应力方向一致；联合组形成较多软骨性及纤维性骨痂，软骨性骨痂边缘矿化较多，并形成骨小梁，在间隙中可观察到丰富的毛细血管。干预组骨痂组织中Runx2及p-β-catenin/β-catenin蛋白表达量高于模型组，GSK-3β蛋白表达量低于模型组(均 P<0.05)；联合组骨痂组织中Runx2及p-β-catenin/β-catenin蛋白表达量低于干预组，GSK-3β蛋白表达量高于干预组(均 P<0.05)。 结论:川续断皂苷Ⅵ可有效促进胫骨骨折模型大鼠骨折修复，可能是通过激活Wnt/β-catenin信号通路来发挥作用。

目的:基于Wnt信号通路探讨七氟烷预处理对高糖培养心肌细胞损伤的影响。方法:H9c2大鼠心肌细胞随机分为对照组、贫氧组、七氟烷组、高糖＋七氟烷组、高糖＋七氟烷＋XAV-939组，对照组细胞采用正常糖浓度(5.56 mmol/L葡萄糖)培养基进行培养，贫氧组细胞细胞采用在正常培养基中厌氧培养，高糖组细胞贫氧处理后采用高糖(33 mmol/L)培养基进行培养，高糖＋七氟烷组细胞贫氧处理后采用含2.2%七氟烷的高糖培养基培养，高糖＋七氟烷＋XAV-939组细胞贫氧处理后采用含2.2%七氟烷和1 μm XAV-939的高糖培养基培养。5组细胞处理12 h后，采用细胞计数试剂盒(CCK-8)试剂盒检测细胞活力；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色分析细胞凋亡水平；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测细胞氧化应激指标；采用ROS试剂盒检测心肌细胞ROS水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路转录活性相关蛋白表达的影响。组间计量数据比较采用 t检验。 结果:高糖＋七氟烷组细胞活力(1.89±0.12)明显增加高糖组细胞(1.21±0.14)，差异有统计学意义( t＝4.951， P<0.05)。高糖＋七氟烷组细胞SOD活性[(654.23±54.87) nmol/mg]明显高于高糖组[(398.59±51.49) nmol/mg]，差异有统计学意义( t＝6.021， P<0.05)。高糖＋七氟烷组细胞ROS水平[(38.69±) IU/ml]明显高于高糖组[(52.67±6.46) IU/ml]，差异有统计学意义( t＝3.894， P<0.05)。高糖＋七氟烷组TUNEL染色阳性率[(15.63±3.19)%]显著低于高糖组心肌细胞TUNEL染色阳性率[(36.35±4.15)%]，差异有统计学意义( t＝8.541， P<0.05)。高糖＋七氟烷组Wnt3a和β-catenin表达水平(1.26±0.15、1.48±0.14)显著低于高糖组心肌细胞Wnt3a和β-catenin表达水平(2.36±0.12、2.79±0.15)，差异有统计学意义( t＝4.289、4.012， P<0.05)。 结论:心肌细胞损伤后，高糖可拮抗七氟烷对心肌细胞的保护作用，主要机制可能与是通过Wnt/β-catenin信号通路激活和氧化应激失衡相关。

目的:明确经典Wnt通路在食管癌细胞放射抵抗中的作用，探讨经典Wnt通路介导食管癌细胞放射抵抗的机制，为临床上增强食管癌放射敏感性提供重要的分子靶点。方法:应用克隆形成实验检测人食管癌细胞EC9706、ECA109、KYSE70、KYSE150的放射敏感性。通过蛋白质印迹和RT-PCR检测照射后经典Wnt通路的活化情况。通过添加经典Wnt通路激活剂(AZD2858)和抑制剂(XAV-939)综合评价经典Wnt通路对食管癌细胞放射敏感性的影响。通过细胞免疫荧光技术检测照射后细胞DNA双链断裂(DSB)的产生、修复和DNA双链断裂修复蛋白焦点的形成。结果:4种食管癌细胞的放射敏感性由高到低分别为EC9706、ECA109、KYSE70、KYSE150细胞。KYSE150细胞照射后细胞核内β联蛋白增加，c-Myc基因转录上调(均 P<0.05)；而EC9706细胞照射后细胞核内β联蛋白、c-Myc基因转录与照射前相近(均 P>0.05)。EC9706细胞经AZD2858处理后放射抗性增加( P<0.05)，而KYSE150细胞经XAV-939处理后放射抗性降低( P<0.05)。AZD2858使EC9706细胞DNA双链断裂修复加快( P<0.05)，而XAV-939使KYSE150细胞DNA双链断裂修复减慢( P<0.05)；XAV-939通过抑制同源重组修复相关蛋白(BRCA1和RAD51)，而不是非同源末端连接修复相关蛋白(Ku80和XRCC4)降低DNA双链断裂修复能力。 结论:经典Wnt通路通过调控照射后DNA双链断裂的同源重组修复参与对食管癌细胞放射敏感性的调控，抑制经典Wnt通路可以克服食管癌细胞的放射抵抗，增强放射对食管癌细胞的杀伤作用。

Objective:Mitofusin-2(MFN2)is a mitochondrial membrane protein that plays a critical role in regulating mitochondrial fusion and cellular metabolism.To further elucidate the impact of MFN2,this study aimed to investigate its significance on hepatocellular carcinoma(HCC)cell function and its potential role in mediating chemosensitivity.Methods:This study investigated the effects of silencing and overexpressing MFN2 on the survival,proliferation,invasion and migration abilities,and sorafenib resistance of MHCC97-L HCC cells.Additional experiments were conducted using XAV939(a β-catenin inhibitor)and HLY78(a β-catenin activator)to further validate these findings.Results:Silencing MFN2 significantly promoted the survival and proliferation of MHCC97-L cells,enhanced their invasion and migration capacities,increased the IC50 of sorafenib,reduced the percentage of TUNEL-positive cells,and decreased the expression of proapoptotic proteins.Additionally,silencing MFN2 markedly induced the nuclear translocation of β-catenin,increased β-catenin acetylation levels and enhanced the expression of the downstream regulatory proteins Snail 1 and Vimentin while inhibiting E-cadherin expression.Conversely,overexpressing MFN2 reversed the effects observed in MHCC97-L cells mentioned above.The results confirmed that silencing MFN2 activated the β-catenin/epithelial-mesenchymal transition(EMT)pathway and reduced the sensitivity of cells to sorafenib,which could be reversed by XAV939 treatment.Conversely,overexpression of MFN2 inhibited the β-catenin/EMT pathway and increased the sensitivity of cells to sorafenib,which could be altered by HLY78.Conclusion:Low expression of MFN2 in HCC cells promotes the nuclear translocation of β-catenin,thereby activating the EMT pathway and mediating resistance to sorafenib.

目的 探讨鸢尾素治疗肌少症小鼠的作用机制.方法 将雄性SPF级野生C57小鼠随机分为对照组、模型组、鸢尾素组、鸢尾素+Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路抑制剂组(鸢尾素+XAV939组),每组28只.采用抓力检测、抓绳时间及游泳实验检测各组小鼠行为学指标水平.比较各组腓肠肌湿重比;HE染色观察各组腓肠肌病理学形态改变.采用Western blotting检测各组自噬相关蛋白(Beclin1、LC3 Ⅱ/Ⅰ)和通路相关蛋白(Wnt、β-catenin)的表达水平.采用实时荧光定量PCR法检测线粒体分裂融合相关基因动力相关蛋白1(Drp1)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)及视神经萎缩蛋白1(Opa1)表达水平.结果对照组小鼠腓肠肌组织排列整齐,无炎症细胞浸润及水肿坏死情况;模型组小鼠腓肠肌组织结构受损严重,组织排列紊乱,可见大量炎症细胞浸润及肌纤维溶解情况;鸢尾素组小鼠腓肠肌组织较模型组明显改善;鸢尾素+XAV939组与模型组相似.与对照组相比,模型组小鼠抓力、Beclin1、LC3 Ⅱ/Ⅰ、Drp1 mRNA、Wnt、β-catenin表达降低(P＜0.05),抓绳和游泳时间、腓肠肌湿重比减少(P＜0.05),Mfn2、Opa1 mRNA表达升高(P＜0.05);与模型组相比,鸢尾素组上述指标得以递转(P＜0.05);与鸢尾素组相比,鸢尾素+XAV939组上述指标变化同模型组趋势(P＜0.05).结论 鸢尾素可能通过上调Wnt/β-catenin通路改善肌少症小鼠自噬,促进线粒体分裂,抑制线粒体融合,从而起到一定的肌保护作用.

目的:探讨芒果苷(MGF)通过调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对大鼠髋部骨折愈合的作用,阐明其相关作用机制.方法:建立SD大鼠髋部骨折模型,造模成功后将大鼠分为模型组、MGF组和MGF+XAV-939(Wnt/β-catenin信号通路抑制剂)组,另设假手术组,每组15只.术后第1天各组大鼠按分组方法给予MGF或XAV-939干预,每2d给药1次,共14次.采用Lane-Sandhu X射线评分法评估术后第2和4周各组大鼠骨折愈合情况,显微CT(Micro CT)检测各组大鼠骨显微结构参数骨体积(BV)、骨小梁数量(Tb.N)、骨体积分数(BV/TV)和骨小梁厚度(Tb.Th),HE染色观察各组大鼠骨痂组织形态表现,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中成骨标志物骨碱性磷酸酶(BALP)和Ⅰ型前胶原N端前肽(PINP)及破骨标志物抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)和Ⅰ型胶原羧基末端肽(CTX)水平,Western blotting法检测各组大鼠骨痂组织中β-catenin、Runt相关转录因子2(Runx2)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平.结果:与假手术组比较,模型组大鼠骨折后第2和4周骨折线清晰,骨折部位存在较多纤维组织,未发现骨性骨痂,Lane-Sandhu X射线评分及骨显微结构参数BV、Tb.N、BV/TV和Tb.Th均降低(P＜0.05),血清中 BALP 水平降低(P＜0.05),PINP、TRACP-5b 和 CTX 水平升高(P＜0.05),骨痂组织中β-catenin、Runx2和BMP-2蛋白表达水平降低(P＜0.05).与模型组比较,MGF组大鼠骨折后第2周新生骨痂明显增多,第4周骨折线基本消失,骨折愈合较快,骨折部位大量纤维组织被骨组织替代,骨性骨痂量明显增多,Lane-Sandhu X射线评分及骨显微结构参数BV、Tb.N、BV/TV和 Tb.Th 均升高(P＜0.05),血清中 BALP 水平升高(P＜0.05),PINP、TRACP-5b 和 CTX 水平降低(P＜0.05),骨痂组织中β-catenin、Runx2和BMP-2蛋白表达水平升高(P＜0.05).与MGF组比较,MGF+XAV-939组大鼠骨折后第2和4周骨折部位仅有少量新生骨痂,髓腔未形成,Lane-Sandhu X射线评分及骨显微结构参数BV、Tb.N、BV/TV和Tb.Th均降低(P＜0.05),血清中BALP 水平降低(P＜0.05),PINP、TRACP-5b和 CTX水平升高(P＜0.05),骨痂组织中β-catenin、Runx2和BMP-2蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:MGF可促进大鼠髋部骨折愈合,其作用机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关.

目的 研究人参皂苷Rg1(GS-Rg1)抑制舌鳞状细胞癌(TSCC)增殖和转移能力的作用,以及相关的作用机制.方法 用1.25、2.5、5.0和10.0μmol·L-1的GS-Rg1处理TSCC细胞CAL-27 48 h后,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测不同浓度细胞的增殖能力,并计算GS-Rg1作用CAL-2748 h的IC50值.TSCC细胞CAL-27分为对照组和GS-Rg1组,分别用0.9％NaCl和IC50浓度的GS-Rg1处理对照组和GS-Rg1组48 h.用流式细胞仪检测各组细胞周期分布情况,用Transwell实验检测各组细胞转移能力.构建TOP/FOP Flash质粒,转染对照组和GS-Rg1组,用荧光素酶实验检测GS-Rg1对TSCC细胞CAL-27中wnt/β-连环蛋白(wnt/β-catenin)信号通路活性的影响.用wnt/β-catenin通路抑制药XAV939处理GS-Rg1组细胞(XAV939+GS-Rg1组),及wnt/β-catenin通路激活药HLY78处理GS-Rg 1组细胞(HLY78+GS-Rg1 组),检测 GS-Rg1 组、XAV939+GS-Rg1 组和 HLY78+GS-Rg1组细胞中wnt/β-catenin信号通路活性、细胞增殖能力、细胞周期分布以及转移能力变化,用蛋白质印迹法检测各组细胞中wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin及其下游细胞周期相关分子细胞性骨髓细胞瘤原癌基因(cMYC),细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白D1(cyclinD1)及转移相关蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达.结果 GS-Rg1显著抑制TSCC细胞CAL-27的增殖能力(P＜0.05),GS-Rg1 作用 CAL-27 48 h 的 IC50 值为(5.46±1.58)μmol·L1.对照组和 GS-Rg1 组 G0/G1 分别为(60.65±2.16)％和(71.20±2.38)％,细胞穿膜数分别为(87.33±7.51)和(50.67±3.21)个,荧光素酶活性分别为1.00±0.02和0.35±0.06,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与 GS-Rg1 组相比,XAV939+GS-Rg1 组细胞中 wnt/β-catenin 信号通路活性、细胞增殖能力和转移能力均显著降低(均P＜0.05),G0/G1期细胞增多(P＜0.05),β-catenin、cMYC、CDK4、cyclinD1、E-cadherin、MMP-2 蛋白表达均显著降低(均P＜0.05),N-cadherin蛋白表达增加,而HLY78+GS-Rg1组细胞结果相反.结论 GS-Rg1下调wnt/β-catenin信号通路抑制TSCC细胞增殖和转移能力.

目的:探讨小檗碱(BBR)联合XAV939对骨肉瘤MG-63细胞迁移与凋亡的影响及其可能的机制.方法:培养MG-63细胞,分别加入20～120 μmol/L的BBR和5～60 μmol/L的XAV939,通过CCK-8法测定BBR和XAV939的细胞毒性,采用Chou-Talalay分析法计算两药的联合指数,确定后续实验的干预剂量;将MG-63细胞随机分为空白对照(NC)组、BBR组、XAV939组和BBR+XAV939联合组,采用划痕愈合实验、Transwell小室法检测BBR与XAV939单独或联合处理对MG-63细胞迁移能力的影响,Hoechst 33258染色、JC-1染色及Annexin Ⅴ-FITC/PI双染流式细胞术检测对细胞线粒体膜电位和凋亡的影响,免疫荧光法检测BAX蛋白的表达,WB法检测对细胞中MMP-2表达的影响,qPCR法检测对MMP-2基因表达的影响.结果:BBR和XAV939以剂量依赖方式抑制MG-63细胞的增殖,选定30 μmol/L BBR、7.5 μmol/L XAV939用于后续实验.与NC组相比,BBR(30 μmol/L)、XAV939(7.5 μmol/L)及BBR+XAV939联合处理细胞24 h后,MG-63细胞迁移能力显著降低、凋亡细胞显著增加(均P<0.05),线粒体膜电位下降(P<0.01),MMP-2的基因表达和MMP-2、BAX蛋白水平均降低(均P<0.05),并且,联合组的效应明显强于单药处理且(P<0.05或P<0.01).结论:BBR和XAV939单独或联合应用可以抑制骨肉瘤MG-63细胞的迁移、促进凋亡,其机制可能与迁移相关蛋白MMP-2的表达降低,凋亡相关蛋白BAX的水平增加有关.