目的:本研究旨在探讨雌激素受体- α（estrogen receptor- α，ESR1）基因PvuⅡ（rs2234693，C>T）和XbaⅠ（rs9340799，A>G）位点多态性与女童1型糖尿病（type 1 diabetes，T1D）易感性的相关性。 方法:纳入2016年1月至2019年12月于重庆三峡中心医院就诊的86例新发T1D女性患儿作为研究对象，并选择同期于本院参加健康体检的100例健康女童作为健康对照。测定研究对象的身高、体重和相关代谢指标；采用毛细管电泳和片段分析（SNaPshot）技术对ESR1基因进行分型；采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测ESR1基因的mRNA表达量。结果:基因分型结果显示T1D组和对照组的PvuII位点基因型分布差异有统计学意义（ χ2=11.672， P=0.003），而XbaI位点基因型分布差异无统计学意义（ χ2=5.433， P=0.066），T1D组的PvuII位点T等位基因频率和XbaI位点G等位基因频率均显著高于对照组（PvuII T vs C： OR=1.909，95% CI=1.261~2.892， P=0.002；XbaI G vs A： OR=1.815，95% CI=1.112~2.961， P=0.016）。携带PvuII T等位基因的T1D患者糖化血红蛋白（HbA1c）和总胆固醇（total cholesterol, TC）水平显著高于携带CC基因型的患者（ P均<0.05），携带XbaI G等位基因的T1D患者低密度脂蛋白（LDL-C）和TC水平显著高于携带AA基因型的患者（ P均<0.05）。T1D患者的ESR1基因mRNA相对表达量显著低于对照组（0.42±0.05 vs 1.04±0.16， t=6.227， P<0.001）。PvuII位点CC、CT和TT基因型的T1D患者ESR1基因mRNA相对表达量差异有统计学意义（ F=5.823， P<0.001），XbaI位点AA、AG和GG基因型的T1D患者ESR1基因mRNA相对表达量差异也有统计学意义（ F=5.415， P<0.001）。 结论:ESR1基因PvuII和XbaI位点多态性可通过影响基因表达，参与到女童T1D的发生、发展中。

目的 无翅型MMTV整合位点家族成员16(WNT16)是一种重要的信号调节蛋白,参与多种细胞生物学过程的调控.本研究旨在构建稳定转染WNT16基因的HEK 293T细胞株,并利用多聚赖氨酸标签(HIS-Tag)实现高效纯化WNT16蛋白.方法 使用TK-PCDH-copGFP-T2A-Puro载体,将WNT16 CDS-HIS序列通过XbaI和BamHI位点连接载体,构建慢病毒载体质粒;将该质粒与pSPAX2和pMD2.G 一起共转染HEK 293T细胞,制备携带WNT16基因的慢病毒;利用慢病毒感染HEK 293T细胞,并通过嘌呤霉素筛选和Western Blot鉴定稳定过表达WNT16的细胞株;利用镍螯合琼脂糖凝胶与HIS标签的高亲和性纯化WNT16蛋白,使用考马斯亮蓝染色和Western Blot法检测纯化效果;用纯化的WNT16蛋白刺激Jurkat细胞,使用Western Blot法检测Jurkat细胞中β-catenin信号通路蛋白的水平,以评估WNT16蛋白的活性.结果 成功构建过表达WNT16基因的慢病毒表达载体,并用其感染HEK 293T细胞.经过嘌呤霉素筛选和Western Blot鉴定,我们获得了稳定表达WNT16的HEK 293T细胞株.使用HIS标签成功纯化了 WNT16蛋白,并用考马斯亮蓝染色和Western Blot法检测了纯化效果.最后,我们用纯化的WNT16蛋白刺激Jurkat细胞,并用Western Blot法检测了 Jurkat细胞中β-catenin信号通路蛋白的水平,WNT16蛋白能够显著增加Jurkat细胞中β-catenin蛋白的表达,表明纯化的WNT16蛋白具有激活WNT/β-catenin通路的生物学活性.结论 本研究成功实现了 WNT16蛋白的高效表达和纯化,并初步研究了其功能.这为进一步探究WNT16在细胞生物学中的作用提供了重要的实验基础.

目的 分析近五年医院产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(KPC)肺炎克雷伯菌的分布、耐药性变迁及流行特征,揭示产KPC肺炎克雷伯菌(KPCKpn)在医院近年来的流行规律,为临床防治KPCKpn感染提供参考.方法 收集2013年1月-2017年6月医院临床标本分离的肺炎克雷伯菌非重复菌株,采用法国梅里埃VITEK MS质谱仪或VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定药敏仪进行细菌鉴定和药敏实验.使用特异引物序列对CRKpn菌株的DNA模板进行多重PCR扩增,确定其是否携带目前已知的常见碳青霉烯耐药基因.随机选取各病区来源的KPCKpn菌株100株,采用脉冲场电泳(PFGE),使用XbaI内切酶对待测菌株基因组进行酶切和电泳分析,使用BioNumerics 3.0软件对电泳图进行同源性分析.结果 近五年,医院共分离肺炎克雷伯菌4946株,其中碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKpn)710株占14.4%,而82.8%的CRKpn为KPCKpn;CRKpn的比例近五年上升明显;KPCKpn菌株主要来自呼吸病区占20.4%、急诊ICU病区占17.0%;KPCKpn菌株主要分离自痰标本占48.3%、引流液占23.0%.结论 CRKpn的比例呈现逐年增加的趋势,KPCKpn菌株数量的增加是导致CRKpn概率增加的主要原因;KPCKpn菌株数量增加的主要原因是其在院内的克隆传播;创伤性操作等医疗行为对于耐药菌感染的发生发展过程有很大程度的影响.

目的 分析2005-2012年我国云贵高原(广西壮族自治区、贵州省、云南省)临床甲型副伤寒沙门菌分离株分子分型和群体结构.方法 收集2005-2012年我国三个伤寒副伤寒高发省份分离自临床的甲型副伤寒沙门菌分离株145株.采用两种酶切(XbaI和SpeI)进行脉冲场凝胶电泳(pulsed field gel electro phoresis,PFGE)分型分析.分析描述我国云贵高原近8年来的甲型副伤寒沙门菌优势克隆群及克隆群变迁.结果 145株甲型副伤寒沙门菌采用XbaI酶切可以得到38个PFGE型;采用SpeI酶切可以得到42个PFGE型;利用两种酶切结果联合分析,可以得到71个型别,其中2个型别所含菌数均超过10株.结论 有些型别仅分布于某个省份某一年份,有些型别却可以在某一省份长期存在并逐年传播,成为优势型别.不同省份间优势型别有所不同,呈现一定的地域差异.

目的 本研究旨在探索ESR1基因多态性与汉族绝经期女性严重抑郁症状的发生是否存在关联.方法 从前来上海三所医院妇科门诊就诊的45～55岁围绝经期及绝经后期妇女中纳入432人.对其雌激素α受体基因上的PvuⅡ(rs2234693)和XbaI(rs9340799)多态位点进行基因型检测.同时使用Beck抑郁量表对其抑郁症状进行评估.同时收集研究对象的一般社会人口学及相关妇产科个人史资料.使用Kupperman绝经指数量表及焦虑自评量表对其绝经期症状及焦虑症状进行评估.结果 XbaI位点多态性与抑郁症状数量性状存在关联,携带XX基因型的女性较Xx及xx基因型者存在更严重抑郁症状(Add value=1.85,95％CI=0.21～3.48).而PvuⅡ位点多态性与抑郁症状数量性状无关联.结论 ESR1基因多态性与汉族围绝经期及绝经后期女性严重抑郁症状的发生可能存在关联.

目的 系统评价雌激素受体 (estrogen receptor, ER) 基因多态性与肝细胞癌 (hepatocellular carcinoma, HCC) 的关系.方法采用Coehrane系统评价方法, 检索Conchrane Library、Pub Med, EMBASE及万方、维普、知网等数据库, 筛选相关文献数据后, 综合评价ER各基因型在HCC组与对照组中是否有差异.采用I2对异质性进行定量分析, 计数资料采用比值比 (OR) 及95％可信区间 (95％CI) 表示, 应用Review Manager5.3软件包进行统计分析.结果共纳入7篇文献, 累计样本量2343例;Meta分析结果表明, 携带ERα的PvuⅡ及rs2077647基因多态性的三种基因型 (T, TT, CC) 与HCC有关, 但各研究间存在明显异质性 (P<0.05), 进行敏感性分析后, 异质性明显减小 (P>0.05).携带ERα XbaI基因多态性的三种基因型 (A、AA、GG) 及ERβ AluI的两种基因型 (G、GG) 与HCC有关.ERβ AluI的隐性模型AA与HCC无关 (P<0.05).另两个位点 (ERαrs1801132, ERβRsa I) 基因多态性与HCC的相关性无统计学意义 (P值分别为0.59及0.15).结论ERα的PvuⅡ、XbaI、rs2077647及ERβ的AluI位点基因多态性与HCC相关, ERαrs1801132和ERβRsaI基因多态性与HCC无关.

目的 构建使用绿色荧光蛋白(GFP)标记的核受体相关蛋白1(nuclear receptor related 1 protein,Nurr1)慢病毒表达载体(DCE-Nurr1)并鉴定.方法 使用引物设计软件Primier5设计基因Nurr1引物并采用聚合酶链反应(PCR)对其进行扩增,利用XbaI和NotI分别将基因Nurr1和载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP进行双酶切,利用T4链接酶将已酶切的基因Nurr1和已酶切的载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP连接起来,完成慢病毒表达载体的构建.结果 通过PCR成功地扩增了Nurr1基因并连接到载体pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP上,序列与GenBank登记的序列一致.结论 成功构建DCE-Nurr1慢病毒表达载体,为进一步在体内或体外研究Nurr1基因功能及其对多巴胺神经元的保护作用提供了基础.

目的 研究2007-2016年四川省德尔卑沙门菌分子分型和耐药趋势,掌握四川省德尔卑沙门菌污染状况,为暴发预警、溯源调查及抗生素使用策略提供参考数据.方法 运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和微量肉汤稀释法对2007-2016年四川省自临床病例、食品从业人员、食物中毒样品、养殖动物及零售食品中分离的106株德尔卑沙门菌进行分子分型及14种抗生素的敏感性测试.结果 106株德尔卑沙门菌对8类14种抗生素均有不同程度耐药,人源性和动物源性菌株对四环素、萘啶酸、氯霉素、复方磺胺的耐药率均大于20％.其中人源性菌株对头孢噻肟、环丙沙星、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉的耐药率均明显高于动物源性菌株;动物源性菌株对四环素、萘啶酸、氯霉素耐药率均明显高于人源性菌株.经XbaI酶切后106株菌共分为67个PFGE带型,不同年份的临床病例、食品从业人员及零售食品生猪肉分离株具有相同PFGE带型.结论 四川省德尔卑沙门菌分离株耐药率较高,并有逐年上升趋势.PFGE型别呈多样性,部分临床病例、食品从业人员分离株与生猪肉分离株PFGE具有相同带型.

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一,是一种雌激素依赖性肿瘤.雌激素与雌激素受体作用而促进乳腺癌的发生发展.雌激素受体α基因存在遗传多态性,其中XbaI和PvuⅡ是研究最热最多的位点,但不同人群中的研究结论不一致.本文就ERα基因XbaⅠ和PvuⅡ多态性与乳腺癌关系进行了综述.

目的:构建一种新的复制子为RSF的温度调控型原核表达载体,以满足多蛋白共表达时对不同复制子表达载体的需求.方法:利用XhoI和XbaI双酶切pRSF-Duet-1获得RSF复制子序列和卡那霉素抗性筛选基因KanR,从pBV220载体中PCR扩增温度调控型启动子PL/R序列,将这两段序列酶连转化并经卡那霉素筛选后得到新的原核表达载体pRSF-PL.将增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到该载体中进行EGFP表达检测.结果:pRSF-PL载体含有预期的RSF复制子序列和PL/R启动子.该载体在表达EGFP基因时,30℃和37℃条件下诱导的EGFP蛋白表达水平低,42℃条件下能实现EGFP蛋白的大量表达.结论:成功构建了以RSF为复制子的温度调控型高效原核表达载体pRSF-PL.