目的 探讨十字花科蔬菜的天然植物化合物 3,3′-二吲哚甲烷(3,3′-diindolelmethane,DIM)在胃癌防治中的作用及其分子机制,为膳食植物营养应用于肿瘤预防提供实验依据.方法 采用不同浓度的DIM(0、20、40、60、80、100、120 μmol/L)处理人胃癌细胞系BGC-823 24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定各组细胞存活率,Western blot检测各组细胞钙蛋白酶(Calpain)、激活转录因子 4(ATF4)和CAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白的表达水平;钙离子荧光探针检测细胞内钙离子浓度变化;使用激活转录因子 4(ATF4)的小干扰RNA(siRNA)特异性敲减胃癌细胞系中的ATF4,并用Western blot检测ATF4 和CHOP蛋白的表达水平,MTT法检测细胞存活率;应用钙离子螯合剂BAPTA-AM预处理胃癌细胞系BGC-823 后,Western blot检测Calpain、ATF4 和CHOP蛋白的表达水平,MTT法检测细胞增殖活力改变情况.结果 MTT法、Western blot及钙离子荧光探针法检测结果表明,随着 DIM 浓度升高,BGC-823 细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),Calpain、ATF4 和CHOP蛋白的表达上调(P<0.05),细胞内钙离子荧光强度增强;转染ATF4 siRNA后,BGC-823 细胞ATF4 蛋白的表达降低(F=16.17,P<0.05),且与DIM+si-NC组相比,DIM+si-ATF4 组细胞存活率增加(F=74.46,P<0.05);进一步通过BAPTA-AM螯合细胞内钙离子后,与 DIM 组相比,DIM+BAPTA-AM 组 Calpain、ATF4 和 CHOP 蛋白的表达降低(F 分别为 24.58、34.93、24.45,P<0.05),细胞存活率增加(F=31.13,P<0.05).结论 DIM可增加细胞质钙离子浓度,上调Calpain、ATF4 和CHOP蛋白的表达水平,从而诱导胃癌细胞系发生内质网应激,抑制胃癌细胞的增殖.

目的:通过观察同种大鼠缺血再灌注(IRI)移植肾组织中钙离子依赖性蛋白酶(Calpain)及胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)的表达情况，同时观察高压氧(HBO)治疗对Calpain、cPLA2表达的影响，初步探讨细胞凋亡的内质网通路及丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路在肾IRI发生中的作用及HBO治疗对通路的影响。方法:同种大鼠移植肾石蜡标本分为假手术组、肾移植组和肾移植+HBO治疗组，分别以移植后1、3和5 h为时间点各分为三个小组。分别应用HE染色法观察病理改变，免疫组织化学(IHC)检测组织中Calpain、cPLA2蛋白的表达情况。结果:①肾组织HE染色变化：假手术组肾组织形态基本正常，各时间点组织结构差异不明显；肾移植组各时间点组织损伤较重；HBO治疗组在1 h及3 h时，肾组织病变程度与肾移植组差异较小，在5 h时，组织损伤减轻；②IHC法检测蛋白的表达变化：Calpain和cPLA2均在肾小管上皮细胞胞浆中表达。相对定量分析显示：假手术组中，在各时间点二者的表达水平比较，差异无统计学意义( P>0.05)；随再灌注时间延长，二者的表达水平在肾移植组及HBO治疗组中均呈明显上升趋势( P<0.05)，且高于假手术组( P<0.05)；但在各时间点二者在肾移植组中的表达水平明显高于HBO治疗组( P<0.05)。 结论:肾移植后早期产生组织损害，再灌注后移植肾组织的Calpain和cPLA2蛋白的表达水平明显增加，随再灌注时间的延长越明显。HBO治疗可明显抑制IRI移植肾组织中Calpain、cPLA2蛋白的表达。

目的:探讨钙蛋白酶小亚基-1(CAPNS1)与细胞核增殖抗原(Ki-67)在胃癌组织中的表达及其与胃癌不同临床病理特征之间的相关性。方法:采用免疫组织化学方法检测2018年1月至2020年6月福建医科大学附属第二医院80例胃癌组织及相邻癌旁正常胃组织中CAPNS1、Ki-67的表达，分析其在胃癌组织中的表达与胃癌不同临床病理特征之间的相关性，组间比较采用 χ2检验。 结果:CAPNS1和Ki-67在胃癌组织中高表达，阳性表达率分别为72.5%(58/80)、67.5%(54/80)，明显高于癌旁正常组织的表达率12.5%(10/80)、15.0%(12/80)，差异有统计学意义( χ2＝9.258， P<0.05)；CAPNS1表达与Ki-67表达两者呈正相关( r＝0.638， P<0.05)；CAPNS1、Ki-67在胃癌组织中的表达与患者年龄( χ2＝0.633， P>0.05; χ2＝0.102， P>0.05)、性别( χ2＝1.013， P>0.05; χ2＝1.212， P>0.05)、肿瘤大小( χ2＝0.656， P>0.05; χ2＝1.058， P>0.05)、浸润深度( χ2＝0.285， P>0.05; χ2＝0.618， P>0.05)无相关，CAPNS1、Ki-67表达与肿瘤分化程度( χ2＝10.865， P<0.05; χ2＝6.412， P<0.05)、淋巴结转移( χ2＝6.921， P<0.05; χ2＝6.532， P<0.05)、临床分期( χ2＝6.325， P<0.05; χ2＝8.652， P<0.05)明显相关。 结论:CAPNS1、Ki-67在胃癌组织中表达上调，参与胃癌的发生和进展。

Objective::Structural abnormalities and dysfunction of the placenta contribute to pregnancy-related complications, such as preeclampsia. Syncytin-A (synA) has been reported to be expressed in the placenta. The contribution of synA to developmental abnormalities and dysfunction of the placenta remains elusive. In this study, we aimed to explore the role of synA in placental development and functions.Methods::SynA-knockout mice were generated using the CRISPR-Cas9 method, and the phenotypes of the placenta and fetus of synA-knockout mice were observed. Real-time quantitative polymerase chain reaction (PCR) and routine PCR were employed to detect the genotypes of the offspring. CD31 immunohistochemistry was used to evaluate the vessel density of the placenta, and the protein levels of key molecules were measured by western blotting. Results::SynA knockout caused fetal death. Furthermore, synA-knockout mice showed placental developmental abnormalities, indicated by a thinner labyrinth layer, thicker spongiotrophoblast layer, lower blood vessel density, and significantly higher numbers of apoptotic trophoblasts, when compared with wild-type littermates. Mechanistically, synA ablation induced apoptosis-inducing factor (AIF) cleavage and nuclear localization and promoted placental trophoblast apoptosis. In addition, synA knockout increased the calpain1 protein levels. The calpain1 inhibitor calpeptin blocked synA knockout-induced AIF cleavage, partially restoring the placental structural abnormalities of synA-knockout mice. Conclusions::SynA knockout leads to placental developmental abnormalities by inducing trophoblastic apoptosis via the calpain1-AIF pathway.

目的:探究骨形成蛋白4(BMP4)在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的肺动脉重塑中的作用及其机制。方法:本研究为实验研究。使用细胞活力检测、蛋白活力测定、蛋白质印迹法、siRNA干扰技术等方法研究BMP4对肺动脉平滑肌细胞(PASMC)的作用。烟雾连续暴露12周小鼠构建肺动脉重塑的动物模型，免疫荧光检测肺动脉BMP4的表达。结果:相较于PDGF组，PDGF+BMP4组能够抑制Ⅰ型胶原蛋白的合成( P<0.001)和钙蛋白酶活性( P<0.001)。相较于对照组，蛋白激酶A(PKA)的活性增加( P<0.001)。已知PKA是钙蛋白酶活性的负调控因子。使用PKA激活剂后，PDGF诱导的钙蛋白酶活性下降( P<0.01)。siRNA沉默PKA，由BMP4下调的钙蛋白酶活性得以恢复( P<0.001)，并增加了Ⅰ型胶原蛋白的表达量( P<0.001)。与PDGF组相比，PDGF+BMP4抑制转化生长因子β 1(TGF-β 1)的活化( P<0.001)和Smad2/3的磷酸化( P<0.001)。在烟雾暴露的小鼠肺动脉中，BMP4蛋白表达降低( P<0.001)。 结论:BMP4通过激活PKA抑制钙蛋白酶-TGF-β 1信号轴，导致PASMC Ⅰ型胶原蛋白合成下降。BMP4作为一种保护因素阻碍肺动脉重塑。

目的:探讨 CAPN3基因非经典剪接位点突变致肢带型肌营养不良2A（LGMD2A）患者的临床、肌肉病理和遗传学特点。 方法:选取2016年7月至2018年7月于山东大学齐鲁医院就诊的3例LGMD2A患者为研究对象。收集其家系的临床资料，对先证者进行全外显子组测序，利用Sanger测序对候选变异进行家系验证。从先证者肌肉组织中提取RNA，利用逆转录聚合酶链反应验证剪接突变对先证者 CAPN3基因前体mRNA剪接的影响。从先证者肌肉组织中提取蛋白，用蛋白质印迹法检测calpain 3蛋白的含量。 结果:3例先证者均存在四肢肌无力症状，近端重于远端。肌肉活组织检查结果均提示肌源性损害。基因检测表明先证者1携带 CAPN3基因c.2185-14T>G和c.2305C>T（p.R769W）复合杂合突变，先证者2携带 CAPN3基因c.1193+30G>A和c.2069_2070delAC（p.H690Rfs *9）复合杂合突变，先证者3携带 CAPN3基因c.1194-9A>G纯合突变。剪接实验表明c.2185-14T>G突变位于内含子20，导致内含子20整体保留，c.1193+30G>A位于内含子9，导致内含子9前31个碱基保留，c.1194-9A>G突变位于内含子9，导致内含子9最后8个碱基保留。蛋白质印迹法结果表明先证者1和先证者2存在calpain 3蛋白缺失。 结论:LGMD2A患者以四肢近端肌力下降为主要临床症状，肌肉病理多表现为肌源性损害，非经典剪切位点突变致前体mRNA剪接异常在该病中发挥了致病作用。

目的:探讨细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂PD98059对脑钙蛋白酶（calpain）相关蛋白的影响，并了解calpain在脑缺血/再灌注损伤（CIRI）中的病理生理变化。方法:将42只大鼠按随机数字表法分为假手术（Sham）组（ n＝6）、模型组（ n＝12）、二甲基亚砜（DMSO）对照组（ n＝12）和PD98059组（ n＝12）。采用经食道起搏电刺激法诱发心室纤颤制备心搏骤停-心肺复苏（CA-CPR）模型诱导大鼠CIRI；Sham组仅进行麻醉、气管插管及动静脉置管等基本操作，不进行CA和CPR。DMSO对照组和PD98059组在自主循环恢复（ROSC）30 min时分别经股静脉注射DMSO或PD98059 0.30 mg/kg；Sham组和模型组给予等量生理盐水。记录各组大鼠CPR持续时间，以及ROSC 24 h存活率和神经功能缺损评分（NDS）；分别采用苏木素-伊红（HE）染色和尼氏染色后观察脑皮质病理学改变；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测磷酸化ERK（p-ERK）、ERK、钙蛋白酶抑制蛋白（calpastatin）、calpain-1和calpain-2的蛋白表达；采用双重免疫荧光法检测p-ERK与calpain-2共表达情况。 结果:各制模组大鼠CPR持续时间及各组大鼠24 h存活率差异均无统计学意义。模型组大鼠脑皮质细胞核明显变形固缩、细胞空泡和组织排列紊乱，尼氏小体较Sham组显著减少，NDS评分明显降低，且ERK磷酸化水平明显增高，calpain-2蛋白表达明显上调；DMSO对照组各项指标与模型组差异无统计学意义。而给予PD98059干预后，大鼠脑皮质病理损伤明显改善，尼氏小体明显增加，NDS评分较模型组明显升高〔分：75.0（72.0，78.0）比70.0（65.0，72.0）， P<0.05〕，ERK磷酸化水平和calpain-2蛋白表达水平较模型组明显降低〔p-ERK（p-ERK/ERK）：0.65±0.12比0.92±0.05，calpain-2蛋白（calpain-2/GAPDH）：0.73±0.10比1.07±0.14，均 P<0.05〕；各组脑皮质calpastatin和calpain-1蛋白表达水平差异均无统计学意义。双重免疫荧光染色显示，p-ERK与calpain-2在细胞质和细胞核中存在共表达，模型组p-ERK与calpain-2共表达率较Sham组明显升高〔（38.6±4.3）%比（9.2±3.5）%， P<0.05〕，而PD98059组p-ERK与calpain-2共表达率则较模型组明显降低〔（18.2±7.0）%比（38.6±4.3）%， P<0.05〕。 结论:ERK与calpain-2共同参与了CA-CPR致CIRI；PD98059在抑制ERK磷酸化的同时也抑制了calpain-2的表达；ERK/calpain-2可作为CIRI治疗新靶点。

目的 通过比较噪声暴露后基底膜不同区域内毛细胞(IHCs)带状突触损伤差异,探讨带状突触损伤易感性的相关因素.方法 将28只C57BL/6J雄性小鼠随机分为噪声暴露组和对照组,每组14只.噪声暴露组小鼠给予强度103 dB SPL、频率2～20 kHz、持续2 h的宽带噪声暴露,对照组小鼠则饲养于安静环境中.噪声暴露前及噪声暴露后第一天进行ABR测试及毛细胞带状突触免疫荧光染色实验.使用全细胞膜片钳技术比较不同区域IHCs的钙离子流入.通过免疫荧光染色比较噪声暴露后的耳蜗基底膜顶回、中回、底回IHCs钙蛋白酶(Cal-pain)表达水平,并用蛋白质印迹实验验证钙蛋白酶对IHCs带状突触蛋白CtBP2的损伤作用.结果 噪声暴露后一天,噪声暴露组在11.3、16.0、22.6、32.0 kHz的ABR阈值较对照组显著上升(均为P＜0.001),中回、底回IHCs带状突触数量明显减少(P＜0.05).全细胞膜片钳实验结果表明耳蜗基底膜中回IHCs有较多的钙离子通道(P＜0.01),但其单通道电流较小(P＜0.01),顶回、中回IHCs钙离子通道开放率无显著差异(P＞0.05).噪声暴露后,耳蜗基底膜中回、底回IHCs的Calpain表达水平显著高于顶回(P＜0.001),蛋白质印迹实验结果表明Calpain以钙离子依赖的方式降解带状突触蛋白CtBP2.结论 钙蛋白酶是基底膜高频区内毛细胞带状突触噪声损伤易感的重要因素.

膈肌是人体内最重要的呼吸肌之一,其中呼吸肌功能的 60%～80%是由膈肌发挥作用的.机械通气是临床重症呼吸衰竭患者常用的支持手段,在维持患者呼吸功能的同时,呼吸机使用不当也能造成呼吸机相关性膈肌功能障碍(VIDD).VIDD的发病机制主要由机械通气导致膈肌线粒体氧化应激(MOS),此外,泛素-蛋白酶体系统(UPS)蛋白降解、自噬、钙蛋白酶活性改变、钙离子、细胞因子也在VIDD的进程中发挥着重要作用.对于VIDD病理机制进行深入了解,有利于临床预防及治疗VIDD.现从可能引起VIDD的潜在病因(呼吸机使用不当、年龄、营养和代谢状态、合并疾病、药物因素)及机制(线粒体氧化应激、膈肌细胞的自噬、钙蛋白酶的激活、钙离子浓度升高)方面的研究进展进行概述,从而为VIDD的治疗提供参考.

目的:观察温肺降浊方对血管性痴呆(VaD)模型大鼠细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)信号通路的影响,探讨其治疗 VaD可能的相关作用机制.方法:将雄性 SD大鼠随机分为假手术组和模型组(等体积 0.9％氯化钠溶液灌胃),温肺降浊方低、中、高剂量组(1.5、3、6 ml剂量灌胃).观察造模后大鼠水迷宫评分和 HE 病理变化,免疫组化、RT-qPCR和Western blot检测海马组织中ERK1/2、钙蛋白酶(Calpain)、Bcl-2 关联死亡启动子重组蛋白(Bad)、B淋巴细胞瘤-xl(Bcl-xl)蛋白和 mRNA表达情况.结果:与假手术组相比,模型组和温肺降浊方各剂量组大鼠逃避潜伏期延长、穿越平台次数缩短(P<0.05),海马组织形态稀疏、水肿及核缩小;海马组织 ERK1/2、Calpain、Bad 蛋白和 mRNA表达升高(P<0.05),Bcl-xl蛋白和 mRNA表达下降(P<0.05).与模型组比较,温肺降浊方高剂量组大鼠逃避潜伏期缩短、穿越平台次数增加(P<0.05),海马组织形态逐渐紧密、水肿减少,数量增多;海马组织ERK1/2、Calpain、Bad蛋白和 mRNA表达下降(P<0.05),Bcl-xl 蛋白和 mRNA 表达升高(P<0.05).结论:血管性痴呆可能与大鼠海马中的 ERK1/2、Calpain、Bad蛋白升高及 Bcl-xl 蛋白降低有关,温肺降浊方可以抑制 VaD大鼠海马中的 ERK1/2 通路激活,减少神经细胞凋亡,延缓疾病进展,改善血管性痴呆大鼠的学习记忆能力.