目的:了解山西省家禽中艾伯特埃希菌的带菌情况。方法:采集山西省不同禽类定点屠宰场鸡肠内容物经EC肉汤增菌后，PCR对其进行 eae基因检测，阳性增菌液接种麦康凯琼脂，挑取不发酵乳糖菌落进行三重PCR（ clpX、 lysP和 mdh基因）、16S rRNA基因序列分析及多位点序列分型（Multiocus sequence typing，MLST）鉴定。 结果:本研究共采集了250份样品，经 eae基因检测、生化鉴定、三重PCR检测、16S rRNA及MLST聚类分析，确定2株不发酵乳糖、木糖，无动力， eae、 clpX、 lysP和 mdh基因阳性的菌株为艾伯特埃希菌。进一步对该2株艾伯特埃希菌毒力基因分析发现，该菌株携带Ⅱ/Ⅲ/Ⅴ组亚型 cdtB基因，但均不携带 stx基因。 结论:本研究表明山西省鸡类中存在艾伯特埃希菌带菌的情况。

目的:探讨鞘氨醇激酶-2(sphingosine kinases 2, SphK2)对活化的星形胶质细胞功能的调控及对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠疾病进程的影响。方法:白细胞介素-17(interleukin 17, IL-17)体外诱导C57BL/6野生型(wild type，WT)小鼠及 sphk2基因敲除( sphk2 -/-)小鼠原代星形胶质细胞活化，real-time PCR测定炎性因子及趋化因子的mRNA转录水平变化，Western blot和免疫荧光检测胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达及信号转导与转录激活因子3的磷酸化(p-STAT3)水平。髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG 35-55)多肽体内诱导小鼠EAE模型，Western blot检测脊髓组织中GFAP和p-STAT3的蛋白质表达水平；real-time PCR检测脊髓组织中炎性因子的mRNA转录水平；苏木素-伊红(HE)和劳克坚牢蓝染色(Luxol fast blue, LFB)观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失变化。 结果:与WT组相比较， sphk2 -/-组IL-17体外刺激小鼠原代星形胶质细胞后，p-STAT3水平显著下降；单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1, MCP-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α，TNF-α)及IL-6等趋化因子及炎性因子的mRNA转录水平明显降低。 sphk2 -/-EAE小鼠与WT EAE小鼠相比较，上述指标体内变化与体外结果相似，且 sphk2 -/-EAE小鼠脊髓组织炎性细胞浸润与髓鞘脱失显著减轻，但体内外GFAP的表达差异无统计学意义。 结论:SphK2可能通过STAT3分子信号调控反应性星形胶质细胞的功能，从而调节炎性因子及趋化因子的产生，参与EAE的病变进程。

目的 了解2023年2月浙江省杭州市某学校发生的一起聚集性腹泻疫情的流行病学及病原学特征.方法 对该起聚集性疫情开展流行病学调查,并采集腹泻患者肛拭子、食品留样及环境样品进行病原体快速筛查和分离鉴定,对分离的病原菌进行药敏试验和全基因组测序分析.结果 本次聚集性疫情共造成22人出现腹泻、腹痛、呕吐等胃肠道症状.从6例腹泻患者肛拭子中分离到eae基因阳性菌株,经进一步鉴定确证为艾伯特埃希菌.6株菌对26种抗生素均敏感,核心基因组的多位点序列分型进化分析显示6株菌单独聚为一簇,且菌株间核心基因组的单核苷酸多态性差异仅在0～1 bp之间.结论 这起学校聚集性腹泻疫情是由艾伯特埃希菌引起,为中国首次报道由艾伯特埃希菌引起的聚集性疫情.

目的:研究microRNA-92a(miRNA-92a或miR-92a)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠中枢神经系统CD4+T细胞分化中的作用,以及miR-92a通过糖酵解途径调控T淋巴细胞分化的过程,并以哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)为下游关键分子靶点,探讨miR-92a影响EAE病理过程的分子机制.方法:利用C57BL/6J或miR-92a-/-小鼠成功构建EAE模型后,分离脊髓CD4+T细胞体外培养,采用流式细胞术检测1型辅助性T(Th1)细胞1、Th2、Th17和调节性T细胞(Treg)细胞比例,利用Seahorse能量代谢分析仪检测细胞糖酵解水平,利用RT-qPCR检测相关基因变化水平;诱导体外培养的初始CD4+T细胞分化为Th1或Treg细胞,在此基础上调控miR-92a水平并结合糖酵解激动剂或抑制剂,检测细胞分化比例;利用Western Blot检测C57BL/6J或miR-92a-/-小鼠CD4+T细胞中mTOR和磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达变化,用质粒转染过表达mTOR后,检测CD4+T细胞糖酵解水平和细胞分化水平.结果:miR-92a可导致EAE后CD4+T细胞分化比例失衡,即Th1和Th17细胞比例增加,Th2和Treg细胞比例减少;miR-92a通过促进糖酵解调控CD4+T细胞分化,抑制糖酵解后促进Treg细胞分化;miR-92a表达的增加能够通过激活mTOR信号通路提高细胞糖酵解水平,从而影响细胞分化.结论:miR-92a通过激活mTOR信号通路促进T淋巴细胞糖酵解,破坏CD4+T细胞分化平衡,从而参与多发性硬化(MS)和EAE的病理过程.

目的 分析江苏省某监测点家畜来源肠致病性大肠埃希菌分离株分子特征,进而评估其潜在的致病性,为感染性腹泻的监测与防控提供依据.方法 采用全基因组测序技术对江苏省某监测点分离的家畜来源的37株肠致病性大肠埃希菌(EPEC)菌株进行特征性分析.结果 本地家畜来源的EPEC均为非典型EPEC(aEPEC),其血清型多样,携带多种与腹泻相关的毒力基因,有9种ST型且具有区域性流行特征,eae基因包含有5种亚型,β1为优势亚型,其在腹泻病人中也最为常见.结论 aEPEC对公众健康构成潜在威胁,应在感染性腹泻的监测工作中,加强对家畜粪便及养殖环境的监测.

目的 明确本院感染性腹泻患者致泻性大肠埃希菌毒力和耐药特征.方法 采用VITEK MS 微生物质谱检测系统初步鉴定,多重实时荧光PCR检测毒力基因,对本院感染性腹泻患者临床分离的致泻性大肠埃希菌(Diarrheagenic Escherichia coli,DEC)进行5 种型别鉴定.微量肉汤稀释法和E-test法药敏试验检测DEC菌株的耐药表型特征.二代测序及生物信息学分析其耐药分子特征.采用Fisher确切概率法进行统计学分析.结果 本院DEC检出率为 11.9%,其中EAEC占比 37.5%,非典型EPEC占比 34.38%,ETEC占比 25.0%,EIEC占比 3.12%,未检出EHEC菌株.32 株DEC对氨苄西林、四环素、甲氨苄啶/磺胺异恶唑耐药率最高,分别为 53.12%、43.75%和 37.5%.ESBLs(+)株占比 18.75%,其多重耐药菌株检出率为 83.83%,显著高于ESBLs(-)菌株,差异有统计学意义(P=0.042).32 株DEC共有 25 个ST型,优势基因型为ST10 共 4 株(12.5%),ST28、ST31 和ST3153 各2 株(各占比6.25%),其他21 个型别各1 株菌(各占比3.13%).EAEC中检出1 株携带blaNDM-1的耐碳青霉烯类菌株.结论 我院感染性腹泻患者的DEC以aggR、pic、astA、eae 4 种毒力基因较为常见,以EAEC、EPEC为主要型别,基因型别呈高度多态性,检出多重耐药菌株.

目的 探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中,外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响.方法 流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能;琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠.流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响.40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型:对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组,每组20只;记录临床评分;流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况.40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型:ERMAP+/+和ERMAP-/-组,每组20只.记录临床评分;脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分.流式细胞术检测IL-17A+CD4+T细胞百分比;Western blotting检测IL-6、白细胞介素17(IL-17)、STAT3、磷酸化 STAT3(p-STAT3)、ROR-γt 蛋白水平表达;Real-time PCR 检测 IL-17、肿瘤坏死因子 a(TNF-a)、IL-6、STAT3和ROR-γt的mRNA表达;ELISA检测细胞水平IL-17和TNF-a的表达.结果 1.外源性ERMAP-Ig融合蛋白抑制体内外Th17细胞分化且减轻小鼠EAE症状.2.与对照组相比,ERMAP-/-组EAE小鼠炎性浸润和脱髓鞘症状加重,Th17分泌IL-17A增加.3.内源性ERMAP基因敲除后,IL-17、TNF-α、IL-6、STAT3及ROR-γt表达均增加.差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 ERMAP可能通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路调控Thl7细胞分化,参与小鼠EAE发生发展.

目的:筛选多发性硬化症(MS)的关键基因,探讨其发病机制并寻找潜在的治疗靶点.方法:从基因芯片数据库(GEO)搜索MS在皮层的基因表达数据,并分析与正常皮层组织的差异表达基因(DEGs);利用DAVID在线软件对挑选出的DEGs进行GO富集分析.基于STRING数据库及Cytoscape软件构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络,利用MCODE与Cytohubaa分析其关键基因簇并筛选出有交集的关键基因,最后在动物模型中加以验证.结果:共纳入两套MS基因芯片数据,选出有交集的DEGs 74个,其中上调基因2个,下调基因72个.DEGs GO富集分析发现钾离子跨膜转运等生物学过程与MS的发生发展相关.Cytoscape软件筛选出10个关键基因,从中选出Kcnc1、Kcnc2两个下调基因,并在小鼠EAE模型中得到验证.结论:利用生物信息学方法有效筛选出参与MS发生的Kcnc1、Kcnc2基因,为MS的治疗提供潜在的治疗靶点和策略.

目的 探讨CD8+ T细胞在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)复发期的部分免疫效应及其作用机制.方法 将 30 只 6～8 周雌性C57BL/6 小鼠随机分为对照组和EAE模型组,每组 15 只;EAE模型组给予髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)人工被动免疫;免疫当日起进行临床神经功能评分;透射电子显微镜(TEM)观察髓鞘结构变化;流式细胞术检测脾脏T 细胞亚群变化;单细胞转录组测序分析中枢神经系统免疫反应表型及相关基因表达差异;微量样本多指标流式(CBA)检测脑组织中细胞因子表达水平;RT-qPCR检测脑组织中主要组织性相容复合物(MHC)分子、Fas、Fas L和颗粒酶B基因表达.结果 MOG35-55 多肽可以成功诱导雌性C57BL/6 小鼠EAE缓解—复发模型;EAE模型组小鼠复发期脾脏中T细胞免疫应答较对照组升高(P＜0.05);脑组织内出现大量T淋巴细胞浸润,免疫效应以Th1 细胞为主;小胶质细胞中MHCⅠ及MHCⅡ类分子基因表达上调(P均＜0.05),且诱导表达MHCⅡ类分子的小胶质细胞几乎同时伴随MHCⅠ类分子的共表达,未见MHCⅡ类分子的独立表达;CD8+ T细胞杀伤效应相关分子Fas基因、TNF-α基因表达差异均无统计学意义(P均>0.05);颗粒酶B基因表达量增高(P＜0.01).结论 CD8+ T细胞可能通过颗粒酶B杀伤MHCⅠ类分子和MHCⅡ类分子共表达的小胶质细胞,通过减弱MHCⅡ类分子对CD4+ T细胞活化,间接抑制复发期炎性反应,发挥免疫负调节作用.

目的 筛选肠道致病性大肠埃希氏菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)菌株,并将其申报为中国医学细菌保藏管理中心(China Medical Bacterial Species Conservation and Management Center,CMCC)标准菌株;以此标准菌株研制我国自主知识产权的EHEC菌株及其基因组DNA标准物质,并将其申报为国家药品标准物质.方法 依据GB4789.6-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》,从160株来源于腹泻患者的大肠埃希菌中筛选EHEC菌株,按照CMCC菌株管理规定整理材料将其申报为标准菌株.用其制备EHEC菌液及其基因组DNA溶液,采用冷冻干燥技术分别制备菌株类(103CFU/样品)和基因组DNA类(20ng/样品)样品各600个.将这两种样品各随机抽取20个进行均匀性检验;并分别于25、37℃条件下存放1、3、5、7 d取样检测运输稳定性,于4 ℃条件下存放7、14、28 d取样检测短期保存稳定性,于-20℃条件下存放14、28、60 d取样检测长期保存稳定性.组织3家实验室对两种样品进行协同标定.筛选20种食品基质对菌株样品进行使用效果评价.结果 从160株来源于患者的大肠埃希菌中筛选出1株EHEC菌株,最终申报为CMCC(B)43207标准菌株.均匀性检验中,F菌株样品=0.662＜FINV(0.05,19,20),P＞0.05;20个基因组样品的eae、stx1、stx2基因均为阳性.于25和37 ℃保存7 d、-20 ℃保存60 d、4 ℃保存28 d后,菌株样品活菌含量均为103CFU/样品,基因组样品的eae、stx1、stx2基因均为阳性.随机抽取的EHEC菌株和基因组DNA样品经3家实验室鉴定均为EHEC,活菌含量均在103CFU/样品的水平,且eae、stx1、stx2基因均为阳性.在20种食品基质中加入样品后均可检出,本底对照均未检出.EHEC菌株及其基因组DNA样品均纳入我国药品标准物质,编号分别为80024和80056.结论 研制的具有自主知识产权的EHEC菌株及其基因组DNA标准物质可提高EHEC检验的时效性,弥补了我国此方面空白.