目的:探讨糖尿病足(diabetic foot, DF)创面中铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)三型分泌系统、生物膜特点，分析其与抗生素耐药性的关系。方法:收集2018年2月1日至2018年12月31日天津医科大学朱宪彝纪念医院糖尿病足科住院DF患者创面中铜绿假单胞菌33株，作为DF组，同时收集非糖尿病创面中铜绿假单胞菌13株，作为对照组。做抗生素敏感试验，检测铜绿假单胞菌三型分泌系统毒力基因exoS、exoU及生物膜形成能力。分析其特点及与抗生素敏感性的关系和临床转归情况。结果:两组均以携带exoS的铜绿假单胞菌为主。DF组占90.9%，对照组占84.6%，差异无统计学意义( χ2＝0.54， P＝0.46)。携带exoS的多重耐药菌株在DF组占16.7%，对照组占18.2%，差异无统计学意义( χ2＝0.18, P＝0.83)。携带exoU的铜绿假单胞菌共5株，DF组3株，1株多重耐药，对照组2株，无多重耐药株。DF组中生物膜增强的铜绿假单胞菌占57.6%，多重耐药株生物膜增强的占83.3%。两种铜绿假单胞菌产生的生物膜耐药性不同，但均对碳青霉烯类抗生素无效。产生生物膜的DF创面清创次数更多( P<0.01)，抗生素使用时间更长( P<0.01)，但愈合率在75%～90%。 结论:DF创面中以分泌exoS铜绿假单胞菌为主。DF创面中铜绿假单胞菌产生生物膜是其产生耐药的原因之一，通过多次清创联合敏感抗生素治疗是清除生物膜的有效方法。

目的:探讨引起血流感染铜绿假单胞菌（ Pseudomonas aeruginosa， P. aeruginosa）的耐药性、毒力基因携带情况以及多位点序列分型（MLST）的型别。 方法:回顾性收集2014年11月至2021年12月山东第一医科大学第一附属医院引起血流感染的铜绿假单胞菌94株。使用基质辅助激光解析/电离飞行时间质谱仪对铜绿假单胞菌进行菌种鉴定，使用Vitek 2 Compact 全自动细菌药敏分析系统对铜绿假单胞菌进行抗菌药物敏感性实验。应用聚合酶链式反应（PCR）方法对18种常见毒力基因的携带情况进行检测。应用MLST对分离菌株进行分型。采用卡方检验对碳青霉烯类抗生素耐药的铜绿假单胞菌（carbapenem resistant pseudomonas aeruginosa，CRPA）和碳青霉烯类抗生素敏感的铜绿假单胞菌（carbapenem susceptible pseudomonas aeruginosa，CSPA）菌株的耐药及毒力基因的携带情况进行比较。 结果:在94株铜绿假单胞菌中，有19株（20.2%）为多重耐药（MDR）菌株，其中有17株为碳青霉烯类抗菌药物耐药株，2株为碳青霉烯类抗菌药物敏感株。所有菌株均包含10种以上的毒力基因，除 exoU基因外，其余基因的检出率均在83%以上。本研究共发现66个ST型，包括59个已知ST型和7个新ST型。其中ST244（11株，11.7%）和ST270（7株，7.4%）为优势型别，两种型别的菌株具有相同的毒力基因分布，但对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率有所差异，其中ST244型别的菌株中有54.5%（6株）的为CRPA，但7株ST270型别的菌株则均为CSPA。 结论:引起血流感染铜绿假单胞菌的耐药性处于较低水平，但存在一定数量的碳青霉烯类抗菌药物耐药菌株和多重耐药菌株。这些菌株具有较高毒力基因携带率和分子多态性特征，在临床上应予以关注。

目的 探讨临床检测的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌中Ⅲ型分泌系统(T3SS)4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)的表达情况及其对抗菌药物的耐药性.方法 收集安徽医科大学附属安庆第一人民医院2022-2023年临床检测的各种来源的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌87株,采用Vitek2-Compact仪器对菌株进行鉴定,并且进行药敏试验,采用聚合酶链反应对T3SS的4种毒力基因(exoT、exoY、exoS、exoU)进行检测,比较不同毒力基因型组合与抗菌药物耐药性之间的关系.结果 87株耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌表达exoT与exoY基因的阳性率均为100.00％(87/87),exoS基因阳性率为77.01％(67/87),exoU基因阳性率为27.59％(24/87).共检出4种类型的T3SS毒力基因型组合,以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,阳性率为71.26％(62/87),其次是exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合,阳性率为21.84％(19/87).药敏试验结果显示,exoT+/exoY+/exoS-/exoU+基因型组合对大部分常见抗菌药物,如阿米卡星、妥布霉素、头孢吡肟、头孢他啶、头孢哌酮/舒巴坦、环丙沙星、哌拉西林的耐药率均明显高于exoT+/exoY+/ex-oS+/exoU-基因型组合,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 该院检出的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌携带表达的T3SS毒力基因主要以exoT+/exoY+/exoS+/exoU-基因型组合为主,不同毒力基因型组合的耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌对常见抗菌药物的耐药性存在差异.

目的 对海南省桶装饮用水中铜绿假单胞菌的耐药性及Ⅲ型分泌系统(typeⅢsecretion system,T3SS)毒力基因携带情况进行调查,在菌株核糖体分型基础上探讨其与样品来源及毒力基因之间的关系,为桶装饮用水的安全监管、污染溯源调查及耐药菌临床治疗提供数据基础.方法 使用VITEK 2 Compact全自动微生物药敏系统对分离得到的55株铜绿假单胞菌进行耐药性分析,通过PCR法扩增T3SS毒力基因ExoU、ExoS、ExoT、ExoY,并应用RiboPrinter全自动微生物基因指纹鉴定系统对分离菌株进行鉴定分型及聚类同源性分析.结果 药敏结果显示,桶装饮用水中分离的铜绿假单胞菌菌株处于较低耐药水平,但仍然发现1株多重耐药铜绿假单胞菌,对亚胺培南、环丙沙星、头孢吡肟均耐药.T3SS毒力基因分布表现为4种基因型组合,分别为ExoT+/ExoY+/ExoS+/ExoU-(45.45％,25/55)、ExoT+/ExoY+/ExoS-/ExoU+(34.55％,19/55)、ExoT+/ExoY-/ExoS-/ExoU+(18.18％,10/55)、ExoY+/ExoY+/ExoS+/ExoU+(1.82％,1/55).菌株核糖体分型共分为6个亚型,各亚型包含菌株数分别为24、1、25、1、3、1,占比分别为43.64％、1.82％、45.45％、1.82％、5.45％和1.82％,以亚型Ⅰ和亚型Ⅲ的菌株占主要优势,亚型Ⅰ菌株主要的T3SS基因型为ExoT+/ExoY+/ExoS-/ExoU+,占比66.67％(16/24),亚型Ⅲ菌株主要的T3SS基因型则为ExoT+/ExoY+/ExoS+/ExoU-,占比88％(22/25).结论 T3SS分泌系统呈现多个毒力基因协同表达的特点,各菌株亚型与毒力基因型存在一定的关联性,通过对两者之间的关系探讨对桶装饮用水铜绿假单胞菌污染溯源、生产控制、临床治疗具有一定的指导意义,初步积累了本地桶装饮用水中铜绿假单胞菌株库及药敏数据.

目的 比较两种表型铜绿假单胞菌(PAE)毒力基因、产金属酶(MBLs)及耐药性,为临床治疗和医院感染控制提供依据.方法 采用ATB鉴定系统进行菌株鉴定,筛选出两种表型菌株;纸片扩散法检测耐药性;PCR方法检测毒力基因exoS、exoU和exoY;改良Hodge试验(PAE-MHT)法检测MBLs.结果 非黏液型PAE对各种抗生素的耐药率均高于黏液型,其中对庆大霉素、氨曲南、左氧氟沙星、亚胺培南、美罗培南的耐药率明显高于黏液型;同时非黏液型MBLs阳性率明显高于黏液型;3种毒力基因阳性率黏液型均高于非黏液型,但两者比较无显著性差异;6种基因型中,除exoU+/exoS-/exoY-和exoU-/exoS-/exoY-两种基因型非黏液型明显高于黏液型外,其余四种基因型的比较无显著性差异.结论 针对PAE感染,应尽早尽快选择敏感药物治疗,以免非黏液型转化成黏液型后,增加治疗难度.

目的 探究临床分离铜绿假单胞菌中T3SS毒力基因分布、表达及与耐药的相关性.方法 收集2015年温州医科大学附属第一医院分离的铜绿假单胞菌共68株.琼脂稀释法检测抗菌药物的敏感性;PCR法检测不同来源菌株exoU、eroS、exoT、exoY4种毒力基因的分布,并对结果进行统计学分析;实时荧光定量PCR检测部分菌株中转录调控相关基因ptrA、exsA以及效应蛋白基因exoT、exoS的表达情况,并对4种基因的相对表达量进行Pearson相关性分析.结果 68株铜绿假单胞菌中,exoT和exoY检出率较高,分别为79.4％和75.0％,其中exoT在创面来源菌株中的检出率高于痰液(97.0％ vs 61.8％,P＜0.01),且以exoU-/exoS+基因型最常见,占51.5％ (35/68).痰液来源的菌株对亚胺培南、美罗培南的耐药率显著高于创面来源菌株(47.1％ vs 8.8％,47.1％vs 14.7％,P＜0.01);携带exoU基因的菌株对碳青霉烯类、氨基糖苷类和氟喹诺酮类药物耐药率均高于其他3种基因型菌株.Pearson相关性分析显示ptrA基因表达量与exoT、exoS、exsA基因表达水平均呈负相关(P＜0.05).结论 本院临床分离的铜绿假单胞菌T3SS毒力基因exoT和exoY的携带率较高,毒力基因与铜绿假单胞菌耐药性相关,ptrA可能是T3SS毒力基因表达的潜在负调控基因.

目的 了解临床分离耐碳青霉烯类铜绿假单胞菌(carbapenem-resistant Pseudomonas aeruginosa,CR-PA)毒力基因exoU与exoS携带情况、耐药特征及同源性.方法 收集2016-2017年临床分离CR-PA 54株,PCR扩增exoU和exoS毒力基因,比较exoS+exoU-株和exoS-exoU+株间耐药率差异及其分离患者临床特征,随机扩增多态性DNA (RAPD)分析菌株间亲缘关系.结果 54株CR-PA中,exoS和exoU基因阳性株数分别为38株和13株,其中exoS+exoU-、exoS-exoU+、exoS+exoU+和exoS-exoU-型分别为37株、12株、1株和4株.exoS-exoU+株对庆大霉素和环丙沙星耐药率高于exoS+exoU-株(x2=7.734,P＜0.05;x2=4.274,P＜0.05).30株CR-PA可聚类,exoS+exoU-型株居多(32.4％),集中分布于ICU和神经内科.结论 本院exoS+exoU-型CR-PA临床分离率高.与exoS+exoU-型相比,exoS-exoU+型CR-PA对庆大霉素和环丙沙星的耐药率较高.

目的 了解铜绿假单胞菌在医院感染的临床分布、对抗菌药物的耐药性特点及多药耐药菌株毒力基因的携带与耐药性关系,为合理用药提供依据.方法 对该院2016年1月至2017年12月临床分离的铜绿假单胞菌引起的感染分布及药敏结果进行回顾性分析.同时收集43株多药耐药铜绿假单胞菌,运用聚合酶联反应(PCR)法对毒力基因exoS和exoU进行检测,对携带exoS(-)/exoU(+)和exoS(+)/exoU(-)两组菌株的耐药率进行 χ2检验.结果 共分离出1000株铜绿假单胞菌,以痰液标本为主,为72.6％;铜绿假单胞菌对阿米卡星敏感度最好,耐药率为9.6％,对头孢他定耐药率最高为42.2％.43株多药耐药菌株中以exoS(+)/exoU(-)基因型为主,有33株,占78.6％,exoS(-)/exoU(+)基因型有6株,占14.3％,exoS(-)/ex-oU(+)菌株对环丙沙星和左氧氟沙星等抗菌药耐药率均明显高于exoS(+)/exoU(-),耐药率差异有统计学意义(P<0.05).结论 铜绿假单胞菌在医院表现出多药耐药,且以exoS为主,虽然携带exoU的菌株所占比例较低,但其耐药率高.

目的 以铜绿假单胞菌的基因芯片为研究样本,并对其进行组学数据层面的挖掘,旨在从分子生物学的层面阐明下呼吸道铜绿假单胞菌毒力基因exoS和exoU的共表达网络特征,并发现其关键的调控基因.方法 于2016年3月至2018年5月采用定群抽样的方法选取内蒙古包钢医院呼吸内科接诊并在该院接受后续治疗的312例下呼吸道铜绿假单胞菌感染者为受试对象,生物标本为患者的肺泡灌洗液及痰液.使用寡聚核苷酸探针对铜绿假单胞菌的基因进行检测,对芯片数据进行预处理.选择头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、阿米卡星、环丙沙星、左旋氧氟沙星、多尼培南、替卡西林共8种呼吸内科针对革兰阴性菌常用的抗菌药物对生物标本进行耐药性测定,利用MCODE算法构建以exoS/exoU为核心的耐药基因共表达网络模型.结果 耐药组exoS/exoU表达量均显著高于非耐药组,差异有统计学意义(P＜0.05);耐药组肺泡灌洗液标本前5位差异表达基因差异表达量从高到低排序依次为RAC1、ITGB1、ITGB5、CRK及IGF1R.痰标本顺序为RAC1、CRK、IGF1R、ITGB1及ITGB5.肺泡灌洗液标本中仅RAC1与exoS、exoU表达呈正相关性(P＜0.05);痰标本中RAC1、ITGB1、ITGB5、CRK及IGF1R与exoS、exoU表达呈正相关性(P＜0.05).共表达网络中纳入的基因包括exoS、exoU、RAC1、ITGB1、ITGB5、CRK、CAMK2D、RHOA、FLNA、IGF1R、TGFBR2、FOS.其中RAC1基因调控能力评分最高(72.00),调控基因数最多(6个);其后依次为ITGB1、ITGB5及CRK基因.结论 痰标本出现exoS和exoU高表达提示铜绿假单胞菌有更高概率产生耐药性;RAC1、ITGB1、ITGB5及CRK基因可能是调控exoS和exoU表达的关键基因.

目的 分析临床分离铜绿假单胞菌Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)毒力基因exoS、exoU在抗菌药物中表达的差异性,以期为患者选择合适的抗感染治疗方案及预后评估提供依据.方法 选取南昌大学第二附属医院2017年1月-2017年12月临床分离的铜绿假单胞菌72株,采用Vitek2 Compact全自动微生物鉴定仪进行细菌鉴定及药敏,采用PCR法检测分离菌株T3SS特异性片段popB和相关毒力基因exoS、exoU表达情况;收集患者临床信息,了解毒力基因表达与细菌耐药性的关系.结果 72株铜绿假单胞菌中4种基因型exoS+/exoU-、exoS-/exo U+、exoS+/exoU+和exoS-/exoU-,分别为56.94％、26.39％、4.17％和12.50％,其中痰液、血液标本中检出率最高的基因型为exoS+/exoU-,分别为57.50％(23/40)和70.00％(7/10).分析药敏结果显示,亚胺培南、氨基糖苷类和氟喹诺酮类耐药的分离株中携带exoU基因的耐药率显著高于携带exoS基因的耐药率,具有统计学意义(P＜0.05);其中携带exoU基因的总菌株为22株,其对亚胺培南、庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星、左氧氟沙星及环丙沙星的耐药率分别为45.45％、45.45％、50.00％、50.00％、40.91％和40.91％;携带exoS基因的总菌株为44株,其对以上药物的耐药率分别为4.55％、6.82％、4.55％、18.18％、11.36％和18.18％.结论 我院临床分离的铜绿假单胞菌毒力基因以exoS+/exoU-基因型为主;铜绿假单胞菌携带exoU基因时,显示出对亚胺培南、氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗菌药物具有更高的耐药性.