目的:探讨戈谢病临床病理学特点。方法:收集戈谢病1型3例病例进行组织学、免疫组织化学、超微结构及临床病理分析，其中1例进行全外显子测序。结果:患者3例，例1男性，例2和例3均为女性，年龄分别为42、23和26岁。组织学观察，在脾窦、肝窦和骨组织中充满戈谢细胞，呈簇状或片状聚集，组织结构破坏。戈谢细胞体积大，有1个或多个小而深染、偏位的胞核，胞质丰富，呈纤维状或“皱纹纸”状。电镜观察，胞质内有大量特征性的膜结合管状结构的溶酶体包涵体。免疫组织化学显示，戈谢细胞均呈CD68、CD163、CD4、CD11c、CD31、CD45、HLA-DR、溶菌酶和波形蛋白阳性。Ki-67阳性指数<1%。例3进行全外显子测序，发现有复合杂合性GBA c.1226A>G，p.N409S和c.115+1G>A剪接突变。结论:戈谢病病理形态结合免疫组织化学及超微结构，有助于诊断，最终还需基因检测确诊。

目的:构建髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的骨硬化小鼠模型，并进行表型研究。方法:构建条件性敲入Clcn7基因p.G763R错义突变小鼠，并与溶菌酶M启动子-重组酶转基因小鼠(LysM cre)交配繁殖，最终获取髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的骨硬化小鼠。利用Micro CT分析不同基因型小鼠骨微细结构的差异，利用HE染色观察骨组织形态学改变。诱导原代破骨细胞，通过实时荧光定量PCR技术检测破骨细胞分化和成熟相关基因表达水平。利用骨吸收陷窝实验观察破骨细胞功能。结果:4周龄时纯合突变小鼠体重较野生型小鼠减轻[(12.000±1.666)g对(15.630±2.314)g， P＝0.021]，股骨长度较野生型缩短[(1.160±0.096)cm对(1.300±0.082)cm， P＝0.037)]。Micro CT发现纯合突变小鼠骨密度在4周龄时较野生型小鼠显著增加[(0.753±0.002)g/cm 3对(0.143±0.034)g/cm 2， P＝0.003]，而杂合突变小鼠骨密度在8周龄时增加明显[(0.236±0.021)g/cm 3对(0.180±0.020)g/cm 3， P＝0.030]。HE染色发现纯合突变小鼠骨髓腔消失，松质骨骨小梁数量显著增多，软骨肥大区增宽；杂合突变小鼠骨小梁较野生型小鼠增多。体外实验中，杂合突变小鼠破骨细胞数量较野生型无明显变化( P＝0.358)，但破骨细胞面积增大[(3.590×10 6±0.911×10 6)μm 2对(1.352×10 6±0.260×10 6)μm 2， P＝0.043]，骨吸收陷窝相关检测结果提示破骨细胞功能降低，而破骨细胞分化和成熟相关基因NFATc1、c-fos、Ctsk和Acp5表达水平均无显著变化。 结论:本研究成功构建髓系细胞特异性Clcn7-G763R突变的小鼠，突变型小鼠破骨细胞功能受损，骨量显著增加且股骨变短，为后续机制研究和治疗探索提供工具。

目的:分析盲肠结扎穿孔术（CLP）诱导的脓毒症对肠上皮细胞增殖和分化的影响。方法:①动物实验：将16只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为假手术组（Sham组）和CLP致脓毒症模型组（CLP组），每组8只。术后5 d取空肠组织，用聚合酶链反应（PCR）检测富亮氨酸重复序列G蛋白耦联受体5（LGR5）和肠型碱性磷酸酶（IAP）的转录表达水平；用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测LGR5的翻译水平；用免疫组化法分析增殖细胞核抗原（Ki67）的表达；用改良钙钴染色法和比色法检测组织IAP水平；免疫荧光法检测肠道潘氏细胞标记分子溶菌酶1（LYZ1）和杯状细胞标记分子黏蛋白2（MUC2）的表达。②细胞实验：取对数生长期的大鼠小肠隐窝细胞（IEC6细胞），并分为空白对照组和脂多糖（LPS）组（LPS 5 μg/mL）。24 h后分别用PCR和Western blotting检测LGR5的转录和翻译水平；用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）染色检测IEC6细胞增殖情况；分别用PCR和比色法检测IAP的转录和翻译水平。结果:①动物实验：免疫组化结果显示，CLP组小鼠空肠组织Ki67染色阳性率低于Sham组〔（41.7±2.5）%比（48.7±1.4）%， P＝0.01〕。PCR和Western blotting结果显示，CLP组与Sham组小鼠空肠组织LGR5表达差异均无统计学意义（Lgr5 mRNA：0.7±0.1比1.0±0.2， P＝0.11；LGR5/β-actin：0.83±0.17比0.68±0.19， P＝0.24）；CLP组小鼠空肠组织IAP在转录水平（0.4±0.1比1.0±0.1， P<0.01）和蛋白水平（U/g：47.3±6.0比73.1±15.3， P<0.01）均低于Sham组。免疫荧光显示，CLP组小鼠空肠组织LYZ1、MUC2的表达水平均低于Sham组。②细胞实验：PCR和Western blotting结果显示，LPS组与空白对照组IEC6细胞LGR5表达水平差异无统计学意义（Lgr5 mRNA：0.9±0.1比1.0±0.2， P＝0.33；LGR5/β-actin：0.71±0.18比0.69±0.04， P＝0.81）。LPS组IEC6细胞增殖率低于空白对照组，但差异无统计学意义〔EdU阳性率：（40.5±3.8）%比（46.5±3.6）%， P＝0.11〕。LPS组IAP转录水平（0.5±0.1比1.0±0.2， P<0.01）和蛋白水平（U/g：15.0±4.0比41.2±10.4， P<0.01）均低于空白对照组。 结论:CLP诱发的脓毒症可抑制肠上皮细胞的增殖和分化，损伤肠上皮自我更新的能力。

目的:研究短时消毒对母乳中主要生物活性物质以及免疫细胞的影响。方法:收集2020年5月至2020年10月复旦大学附属儿科医院新生儿重症监护病房收治的早产儿母亲的新鲜母乳。将同一份母乳分为3份，按不同的处理方法分为未消毒组、巴氏消毒（62.5 ℃ 30 min）组和短时消毒［（62.5±0.5） ℃ 5 s］组。通过酶联免疫吸附法检测乳清中的分泌型免疫球蛋白A（secretory immunoglobulin A，sIgA）、乳铁蛋白（lactoferrin，LTF）、溶菌酶（lysozyme，LZM）以及胰岛素样生长因子结合蛋白-3（insulin-like growth factor binding protein-3，IGFBP-3）的含量；通过流式细胞术检测母乳中存活免疫细胞（白细胞、单核细胞、T细胞、B细胞）的数量及其百分比。应用弗里德曼双向秩方差分析（Friedman检验）、Bonferroni校正、配对样本 t检验或配对样本非参数检验等方法，对数据进行统计学分析。 结果:共收集53位母亲的新鲜母乳共87份 。（1）未消毒组sIgA、LTF、LZM的含量均高于短时消毒组［0.42 mg/ml（0.33～0.65 mg/ml）与0.40 mg/ml（0.28～0.62 mg/ml），（3.57±1.06）与（3.53±1.11） mg/ml，128.60 μg/ml（77.18～203.00 μg/ml）与121.70 μg/ml（68.66～188.20 μg/ml）］，而短时消毒组又高于巴氏消毒组［0.25 mg/ml（0.17～0.37 mg/ml）、（0.85±0.58） mg/ml和83.40 μg/ml（47.40～151.40 μg/ml）］（ P值均<0.05）。巴氏消毒组sIgA、LTF、LZM的保有率均低于短时消毒组［55.87%（46.01%～71.41%）与96.93%（83.03%～115.90%）；21.72%（12.54%～29.42%）与97.88%（88.98%～104.30%）；69.26%（49.42%～89.08%）与93.80%（74.85%～110.20%）； P值均<0.05］。3组IGFBP-3含量和保有率差异无统计学意义（ P值均>0.05）。（2）巴氏消毒组存活白细胞、单核细胞、T细胞和B细胞数量明显低于未消毒组［185.50个（87.00～356.50个）与1 271.00个（540.50～2 283.00个）；12.00个（6.00～16.75个）与266.00个（137.30～518.80个）；1.00个（0.00～2.00个）与47.50个（28.50～116.00个）；1.00个（0.00～1.75个）与21.00个（10.00～41.50个）； P值均<0.05］；巴氏消毒组存活白细胞占全部白细胞百分比，以及存活单核细胞、T细胞和B细胞占存活白细胞的百分比也明显低于未消毒组［24.80%（16.00%～36.80%）与74.20%（63.55%～86.45%），5.91%（4.09%～8.77%）与21.90%（17.40%～29.30%）；0.31%（0.00%～1.31%）与4.00%（2.69%～6.43%）；0.30%（0.00%～0.86%）与1.27%（0.57%～2.85%）； P值均<0.05］。短时消毒组与未消毒组相比，也呈现类似趋势（ P值均<0.05）。但短时消毒组母乳存活白细胞和单核细胞数量及其分别占全部白细胞和存活白细胞的百分比［白细胞：279.50个（116.80～548.50个），32.20%（20.70%～45.75%）；单核细胞：32.00个（21.00～83.75个），15.60%（11.10%～19.15%）］明显高于巴氏消毒组（ P值均>0.05）。（3）不论采用巴氏消毒还是短时消毒，母乳中存活的单核细胞、T细胞以及B细胞占相应亚群的百分比均低于未消毒组［2.94%（1.33%～7.14%）、9.72%（5.77%～16.00%）与52.60%（31.35%～68.75%）；0.00%（0.00%～1.61%）、0.49%（0.00%～2.53%）与28.10%（10.55%～57.00%）；0.00%（0.00%～0.83%）、0.24%（0.00%～2.47%）与13.80%（3.27%～41.00%）； P值均<0.05］，短时消毒组仅存活单核细胞所占百分比高于巴氏消毒组。 结论:短时消毒相较于巴氏消毒能够更好地保留母乳中的sIgA、LTF和LZM，同时可以较好地保留单核细胞的活性。

目的:比较前蛋白转化酶枯草溶菌酶9（PCSK9）抑制剂与他汀类药物对2型糖尿病（T2DM）患者血脂异常的疗效。方法:选取2018年1月至2021年1月山东第一医科大学附属人民医院血脂异常的T2DM患者140例，其中男80例，女60例，年龄41~72（55±5）岁。采用随机数字表法分为观察组（ n=68）和对照组（ n=72）。两组患者均给予降糖等常规治疗，其中对照组给予他汀类药物调脂，观察组给予PCSK9抑制剂调脂。比较两组患者治疗前后低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、白细胞介素（IL）-1、IL-6、IL-8、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）表达水平的差异以及LDL-C达标率的差异。T2DM患者血清PCSK9水平与空腹血糖（FPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）等指标的相关性采用Pearson相关分析。 结果:观察组治疗后LDL-C为（2.3±0.7）mmol/L，低于对照组的（2.7±0.7）mmol/L（ P=0.024）；观察组LDL-C达标率为89.7%（61/68），高于对照组的68.1%（49/72）（ P=0.002）；观察组治疗后IL-1、IL-6、TNF-α、CRP、IL-10和IL-8水平分别为（27.6±6.6）、（36.7±6.9）、（40.1±8.9）、（7.8±1.8）、（19.2±3.3）、（13.7±3.3）ng/L，均低于对照组的（30.6±7.9）、（40.1±7.3）、（43.4±9.2）、（10.4±2.5）、（30.7±3.7）、（26.8±3.4）ng/L（均 P<0.05）。观察组治疗后PCSK9水平为（74±13）μg/L，低于对照组的（97±14）μg/L（ P<0.001）。T2DM患者PCSK9水平与LDL-C、IL-1、IL-6和TNF-α呈正相关（ r=0.390、0.433、0.398、0.562，均 P<0.05）。 结论:PCSK9抑制剂在T2DM患者中调脂作用较好，同时可改善炎症水平。

实验以花鲈(Lateolabrax maculatus)为研究对象,探究桑叶提取物对花鲈抗氧化能力和非特异性免疫的影响.选择体质健康良好,初始平均体重为(9.00±0.02)g的花鲈360尾,随机分为6个组,每组3次重复,每次重复20尾鱼,分别投喂不同桑叶提取物浓度的饲料(0、3、6、9、12和15 g/kg),实验共进行52d.实验结果显示,与对照组相比,桑叶提取物显著提高了血清中的免疫球蛋白M含量,且在桑叶提取物添加量为6 g/kg时达到最高(P＜0.05).桑叶提取物对血清酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、溶菌酶、补体C3、总蛋白无显著影响(P＞0.05).与对照组相比饲料中添加桑叶提取物对花鲈头肾ACP和AKP活性无显著影响(P＞0.05).与对照组相比,桑叶提取物显著提高了血清中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)水平,并显著降低了血清中丙二醛(MDA)的含量(P＜0.05).桑叶提取物对花鲈血清中总抗氧化能力(T-AOC)无显著影响(P＞0.05).与对照组相比,桑叶提取物对花鲈头肾SOD活性、T-AOC和MDA含量也均无显著影响(P＞0.05).通过转录分析发现,桑叶提取物主要通过直接或间接影响色氨酸代谢来调控花鲈头肾的免疫机能.然而,桑叶提取物对花鲈头肾中3-羟基邻氨基苯甲酸3,4-双加氧、β-1,4-N-乙酰氨基半乳糖转移酶3、鞘磷脂磷酸二酯酶、MHC I类抗原和免疫球蛋白重链等基因的表达量无显著性影响.以上结果表明,桑叶提取能够在一定程度上提高花鲈血清和头肾抗氧化能力和非特异性免疫.研究结果为桑叶提取物在水产养殖中的应用提供一定理论依据.

实验旨在探究不同水平的大豆球蛋白对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)肠道菌群和抗菌相关基因的影响.在饲料中添加0(G0组,作为对照组)、1.82％(GL组)、3.64％(GH1组)、5.46％(GH2组)和7.28％(GH3组)五种不同水平的大豆球蛋白饲喂克氏原螯虾(平均体重约为4.3 g)4周.养殖实验结束后测定肠道微生物的组成和抗菌相关基因的表达.结果显示:(1)饲料中的大豆球蛋白对克氏原螯虾肠道菌群的Alpha多样性没有显著性影响,但改变了其肠道菌群组成.GL组Cloacibacterium、沙曼气单胞菌(Aeromonas sharmana)等菌群的相对丰度显著高于其他4组.与G0组相比,红杆菌属(Rhodobacter)、副球菌属(Paracoccus)、丙酸杆菌属(Propionicimonas)和生丝微菌属(Hyphomicrobium)等益生菌及亨氏柄杆菌(Caulobacter henricii)的相对丰度在GH2或GH3组中显著下降;而GH3组壤霉菌属(Agromyces)、巴氏微杆菌(Microbacterium barkeri)、假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas)和军团杆菌属(Legionella)等潜在病原菌的相对丰度显著高于G0组.(2)随着大豆球蛋白水平的升高,各组肠道抗菌相关基因的表达水平呈现一次线性和二次响应的变化趋势.与G0组相比,GL组抗脂多糖因子(alf)、甲壳素(cru)和血蓝蛋白(hem)基因的表达水平显著下降;除组织蛋白酶-B(cst-b)外,GH1、GH2和GH3组其他抗菌相关基因的表达水平随着饲料中大豆球蛋白水平的升高而显著上升;GH2组cst-b的表达水平显著高于其余4组.(3)斯皮尔曼相关分析结果表明肠道菌群和抗菌相关基因之间存在显著的相关关系.cru、alf、C型凝集素(lec-c)、溶菌酶(lys)、白细胞介素增强因子结合子-2(iebf-2)、hem、热休克蛋白-70(hsp-70)和cst-b的表达水平与亨氏柄杆菌、副球菌属、红杆菌属、丙酸杆菌属、Desulfovibrio putealis、Thermomonas dokdonensis、沙曼气单胞菌和气单胞菌属、Chitinilyticum aquatile、台湾几丁质杆菌、Cloaci-bacterium 和生丝微菌属等菌群的相对丰度具有显著的负相关关系;而与壤霉菌属、产气荚膜梭杆菌(Clostri-dium Perfringens)、巴氏微杆菌、乳球菌(Lactococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、类诺卡氏菌属(Nocar-dioides)和Peredibacter starrii等菌群的相对丰度具有显著的正相关关系.综上所述,饲料中低水平的大豆球蛋白(1.82％)在一定程度上能够促进肠道中益生菌的生长,改善肠道菌群健康,同时下调抗菌相关基因的表达;而高水平的大豆球蛋白(≥3.64％)可能抑制了益生菌的生长,导致病原菌的增殖,从而破坏了肠道菌群稳态,并且上调了抗菌相关基因的表达.相关分析结果表明抗菌相关基因与肠道菌群之间可能存在一定的互作关系.

目的 观察间充质干细胞外泌体在肾移植术后口腔溃疡防治中的效果.方法 选取 2021 年 10 月—2022 年4 月收治的100 例肾移植术后患者,统计口腔溃疡发生情况,将发生口腔溃疡患者根据干预方法不同分为观察组20 例和对照组20 例.对照组给予常规生理盐水口腔护理,观察组经常规护理后给予间充质干细胞外泌体喷雾剂治疗,连续干预7d.比较2 组治疗效果、口腔溃疡及恢复情况(进食恢复时间、疼痛消失时间、溃疡愈合时间),比较治疗前及治疗3、7d后2 组口腔pH值、唾液免疫球蛋白[分泌型免疫球蛋白A(sIgA)、溶菌酶(Lys)、免疫球蛋白G(IgG)]、血清炎性因子[白细胞介素-6(IL-6)、转化生长因子-β(TGF-β)、前列腺素 E2(PGE2)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、口腔溃疡疼痛视觉模拟评分法(VAS)评分、口腔评估指南(OAG)评分、口腔健康影响程度量表(OHIP-14)评分.结果 100 例肾移植术后患者中有 40 例发生口腔溃疡,观察组总有效率为 95.00%(19/20)高于对照组的65.00%(13/20)(P<0.05);观察组进食恢复时间、疼痛消失时间、溃疡愈合时间均短于对照组(P<0.05,P<0.01);治疗3、7d后观察组口腔pH值、唾液sIgA水平高于对照组,唾液Lys、IgG水平低于对照组(P<0.05,P<0.01);治疗3、7d后观察组血清IL-6、TGF-β、PGE2、TNF-α水平及OAG评分、VAS评分、OHIP-14 评分均低于对照组(P<0.05,P<0.01).结论 肾移植后口腔溃疡发生率较高,间充质干细胞外泌体应用于肾移植术后口腔溃疡患者治疗效果较好,可缩短疼痛、溃疡愈合时间,缓解炎症反应,改善患者口腔健康状态.

为研究大口黑鲈(Mficropterus salmoides)幼鱼肝脏、肠道对氨氮胁迫的反应机制,以大口黑鲈幼鱼(15.32± 0.65)g为实验对象,设置0、25和50 mg/L三个浓度(非离子氨浓度0、0.55和1.11 mg/L),研究氨氮胁迫48h对大口黑鲈肝、肠组织结构、酶活性和肠道微生物的影响.结果显示,胁迫48h后,25和50 mg/L氨氮浓度胁迫均使肝组织出现肝细胞溶解空泡化、肝细胞排列紊乱等现象,此外,50 mg/L氨氮胁迫还使肠道产生杯状细胞增多,绒毛宽度、肌层厚度增加等现象.25和50 mg/L组的肝组织中GPT及GOT活性较对照组显著下降;肝组织LZM活性,肠组织SOD活性、CAT活性和MDA含量显著高于对照组(P＜0.05).50 mg/L组补体C3活性显著高于对照组(P＜0.05).氨氮胁迫48h显著影响了大口黑鲈肠道微生物的Alpha多样性和Beta多样性.在门水平上,与对照组相比,50 mg/L组拟杆菌门和螺旋体门的相对丰度显著升高(P＜0.05).在属水平上,与对照组相比,50 mg/L组不动杆菌属(Acinetobacter)、金黄杆菌属(Chryseobacterium)和螺旋体属(Brevinema)的丰度显著升高,邻单胞菌属(Plesiomonas)的丰度显著降低(P＜0.05).BugBase表型预测结果显示革兰氏阴性菌在大口黑鲈肠道菌群中占绝对优势;且50 mg/L组的肠道菌群具有更低的生物膜形成能力和耐应激性.研究表明,氨氮胁迫会对大口黑鲈肝、肠组织造成损伤,鱼体代谢和解毒能力下降;抗氧化酶活性升高,大口黑鲈发生氧化应激;溶菌酶和补体C3活性上升,GOP和GPT活性降低,非特异性免疫系统能力下降.同时,肠道菌群构成改变,菌群耐应激性降低,肠道功能易损伤.研究结果将为解析氨氮对大口黑鲈的危害提供理论基础.

目的 探究6种化学试剂型和3种酶型菌体裂解剂在聚合酶链式反应(PCR)扩增体系中的最大允许终浓度和不同浓度IGEPAL CA-630裂解不同种属菌株的差异.方法 配制6种化学试剂型(IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA、异硫氰酸胍和NaOH)和3种酶型(溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶K)及多个不同稀释度的裂解液,添加于荧光定量PCR体系中,分析比较Ct值差异.用IGEPAL CA-630溶液(浓度为1％和0.1％,TE为溶剂)、TE和去离子水分别裂解嗜热链球菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌,经荧光定量PCR扩增,比较Ct值的差异.结果 在PCR体系中,IGEPAL CA-630、CTAB、SDS、EDTA异硫氰酸胍和NaOH的最大允许终浓度分别为0.800‰、0.256‰、0.012 8‰、0.8 mmol/L、0.012 8 mol/L 和 0.64 mmol/L,溶菌酶、溶葡球菌酶和蛋白酶 K 的最大允许浓度分别为0.512、1.28和0.512 μg/mL.IGEPAL CA-630裂解嗜热链球菌和金黄色葡萄球菌实验中,TE溶液、0.1％和1％IGEPAL CA-630的Ct值依次减小,TE溶液和去离子水的Ct值没有明显差异;去离子水、TE溶液、0.1％和1％IGEPALCA-630裂解大肠埃希菌的Ct值均没有明显差异.结论 通过探究,明确了上述9种常见裂解剂不影响PCR扩增的最大浓度,且适当提高IGEPAL CA-630浓度可以增强提取革兰氏阳性菌DNA作用.