目的:探讨乳腺癌circ0008234和miR-1205表达与多层螺旋CT显像的肿瘤学特点。方法:选取2018年1月至2018年12月浙江台州市第一人民医院的40例乳腺癌患者作为观察组，将同期收治的40例非乳腺癌患者作为对照组，荧光定量PCR法检测所有患者circ0008234和miR-1205表达水平。通过生物信息学方法预测circ0008234的下游靶miRNA，双荧光素酶报告分析法证实circ0008234和miR-1205的相互作用。采用多层螺旋CT对患者进行检查，观察肿块大小、形态、钙化区域、淋巴结转移及边缘，分析circ0008234和miR-1205表达水平与CT征象之间的相关性。结果:观察组circ0008234表达水平高于对照组（2.23±0.86 vs 1.07±0.37）（ P=0.00），但miR-1205表达水平则低于对照组（0.76±0.29 vs 1.04±0.29）（ P=0.00）。观察组患者circ0008234和miR-1205表达水平在不同边缘形态及微小钙化点患者体内无显著差异，但肿块形态规则的患者circ0008234表达水平显著高于不规则患者（2.52±0.88 vs 1.91±0.74）（ P=0.025），miR-1205表达水平则低于不规则患者（0.66±0.30 vs 0.86±0.25）（ P=0.025）。观察组肿块直径≥2 cm患者circ0008234表达水平显著高于肿块直径<2 cm患者（2.59±0.95 vs 1.69±0.17）（ P=0.001），但miR-1205表达水平则低于肿块直径<2 cm患者（0.65±0.21 vs 0.92±0.33）（ P=0.003）。观察组淋巴结转移患者circ0008234表达水平显著高于无淋巴结转移患者（2.55±1.09 vs 1.94±0.44）（ P=0.022），但淋巴结转移患者miR-1205表达水平低于无淋巴结转移患者（0.65±0.26 vs 0.85±0.30）（ P=0.027）。荧光素酶检测证实miR-1205是circ0008234的直接靶点。circ0008234可负调控miR-1205的表达。 结论:乳腺癌CT显像与circ0008234和miR-1205表达间存在相关性，这可为乳腺癌恶变程度和预后的判断提供依据。

目的 探讨circ_0081664对非小细胞肺癌细胞生长和转移的影响及机制.方法 选取2016年1月至2020年5月期间本院收治的30例非小细胞肺癌患者癌组织及相应的癌旁组织,RT-qPCR检测circ_0081664和miR-1205的表达水平;A549细胞分为si-NC组、si-circ_0081664组、miR-NC组、miR-1205组、si-circ_0081664+anti-miR-NC组、si-circ_0081664+anti-miR-1205组.MTT检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;Transwell小室实验检测迁移和侵袭;Western blot法检测蛋白表达;双荧光素酶报告实验检测circ_0081664和miR-1205的靶向关系.结果 肺癌组织中circ_0081664表达水平升高,miR-1205表达水平降低(P<0.05).转染circ_0081664抑制表达载体或miR-1205过表达载体后,A549细胞活性降低,Ki-67、Bcl2、MMP-2、MMP-9表达水平降低,P21、Bax表达水平升高,细胞凋亡率升高,迁移侵袭细胞数减少(P<0.05).同时抑制circ_0081664和miR-1205表达后,细胞活性升高,细胞凋亡率降低,迁移侵袭细胞数增加(P<0.05).结论 抑制circ_0081664表达可能通过上调miR-1205,抑制非小细胞肺癌细胞的生长和转移.

目的:腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活可以抑制地塞米松(Dex)诱导的成骨细胞损伤.Cullin-RING泛素E3连接酶4A(CUL4A)决定了AMPKα泛素化和蛋白酶体降解.本研究鉴定了一种新型的靶向CUL4A的微小核糖核酸-1205(miR-1205).方法:为了研究miR-1205对Dex诱导人类成骨细胞的氧化损伤和细胞死亡的影响,对hFOB1.19成骨细胞和原代人成骨细胞进行培养和分化,提取第3～10代的原始人类成骨细胞总细胞RNA,并通过反转录获得cDNA.利用qPCR、2ΔΔCt方法进行数据定量,分析miR-1205的表达.将生成表达premiR-1205的慢病毒(lv-premiR-1205)或miR-1205反义慢病毒(lv-antagomiR-1205),进行过滤并添加至hFOB1.19细胞或人成骨细胞.将细胞接种到六孔板中,通过miR模拟物转染,进行遗传修饰.检查CUL4A 3'-UTR荧光素酶的活性,并对结果进行量化.在对hFOB1.19细胞使用Dex处理后,对细胞功能包括细胞生存力测定,细胞死亡检测,以及通过核TUNEL染色和caspase-3活性测定及Western印迹测定进行细胞凋亡检查.结果:将CUL4A七个靶向miRNA模拟物中的每一个都分别转染到hFOB1.19成骨细胞中.其中,miR-1205模拟物导致最显著的CUL4A mRNA降低.miR-1205的亚细胞分布表明,内源性miR-1205的大部分位于细胞质中.生物素化的miR-1205与hFOB1.19细胞中的CUL4A mRNA直接关联并使其沉默,从而导致AMPK级联激活,并显著减弱hFOB1.19细胞中Dex诱导的细胞毒性.此外,miR-1205的过表达显著抑制了hFOB1.19细胞中Dex诱导的凋亡激活.结论:在hFOB1.19细胞和人类成骨细胞中,通过miR-1205沉默CUL4A,激活了AMPK信号传导,并调节其下游靶标发挥有效的抗氧化活性,极大减弱Dex诱导的细胞毒性,从而显著保护成骨细胞.

Chemoresistance is the major cause of therapeutic failure in human triple negative breast carcinoma(TNBC).Docetaxel(DOC),a first-line therapeutic drug in TNBC treatment,is limited for long-term use due to the develop-ment of chemoresistance.Thus,overcoming chemoresistance of DOC remains an important challenge to improve patient's outcome of TNBC.In this study,we aimed to investigate the molecular mechanism behind DOC che-moresistance and the possible therapeutic effects of miRNAs.Utilizing qRT-PCR analysis,we discovered that miR-1205 is gradually downregulated in human triple negative breast carcinoma MDA-MB-231 and docetaxel-resistant MDA-MB-231(MDA-MB-231/DOC)cells compared with Hs 578Bst normal human breast fibroblasts.Cell viability,cell cycle and apoptosis assays in MDA-MB-231/DOC cells indicated that miR-1205 overexpression enhances doc-etaxel sensitivity by reducing cell viability as well as inducing G2/M cell cycle arrest and cell apoptosis.Western blot analysis,dual-luciferase reporter assay,co-immunoprecipitation assay and chromatin immunoprecipitation assay revealed that miR-1205 overexpression disrupts the stable complex formation of DNAJB1,mutp53 and TAp63 by directly reducing DNAJB1 expression,which abates the sequestrating effect of mutp53 on TAp63,thereby leading to the enhanced DOC sensitivity in MDA-MB-231/DOC cells.Our findings demonstrate the role of the miR-1205/DNAJB1 axis in the docetaxel resistance of TNBC,which may offer a promising therapeutic approach to resolve docetaxel resistance in TNBC.

目的:研究胃癌中环状RNA hsa_circ_0003071的基本特征、功能预测及生存预后分析.方法:通过PCR扩增验证胃癌与癌旁组织中hsa_circ_0003071的表达量,利用PCR扩增及一代测序验证hsa_circ_0003071反向剪接位点,利用核糖核酸酶R(RNase R)处理,细胞质细胞核RNA分离和定量PCR以及蛋白质翻译的潜能分析研究hsa_circ_0003071的基本特征.利用生信方法预测hsa_circ_0003071上微RNA(miRNA)的结合位点以及miRNA的靶基因,并构建circRNA-miRNA-mRNA网络,随后利用基因本体论(GO)及京都基因和基因组百科全书(KEGG)对miRNA的下游靶基因合集进行功能注释.结合生信方法获得hsa_circ_0003071调控的下游关键靶基因在胃癌的生存预后分析.结果:PCR实验证实胃癌中hsa_circ_0003071的表达量显著低于癌旁组织.CircBase注释显示hsa_circ_0003071是由基因SPATS2L转录本NM_001100422中第6号外显子经反向剪接构成,并且PCR扩增和一代测序共同验证了hsa_circ_0003071的反向剪接位点.hsa_circ_0003071可以抵抗RNase R处理,并且主要分布于细胞质.蛋白质翻译分析显示,hsa_circ_0003071具有翻译蛋白的潜能,其开放阅读框可能编码含124个氨基酸的蛋白质.生信预测显示hsa_circ_0003071具有多个miRNA结合位点,取数据库交集的两个miRNA(has-miR-604、has-miR-1205)预测其下游靶基因共148个,随之构建circRNA-miRNA-mRNA调控网络.GO分析结果显示,上述靶基因合集分别在12个生物学过程条目和2个分子功能条目中显著富集;KEGG通路分析结果显示,上述靶基因合集在mRNA监测通路和Hippo信号通路显著富集.结论:本研究分析了胃癌中新型环状RNA hsa_circ_0003071的表达量、反向剪接位点、RNase R酶的抵抗性和主要分布在细胞质等基本特征,从蛋白质翻译、circRNA-miRNA-mRNA调控网络和环状RNA下游调控关键基因在胃癌中的预后生存分析角度为hsa_circ_0003071的功能研究提供了新的方向.

目的:探讨紫檀芪对人结直肠癌细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其对LncRNA ELFN1-AS1/miR-1205的调控作用.方法:体外培养结直肠癌细胞Caco-2,加入不同剂量的紫檀芪处理细胞,将正常培养的Caco-2细胞作为对照组;si-NC、si-ELFN1-AS1分别转染至Caco-2细胞(si-NC组、si-ELFN1-AS1组),pcDNA、pcDNA-ELFN1-AS1分别转染至Caco-2细胞后加入含有紫檀芪的培养基处理细胞(紫檀芪+pcDNA组、紫檀芪+pcDNA-ELFN1-AS1组);qRT-PCR检测ELFN1-AS1、miR-1205的表达量;CCK-8、平板克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验与Transwell小室分别检测细胞增殖、克隆形成、凋亡、迁移及侵袭;双荧光素酶报告基因实验检测ELFN1-AS1与miR-1205的靶向关系.结果:与对照组相比,紫檀芪不同剂量组ELFN1-AS1的表达水平均降低(P<0.05),miR-1205表达水平均升高(P<0.05),并可抑制细胞活性、克隆形成、迁移及侵袭(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);与si-NC组相比,si-ELFN1-AS1组miR-1205表达水平升高(P<0.05),可抑制细胞活性、克隆形成、迁移及侵袭(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);ELFN1-AS1可靶向调控miR-1205;ELFN1-AS1过表达可明显逆转紫檀芪对结直肠癌细胞生物学行为的调控作用.结论:紫檀芪可通过调控ELFN1-AS1/miR-1205从而降低结直肠癌细胞的增殖、克隆形成、迁移、侵袭能力,并可促进细胞凋亡.

目的:探讨circ_0000267是否通过靶向miR-1205调控胃癌细胞增殖、侵袭迁移.方法:选取三家医院(青海省西宁市中医院、中国人民解放军第九四一医院、青海省第五人民医院)2016年1月至2020年1月收治的30例胃癌患者的癌组织和癌旁组织;胃癌MKN-45细胞分为si-NC组、si-circ_0000267 组、si-circ_0000267+anti-miR-NC 组、si-circ_0000267+anti-miR-1205 组.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测circ_0000267和miR-1205的表达水平;MTT检测细胞增殖活性;West-ern blot法检测蛋白表达;Transwell检测细胞迁移和侵袭;双荧光素酶报告实验检测circ_0000267和miR-1205的靶向关系.结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中circ_0000267表达水平升高,miR-1205表达水平降低(P＜0.05).抑制circ_0000267表达后,胃癌MKN-45细胞活性降低,CyclinD1表达水平降低,p21表达水平升高,迁移侵袭细胞数减少,MMP-2、MMP-9表达水平降低(P＜0.05).circ_0000267靶向调控miR-1205;下调miR-1205表达逆转了抑制circ_0000267表达对胃癌MKN-45细胞增殖和迁移侵袭的影响.结论:抑制circ_0000267可通过靶向调控miR-1205抑制胃癌细胞增殖、侵袭迁移.

目的 探究环状RNA hsa_circ_0081069在结直肠癌中的表达,及其调控结直肠癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的机制.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测结直肠癌组织和癌旁组织中hsa_circ_0081069的表达情况.采用Transwell实验和CCK8实验分别检测敲低hsa_circ_0081069对结直肠癌细胞迁移、侵袭及增殖能力的影响.采用双荧光素酶报告实验检测hsa_circ_0081069与miR-1205的相互作用.结果 与癌旁组织相比,hsa_circ_0081069在结直肠癌组织中呈高表达(P<0.001).与人正常结直肠黏膜细胞株FHC相比,hsa_circ_0081069在6种结直肠癌细胞株的表达水平明显上调(P<0.05),其中HCT116及DLD1细胞上调程度最高(P<0.001).敲低hsa_circ_0081069可抑制HCT116及DLD1细胞的迁移、侵袭和增殖(P<0.01).hsa_circ_0081069可靶向调控miR-1205,沉默hsa_circ_0081069与抑制miR-1205联合作用,使结直肠癌细胞受到抑制的迁移、侵袭及增殖能力得到恢复.结论 hsa_circ_0081069在结直肠癌组织和细胞中呈高表达,且通过靶向调控miR-1205促进结直肠癌的迁移、侵袭及增殖.