目的:探讨6-姜烯酚（6-SH）是否通过促进微小RNA-26a-5p（miR-26a-5p）表达并抑制死亡相关蛋白激酶1（DAPK1），减轻氧糖剥夺/复氧（OGD/R）神经细胞自噬及神经细胞钙超载，并探究其潜在机制。方法:取体外培养的对数生长期小鼠海马神经元HT22细胞，用细胞增殖与毒性检测试剂盒（CCK-8）检测细胞活性，寻找Na 2S 2O 4的最佳制模浓度。将HT22细胞分为空白对照组（NC组）、OGD/R组（无糖培养基+10 mmol/L Na 2S 2O 4处理1.5 h后换正常培养基培养4 h）、6-SH干预组（OGD后用10 μmol/L 6-SH培养4 h）、阴性对照抑制剂预处理组（阴性对照抑制剂转染48 h后行OGD，再用6-SH培养4 h）、miR-26a-5p抑制剂预处理组（miR-26a-5p抑制剂转染48 h后行OGD，再用6-SH培养4 h）。采用CCK-8法检测各组细胞活性；透射电镜下观察细胞超微结构；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测DAPK1、miR-26a-5p基因表达；分子对接验证6-SH与miR-26a-5p的相互作用；双荧光素酶验证DAPK1与miR-26a-5p的靶向关系；流式细胞仪测定细胞内Ca 2+水平；蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测磷酸化谷氨酸受体2B（p-NMDAR2B）Ser1303、DAPK1、自噬相关蛋白Beclin1、微管相关蛋白1轻链3（LC3）、p-DAPK1 Ser308蛋白表达；免疫荧光法检测LC3和Beclin1的表达。 结果:CCK-8法检测结果显示，6-SH干预组细胞活性较OGD/R组明显升高，miR-26a-5p抑制剂预处理组细胞活性较6-SH干预组明显降低。透射电镜下显示，6-SH干预组自噬小体较OGD/R组明显减少，miR-26a-5p抑制剂预处理组自噬小体较6-SH干预组明显增多。RT-qPCR检测结果显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组miR-26a-5p表达明显上调，DAPK1 mRNA表达明显下调；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组miR-26a-5p表达明显下调，DAPK1 mRNA表达明显上调。分子对接验证6-SH与miR-26a-5p可互相作用。双荧光素酶报告基因检测显示，与阴性对照组比较，mmu-miR-26a-5p显著下调m-DAPK1-3UTR-WT的荧光素酶表达，说明两者之间存在结合作用。流式细胞仪检测结果显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组细胞内Ca 2+水平明显降低；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组Ca 2+水平明显升高。Western blotting检测结果显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组p-NMDAR2B Ser1303、DAPK1、Beclin1、LC3蛋白表达均明显降低（p-NMDAR2B Ser1303/β-actin：2.34±0.27比4.78±0.39，DAPK1/β-actin：1.40±0.13比2.37±0.21，Beclin1/β-actin：2.61±0.32比4.32±0.29，LC3/β-actin：2.52±0.45比5.09±0.18，均 P<0.05），p-DAPK1 Ser308蛋白表达明显升高（p-DAPK1 Ser308/β-actin：0.66±0.09比0.40±0.02， P<0.05）；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组p-NMDAR2B Ser1303、DAPK1、Beclin1、LC3蛋白表达明显升高（p-NMDAR2B Ser1303/β-actin：4.08±0.14比2.34±0.27，DAPK1/β-actin：1.96±0.15比1.40±0.13，Beclin1/β-actin：3.92±0.31比2.61±0.32，LC3/β-actin：4.33±0.33比2.52±0.45，均 P<0.05），p-DAPK1 Ser308蛋白表达明显降低（p-DAPK1 Ser308/β-actin：0.33±0.12比0.66±0.09， P<0.05）；免疫荧光法检测显示，与OGD/R组比较，6-SH干预组LC3、Beclin1荧光强度明显降低；与6-SH干预组比较，miR-26a-5p抑制剂预处理组LC3、Beclin1荧光强度明显升高。 结论:6-SH可通过调控miR-26a-5p/DAPK1减轻细胞自噬及钙超载，从而减轻神经细胞损伤。

目的:研究X射线辐射诱导非小细胞肺癌（NSCLC) A549细胞凋亡的适应性反应，并筛选适应性反应相关的微RNA (miRNA）。方法:将NSCLC A549细胞分为6组，包括50 mGy+20 Gy、200 mGy+20 Gy、20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组及对照组（0 Gy），前2组细胞分别用50、200 mGy初始剂量进行照射，培养6 h后用20 Gy的效应剂量进行照射，20 Gy、50 mGy、200 mGy照射组同时进行照射。培养24 h后使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。利用小RNA测序技术筛选差异表达miRNA，并对其靶基因进行基因本体（GO）及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路的功能富集分析。采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR）对部分差异表达miRNA进行验证。2组间数据的比较采用Welch t检验。 结果:50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组的A549细胞早期凋亡率分别为（1.81±0.11）%和（2.17±0.19）%，低于20 Gy照射组的（4.54±0.23）%，且差异均有统计学意义（ t=10.680、8.006，均 P<0.01）。与20 Gy照射组相比，50 mGy+20 Gy照射组和200 mGy+20 Gy照射组共同差异表达趋势miRNA有1个上调（miR-3662）、15个下调（miR-185-3p、miR-1908-5p、miR-1307-5p、miR-182-3p、miR-92a-3p、miR-582-5p、miR-501-3p、miR-138-5P、miR-1260b、miR-484、miR-378d、miR- 193b-3P、miR-127-3p、miR-1303及miR-654-5p）。GO富集分析结果显示，差异表达miRNA调控靶基因功能显著富集于细胞通讯调节、代谢过程的正向调节、代谢信号的调节、酶结合及催化活性等过程。KEGG富集分析结果显示，靶基因相关信号通路显著富集于溶酶体、丝裂原活化蛋白激酶、Ras和内吞作用等信号通路。qRT-PCR检测结果显示，miRNA表达情况与基因芯片结果趋势一致（10个miRNA表达水平得到验证）。 结论:X射线50、200 mGy照射剂量均能诱导NSCLC A549细胞凋亡的适应性反应，并筛选到一组共同差异表达的miRNA，可能在X射线辐射诱导细胞凋亡的适应性反应中发挥了重要作用，有可能成为调节电离辐射生物效应的潜在靶点。

目的:探讨微小RNA(miRNA)-1303通过靶向调控溶血磷脂酸受体3(LPAR3)的表达抑制肾癌786-O细胞增殖和迁移的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肾癌细胞株(A498、ACHN、786-O、OS-RC-2)及正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-1303的相对表达量。将miR-1303模拟物和阴性对照序列分别转染至miR-1303表达最低的肾癌细胞，分别作为miR-1303组和阴性对照组。qRT-PCR检测两组细胞miR-1303的相对表达量。MTT法和Transwell迁移实验分别检测细胞增殖能力和迁移能力。生物信息学软件RegRNA 2.0预测miR-1303的靶基因。双荧光素酶报告基因检测miR-1303与靶基因的结合。qRT-PCR和Western blotting法检测LPAR3的相对表达量。计量资料以均数±标准差( ± s)表示，两组间比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析。 结果:肾癌细胞株A498、ACHN、786-O、OS-RC-2和正常肾小管上皮细胞HK-2中miR-1303表达分别为0.51±0.04、0.79±0.02、0.21±0.04、0.55±0.07和1.00±0.05，肾癌细胞株中miR-1303表达均低于HK-2( P<0.05)，786-O细胞中的相对表达量最低( F＝29.50， P<0.01)。与阴性对照组相比，miR-1303组细胞miR-1303的表达明显增加[(1.00±0.01)比(7.98±0.88)， t＝7.95， P<0.01]。miR-1303组细胞吸光度值明显低于阴性对照组( P<0.05)。miR-1303组细胞迁移数明显低于阴性对照组( P<0.05)。miR-1303可与LPAR3 mRNA互补配对结合( P<0.01)。与阴性对照组相比，miR-1303组786-O细胞中 LPAR3基因表达显著下降[(1.00±0.01)比(0.23±0.03)， t＝23.56， P<0.01]。 结论:miR-1303可能通过靶向抑制LPAR3的表达，抑制肾癌786-O细胞的增殖能力和迁移能力。

目的 探讨circ_0007059 对前列腺癌LNCaP细胞恶性生物学行为的影响.方法 选取 2017 年 5 月至2020 年在我院就诊的41 例前列腺癌患者的癌组织和癌旁组织标本;体外培养前列腺癌LNCaP细胞,采用质粒转染分别过表达/敲低circ_0007059 表达、抑制miR-1303 表达,并同时上调circ_0007059 和miR-1303 表达.转染后,检测circ_0007059 和miR-1303 表达、细胞增殖、迁移、侵袭,以及Ki-67、MMP-2、MMP-9 蛋白表达,并验证circ_0007059 和miR-1303 的靶向关系.结果 前列腺癌组织中circ_0007059 表达水平降低,miR-1303 表达水平升高(P<0.05).circ_0007059 过表达或抑制miR-1303 表达后,LNCaP细胞活性、迁移和侵袭能力,以及Ki-67、MMP-2、MMP-9 蛋白水平均降低.circ_0007059 靶向调控miR-1303;上调miR-1303 逆转了circ_0007059 过表达对LNCaP细胞的作用.结论 过表达circ_0007059 可抑制LNCaP细胞的恶性生物学行为,其机制可能与靶向下调miR-1303 有关.

[目的]探究环状RNA纺锤体与动粒相关蛋白3(circ-SKA3)通过miR-1303调控Toll样受体4(TLR4)轴在动脉粥样硬化(As)中的作用.[方法]收集2019年4月—2022年4月收治的30例As患者经颈动脉内膜剥脱术切除的颈动脉斑块及病变血管组织、对应斑块旁正常组织与静脉血,另收集30例健康对照者静脉血.微阵列分析、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、荧光原位杂交(FISH)实验检测circ-SKA3在As患者斑块组织和对照样本、血浆外泌体、人脐静脉内皮细胞(HUVEC)、As模型小鼠主动脉组织中的表达和定位.通过生物信息学、双荧光素酶报告基因检测、RNA免疫共沉淀等方法验证circ-SKA3、miR-1303、TLR4之间的相互关系.通过CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验、血管形成实验检测HUVEC增殖、迁移、血管形成能力,蛋白质印迹法检测TLR4轴相关蛋白表达.油红O染色、HE染色、Masson染色观察As模型小鼠主动脉组织病变情况,免疫组织化学、免疫荧光检测As模型小鼠主动脉组织TLR4的表达情况.[结果]As患者斑块组织、血浆外泌体、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)处理的HUVEC和As模型小鼠主动脉组织中circ-SKA3、TLR4的表达水平上调(P＜0.05),miR-1303的表达水平下调(P＜0.05).功能分析表明,circ-SKA3在体外实验中促进HUVEC损伤,在体内实验中促进As进展.机制分析表明,circ-SKA3可通过海绵吸附miR-1303促进TLR4表达,抑制circ-SKA3/miR-1303/TLR4轴可抑制As病变形成.[结论]circ-SKA3在As患者颈动脉斑块、血浆外泌体、ox-LDL处理的HUVEC和As模型小鼠主动脉中的表达显著增高,circ-SKA3/miR-1303/TLR4轴可促进体内外As模型发展.

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)是糖尿病(Diabetes mellitus,DM)最常见的微血管并发症之一,也是造成患者出现终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)的重要原因.研究发现,微小核糖核酸(microRNA,miRNA)与DN的发生发展关系密切.MiR-571、miR-152、miR-1303、miR-192、miR-200、miR21、miR-146、miR-23、miR-145、miR-126、miR-377等多种miRNAs均参与了DN的发生发展过程.基于文献和课题组前期高通量测序筛选,对其中的差异miRNAs进行聚类分析与靶基因预测,结果发现miR-27和miR-29两种miRNA表达有显著差异,现就这两种miRNA参与调控糖尿病肾病关系、下游信号通路及相关中药研究应用予以综述.

目的 探讨微小RNA-1303(miR-1303)、神经调节蛋白1(NRG1)在甲状腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 选取2018年5月至2020年8月上海市第一人民医院163例行手术治疗的甲状腺疾病患者的冰冻组织标本,其中甲状腺癌99例、甲状腺腺瘤29例、桥本甲状腺炎20例、结节性甲状腺肿15例,另从本院病理科选取同期25例正常甲状腺组织标本.采用逆转录聚合酶链反应检测miR-1303在组织中的表达.采用免疫组织化学法检测NRG1的表达.分析miR-1303与NRG1表达与甲状腺癌临床病理特征的关系及二者的相关性.结果 甲状腺癌、甲状腺腺瘤、桥本甲状腺炎、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织中 miR-1303表达量分别为(1.43±0.25)、(1.27±0.21)、(1.19±0.11)、(1.13±0.12)、(1.00±0.08).甲状腺癌组织中miR-1303表达量高于其他甲状腺组织,差异有统计学意义(F=8.771,P＜0.001).甲状腺癌组织中miR-1303表达量与肿瘤大小、分化程度、包膜浸润、转移淋巴结、病理类型和TNM分期相关(均P＜0.001).甲状腺癌、甲状腺腺瘤、桥本甲状腺炎、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织NRG1阳性表达率分别为51.5％(51/99)、75.9％(22/29)、80.0％(16/20)、80.0％(12/15)、88.0％(22/25).甲状腺癌组织NRG1阳性表达率低于其他甲状腺组织,差异有统计学意义(x2=21.629,P=0.001).甲状腺癌组织中NRG1表达与肿瘤大小、分化程度、包膜浸润、淋巴结转移、TNM分期相关(均P＜0.05).甲状腺癌组织中miR-1303表达量与NRG1表达评分呈显著负相关(r=-0.739,P=0.002).结论 miR-1303、NRG1在甲状腺癌组织中的表达与肿瘤大小、分化程度、包膜浸润、淋巴结转移及TNM分期有关.甲状腺癌组织中miR-1303与NRG1表达呈显著负相关.

目的 探讨微小核糖核酸(micro-ribonucleic acid,miR)-1303在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者肿瘤组织和外周血中的表达及其临床意义.方法 回顾性选取2017年1月～2019年10月在武警湖北省总队医院内一科收治的NSCLC患者67例纳入病例组,均经术后病理确诊为NSCLC,另选取同期体检的30例健康受试者纳入对照组.收集NSCLC患者手术切除后的肿瘤组织和癌旁组织以及所有受试者的外周血,采用实时荧光聚合酶链反应(real time fluorescence polymerase chain reaction,RT-PCR)检测组织及血浆中miR-1303的表达水平,分析miR-1303与临床病理特征的关系;Pearson分析血浆和组织中miR-1303的相关性;绘制受试者工作特征曲线(receiv-er operating characteristic,ROC)评价血浆miR-1303对NSCLC诊断的效能.结果 与癌旁组织相比,NSCLC肿瘤组织中miR-1303(1.883±0.658 vs 1.512±0.263)表达水平明显升高,差异具有统计学意义(t=4.286,P<0.01).与对照组比较,NSCLC患者血浆miR-1303(1.413±0.552 vs 1.012±0.214)水平明显升高,差异具有统计学意义(t=9.138,P<0.01).Pearson相关性分析,NSCLC患者血浆miR-1303和肿瘤组织中的miR-1303水平呈正相关(r=0.319,P=0.022).ROC曲线显示,当血浆miR-1303截断值为1.583时,诊断NSCLC的敏感度和特异度分别为0.701,0.967,曲线下面积为0.870(95％CI:0.752～0.921).miR-1303>1.583和miR-1303≤1.583组患者在淋巴结转移、TNM分期方面比较差异具有统计学意义(t=4.264,8.412,均P<0.01).结论 NSCLC患者血浆和肿瘤组织中的miR-1303水平明显上调,且与临床分期及淋巴结转移有关,可作为NSCLC辅助诊断及病情监测的新指标.