Schistosoma infection is one of the major causes of liver fibrosis.Emerging roles of hepatic progenitor cells(HPCs)in the pathogenesis of liver fibrosis have been identified.Nevertheless,the precise mechanism underlying the role of HPCs in liver fibrosis in schistosomiasis remains unclear.This study examined how autophagy in HPCs affects schistosomiasis-induced liver fibrosis by modulating exosomal miRNAs.The activation of HPCs was verified by immunohistochemistry(IHC)and immunofluorescence(IF)staining in fibrotic liver from patients and mice with Schistosoma japonicum infection.By coculturing HPCs with hepatic stellate cells(HSCs)and assessing the autophagy level in HPCs by proteomic analysis and in vitro phenotypic assays,we found that impaired autophagy degradation in these activated HPCs was mediated by lysosomal dysfunction.Blocking autophagy by the autophagy inhibitor chloroquine(CQ)significantly diminished liver fibrosis and granuloma formation in S.japonicum-infected mice.HPC-secreted extracellular vehicles(EVs)were further isolated and studied by miRNA sequencing.miR-1306-3p,miR-493-3p,and miR-34a-5p were identified,and their distribution into EVs was inhibited due to impaired autophagy in HPCs,which contributed to suppressing HSC activation.In conclusion,we showed that the altered autophagy process upon HPC activation may prevent liver fibrosis by modulating exosomal miRNA release and inhibiting HSC activation in schistosomiasis.Targeting the autophagy degradation process may be a therapeutic strategy for liver fibrosis during Schistosoma infection.

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)CYP1B1-AS1对急性髓系白血病细胞增殖和迁移的影响及机制.方法:实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CYP1B1-AS1在急性髓系白血病细胞系THP-1、NB4、HL-60、KG-1、SKM-1和骨髓基质细胞HS-5中的表达量.通过5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理急性髓系白血病细胞系,RT-qPCR检测5-Aza-CdR对CYP1B1-AS1表达的影响.根据转染物不同分别将HL-60细胞分为NC组和CYP1B1-AS1组.克隆形成实验和划痕实验依次检测HL-60细胞的增殖和迁移能力.双荧光素酶实验验证CYP1B1-AS1 与微小 RNA(miR)-1306-5p 的靶向关系.RT-qPCR 检测 CYP1B1-AS1 对 HL-60 细胞 miR-1306-5p表达的影响.免疫印迹法检测CYP1B1-AS1对HL-60细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、细胞周期素E(Cyclin E)和转录因子(Twist)、纤维连接蛋白(Fibronectin)表达的影响.结果:与HS-5细胞比较,CYP1B1-AS1在急性髓系白血病细胞系中表达量降低,且HL-60细胞系中CYP1B1-AS1表达量最低(均P＜0.05).5-Aza-CdR能够明显促进急性髓系白血病细胞系中CYP1B1-AS1的表达(均P＜0.05).与NC组比较,CYP1B1-AS1组HL-60细胞增殖能力和迁移率降低(均P＜0.05).过表达miR-1306-5p能够抑制野生型CYP1B1-AS1的荧光素酶活性(P＜0.05).与NC组比较,CYP1B1-AS1组HL-60细胞中miR-1306-5p表达减少,细胞增殖和迁移相关蛋白CDK2、Cyclin E、Twist、Fibronectin表达降低(均P＜0.05).结论:过表达CYP1B1-AS1可能通过靶向下调miR-1306-5p表达抑制急性髓系白血病细胞的增殖和迁移.

目的 观察微小RNA-1306-5p(miR-1306-5p)在急性髓系白血病(AML)患者骨髓组织单个核细胞中的表达及对人白血病细胞株HL60增殖凋亡和迁移侵袭调控作用.方法 分别提取初诊AML患者和再生障碍性贫血(AA)患者骨髓组织单个核细胞,采用qRT-PCR法检测单个核细胞miR-1306-5p;②取HL60细胞,分别转染过表达和敲低miR-1306-5p质粒(mimics control、miR-1306-5p mimics、inhibitor control、miR-1306-5p inhibitor,计为1、2、3、4组),转染48 h后采用CCK8法检测各组细胞OD值,流式细胞术和Transwell法分别检测各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数.结果 AML患者和AA患者miR-1306-5p相对表达量分别为0.27±0.07、1.00±0.08,两者比较,P<0.05.与mimics control组比较,miR-1306-5p mimics组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数降低,凋亡率升高(P均<0.05);与inhibitor control 组比较,miR-1306-5p inhibitor组OD值、侵袭细胞数、迁移细胞数升高,凋亡率降低(P均<0.05).结论 AML患者骨髓组织单个核细胞miR-1306-5p表达降低,转染过表达miR-1306-5p质粒的HL60细胞增殖、迁移、侵袭能力减弱及凋亡能力增强,敲低miR-1306-5p质粒的HL60细胞增殖、迁移、侵袭能力增强及凋亡能力减弱.

目的:观察茵陈提取物(HACE)对糖尿病大鼠肾组织中微小核糖核酸(miRNAs)表达谱的影响,从miRNA角度探讨HACE对糖尿病大鼠的肾脏保护作用及其机制.方法:采用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,将60只雄性Wistar大鼠分为对照组(12只)、模型组(24只)和HACE组(24只).分别于给药8和16周后检测各组大鼠尿白蛋白排泄率和尿蛋白排泄率;HE染色检测大鼠肾组织形态表现;miRNA芯片初步筛查各组大鼠肾组织中miRNAs差异表达谱,对于差异表达在1.74倍以上高丰度的miRNAs筛选阳性miRNAs,采用RT-qPCR验证筛选的miRNAs的相对表达量.结果:与模型组比较,给药8和16周后HACE组大鼠肾小球系膜聚集等现象明显减轻,尿白蛋白排泄率明显降低(P＜0.05).miRNA芯片初筛,对照组和模型组大鼠肾组织中有35个差异表达的miRNAs,模型组和HACE组大鼠肾组织中有17个差异表达的miRNAs.RT-qPCR法检测,给药8周后,与对照组比较,模型组大鼠肾组织中miR-1306-3p (P＜0.05)、miR-672-5p(P＜0.05)和miR-3550 (P＜0.01)相对表达量明显降低;与模型组比较,HACE组大鼠肾组织中miR-672-5p相对表达量升高(P＜0.05).给药16周后,与对照组比较,模型组大鼠肾组织中miR-21-5p相对表达量升高(P＜0.01),miR-1306-3p (P＜0.05)、miR-672-5p (P＜0.01)和miR-466d (P＜0.05)相对表达量降低;与模型组比较,HACE组大鼠肾组织中miR-21-5p (P＜0.05)和miR-1306-3p (P＜0.05)相对表达量降低,miR-672-5p相对表达量升高(P＜0.05).结论:HACE作用后糖尿病大鼠肾组织中miRNAs表达谱出现变化.HACE对糖尿病大鼠的肾脏具有保护作用,其机制可能与miRNAs有关.

目的:探究miR-1306-5p对糖尿病心肌病变的影响和可能机制.方法:体外培养人心肌细胞AC16,分为对照组和高糖组,作用24 h后,收集细胞上清液,采用全自动生化分析仪检测心肌酶CK、LDH和AST水平,采用Western blot检测AC16细胞中心肌病变相关蛋白ANF、β-MHC、TGF-β的表达以及水通道蛋白1(AQP1)的表达,采用qRT-PCR检测miR-1306-5p和AQP1 mRNA的表达.采用双荧光素酶实验验证miR-1306-5p与AQP1的靶向关系.另取AC16细胞,观察抑制miR-1306-5p的表达或同时抑制miR-1306-5p和AQP1的表达对心肌酶的分泌、心肌病变相关蛋白表达、凋亡率以及凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:高糖处理提高了AC16细胞心肌酶CK、LDH和AST的分泌,心肌病变相关蛋白ANF、β-MHC、TGF-β以及miR-1306-5p的表达,降低了AQP1的表达(P<0.05).miR-1306-5p与AQP1存在负向靶控关系.抑制miR-1306-5p表达降低了高糖诱导的AC16细胞凋亡率、心肌酶的分泌及心肌病变相关蛋白和Bax蛋白的表达水平,提高了Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.05);抑制AQP1逆转了抑制miR-1306-5p对高糖诱导的AC16细胞上述指标的改善作用(P<0.05).结论:抑制miR-1306-5p表达可能通过靶向上调AQP1减轻高糖诱导的心肌细胞损伤.

目的 探究大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤后微小核糖核酸(microRNA)表达谱差异,并通过生物信息学分析预测差异表达microRNA在星形胶质细胞被损伤诱导活化后的作用.方法 使用细胞损伤控制仪Ⅱ型构建大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤模型,阀门压力设置为40 PSI,模拟重型颅脑损伤.损伤后24 h收集对照组及损伤组星形胶质细胞总RNA,使用Agilent microRNA芯片检测差异表达microRNA,通过R语言软件构建火山图及聚类分析热图;利用DIANA TOOLS和miRDB数据库预测microRNA的靶基因,并对靶基因集进行基因本体论(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)富集分析;使用STRING数据库构建蛋白互作(PPI)网络,应用Cytoscape软件筛选关键基因.结果 大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤24 h后共有9个microRNA差异表达[| Log2 Fold Change(FC)|≥0.26,P＜0.05],其中5个表达上调,分别是rno-miR-34a-5p、rno-miR-34b-5p、rno-miR-129-5p、rno-miR-140-3p 和 rno-miR-7a-5p;4 个表达下调,分别是 rno-miR-199a-3p、rno-miR-199a-5p、rno-miR-221-3p 和 rno-miR-1306-3p.rno-miR-34b-5p 差异表达倍数最为显著,对其进行靶基因预测共获得154个基因,进一步的GO和KEGG富集分析发现,rno-miR-34b-5p靶基因参与蛋白磷酸酶2A结合及磷脂酶C活性正向调节,并调控磷脂酶D信号通路、MAPK信号通路及PI3K-AKT信号通路,与颅脑创伤(TBI)后神经修复及再生密切相关.同时使用靶基因集构建PPI网络,筛选5个关键基因,分别为Tp53、Notch 1、Ki tlg、Pdgfrb和Pdgfra.结论 大鼠原代星形胶质细胞体外牵张损伤后rno-miR-34b-5p显著升高,生物信息学预测rno-miR-34b-5p靶向抑制Notch1及PDGFRA基因的表达,降低PI3K-AKT信号通路活性,可能使损伤星形胶质细胞向A1型转化,阻碍TBI后神经修复及再生.本研究为TBI后康复治疗提供了潜在的作用新靶点及新的研究方向.

目的 将LASSO与COX回归相结合用于美国肿瘤基因图谱(TCGA)胃癌淋巴结转移相关microRNA的筛选并且构建预后模型.方法 通过TCGA下载胃癌的microRNA表达谱及临床随访数据,使用R语言对数据进行LASSO-COX回归并构建预后模型并验证其效能.结果 采用5×交叉验证在曲线最低点选择最小惩罚系数λ=0.005 6,在该处得到 6 个非零系数的microRNA:has-miR-584-3p、hsa-miR-362-3p、hsa-miR-1245b-5p、hsa-miR-1306-3p、hsa-miR-96-3p、hsa-miR-548j-5p,其HR分别为0.921(95％CI:0.841～0.945)、0.979(95％CI:0.959～0.999)、1.473(95％CI:1.185～2.204)、0.882(95％CI:0.816～0.952)、0.816(95％CI:0.626～0.883)、0.860(95％CI:0.750～0.987),P均＜0.01,其风险函数为 0.921 exp has-miR-584-3p+0.979 exp hsa-miR-362-3p+1.473 exp hsa-miR-1245b-5p+0.882 exp hsa-miR-1306-3p+0.816 exp hsa-miR-96-3p+0.860 exp hsa-miR-548j-5p,根据受试者工作特征(ROC)曲线确定的风险函数最佳截断值为 0.53,以此截断值将患者分为高风险组(n=86)及低风险组(n=279),两组间生存曲线有统计学差异,且风险函数越高患者预后越好,高表达组死亡风险是低表达组的0.11 倍(95％CI:0.06～0.23,P＜0.01),风险函数对患者1 年生存率的预测最佳截断值为1.405,AUC为0.755,对患者2 年生存率的预测最佳截断值为1.145,AUC为0.765.结论 基于LASSO-COX回归建立的6 microRNA预后模型可有效预测胃癌患者淋巴结转移相关总生存率.