目的:检测初治多发性大动脉炎（TAK）患者血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，分析其在TAK发病机制中的可能作用。方法:选2020年6月至11月北京协和医院风湿免疫科确诊的初治TAK患者10例，另选与之年龄性别匹配的健康对照者5例，分别通过RNA测序和蛋白质谱技术检测血浆外泌体携带的微小RNA和蛋白，筛选出差异表达的微小RNA和蛋白，并对其进行层次聚类分析、功能、信号通路和结构域富集分析，最终筛选出与血管炎有关的微小RNA和蛋白，探究其在TAK发病机制中的可能作用。统计学采用Fisher精确概率检验或 χ2检验。 结果:TAK患者血浆外泌体携带的差异表达的微小RNA 29个，其中miR-101-3p、miR-122-5p、miR-143-3p、miR-185-3p、miR-192-5p、miR-194-5p、miR-19a-3p、miR-19b-3p、miR-20b-5p、miR-21-5p、miR-22-3p、miR-335-5p、miR-34a-5p、miR-3613-5p、miR-548ad-5p、miR-590-3p、miR-7-5p表达上调，miR-1249-3p、miR-141-3p、miR-199a-5p、miR-199b-5p、miR-200a-3p、miR-200c-3p、miR-204-5p、miR-29c-5p、miR-335-3p、miR-381-3p、miR-4433b-5p、miR-584-5p表达下调。差异表达的蛋白357个，其中236个表达上调，121个表达下调，最终筛选前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白。结论:血浆外泌体携带的miR-34a-5p、miR-200c-3p、miR-143-3p、miR-22-3p、miR-21-5p、前激肽释放酶、激肽原1、桥粒蛋白可能通过调节血管生理过程、炎症反应、自身免疫等过程参与TAK的发病机制，具有作为TAK生物标志物和治疗靶点的潜在作用。

目的:探讨普萘洛尔通过长链非编码RNA核旁丛组装转录本1(lncRNA NEAT1)靶向微小RNA(miR)-194-5p调控血管瘤内皮细胞(HemECs)增殖的作用。方法:收集2021年3月至2022年8月在河北医科大学第二医院小儿外科手术切除的血管瘤标本20例，根据Mulliken标准分为增生期组和消退期组。采用实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测两组瘤体中NEAT1和miR-194-5p水平。制备HemECs，细胞计数试剂盒(CCK-8)试验检测敲低和过表达NEAT1对HemECs增殖影响。双荧光素酶酶报告基因实验及RT-qPCR验证miR-194-5p与NEAT1之间的相互作用。不同浓度普萘洛尔给药后，CCK-8试验检测细胞活性，5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测细胞增殖，RT-qPCR方法检测NEAT1和miR-194-5p水平。两组间比较采用独立样本 t检验进行分析，多组间比较采用单因素方差分析和重复测量方差分析，采用Spearman分析确定各指标间相关性。 结果:RT-qPCR结果显示增生期血管瘤NEAT1表达高于退化期血管瘤(17.43±5.38比8.82±3.70， t＝4.176， P<0.01)；而增生期血管瘤miR-194-5p表达低于退化期血管瘤(0.28±0.11比0.41±0.11， t＝2.692， P<0.01)。CKK-8检测结果显示，si-NEAT1组细胞活性低于si-NC组(0.86±0.05比1.11±0.03， t＝7.794， P<0.01)；OE-NEAT1组细胞活性高于OE-NC组(1.33±0.01比1.11±0.05， t＝8.072， P<0.05)。Si-NEAT1组miR-194-5p表达水平高于si-NC组(2.88±0.33比1.14±0.47， t＝5.206， P<0.01)；OE-NEAT1组miR-194-5p表达水平低于OE-NC组(0.43±0.06比1.24±0.11， t＝10.830， P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示miR-194-5p和NEAT1-WT共转染组荧光素酶活性高于miR-NC和NEAT1-WT共转染组(0.35±0.05比0.65±0.04， t＝5.273， P<0.01)。OE-NEAT1＋普萘洛尔组细胞EdU染色阳性细胞率显著低于OE-NEAT1组和OE-NC组(35.97±1.09比69.66±2.85、51.89±1.09， F＝65.100， P<0.01)，OE-NEAT1＋普萘洛尔组NEAT1、miR-194-5p表达量均与OE-NEAT1组比较，差异有统计学意义(1.63±0.30比3.94±0.50， t＝6.851， P<0.01；0.86±0.26比0.37±0.03， t＝3.213， P<0.05)。 结论:普萘洛尔可通过NEAT1靶向miR-194-5p调节HemECs增殖，NEAT1可能作为婴幼儿血管瘤分子治疗的潜在靶点。

目的 探讨模拟微重力环境下miR-194-3p对成骨细胞功能变化的调控作用,为极端力学环境下成骨细胞的力学响应机制提供理论基础.方法 利用细胞旋转培养系统建立细胞水平微重力环境,分别采用MTT、RT-PCR、Western blot、荧光双染色法和茜素红染色法检测转染miR-194-3p抑制剂前后MC3T3-E1 成骨细胞增殖、分化、凋亡和矿化的变化情况.结果 模拟微重力环境下miR-194-3p表达上调,成骨细胞的增殖、分化和矿化均受到一定程度的抑制,同时促进了成骨细胞的凋亡.转染miR-194-3p抑制剂后,miR-194-3p表达显著下调,且能部分逆转由微重力导致的细胞成骨细胞增殖减弱、成骨分化标志物如ALP、OCN和COL-I基因和蛋白表达降低、骨矿化结节减少和成骨细胞凋亡数目增加的情况,说明miR-194-3p能有效改善微重力暴露下成骨细胞功能异常的情况.结论 模拟微重力环境下miR-194-3p可能作为一种负调控因子,通过调控成骨细胞功能参与其力学响应的进程.

目的:探讨下调lncRNA FBXL19-AS1抑制人膀胱癌细胞系T24的细胞增殖、凋亡及迁移的分子机制。方法:收集2020年3月至2020年7月本院收治的50例膀胱癌患者的癌组织及其癌旁组织标本，采用qRT-PCR检测lncRNA FBXL19-AS1、miR-194-5p表达量；体外培养人膀胱癌细胞T24，随机将其分为si-lncRNA FBXL19-AS1组、miR-194-5p组、si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-194-5p组及各自对照si-NC组、miR-NC组、si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-NC组；采用MTT法、平板克隆形成实验、流式细胞术、Transwell小室实验进行细胞增殖、克隆形成、凋亡及迁移检测；采用双荧光素酶报告实验验证lncRNA FBXL19-AS1是否靶向miR-194-5p；采用Western blot法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达量。结果:与癌旁组织比较，lncRNA FBXL19-AS1在膀胱癌组织中的表达量升高，miR-194-5p的表达量降低(均 P<0.05)；与miR-NC组比较，miR-194-5p组细胞的荧光素酶活性减弱( P<0.05)；与si-NC组比较，si-lncRNA FBXL19-AS1组细胞的lncRNA FBXL19-AS1表达量降低，miR-194-5p的表达量升高，细胞增殖抑制率升高，细胞克隆形成数减少(均 P<0.05)；与miR-NC组比较，miR-194-5p组的miR-194-5p表达量升高，细胞增殖抑制率升高，细胞克隆形成数减少(均 P<0.05)；与si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-194-5p组的miR-194-5p表达量降低，细胞增殖抑制率降低，细胞克隆形成数增多(均 P<0.05)。与si-NC组比较，si-lncRNA FBXL19-AS1组的细胞凋亡率、Bax、裂解的Caspase3蛋白水平均升高，Bcl-2蛋白水平降低(均 P<0.05)；与miR-NC组比较，miR-194-5p组的细胞凋亡率升高( P<0.05)，Bax、裂解的Caspase3蛋白水平均升高，Bcl-2蛋白水平均降低(均 P<0.05)；与si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-194-5p组的细胞凋亡率、Bax、裂解的Caspase3蛋白水平均降低，Bcl-2蛋白水平升高(均 P<0.05)。与si-NC组比较，si-lncRNA FBXL19-AS1组的迁移细胞数减少( P<0.05)；与miR-NC组比较，miR-194-5p组的迁移细胞数减少( P<0.05)；与si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-NC组比较，si-lncRNA FBXL19-AS1+anti-miR-194-5p组的迁移细胞数增多( P<0.05)。 结论:下调lncRNA FBXL19-AS1可通过调节miR-194-5p抑制膀胱癌细胞的增殖及转移。

目的:研究miR-194-5p靶向调控高迁移率族蛋白2(HMGA2)表达,进而抑制转化生长因子(TGF)-β1诱导的胰腺癌细胞上皮—间质转化(EMT)的相关分子机制.方法:将人胰腺癌细胞系BxPc-3分为四组,分别为对照组、处理组、Sh-miR-194-5p组和Sh-NC组,除了对照组,其他三组均在体外采用TGF-β1诱导培养72 h,分别构建miR-194-5p沉默质粒(Sh-miR-194-5p)和对照质粒(Sh-NC)在TGF-β1诱导培养前2 h转染细胞.倒置显微镜观察细胞形态,qRT-PCR法检测miR-194-5p,Western blot法检测HMGA2以及EMT标志物(E-cadherin、Vimentin和N-cadherin)蛋白,Transwell实验检测细胞侵袭.结果:与对照组相比,处理组细胞形态为长梭形,出现EMT特征性形态;miR-194-5p、HMGA2、Vimentin和N-cadherin表达量明显升高,而E-cadherin表达量明显下降,侵袭细胞数目减少(P＜0.05).与处理组和Sh-NC组相比,Sh-miR-194-5p组细胞形态变化明显减少,但仍多于对照组,niR-194-5p、HMGA2、Vimentin和N-cadherin表达量明显下降,而E-cadherin表达量明显升高,侵袭细胞数目增多(P＜0.05),与对照组相比差异仍有统计学意义(P＜0.05).结论:人胰腺癌细胞可高表达miR-194-5p,通过靶向调控HMGA2表达进而部分程度上抑制了 TGF-β1诱导的细胞EMT变化,为疾病发生机制以及临床干预提供了新型靶点.

[目的]作为一种喜温冷敏植物,低温严重影响小桐子的生长发育、地域分布与产量.前期工作发现12 ℃低温锻炼可显著提高小桐子的抗冷性,小桐子早期光诱导蛋白(ELIP)基因是低温高响应基因.为探究JcELIP在小桐子低温响应中的作用,全面了解JcELIP的结构、调控机制、进化关系及JcELIP与miRNAs的互作关系,也为后续小桐子抗冷分子育种提供一个重要的候选基因资源.[方法]通过RT-PCR克隆了小桐子JcELIP基因并对其进行系统的生物信息学分析,采用RT-qPCR分析JcELIP基因在根、茎、叶中及12 ℃低温锻炼过程中的表达变化,鉴定与JcELIP互作的miRNAs,进行了 12 ℃低温锻炼过程中的共表达分析.[结果]该基因完整的开放阅读框(ORF)为585 bp,编码194个氨基酸,蛋白的分子质量为2.04 kD,理论等电点为9.59,属于稳定的疏水碱性蛋白,具有3个疏水跨膜螺旋;三级结构主要由a-螺旋和无规则卷曲组成,具有叶绿素a/b结合位点.顺式作用元件预测显示JcELIP具有脱落酸等激素响应元件.进化分析显示:小桐子JcELIP与木薯MeELIP同源性最高.RT-qPCR分析显示:正常生长条件下小桐子JcELIP在根、茎、叶中的表达量无显著差异;12 ℃冷锻炼条件下JcELIP在叶中表达快速上调,48 h时其表达量达到对照组的64.8倍,表明JcELIP参与了小桐子对冷胁迫的响应与适应.基于小桐子降解组数据,鉴定到miR390-x、miR6476-x和novel-m0090-3p等8个miRNAs对JcELIP的表达具有调控作用;共表达分析结果表明在12 ℃低温锻炼过程中JcELIP的表达受miR390-x和novel-m0090-3p显著负调控.[结论]JcELIP高响应低温胁迫并与miRNAs互作,表明其在小桐子响应低温胁迫过程中发挥重要作用.

目的 探讨鼻咽癌癌组织中长链非编码RNA羧基末端结合蛋白1反义RNA2(long non-coding RNA C-terminal binding protein 1 antisense RNA2,LncRNA CTBP1-AS2)、微小核糖核酸(microRNA,miR)-140-5p水平表达与放疗疗效及预后的关系.方法 选取2018年3月～2020年3月于南通市肿瘤医院确诊的222例鼻咽癌患者为鼻咽癌组,记录患者临床资料,评估放疗疗效及预后,并分为生存组(n=194)和死亡组(n=28);另选取同期 219 例鼻咽炎患者为对照组.采用Pearson相关分析检验鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平的相关性;采用Kaplan-Meier生存曲线分析鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2,miR-140-5p表达水平与患者预后的关系;采用COX比例风险回归模型对鼻咽癌患者预后进行多因素分析.结果 鼻咽癌组患者组织中LncRNA CTBP1-AS2 表达水平(2.25±0.46)高于对照组(1.02±0.22),miR-140-5p表达水平(0.67±0.19)低于对照组(1.01±0.23),差异具有统计学意义(t=35.742,16.934,均P＜0.001).鼻咽癌患者中LncRNA CTBP1-AS2与miR-140-5p表达水平呈负相关(r=-0.624,P＜0.001).LncRNA CTBP1-AS2 高表达的鼻咽癌患者放疗后总有效率(74.11%)和三年生存率(77.68%)低于低表达患者(93.64%,97.27%),差异具有统计学意义(χ2=15.578,19.331,均P＜0.001);miR-140-5p高表达患者放疗后总有效率(93.58%)和三年生存率(96.33%)显著高于低表达患者(74.34%,78.76%),差异具有统计学意义(χ2=15.119,15.538,均P＜0.001).死亡组磁共振酰胺质子转移(amide proton transfer,APT)值(2.10±0.26)、放疗无效(85.71%)、LncRNA CTBP1-AS2高表达(89.29%)及miR-140-5p低表达(85.71%)患者比例高于生存组(1.82±0.31,6.19%,44.85%,45.88%),差异具有统计学意义(t/χ2=4.551,108.127,19.331,15.538,均P＜0.001).LncRNA CTBP1-AS2 表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的危险因素(HR=2.762,95%CI:1.510～5.051,P=0.001),miR-140-5p表达水平为鼻咽癌患者三年内死亡的保护因素(HR=0.817,95%CI:0.718～0.930,P=0.002).结论 鼻咽癌组织中LncRNA CTBP1-AS2 高表达,miR-140-5p低表达,二者与放疗疗效及预后关系密切.

目的:检测增龄性胸腺萎缩过程中miR-194与PTPN12的表达水平变化,并分析二者相互作用,阐明其中的分子调节机制.方法:选用C57BL/6小鼠,分为4组:1月龄组、6月龄组、10月龄组和19月龄组,每组6只,雌雄各半.麻醉后取出胸腺组织,用CD45抗体与LS柱吸附洗脱,筛选出胸腺上皮细胞.实时荧光定量PCR与Western blot方法检测随年龄增长,胸腺上皮细胞中miR-194与PTPN12基因的表达变化趋势.体外实验共转染miR-194与PTPN12荧光素酶报告载体到HEK293细胞内,分别于24、48 h后检测自发荧光值.结果:随月龄增长,miR-194表达出现下调趋势(P<0.05),而PTPN12基因表达出现上调趋势(P<0.05),且二者呈负相关性(P<0.05).体外荧光素酶报告基因结果显示,miR-194与PTPN12基因3' UTR区域发生直接作用,并在48 h结合效率最高.结论:PTPN12是miR-194靶基因之一,参与了增龄性胸腺萎缩过程,是调节胸腺上皮细胞功能的重要因子.

目的:研究miR-629-5p对胃癌细胞生物学行为的影响并鉴定其靶基因.方法:通过实时荧光定量PCR (quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-629-5p在16例胃癌组织和3种胃癌细胞中的表达水平;将细胞实验分为2个组:实验组(IN)和对照组(NC);转染miR-629-5p抑制剂下调胃癌细胞MKN-45中miR-629-5p的表达;CCK-8实验和平板克隆实验检测MKN-45增殖;Transwell小室实验和划痕实验检测MKN-45迁移和侵袭;细胞流式技术检测MKN-45凋亡;通过miRWalk2.0工具预测miR-629-5p的靶基因,Western blot检测MKN-45中线粒体样转录释放因子1(mitochondrial translational release factor 1 like,MTRF1L)蛋白表达.结果:与癌旁组织[1.574(0.197,4.503)]相比,胃癌组织中miR-629-5p相对表达量[2.081(0.231,7.216)]明显增加(P=0.003);与正常胃黏膜细胞(1.017±0.226)相比,胃癌细胞中miR-629-5p相对表达量(MKN-28:3.040±0.506;MKN-45:5.924±0.403;SCG-7901:3.377±0.372)均明显增加(P=0.000).下调miR-629-5p表达后,胃癌细胞MKN-45的增殖减慢(IN:64±12;NC:102±12;P=0.018),迁移(IN:106±9;NC:194±29;P=0.008)和侵袭(IN:25±7;NC:60±9;P=0.007)能力减弱,凋亡细胞数增加[IN:(19.257±2.440)％;NC:11.687±2.237;P=0.017].miR-629-5p预测的靶基因共有46个,下调miR-629-5p的表达后,MTRF1L表达量明显增加(IN.0.923±0.101;NC:0.556±0.026;P=-0.004).结论:miR-629-5p在胃癌中表达上调,可促进MKN-45的增殖,增强MKN-45迁移和侵袭能力,抑制MKN-45凋亡;MTRF1L可能是miR-629-5p的靶基因之一.

目的 研究瘢痕疙瘩中miR-194-3p对成纤维细胞增殖作用的影响,为瘢痕疙瘩的治疗提供理论基础.方法 对瘢痕疙瘩标本应用基因芯片筛选出与正常组织差异表达的miRNA,并通过real-time PCR技术来验证miR-194-3p表达;采用Western-blot和real-time PCR分析miR-194-3p对其靶蛋白RUNX2的调节作用.在成纤维细胞中过表达或抑制miR-194-3p后,通过MTT实验观察其对成纤维细胞增殖的作用.通过Western-blot和real-time PCR探讨其对RUNX2及其增殖相关蛋白CDK4的调控作用.结果 miR-194-3p在瘢痕疙瘩中呈下调表达,其能够抑制RUNX2的表达;miR-194-3p可以通过抑制增殖相关蛋白CDK4来抑制成纤维细胞的增殖.结论 miR-194-3p可以抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖.