目的:探讨二甲双胍调控miR-340-5p/DEAD-box解旋酶17（DEAD-box helicase 17，DDX17）轴对高糖诱导成骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:MC3T3-E1细胞分为对照组、高糖组、二甲双胍组、inhibitor NC组、miR-340-5p inhibitor组、二甲双胍+mimic NC组、二甲双胍+miR-340-5p mimic组，qRT-PCR检测miR-340-5p表达；Western blot检测DDX17、细胞周期素D1（Cyclin D1）、增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2-associated X protein，Bax）、裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3（Cleaved aspartate-specific cysteine protease-3，Cleaved caspase-3）蛋白；CCK-8、5-乙炔基-2’-脱氧尿苷（5-ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU）染色检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；荧光原位杂交实验、双荧光素酶分别验证miR-340-5p与DDX17的定位、靶向关系。结果:与对照组比较，高糖组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高（ t=19.81，39.47，24.61，21.62， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低（ t=7.624，30.100，26.54，19.46，21.20， P均<0.001）；与高糖组比较，二甲双胍组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低（ t=13.37，28.55，18.35，18.78， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高（ t=7.97，25.76，18.48，12.39，18.98， P均<0.001）；与高糖组、inhibitor NC组比较，miR-340-5p inhibitor组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达降低（ F=85.92，301.11，142.64，170.35， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达升高（ F=26.54，447.72，249.31，113.46，393.27， P均<0.001）；与二甲双胍组、二甲双胍+mimic NC组比较，二甲双胍+miR-340-5p mimic组miR-340-5p表达、细胞凋亡率及Bax、Cleaved caspase-3蛋白表达升高（ F=36.27，395.56，94.90，18.59， P均<0.001），OD 450值、EdU阳性细胞率及DDX17、Cyclin D1、PCNA蛋白表达降低（ F=21.44，128.47，24.28，25.89，18.06， P均<0.001）。miR-340-5p靶向调控DDX17表达，且二者共定位于细胞质中。 结论:二甲双胍通过下调miR-340-5p表达，上调DDX17表达进而促进高糖诱导的MC3T3-E1细胞增殖，抑制凋亡。

目的:阐释miR-340-5p对HBV复制的影响及其调控机制，并为HBV感染后的生物标志物和治疗用药提供新的策略。方法:在肝癌细胞HepG2.2.15中转染miR-340-5p的模拟物(340-mimic)和抑制剂(340-inhibitor)及其对应的阴性对照。通过ELISA检测上清中HBeAg和HBsAg的水平变化。同时收取细胞，提取RNA和壳体化DNA，并采用qRT-PCR分别检测HBV总RNA和pgRNA的水平及HBV DNA拷贝数的变化；分子克隆构建STAT3的过表达质粒pEF-flag-stat3，通过qRT-PCR和western blot对STAT3的mRNA和蛋白表达加以验证；此外，共转染miR-340-5p的模拟物和pEF-flag-stat3后通过northern blot，qPCR和ELISA对HBV的复制情况进行检测。结果:miR-340-5p过表达后，HBV转录生成总RNA和逆转录模板pgRNA的水平明显下降至对照组的45.89%、61.46% ( P＝0.001、 P＝0.003)；壳体化DNA的合成及HBeAg和HBsAg的分泌水平分别受到72.46%、18.27%、14.42%的抑制( P<0. 001、 P<0. 001、 P＝0.005)；干扰内源性miR-340-5p则与对照组相比分别增加44.02%、45.56%、22.66%、11.85%、14.04%( P＝0. 009、 P＝0. 01、 P＝0. 011、 P＝0.013、 P＝0.027)。相比之下在此基础上过表达信号转导和转录激活因子(STAT)3能够减弱被miR-340-5p抑制的HBV复制。进一步的实验结果也表明STAT3对HBV的复制有促进作用。 结论:miR-340-5p能够通过靶向作用于STAT3抑制其转录和翻译进而抑制HBV的复制。

本文通过研究GISTs组织TNC、CD55、微小RNA(microRNA，miR)-340和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达与临床病理特征和预后的相关性，以期为临床GISTs的诊治提供新的靶点与思路，现将结果报道如下。

目的:探索微小RNA(miR)-340-5p在胰腺导管腺癌细胞(PDAC)中表达及影响其生物学行为的机制。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺导管腺癌与正常细胞中miR-340-5p的表达，研究其表达水平与临床特征之间的联系。检测不同胰腺导管腺癌细胞及人胰腺导管上皮细胞中miR-340-5p水平。miR-340-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-340-5p对RhoA的调控功能。结果:PDAC组织中miR-340-5p水平低于正常胰腺组织(0.362 4±0.083 7、0.965 2±0.129 9， t＝21.272， P<0.01)；PDAC中miR-340-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移( χ2＝7.782， P<0.01)、肝转移( χ2＝17.109， P<0.01)有相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-340-5p模拟物后低于对照组(0.992 5±0.099 8比0.177 5±0.019 0， t＝18.496， P<0.01)。转染后，转染组细胞增殖活性降低(0.505 2±0.077 1比1.031 0±0.069 1、1.029 5±0.113 5， t＝38.012、7.637， P<0.01、迁移距离减少(0.753 3±0.050 1、0.725 0±0.071 5比0.338 3±0.087 7， t＝11.098、7.031， P<0.01)、迁移细胞数减少(57.000 0±4.290 0、52.666 7±5.785 0比19.833 3±2.994 0， P<0.01)。Western blot及RT-qPCR结果显示，与空白对照组(NC)及阴性对照组(Scramble)比较，miR-340-5p模拟物转染组N-cadherin(1.048 3±0.076 9、1.040 7±0.079 2比0.457 3±0.074 5， t＝11.800、11.585， P<0.01)、Vimentin(1.045 3±0.062 8、0.993 3±0.068 6比0.521 7±0.057 9， t＝10.982、9.585， P<0.05)、MMP-9(1.047 0±0.069 6、1.154 3±0.101 1比0.560 3±0.457 1， t＝32.803、18.559， P<0.01)表达显著降低，E-cadherin(1.053 3±0.100 3、0.987 7±0.083 4比1.976 0±0.154 2， t＝－29.502、－24.203， P<0.01)表达升高。 结论:胰腺导管腺癌中miR-340-5p表达降低，过表达miR-340-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖和转移。其对RhoA信号通路介导的上皮-间充质转化(EMT)进程具有潜在抑制作用。

目的:探讨miR-340/高迁移率组蛋白盒1（HMGB1）轴在肝纤维化形成过程中的作用机制。方法:腹腔注射四氯化碳构建大鼠肝纤维化模型；基因芯片筛选正常和肝纤维化大鼠差异表达的miRNA后选择其中可靶向HMGB1的miRNA并验证，qPCR检测miRNA表达变化对HMGB1水平的影响；双荧光素酶报告基因实验（LUC）验证miR-340和HMGB1间的靶向关系；miRNA mimics和HMGB1过表达载体共转染后，噻唑蓝（MTT）法检测肝星状细胞系HSC-T6的增殖活性，蛋白质印迹法检测细胞外基质（ECM）标志物I型胶原、α-平滑肌肌动蛋白（SMA）的表达。采用方差分析和LSD- t检验进行统计学分析。 结果:苏木精-伊红及Masson染色结果表明大鼠肝纤维化模型构建成功；芯片分析和生物信息学预测得到8个可能靶向HMGB1的miRNA，动物模型验证得到miR-340；qPCR检测结果表明miR-340可抑制HMGB1表达，荧光素酶互补实验提示miR-340可靶向结合HMGB1；功能实验结果表明HMGB1过表达可增强细胞增殖活性和I型胶原、α-SMA的表达，而miR-340 mimics不仅可抑制细胞增殖活性和HMGB1、I型胶原、α-SMA的表达，还可部分逆转HMGB1对细胞增殖和ECM合成的促进作用。结论:miR-340靶向HMGB1抑制肝星状细胞增殖和ECM沉积，在肝纤维化进程中发挥保护作用。

目的 探讨miR-340-5p靶向调控富含AT的相互作用结构域(ARID)1A对甲状腺癌活性、迁移和侵袭的影响.方法 通过实时荧光定-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western印迹检测miR-340-5p和ARID1A在甲状腺癌细胞中表达水平.通过噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测转染miR-340-5p抑制物后癌细胞活性、迁移和侵袭变化.双荧光素酶报告基因检测miR-340-5p和ARID1A的靶向结合关系.最后通过同时敲低miR-340-5p和ARID1A的回复实验验证miR-340-5p调控ARID1A影响癌症发展.结果 miR-340-5p在甲状腺癌细胞中明显高表达,ARID1A表达明显较低(P＜0.05).通过抑制BC-PAP细胞中miR-340-5p表达明显减少了癌细胞活性、迁移和侵袭水平.miR-340-5p和ARID1A具有直接靶向结合关系.敲降ARID 1A能够明显逆转miR-340-5p抑制物对BCPAP细胞活性、迁移和侵袭的抑制作用.结论 miR-340-5p是甲状腺癌中的促癌基因,ARID1A为miR-340-5p的靶标下游,miR-340-5p通过靶向调控ARID 1A促进甲状腺癌细胞活性、迁移和侵袭.

目的:探讨miR-340-5p调控磷酸二酯酶4D（PDE4D）表达对胃癌细胞顺铂（DDP）耐药性的影响。方法:将胃癌细胞AGS连续暴露于0.1 ~ 1 μg/mL DDP中来构建耐DDP的胃癌细胞系AGS/DDP，1、3、5、7 μg/mL DDP处理AGS、AGS/DDP细胞，CCK-8检测细胞活力及IC50；qRT-PCR检测miR-340-5p表达量；Western blot检测PDE4D蛋白表达水平；验证miR-340-5p与PDE4D靶向关系；分别将miR-340-5p mimics、siRNA PDE4D转染于AGS/DDP细胞，miR-340-5p mimics和pcDNA-PDE4D共转染于AGS/DDP细胞，将转染成功的AGS/DDP细胞以及未转染AGS/DDP细胞分别用5 μg/mL DDP处理，观察AGS/DDP细胞增殖、迁移和侵袭变化。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析和SNK-q检验。结果:与AGS细胞相比，AGS/DDP细胞在1、3、5、7 μg/mL DDP处理时的细胞活力升高，IC50值[（5.89 ± 0.27）比（1.46 ± 0.11）μg/mL]升高；与AGS细胞相比，AGS/ DDP细胞中miR- 340- 5p的表达（0.34 ± 0.17比1.00 ± 0.00）降低，而PDE4D蛋白水平（1.83 ± 0.11比0.25 ± 0.01）升高；PDE4D为miR-340-5p靶基因；过表达miR-340-5p或敲低PDE4D可抑制AGS/ DDP细胞增殖、迁移[（54.17 ± 4.12）比（26.00 ± 2.28）个、（55.00 ± 4.43）比（24.50 ± 2.07）个]与侵袭[（37.17 ± 3.19）比（19.33 ± 1.63）个、（38.33 ± 3.14）比（16.33 ± 1.63）个]；上调PDE4D表达可逆转过表达miR-340-5p对AGS/DDP细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用（P均< 0.05）。结论:miR-340- 5p通过靶向下调PDE4D表达抑制AGS/DDP细胞增殖、迁移和侵袭，降低其对DDP的耐药性。

在许多发展中国家,宫颈癌是女性癌症相关发病和死亡的主要原因.本文阐明了微小RNA(miRNA)在上皮-间充质转化(EMT)中的作用机制,并发现miRNA通过调控EMT在宫颈癌的转移侵袭和肿瘤耐药中发挥重要作用.miR-92a-3p、miR-21、miR-138等可以直接靶向EMT促进宫颈癌转移侵袭;miR-98-5p、miR-204-5p、miR-340等可以通过抑制EMT来抑制宫颈癌转移侵袭;miR-101-3p、miR-106b、miR-4677-3p等可通过内源性竞争机制影响EMT进而影响宫颈癌发生和进展.在宫颈癌肿瘤耐药性中,miR-25-3p可通过靶向Sema4C,将EMT逆转为间质表型上皮样转化,增强宫颈癌耐药细胞对顺铂的敏感性.靶向miRNA可能是一种新型治疗宫颈癌的方法.

目的 探讨miR-340在膀胱尿路上皮癌中的表达,并对其预测的靶基因进行生物信息学分析,为miR-340在膀胱尿路上皮癌发生中的作用机制研究提供理论基础.方法 采用miRNA芯片技术检测膀胱尿路上皮癌及正常膀胱黏膜组织中miRNA表达谱,用实时定量PCR法进行验证,挑选具有显著表达差异的miR-340为进一步研究对象,利用生物信息学方法,对miR-340的靶基因进行预测,并对其靶基因进行基因本体(GO)功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析.结果 miRNA表达谱芯片、实时定量PCR法均提示miR-340在膀胱尿路上皮癌中较癌旁正常膀胱组织中表达明显降低.miR-340预测靶基因集合功能富集于细胞黏附(cell adhesion)、生物黏附(biological adhesion)和细胞间黏附(cell-cell adhesion)等,KEGG通路分析涉及癌通路(pathways in cancer)和细胞周期通路(pathways in cell cycle)等.结论 miR-340在膀胱尿路上皮癌中呈低表达,miR-340预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.

To the Editor:Benign prostatic hyperplasia (BPH) is a prevalent chronic disease that predominately affects males aged over 40 years,characterized by benign unregulated hyperplasia that arises from stromal and epithelial prostate cells.[1,2]Although the association between altered microRNA (miRNA) expressions and the incidence of prostate cancer has been widely investigated,there still remains a poor understanding of the mechanism underlying miRNA expressions in BPH of the prostatic stroma.[3] More recently,emerging evidence has highlighted the role of antitumor miRNA-340 (miR-340) in the event of prostate cancer progression and metastasis.[4] However,there remains an inadequate understanding regarding the role of miR-340 in BPH.In this study,we collected prostatic tissues from 75 BPH patients and normal prostatic tissues from 67 non-BPH patients who were admitted into Beijing Friendship Hospital,between June 2012 and December 2013.In an attempt to examine the expression patterns ofmiR-340 in BPH in vivo,we quantified a decreased expression level of miR-340 among obtained prostatic tissues from patients with BPH in contrast to normal prostatic tissues [Figure la],which suggested that downregulated miR-340 was associated with the occurrence of BPH.The study was conducted with the approval of the Institutional Ethics Committee of Beijing Friendship Hospital,Capital Medical University,with all participating patients giving informed consent in accordance with the requirements of the Declaration of Helsinki.