目的:探索微小RNA(miR)-340-5p在胰腺导管腺癌细胞(PDAC)中表达及影响其生物学行为的机制。方法:实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测40例胰腺导管腺癌与正常细胞中miR-340-5p的表达，研究其表达水平与临床特征之间的联系。检测不同胰腺导管腺癌细胞及人胰腺导管上皮细胞中miR-340-5p水平。miR-340-5p模拟物转染PDAC细胞株PANC-1；甲基噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；划痕实验、Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。RT-qPCR及蛋白质印迹法(Western blot)检测N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。双荧光素酶报告基因分析实验检测miR-340-5p对RhoA的调控功能。结果:PDAC组织中miR-340-5p水平低于正常胰腺组织(0.362 4±0.083 7、0.965 2±0.129 9， t＝21.272， P<0.01)；PDAC中miR-340-5p表达降低与胰腺癌淋巴结转移( χ2＝7.782， P<0.01)、肝转移( χ2＝17.109， P<0.01)有相关。双荧光素酶报告基因分析结果表明，野生型RhoA的荧光素酶活性在转染miR-340-5p模拟物后低于对照组(0.992 5±0.099 8比0.177 5±0.019 0， t＝18.496， P<0.01)。转染后，转染组细胞增殖活性降低(0.505 2±0.077 1比1.031 0±0.069 1、1.029 5±0.113 5， t＝38.012、7.637， P<0.01、迁移距离减少(0.753 3±0.050 1、0.725 0±0.071 5比0.338 3±0.087 7， t＝11.098、7.031， P<0.01)、迁移细胞数减少(57.000 0±4.290 0、52.666 7±5.785 0比19.833 3±2.994 0， P<0.01)。Western blot及RT-qPCR结果显示，与空白对照组(NC)及阴性对照组(Scramble)比较，miR-340-5p模拟物转染组N-cadherin(1.048 3±0.076 9、1.040 7±0.079 2比0.457 3±0.074 5， t＝11.800、11.585， P<0.01)、Vimentin(1.045 3±0.062 8、0.993 3±0.068 6比0.521 7±0.057 9， t＝10.982、9.585， P<0.05)、MMP-9(1.047 0±0.069 6、1.154 3±0.101 1比0.560 3±0.457 1， t＝32.803、18.559， P<0.01)表达显著降低，E-cadherin(1.053 3±0.100 3、0.987 7±0.083 4比1.976 0±0.154 2， t＝－29.502、－24.203， P<0.01)表达升高。 结论:胰腺导管腺癌中miR-340-5p表达降低，过表达miR-340-5p后能明显抑制PANC-1细胞的体外增殖和转移。其对RhoA信号通路介导的上皮-间充质转化(EMT)进程具有潜在抑制作用。

在许多发展中国家,宫颈癌是女性癌症相关发病和死亡的主要原因.本文阐明了微小RNA(miRNA)在上皮-间充质转化(EMT)中的作用机制,并发现miRNA通过调控EMT在宫颈癌的转移侵袭和肿瘤耐药中发挥重要作用.miR-92a-3p、miR-21、miR-138等可以直接靶向EMT促进宫颈癌转移侵袭;miR-98-5p、miR-204-5p、miR-340等可以通过抑制EMT来抑制宫颈癌转移侵袭;miR-101-3p、miR-106b、miR-4677-3p等可通过内源性竞争机制影响EMT进而影响宫颈癌发生和进展.在宫颈癌肿瘤耐药性中,miR-25-3p可通过靶向Sema4C,将EMT逆转为间质表型上皮样转化,增强宫颈癌耐药细胞对顺铂的敏感性.靶向miRNA可能是一种新型治疗宫颈癌的方法.

目的 探讨中枢神经特异蛋白(S100β)基因单核苷酸多态性对微小RNA(miRNA)靶向调控的影响.方法 利用TargetScan在线软件,寻找调控S100β基因的miRNA及其配对结合位点.构建S100β基因rs9722位点不同基因型载体并鉴定.将构建的S100β基因rs9722位点不同基因型载体(S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722C-mut)与miRNA模拟物(miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p)两两组合共转染293T细胞,采用双荧光素酶报告基因实验检测各组合培养液上清荧光素酶活性.取对数生长期人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,分别转染miRNA mimics、miR-340-3p、miR-593-3p、miR-6827-3p,采用实时荧光定量PCR法检测相应miRNA表达,采用Western blotting法检测S100β 表达.结果 miR-340-3p、miR-6827-3p的5′-CUCUGCC-3′序列与S100β 基因3′非编码区(3′UTR)的5′-GAGACGG-3′序列完全互补,而miR-593-3p的5′-GUCUCUG-3′序列与S100β 基因3′UTR的5′-CA-GAGAC-3′序列完全互补.经鉴定,构建的S100β基因rs9722位点S100β-rs9722C、S100β-rs9722T、S100β-rs9722C-mut序列双酶切片段大小与目的基因序列片段大小一致.双荧光素酶报告基因实验显示,miR-340-3p、miR-6827-3p可靶向调控S100β基因rs9722C位点的3′UTR,而对S100β基因rs9722T、rs9722C-mut位点的3′UTR无靶向调控作用;miR-593-3p对S100β基因rs9722C、rs9722T、rs9722C-mut位点的3′UTR均无靶向调控作用.miR-340-3p组、miR-593-3p组、miR-6827-3p组相应miRNA相对表达量均高于其对应miRNA NC组(P均<0.05).miR-6827-3p组S100β相对表达量低于其对应miRNA NC组(P<0.05),而miR-340-3p组、miR-593-3p组S100β相对表达量与其对应miRNA NC组比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 miRNA对S100β基因转录后调控效率存在基因型差异,miR-6827-3p可能通过靶向结合S100β基因rs9722C基因型mRNA,从而调控S100β表达.

目的 探讨右美托咪定(Dex)对缺氧复氧诱导心肌细胞凋亡的防护作用及机制.方法 选取大鼠心肌细胞H9c2,根据微小RNA(miR)-340-5p抑制剂及其阴性对照抑制剂转染情况,分为对照组(未处理)、阴性对照抑制剂组和miR-340-5p抑制剂组;根据miR-340-5p抑制剂及其阴性对照抑制剂转染、Dex以及缺氧复氧干预,分为对照组(未处理)、缺氧复氧组、缺氧复氧+Dex组、缺氧复氧+阴性对照抑制剂+ Dex组、缺氧复氧+miR-340-5p抑制剂+Dex组;根据miR-340-5p模拟物及其阴性对照模拟物转染、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)碱基突变情况,分为HMGB1-wtUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-mutUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-wtUTR+ miR-340-5p模拟物组、HMGB1-mutUTR+ miR-340-5p模拟物组.采用细胞计数试剂盒8检测细胞增殖水平.采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测HMGB1 mRNA、miR-340-5p表达量.采用蛋白质印迹法检测HMGB1、B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达量.采用流式细胞术检测细胞凋亡情况.采用双荧光素酶试验验证miR-340-5p与HMGB1的靶向结合.结果 缺氧复氧+ Dex组miR-340-5p表达量高于缺氧复氧组[(0.80±0.04)比(0.25±0.01)],HMGB1mRNA及其蛋白表达量均低于缺氧复氧组[(1.47±0.13)比(5.02±0.52)、(2.09±0.08)比(4.87±0.16)],差异均有统计学意义(均P ＜0.05).缺氧复氧+Dex组细胞增殖水平低于对照组,但高于缺氧复氧组;缺氧复氧+ miR-340-5p抑制剂+Dex组细胞增殖水平低于缺氧复氧+阴性对照抑制剂+Dex组;差异均有统计学意义(均P＜0.05).缺氧复氧+miR-340-5p抑制剂+Dex组Bcl-2表达量低于缺氧复氧+阴性对照抑制剂+ Dex组,Bax表达量、凋亡率均高于缺氧复氧+阴性对照抑制剂+Dex组,差异均有统计学意义(均P ＜0.05).双荧光素酶试验结果显示,HMGB1-wtUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-mutUTR+阴性对照模拟物组、HMGB1-wtUTR+miR-340-5p模拟物组及HMGB1-mutUTR+ miR-340-5p模拟物组相对荧光比值比较,差异有统计学意义(F=22.43,P＜0.01),且HMGB1-wtUTR+ miR-340-5p模拟物组相对荧光比值低于其他3组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 Dex可通过上调miR-340-5p表达,从而靶向抑制HMGB1的表达,改善细胞凋亡情况,进而发挥心肌保护作用.

目的 探讨长链非编码RNA HOXA-AS3(lncRNA HOXA-AS3)对小细胞肺癌耐药性细胞DMS114/DDP的影响及其对微小RNA-340-5p(miR-340-5p)的调控作用.方法 采用qRT-PCR法检测肺癌组织及癌旁组织中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;体外培养小细胞肺癌细胞DMS114,采用顺铂浓度递增法建立耐药细胞DMS114/DDP,分别将si-NC、si-HOXA-AS3、si-HOXA-AS3与anti-miR-NC、si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p转染至DMS114/DDP细胞;采用qRT-PCR法检测细胞中HOXA-AS3、miR-340-5p的表达量;采用CCK-8法检测细胞存活率及计算顺铂IC50值;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验检测HOXA-AS3、miR-340-5p的靶向关系.结果 肺癌组织中HOXA-AS3的表达水平升高(P<0.05),miR-340-5p的表达水平降低(P<0.05);不同浓度的顺铂处理后DMS114细胞、DMS114/DDP细胞存活率逐渐降低(P<0.05),且DMS114/DDP细胞IC50值高于DMS114细胞(P<0.05);与DMS114细胞比较,DMS114/DDP细胞中HOXA-AS3的表达水平升高(P<0.05);转染si-HOXA-AS3可明显降低细胞活力(P<0.05),提高凋亡率(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实HOXA-AS3可靶向结合miR-340-5p;共转染si-HOXA-AS3与anti-miR-340-5p可明显提高细胞活力(P<0.05),降低凋亡率(P<0.05).结论 干扰HOXA-AS3表达可抑制细胞增殖及促进细胞凋亡进而增强DMS114/DDP细胞顺铂敏感性,其作用机制可能与上调miR-340-5p的表达有关.

B3型柯萨奇病毒(Coxsackie virus B3,CVB3)感染与1型糖尿病发病及胰岛β细胞损伤有关,但机制并不清楚.病毒性心肌炎的研究证实CVB3通过调控微小RNA(microRNAs,miRNAs)的表达引起心肌细胞损伤.本研究的目的是观察CVB3感染的胰岛β细胞中miRNAs表达的变化及生物学意义,进而初步探究CVB3感染引起胰岛β细胞损伤的分子机制.本研究培养了人胰岛β细胞株,感染CVB3后采用miRNAs芯片及荧光定量PCR检测miRNAs表达的变化;转染miR-阴性对照(NC)或miR-146a-5p后感染CVB3,检测细胞活力、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白介素-1β(IL-1β)的含量、IRAK-1及TRAF-6的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-146a-5p靶向 IRAK-1 及 TRAF-6.结果显示:CVB3组中 miR-101a-3p、miR-140-5p、miR-146a-5p、miR-146b-5p、miR-340-5p的表达水平均低于对照组且miR-146a-5p表达降低最显著;miR-NC+CVB3组的细胞活力、miR-146a-5p表达水平均低于miR-NC组,TNF-α、IL-1β的含量及IRAK-1、TRAF-6的表达水平均高于miR-NC 组;miR-146a-5p+CVB3组的细胞活力高于 miR-NC+C VB3组,TNF-α、IL-1β 的含量及 IRAK-1、TRAF-6的表达水平均低于miR-NC+CVB3组;过表达miR-146a-5p时,野生型IRAK-1、TRAF-6报告基因的荧光活力低于miR-NC组.以上结果表明CVB3感染的胰岛β细胞中多种miRNAs表达发生变化,其中miR-146a-5p表达降低与CVB3感染引起胰岛β细胞损伤有关,靶向IRAK-1、TRAF-6并调控炎症反应是可能的分子机制.本研究对CVB3感染引起胰岛素β细胞损伤的作用及分子机制进行了初步探究,进而为今后阐明1型糖尿病的发病机制及防治靶点提供了依据.

目的:探究心脏死亡器官捐献(DCD)大鼠模型肝脏和血清微小RNA(miRNA)表达特征。方法:采用随机数字表法将30只SD大鼠分为DCD组和对照组，每组15只。采用4%水合氯醛腹腔注射进行麻醉后，经腹正中切口剪断膈肌，诱导大鼠低血压和缺氧，进而诱发心脏停跳，构建DCD大鼠模型。对照组未剪断膈肌，麻醉与手术方法同DCD组。模型构建成功后经下腔静脉采血并获取肝脏组织。采用miRNA芯片检测肝脏和血清miRNA表达。采用随机数字表法从DCD组与对照组肝脏差异表达的miRNA中选取部分miRNA，通过实时定量PCR(qRT-PCR)进行验证。选取经qRT-PCR验证的肝脏组织中差异表达的miRNA以及DCD组与对照组肝脏和血清差异表达最显著的部分miRNA，通过miRDB数据库分析预测其靶基因，并进行功能分析。组间正态分布计量资料比较采用成组t检验或单因素方差分析。P<0.05为差异有统计学意义。结果:DCD组血清ALT、AST和乳酸脱氢酶分别为(76±12)、(286±56)和(2 539±122)U/L，对照组分别为(44±11)、(124±48)和(1 658±126)U/L，差异均有统计学意义(t＝4.622、16.916和16.315，P均<0.05)。DCD组大鼠肝脏组织中38个miRNA表达均高于对照组(Fold Change均>2，P均<0.05)；90个miRNA表达下调(Fold Change均<0.5，P均<0.05)。DCD组大鼠血清10个miRNA表达均高于对照组(Fold Change均>2，P均<0.05)；11个miRNA表达下调(Fold Change均<0.5，P均<0.05)。miR-100-5p、miR-540-3p和miR-10b-5p在肝脏与血清中同步表达上调(Fold Change均>2，P均<0.05)；miR-1843a-5p和miR-342-5p同步表达下调(Fold Change均<0.5，P均<0.05)。qRT-PCR检测结果示：DCD组肝脏组织miR-183-3p、miR-10b-5p、miR-487b-5p、miR-100-5p、miR-503-5p、miR-540-3p和miR-219a-2-3p相对表达均高于对照组，差异均有统计学意义(t＝2.808、6.860、10.106、20.594、3.697、10.433和5.828，P均<0.05)；miR-3559-3p、miR-150-5p、miR-223-3p、miR-340-3p、miR-342-5p、miR-664-2-5p、miR-219b和miR-224-3p相对表达均低于对照组，差异均有统计学意义(t＝-2.726、-3.318、-5.257、-4.845、-4.300、-5.082、-4.546和-3.481，P均<0.05)。miRNA靶基因预测分析显示，上述miRNA的靶基因包含一系列与DCD诱导肝损伤相关的重要生物学过程相关基因。结论:DCD大鼠肝脏和血清miRNA呈现特异性表达谱，这些失调的miRNA可能成为无创评估DCD供肝损伤的潜在生物标志物。

目的 探讨血清微小RNA(miR)-340-5p、磷酸酪氨酸衔接蛋白1(APPL1)水平与老年阿尔茨海默病(AD)患者炎症反应、认知功能的相关性.方法 选择2019年1月-2021年12月国药葛洲坝中心医院110例老年AD患者(AD组)和110名健康体检者(NC组).AD组患者依据临床痴呆评定量表评分分为轻度AD组、中度AD组、重度AD组,采用简易智能精神状态检查量表(MMSE)评估认知功能损伤程度并分为轻度认知功能障碍组、中度认知功能障碍组、重度认知功能障碍组.比较各组超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、miR-340-5p、APPL1、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6水平,Pearson相关性分析血清miR-340-5p、APPLl与炎性因子以及认知功能评分的相关性.受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-340-5p、APPL1水平对AD的诊断价值.结果 AD组血清miR-340-5p表达水平低于NC组,APPL1表达水平高于NC组,差异有统计学意义(t=12.473、10.898,P均＜0.05).轻度AD组、中度AD组、重度AD组血清miR-340-5p表达水平依次降低,APPL1表达水平依次增加,差异有统计学意义(F=14.202、15.477,P均＜0.05).轻度认知功能障碍组、中度认知功能障碍组及重度认知功能障碍组血清miR-340-5p表达水平依次降低,APPL1表达水平依次增加,差异有统计学意义(F=18.081、9.548,P均＜0.05).AD组MMSE评分显著低于NC组,IL-1β、IL-6、hs-CRP水平高于NC组,差异有统计学意义(t=39.654、18.064、24.683、48.218,P均＜0.05).轻度AD组、中度AD组、重度AD组MMSE评分依次降低,而hs-CRP、IL-1 β、IL-6水平依次增加,差异有统计学意义(F=39.863、153.382、86.058、44.757,P均＜0.05).相关性分析显示,AD组血清miR-340-5p与MMSE评分成正相关,与IL-1β、IL-6、APPL1、hs-CRP 存在负相关(r=0.615、-0.469、-0.504、-0.658、-0.427,P均＜0.05);而 APPL1 与 MMSE 评分成负相关,与 hs-CRP、IL-1β、IL-6 水平成正相关(r=-0.637、0.490、0.549、0.458,P 均＜0.05).ROC 分析显示,miR-340-5p 对 AD诊断的曲线下面积(AUC)为 0.858(95％CI:0.809～0.907),APPL1 对 AD诊断的 AUC 为 0.822(95％CI:0.768～0.877),APPL1 联合 miR-340-5p 诊断 AD 的 AUC 为 0.927(95％CI:0.893～0.961).结论 miR-340-5p 在 AD 患者血清中表达降低,APPL1表达升高,均与病情严重程度、炎症反应及认知功能损伤相关,且对AD有一定诊断价值.

目的 探讨微小RNA-340(miR-340)对神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)增殖、迁移的影响及其作用机制.方法 选择2018年10月至2020年12月在延安大学附属医院进行手术治疗的23例神经母细胞瘤及其瘤旁组织标本进行实验研究;体外培养SH-SY5Y细胞,将细胞分为对照组、miR-340过表达(miR-340 mimics)组、miR-340阴性对照组(negative control,NC)组、miR-340 mimics+pcDNA组及miR-340 mimics+SKP2组,分别检测肿瘤组织和瘤旁组织、各组SH-SY5Y细胞miR-340、SKP2mRNA表达及各组细胞增殖、迁移侵袭及SKP2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9表达;双荧光素酶报告实验验证miR-340与SKP2的靶向关系.结果 神经母细胞瘤组织中miR-340表达水平为0.55±0.08,明显低于瘤旁组织的1.05±0.15,SKP2 mRNA表达水平为1.96±0.20,明显高于瘤旁组织的1.01±0.11,差异均有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告实验表明miR-340与SKP2存在靶向调控关系;与对照组和miR-340 NC组相比,miR-340 mimics组SH-SY5Y细胞miR-340表达水平显著升高,细胞存活率、划痕迁移率、侵袭数、SKP2 mRNA和蛋白表达、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与miR-340 mimics组和miR-340 mimics+pcDNA组比较,miR-340 mimics+SKP2组细胞存活率、划痕迁移率、侵袭数、SKP2 mRNA及蛋白、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 神经母细胞瘤中miR-340低表达,过表达miR-340可抑制SH-SY5Y细胞增殖、迁移与侵袭,其机制可能与下调SKP2表达有关.

目的 探讨喉癌组织内微小RNA(miR)-340-5p(miR-340-5p)、原癌基因(c-Myc)与转录因子-4(TCF-4)的表达及其临床意义.方法 选取64例喉癌患者为研究对象.于术中采集癌组织及癌旁正常组织,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测癌组织及癌旁正常组织miR-340-5p、c-Myc与TCF-4的表达水平,另外统计分析三项指标表达水平与喉癌患者临床病理特征的关系.结果 癌组织中miR-340-5p相对表达量(2.15±0.27)低于癌旁正常组织(6.76±0.89),c-Myc、TCF-4相对表达量[(4.95±0.63)、(4.36±0.48)]高于癌旁正常组织[(0.94±0.16)、(0.90±0.17)],差异有统计学意义(P<0.05);miR-340-5p、c-Myc、TCF-4与喉癌患者年龄、体重指数(BMI)、肿瘤分化程度、肿瘤位置、是否伴有淋巴结转移无关(P>0.05);miR-340-5p、c-Myc、TCF-4与喉癌患者的肿瘤分期有关(P<0.05).结论 miR-340-5p、c-Myc、TCF-4在喉癌患者癌组织内呈异常表达,其中miR-340-5p呈低表达,c-Myc、TCF-4呈高表达,三项指标与喉癌分期有关,参与喉癌的发生与发展,临床需予以高度重视.