目的:探讨紫云英苷上调miRNA-513（miR-513）对前列腺癌细胞株C4-2B细胞增殖能力及细胞周期的影响。方法:选取前列腺癌细胞株C4-2B，采用125 μg/L紫云英苷作用48 h者为紫云英苷组，未处理者为对照组。采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测两组C4-2B细胞增殖能力，流式细胞术检测细胞周期。采用miRNAMap预测软件预测miR-513的靶基因为叉头框蛋白R2（FOXR2），并采用双荧光素酶报告基因实验进行验证。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测两组细胞miR-513和FOXR2 mRNA的相对表达水平，蛋白质印迹法检测两组细胞中FOXR2、细胞周期蛋白依赖性激酶7（CDK7）、β-actin和细胞周期蛋白H（cyclin H）的表达。结果:与对照组比较，培养第2、3、4、5天紫云英苷组C4-2B细胞增殖活力均降低（均 P<0.05）。对照组和紫云英苷组S期细胞比例分别为（48.1±3.2）%和（36.0±2.1）%，紫云英苷组S期细胞比例降低（ t=3.12， P=0.021）；G 2期细胞比例分别为（24.9±3.3）%和（11.8±2.4）%，紫云英苷组G 2期细胞比例降低（ t=3.18， P=0.019）。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平分别为1.01±0.22和6.55±0.61，紫云英苷组C4-2B细胞中miR-513的相对表达水平升高（ t=7.70， P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验验证FOXR2为miR-513的靶基因。对照组和紫云英苷组C4-2B细胞中FOXR2 mRNA相对表达水平分别为1.04±0.14和0.19±0.06，差异有统计学意义（ t=5.53， P=0.002），提示紫云英苷促进miR-513表达后，FOXR2 mRNA表达降低。紫云英苷组C4-2B细胞FOXR2、CDK7和cyclin H蛋白相对表达水平较对照组均降低。 结论:紫云英苷可能通过上调miR-513的表达，抑制前列腺癌C4-2B细胞增殖，诱导细胞周期停滞。

目的 研究microRNA (miR)-513b-5p对晶状体稳定性调节蛋白αB-crystallin的调节关系,及miR-513b-5p对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)氧化应激和凋亡调节的下游机制.方法 实时定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测白内障患者和健康志愿者晶状体组织中miR-513b-5p及αB-crystallin的水平.miR-513b-5p拟似物mimic单独转染LEC细胞SRA01/04,或抑制剂和H2O2共处理SRA01/04;另外,mimic与αB-crystallin过表达质粒cDNA3.1-αB-crystallin(c-CRYAB)联合转染SRA01/04,试剂盒检测的细胞凋亡率,RT-qPCR法和Western blot法分别检测miR-513b-5p 的水平及αB-crystallin、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)的表达变化,生物信息学分析和荧光素酶报告基因实验研究miR-513b-5p和αB-crystallin的靶向关系.结果 白内障患者晶状体组织中miR-513b-5p的水平显著上调(P＜0.05)和αB-crystallin的表达水平下调(P＜0.05);过表达miR-513b-5p促进SRA01/04凋亡和活性氧ROS分子水平,下调抗氧化分子SOD;抑制miR-513b-5p降低H2O2所诱导的活性氧ROS(P＜0.05);αB-crystallin的表达被miR-513b-5p过表达显著性下调(P＜0.05),miR-513b-5p过表达对细胞凋亡和ROS与SOD水平的调控作用被αB-crystallin过表达显著削弱(P＜0.05).结论 miR-513b-5p通过对αB-crystallin蛋白的负调节从而促进LEC的氧化应激和凋亡.

目的 探究组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylase-1,HDAC1)调节垂体瘤中细胞凋亡的作用机制.方法 人垂体瘤细胞系RC 4B/C分为4组,即control组、mimic组、mimic+ HDAC1组和HDAC1组.所有细胞按照分组分别通过质粒转染技术上调miR-513c 5p或/和HDAC1的水平;对照组转染等量的NC质粒.通过Starbase预测和双荧光酶素报告验证HDAC1受到miR-513c 5p的靶向调节.检测和比较各组的细胞的细胞生长和调往率,并比较各组细胞miR-513c-Sp、HDAC1和PI3K/AKT通路的水平.结果 与对照组比较,mimic组的细胞活力降低(P＜0.05).HDAC1组的细胞活力高于对照组(P＜0.05),并且mimic+ HDAC1组的细胞活力高于mimic组(P＜0.05).mimic组的细胞凋亡率高于对照组(P＜0.05).HDAC1组的细胞凋亡率低于对照组(P＜0.05),并且mimic+ HDAC1组的细胞凋亡率低于mimic组(P＜0.05).Mimic组的HDAC1的mR-NA和蛋白水平低于对照组(P＜0.05),并且Mimic+ HDAC1组的HDAC1的mRNA和蛋白水平显著高于Mimic组(P＜0.05).MiR 513c-5p直接靶向HDAC1.Mimic组的PI3K、AKT1蛋白表达水平下调(P＜0.05),HDAC1组的PI3K、AKT1蛋白蛋白表达水平高于对照组(P＜0.05),并且mimic+ HDAC1组的PI3K、AKT1蛋白表达水平高于mimic组(P＜0.05).结论 HDAC1具有通过调节PI3K/AKT通路促进垂体瘤细胞在增殖和促进凋亡的作用,并且HDAC1对垂体瘤细胞的促癌作用受到miR-513c-5p的靶向调控.

目的 观察并检测原因不明复发性自然流产(URSA)患者外周血细胞因子白细胞介素10(IL-10)、miR-513c-5p水平变化,探讨二者在URSA发病中的作用.方法 选取30例正常早孕妇女(正常妊娠组)和30例URSA患者(URSA组),抽取空腹外周静脉血,ELISA法检测血清IL-10蛋白,qPCR法检测单个核细胞(PBMC)中的miR-513c-5p.采用Target Scan7.1生物信息软件,预测miR-513c-5p与IL-10 mRNA的3'非翻译区(3'UTR)是否可能存在互补结合;双荧光素酶报告基因系统检测miR-513c-5p对IL-10 mRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性的影响.分别构建包含结合位点的野生型及突变型IL-10 mRNA 3'UTR质粒,将293T细胞分为过表达组、抑表达组、对照组,分别转染miR-513c-5p mimics、inhibitor及阴性对照;qPCR法检测各组293T细胞中的IL-10 mRNA,ELISA法检测细胞培养上清液中的IL-10蛋白.结果 URSA组血清IL-10蛋白低于正常妊娠组,而miR-513c-5p水平高于正常妊娠组(P均<0.05).IL-10 mRNA的3'UTR与miR-513c-5p之间具有潜在互补结合位点,且两者间存在碱基互补结合.细胞中IL-10 mRNA表达及细胞上清中IL-10蛋白水平抑表达组>对照组>过表达组,P均<0.05.结论 URSA患者血清IL-10蛋白水平降低,而PBMC中miR-513c-5p表达升高;miR-513c-5p可能通过碱基互补结合直接抑制靶基因IL-10 mRNA转录及蛋白表达,打破母胎免疫耐受状态导致流产;靶向调控miR-513c-5p/IL-10信号通路可能成为临床治疗URSA的有效途径.

目的 探讨微小RNA(miR)-513c-5p在宫颈癌中的表达及靶向组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)调节宫颈癌细胞迁移和侵袭的机制.方法 临床收集宫颈癌患者86例,通过Real-time PCR检测肿瘤组织和癌旁组织中miR-513c-5p水平,分析其与宫颈癌病理特征的关系.通过双荧光素酶报告验证miR-513c-5p靶向HDAC1.将宫颈癌HeLa细胞系分为4组:对照组、类似物(mimic)组、mimic+HDAC1组和HDAC1组.通过质粒转染技术过表达miR-513c-5p和(或)HDAC1.Real-time PCR和Western blotting分别用于检测RNA或蛋白的表达水平.分别通过CCK-8法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组的细胞生长、迁移和侵袭能力.结果 宫颈癌组织中miR-513c-5p水平显著低于癌旁组织.低水平的miR-513c-5p与更高的局部侵袭、淋巴转移和远端转移有关(P＜0.05).miR-513-5p靶向抑制HDAC1表达.过表达miR-513c-5p显著抑制宫颈癌细胞生长、迁移和侵袭(P＜0.05).过表达HDAC1促进细胞生长、迁移和侵袭(P＜0.05),并且可以逆转miR-513c-5p的抑制作用(P＜0.05).结论 低水平的miR-513c-5p可能与宫颈癌转移有关,并且miR-513c-5p可通过靶向抑制HDAC1蛋白的表达抑制宫颈癌HeLa细胞生长、迁移和侵袭.

目的 探讨血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中的表达水平及其可能的作用机制.方法 收集颅内动脉瘤患者(颅内动脉瘤组)和无颅内动脉瘤的志愿者(对照组)各100例,采用定量逆转录PCR(quantitative reverse transcription PCR,qRT-PCR)技术测定血清hsa-miR-513b-5p、肿瘤坏死因子(TNF-α)、MMP2、MMP3、MMP9(基质金属蛋白酶,MMPs)和基质金属蛋白酶抑制剂4(TIMP4)水平.采用hsa-miR-513b-5p模拟物和抑制剂转染人血管平滑肌细胞(human aortic smooth muscle cells,HASMC),检测细胞增殖、凋亡和坏死变化.通过双荧光素酶报告基因分析hsa-miR-513b-5p的作用靶点COL1A1,并分析影响颅内动脉瘤形成的信号通路.结果 颅内动脉瘤组患者高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、TNF-α、MMP2、MMP3、MMP9水平高于对照组(P<0.05),而低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、N末端B型利钠肽原(NT-proBNP)、血浆总同型半胱氨酸(Hcy)和TIMP4水平降低(P<0.05).与对照组相比,颅内动脉瘤组患者血清hsa-miR-513b-5p表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05).经has-miR-513b-5p模拟物转染的HASMC,与模拟物对照组比较,其细胞增殖能力降低,而凋亡和坏死水平增高,差异均有统计学意义(P<0.05).经has-miR-513b-5p抑制剂转染的HASMC,与抑制剂对照组比较,其细胞增殖能力增强,而凋亡和坏死水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05).双荧光素酶检测结果显示has-miR-513b-5p可靶向抑制COL1A1表达,并上调RIP1-RIP3-MLKL和MMPs信号通路,抑制HASMC增殖和细胞外基质合成.结论 血清hsa-miR-513b-5p在颅内动脉瘤患者中表达水平下降,并参与调节血管平滑肌细胞增殖和细胞外基质合成影响动脉瘤形成.

目的 研究HOX transcript antisense RNA(HOTAIR)通过靶向miR-513c-5p调控乳腺癌增殖的作用及机制.方法 选取来自蚌埠医学院第一附属医院2020年6—12月间女性患者乳腺癌和癌旁组织各40例,应用real-time PCR方法检测癌组织和癌旁组织中HOTAIR和miR-513c-5p表达并分析其表达的相关性.沉默MCF-7细胞中HOTAIR表达建立不同HOTAIR沉默水平的sh-HOTAIR-1组和sh-HOTAIR-2组,感染空载体作为对照组.应用real-time PCR方法检测MCF-7细胞中HOTAIR和miR-513c-5p表达并分析其表达的相关性,CCK-8法分析sh-HOTAIR-1组和sh-HOTAIR-2组细胞24,48,72 h体外增殖的变化,应用流式细胞方法分析细胞周期的变化,通过蛋白印迹法(Western blot)分析细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)4/6蛋白表达.将miR-513c-5p抑制物转染至沉默sh-HOTAIR-2的MCF-7细胞,观察miR-513c-5p抑制物对HOTAIR沉默后MCF-7细胞增殖、细胞周期及相关蛋白表达调控的影响.结果 与癌旁组织相比,乳腺癌组织HOTAIR表达显著上调,miR-513c-5p表达显著下调,二者成负相关(r=-0.5498,P<0.05).与对照组比较,sh-HOTAIR-1组和sh-HOTAIR-2组MCF-7细胞中miR-513c-5p表达显著上调,MCF-7细胞体外增殖水平均显著下调,细胞周期G2/M期显著上调,CDK4/6蛋白和mRNA表达显著下调(均P<0.05).与sh-HOTAIR-2组相比,sh-HOTAIR-2+miR-513c-5p抑制组中MCF-7细胞体外增殖显著上调,细胞周期G2/M期显著下调,CDK4/6蛋白和mRNA表达显著上调(均P<0.05).结论 HOTAIR在乳腺癌中高表达,可促进肿瘤细胞体外增殖,可能与抑制miR-513c-5p表达有关.

目的 研究miR-513a-5p通过靶向调控p21活化激酶1(p21-activated kinase 1,PAK1)抑制子宫颈癌细胞增殖和侵袭的机制.方法 通过分析高通量基因表达(Gene Expression Omnibus,GEO)数据库GSE145372数据集的数据确认miR-513a-5p在子宫颈癌组织和正常子宫颈组织中的表达差异.采用实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-513a-5p和PAK1在子宫颈癌细胞株(HT3、C-33A和HeLa)和人子宫颈内膜上皮细胞株(End1/E6E7)中的表达情况.在miR-513a-5p表达最低的细胞株HT3和C-33A中分别转染miR-513a-5p mimics(miR-513a-5p mimics组)和NC mimics(NC mimics组).在HT3和C-33A细胞中分别转染pcDNA3.1-PAK1和空载pcDNA3.1-NC用于后续功能拯救实验.采用EdU实验和transwell实验分别检测miR-513a-5p和PAK1对子宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响.荧光素酶报告实验验证miR-513a-5p和PAK1之间的相互作用.结果 miR-513a-5p在子宫颈癌细胞株HT3、C-33A和HeLa中的表达均低于人子宫颈内膜上皮细胞株End1/E6E7(均P<0.01).与转染NC mimics的HT3和C-33A细胞比较,转染miR-513a-5p mimics后48 h,HT3和C-33A细胞株增殖和侵袭能力均减弱(均P<0.01).荧光素酶实验结果显示,miR-513a-5p可以和PAK1结合.拯救实验结果表明,与单独转染miR-513a-5p mimics的HT3和C-33A细胞比较,共转染miR-513a-5p mimics和pcDNA3.1-PAK1能恢复HT3和C-33A细胞的增殖和侵袭能力(均P<0.01).结论 miR-513a-5p通过靶向调控PAK1抑制子宫颈癌细胞增殖和侵袭.