目的:探讨微小RNA(miRNA，miR)-598-3p靶向调控RNA聚合酶Ⅱ第五亚基调节蛋白(RMP)基因对人胃癌细胞SGC-7901恶性增殖和侵袭迁移的影响及其作用机制。方法:筛选SGC-7901细胞株行后续实验，分别建立稳定过表达或敲减RMP和miR-598-3p的SGC-7901细胞株。采用溴脱氧尿苷(BrdU)、细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力，平板克隆形成实验检测细胞集落形成能力，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell实验检测细胞侵袭能力，双荧光素酶报告基因法分析miR-598-3p的结合靶点，蛋白质印迹法(Western blot)检测相关通路相关蛋白表达水平，两样本间比较使用 t检验。 结果:稳定过表达和敲减RMP或miR-598-3p的SGC-7901细胞株建立成功。敲减RMP能显著降低SGC-7901的增殖能力，BrdU(8.867±1.159比26.030±3.630， t＝7.704， P<0.01)，CCK-8(0.560±0.052比1.020±0.107， t＝6.708， P<0.01)，迁移能力(336.000±21.070比252.700±36.120， t＝3.452， P<0.05)，侵袭能力(36.330±7.371比127.300±10.690， t＝12.140， P<0.01)。过表达RMP能显著提高SGC-7901细胞的增殖能力，BrdU(56.400±6.560比24.800±4.423， t＝6.918， P<0.01)，CCK-8(2.105±0.142比1.028±0.110， t＝10.350， P<0.01)，迁移能力(131.300±20.110比257.000±29.140， t＝6.148， P<0.01)，侵袭能力(347.700±41.140比135.000±17.690， t＝8.226， P<0.01)。生物信息学预测miR-598-3p与RMP的3’端非编码区(3’UTR)位点结合，并通过双荧光素报告系统验证。过表达或敲减miR-598-3p能分别降低和提高SGC-7901细胞株的增殖、迁移及侵袭能力，而RMP的回复表达能挽救miR-598-3p引起的细胞增殖、侵袭及迁移的抑制。miR-598-3p通过靶向RMP抑制p70核糖体蛋白S6激酶(p70s6k1)/凋亡蛋白(Bad)和核因子-κB(NF-κB)通路发挥功能。 结论:miR-598-3p靶向RMP基因抑制p70s6k1/Bad和NF-κB通路降低SGC-7901细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。

目的 探讨miR-598在非小细胞肺癌(NSCLC)组织和细胞中的表达,研究其对NSCLC细胞迁移和侵袭的影响.方法 通过qRT-PCR技术检测miR-598在NSCLC组织及细胞系中的表达水平,通过划痕实验和Transwell实验检测A549细胞瞬时转染miR-598 mimics或miR-598 inhibitors后的迁移及侵袭能力.利用生物信息学技术预测miR-598与RNA结合蛋白MSI2可能的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因验证其靶向调控关系.将MSI2单独或与miR-598共转染A549细胞后,检测转染后细胞的迁移和侵袭能力.结果 NSCLC组织中miR-598的表达明显低于癌旁组织(P<0.001),且NSCLC细胞系(A549、H1650和H1299)中miR-598的表达明显低于正常肺上皮细胞系BEAS-2B(P<0.001).A549细胞转染miR-598 mimics后迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01),而转染miR-598 inhibitors后迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05).MSI2是miR-598的直接靶基因,可以促进A549细胞的迁移和侵袭(P<0.05),但引入miR-598后MSI2促进细胞迁移和侵袭的作用被逆转(P<0.05).结论 miR-598可通过下调靶基因MSI2的表达而抑制NSCLC的迁移和侵袭.

目的 研究miR-1269a表达对非小细胞肺癌H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响.方法 选取非小细胞肺癌H460细胞系进行无血清悬浮培养,通过流式细胞仪筛选CD133及CD44阳性的H460干细胞样细胞.通过RT-qPCR检测miR-30a、miR-148a、miR-148b、miR-152、miR-411、miR-497、miR-598、miR-424、miR-761、miR-1269a、miR-1280及CD44、CD133 mRNA在H460干细胞样细胞内的表达水平.采用CCK-8实验、干细胞成球实验、流式细胞术及彗星实验分析miR-1269a表达对H460干细胞样细胞放疗敏感性的影响.结果 H460干细胞样细胞的CD133及CD44 mRNA表达水平较H460细胞明显增加,分别为H460细胞的(1.30±0.03)倍和(1.19±0.02)倍(P<0.05).miR-1269a在H460干细胞样细胞中的表达量最高,且高于H460细胞中的表达量,差异有统计学意义(P<0.05).转染miR-1269a inhibitor后经X线照射处理,H460干细胞样细胞的生长抑制率(72.11％±2.45％)明显增高,其凋亡率达17.70％±0.54％,细胞内DNA双链断裂也明显增加,在2 Gy的X线辐射处理后DNA尾矩为转染前的(1.19±0.02)倍,即转染miR-1269a inhibitor明显增加了H460干细胞样细胞对放疗的敏感性(P<0.05).转染pcDNA3.1-SOX7后经X线照射处理对H460干细胞样细胞的作用与转染miR-1269a inhibitor相近.转染miR-1269a mimics可逆转pcDNA3.1-SOX7对H460干细胞样细胞恶性生物学行为的抑制作用.结论 抑制miR-1269a可能增强非小细胞肺癌的放疗敏感性,其机制可能是通过上调SOX7的表达所致.

目的 探讨微小RNA对高血压相关性脑出血(HRICH)患者脑血管组织的影响.方法 回顾性连续纳入2018年9月至2019年12月四川绵阳四〇四医院神经外科自发性高血压脑出血住院患者9例为观察组,回顾性连续纳入同期四川绵阳四〇四医院神经外科因颅脑外伤需行颅内减压术且伴高血压病史的住院患者9例为对照组.术中取两组患者术区皮质造瘘口的少量脑血管标本,通过Trizol法提取标本总RNA,筛选差异表达的微小RNA.从微小RNA差异表达谱中随机选择3种微小RNA,用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)技术验证结果的可靠性.采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具预测差异表达微小RNA的靶基因,并对靶基因进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,富集程度越高,相应的P值越小.结果 (1)与对照组标本比较,观察组患者脑血管组织细胞中有35种差异表达的微小RNA,其中15种微小RNA表达下调,即hsa-let-7g-3p、hsa-miR-103a-2-5p、hsa-miR-126-5p、hsa-miR-130a-3p、hsa-miR-210-3p、hsa-miR-214-3p、hsa-miR-28-5p、hsa-miR-34a-5p、hsa-miR-378a-3p、hsa-miR-145-5p、hsa-miR-4785、hsa-miR-549a-5p、hsa-miR-574-3p、hsa-miR-590-3p、hsa-miR-660-3pg表达降低(均P<0.05);20种微小RNA表达上调,即hsa-miR-1180-3p、hsa-miR-1224-3p、hsa-miR-128-2-5p、hsa-miR-1298-3p、hsa-miR-137-5p、hsa-miR-139-3p、hsa-miR-139-5p、hsa-miR-2682-5p、hsa-miR-370-3p、hsa-miR-433-3p、hsa-miR-485-5p、hsa-miR-541-3p、hsa-miR-543、hsa-miR-598-5p、hsa-miR-6505-5p、hsa-miR-668-3p、hsa-miR-7-5p、hsa-miR-744-5p、hsa-miR-873-3p、hsa-miR-942-3p表达升高(均P<0.05).(2)对已知的差异表达微小RNA采用TargetScan、miRDB、miRanda三种在线分析工具进行基因预测,结果显示,共同交集预测得到的靶基因有87个交集.(3)随机抽取3种差异表达的微小RNA进行荧光定量逆转录PCR验证,结果显示,与对照组(颅脑外伤伴高血压病史者)比较,观察组(自发性高血压脑出血者)hsa-miR-145-5p、hsa-miR-28-5p表达降低(0.22±0.17比1.00±0.29,t=0.153;0.13±0.03比1.00±0.62,t=0.421),hsa-miR-139-3p表达升高(1.95±0.29比1.00±0.52,t=0.492),组间差异均有统计学意义(均P<0.05).(4)交集靶基因的KEGG富集分析结果显示,主要涉及Ras相关蛋白1信号通路、黏附斑激酶、肿瘤微小RNA、环磷酸鸟苷-环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶信号通路、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、人乳头状瘤病毒、肿瘤蛋白聚糖、肿瘤通道蛋白,其中MAPK信号通路的富集程度较高(P<0.01).结论 微小RNA可能在调控HRICH的相关生物学功能中具有重要作用.

目的:探讨miR-598通过靶向FGFR2基因对乳腺癌细胞增殖、凋亡及糖代谢的影响.方法:检测乳腺癌组织和多种乳腺癌细胞中miR-598的表达.miR-598模拟物(mimic)和pcDNA-FGFR2质粒分别或共转染乳腺癌MCF-7细胞,构建过表达体系.将细胞分为4组:对照组、miR-598 mimic组、pcDNA-FGFR2组和mimic+FGFR2组.qRT-PCR检测miR-598和FGFR2的表达.生物信息学软件预测miR-598和FGFR2结合位点.双荧光素酶报告基因实验验证miR-598和FGFR2的靶向关系.克隆形成实验检测细胞增殖.JC-1实验检测细胞线粒体膜电位变化.试剂盒检测葡萄糖摄入量和乳酸生成量.Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9蛋白表达.结果:乳腺癌组织中miR-598的表达显著低于癌旁组织(P<0.05),且乳腺癌细胞系(MCF-7、MDA-MB-231和HCC1937)中miR-598的表达显著低于乳腺正常细胞系Hs 578Bst(P<0.05).实验证实FGFR2为miR-598的靶基因,miR-598与FGFR2的表达呈负相关.miR-598过表达逆转了高水平FGFR2导致的克隆形成率的升高(P<0.05).miR-598过表达逆转了高水平FGFR2导致的线粒体膜电位红绿荧光比例的升高(P<0.05)及凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9表达的降低(P<0.05).miR-598过表达逆转了高水平FGFR2导致的葡萄糖摄入量和乳酸生产量的增加(P<0.05).结论:miR-598通过靶向FGFR2抑制乳腺癌细胞增殖,加速线粒体膜电位去极化,促进细胞凋亡并且抑制细胞糖代谢.

目的 探讨miR-598对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 采用qRT-PCR检测肝癌组织和肝癌细胞SNU-449、Huh7、HCCLM3及正常肝细胞L-02中miR-598表达水平.在Huh7细胞中转染miR-598 mimics,分为空白对照组、miR-NC组、miR-598组、miR-NC+吉非替尼(2.5 μmol·L-1)组和miR-598+吉非替尼组.CCK-8法检测细胞增殖,平板细胞克隆实验检测细胞克隆能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bax、Bcl-2和Wnt2b蛋白表达,荧光素酶报告系统鉴定miR-598和Wnt2b靶向关系.共转染miR-598 mimics、pcDNA3.1-Wnt2b,分为空白对照组、miR-598+吉非替尼+NC组和miR-598+吉非替尼+Wnt2b组,观察细胞增殖、克隆、凋亡变化.结果 肝癌细胞SNU-449、Huh7、HCCLM3中miR-598表达水平低于正常肝细胞L-02(P＜0.05).与miR-NC组比较,miR-598组和miR-NC+吉非替尼组细胞存活率低,克隆形成数目少,细胞凋亡率高,Bax蛋白表达水平增加,Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05).与miR-598组和miR-NC+吉非替尼组比较,miR-598+吉非替尼组细胞存活率降低,克隆形成数目减少,细胞凋亡率和Bax蛋白表达水平增加,Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05).miR-598靶向下调Huh7细胞中Wnt2b表达水平.miR-598+吉非替尼+Wnt2b组较miR-598+吉非替尼+NC组的细胞存活率高,克隆形成数目多,细胞凋亡率低,Bax蛋白表达水平低,Bcl-2、Wnt2b蛋白表达水平高(P＜0.05).结论 miR-598可抑制Huh7细胞增殖并诱导凋亡,可能通过靶向下调Wnt2b表达,提高Huh7细胞对吉非替尼的敏感性.

目的 基于生物信息学分析,探索微RNA(miRNA)及其靶基因调控网络在子宫内膜异位症中的分子调控机制,为研究发病机制及治疗靶点提供新思路.方法 从公共基因芯片数据库GEO下载关于异位内膜和在位内膜组织miRNA表达的数据集GSE105765,使用R语言软件对其差异表达的miRNA进行分析,并筛选出差异表达排名前6位的miRNA,利用在线数据库TargetScan、miRWalk和miRDB分别预测其靶基因,获得3个数据库同时预测的靶基因交集.使用DAVID在线网站对获得的交集靶基因通过GO和KEGG进行基因富集分析,以判定靶基因主要影响的生物学功能或通路.通过STRING数据库和Cytoscape软件对筛选得到的靶基因进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析.结果 筛选出异位内膜和在位内膜组织差异表达的miRNA共85个,其中排名前6位的是 miR-202-5p、miR-514a-3p、miR-615-3p、miR-202-3p、miR-509-3p、miR-509-3-5p;3个数据库分别预测的靶基因交集有43、194、2、598、209、556个;GO和KEGG富集分析显示,6个miRNAs的交集靶基因与轴突转运、糖代谢代谢途径等密切相关;通过PPI网络和模块分析筛选出RAC1、EP300、EGFR、CTNNB1处于PPI核心位点.结论 利用生物信息学发现,与在位内膜组织比较,异位内膜组织存在miRNA的差异表达,并通过靶基因参与调控轴突转运及糖代谢途径,为子宫内膜异位症的发病机制及治疗靶点研究提供了新证据.

目的 探讨长非编码RNA(lncRNA)在儿童肠息肉的差异表达.方法 以3例配对儿童正常肠黏膜和肠息肉,外加4例儿童肠息肉开展相关组织的lncRNA测序研究.随后分别在60例儿童肠息肉组织及正常肠黏膜组织标本运用RT-qPCR验证6个差异表达lncRNA基因.结果 通过测序发现存在1307+738条差异表达的mRNA,共598条明显表达差异的lncRNA,其中上调472条,下调126条.RT-qPCR验证了MIR4435-2HG、SH3PXD2A-AS1、Lnc00668、MIR194-2HG、AC245060.6、BX890604.2等共6个基因.结论 差异表达的lncRNA可能参与了儿童肠息肉的发病过程,这一现象拓展了对儿童肠息肉的认识,为临床诊治及预后判断提供了新的思路.