目的:探讨淫羊藿素调控miRNA-329（miR-329）、miRNA-1236（miR-1236）抑制肝癌细胞增殖的分子机制。方法:采用2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素处理肝癌细胞株HepG2，对照组仅加入二甲基亚砜（DMSO），培养36 h后采用CCK-8法检测淫羊藿素对HepG2细胞的半数抑制浓度（ IC50）及细胞增殖率。使用400 μg/L甲胎蛋白（AFP）处理HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h后，CCK-8法检测AFP对HepG2细胞增殖的影响。构建AFP-3'UTR荧光素酶报告质粒pmirGLO-AFP-3'UTR质粒，将pmirGLO空白载体质粒、pmirGLO-AFP-3'UTR质粒及miR-329或miR-1236的模拟物或抑制剂、相应的模拟物的对照质粒（NC）、相应的抑制剂的对照质粒（INC）分别共转染HepG2细胞，培养24 h后双荧光素酶报告基因检测miR-329和miR-1236对荧光素酶活性的影响。蛋白质印迹法和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）分别检测淫羊藿素对HepG2细胞AFP、miR-329和miR-1236表达的影响。使用miR-329、miR-1236的模拟物和抑制剂分别转染HepG2细胞，检测miR-329、miR-1236对AFP水平的影响。 结果:2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组细胞增殖率分别为（80.4±2.3）%、（73.2±1.6）%、（51.7±3.3）%、（38.2±4.6）%、（29.5±4.3）%和（94.0±2.9）%，差异有统计学意义（ F＝75.65， P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组HepG2细胞增殖率分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。淫羊藿素对HepG2细胞的 IC50为10 μmol/L。2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μmol/L淫羊藿素组和对照组AFP mRNA的相对表达量分别为0.83±0.06、0.69±0.02、0.53±0.07、0.45±0.01、0.33±0.07和1.00±0.01，差异有统计学意义（ F＝42.67， P<0.01）；不同浓度淫羊藿素组AFP mRNA的相对表达量分别与对照组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。400 μg/L AFP作用HepG2细胞0、12、24、36、48、60 h，细胞增殖率分别为（102±5）%、（138±13）%、（186±24）%、（260±12）%、（311±15）%、（348±25）%，差异有统计学意义（ F＝27.483， P<0.01）；AFP作用不同时间分别与0 h细胞增殖率比较，差异均有统计学意义（均 P<0.01）。与对照组比较，不同浓度淫羊藿素均能够促进miR-329和miR-1236表达（均 P<0.01）。miR-329和miR-1236模拟物与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均降低了约40%；miR-329、miR-1236抑制剂与AFP-3'UTR共转染后，荧光素酶活性均增加约1.5倍。miR-329和miR-1236均可降低AFP蛋白和mRNA的表达水平（均 P<0.05）。 结论:淫羊藿素体外通过增加miR-329和miR-1236表达，促进miR-329、miR-1236与AFP-3'UTR的结合，抑制AFP mRNA的稳定性和翻译活性，抑制AFP表达，从而抑制肝癌细胞增殖。

目的:筛选血浆外泌体微小核糖核苷酸(microRNA)作为肝细胞癌(HCC)的诊断标志物，并分析候选miRNA在HCC进展中可能发挥的作用。方法:2018年10月至2019年2月收集12例于广州市第一人民医院初诊为"HCC"的患者及12例健康志愿者血浆样本，利用超速离心法收集血浆外泌体，经动态光散射法及蛋白质免疫印迹法鉴定后，提取RNA进行测序。通过定量聚合酶链反应(qPCR)验证候选外泌体miRNA差异表达量，使用 t检验分析各miRNA表达量差异。通过生物信息学方法预测候选miRNA的靶基因及可能调控的通路，分析其在HCC进展过程中发挥的作用，组间比较采用 t检验。 结果:以差异表达倍数2倍以上(Fold change>2.0或<0.5，且 P<0.05)作为标准，分别比较HCC患者术前、术后及健康志愿者血浆外泌体miRNA的差异表达结果，结合两次结果，筛选表达同时上/下调miRNA共12个。其中，表达上调6个(miR-2115-3p、miR-214-3p、miR-511-5p、miR-1299、miR-10a-5p、miR-375-3p)，表达下调6个(miR-219a-2-3p、miR-127-3p、miR-9-5p、miR-383-5p、miR-212-5p、miR-1248)。qPCR验证候选miRNA在HCC患者及健康志愿者血浆外泌体中的表达差异，HCC组miR-1248表达低于健康志愿者组(9.046 ΔCt比7.597 ΔCt， t＝2.849， P<0.05)。 结论:血浆外泌体miR-1248有作为HCC的诊断标志物的潜力。血浆外泌体miR-1248可通过调控受体细胞的细胞外基质受体相互作用、介导代谢重编程抑制HCC进展。

目的 探索胃癌发生过程的风险miRNAs,为上消化道机会性筛查中早期胃癌识别提供依据.方法 纳入2021年6月至2023年8月在广西医科大学附属肿瘤医院、右江民族医学院附属医院、桂林市人民医院3个中心进行上消化道癌机会性筛查的人群.选取健康体检者107例、早期胃癌患者71例、进展期胃癌患者97例.首先采用转录组测序筛选差异表达miRNAs,然后在3组前瞻性人群的血浆样本中通过RT-qPCR验证差异表达的miRNAs,最后采用受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估miRNAs的诊断效能.结果 转录组测序的差异基因分析共筛选出胃癌发生过程中的6个差异表达miRNAs,包括miR-3176、miR-885-5p、miR-203a-3p、miR-452-5p、miR-223-3p、miR-219a-2-3p.RT-qPCR结果显示,miR-452-5p在早期胃癌及进展期胃癌患者中表达上调(均P＜0.001).ROC曲线显示,miR-452-5p诊断早期胃癌和进展期胃癌的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.900、0.975.区分早期胃癌与进展期胃癌的AUC为0.843.结论 miR-452-5p在早期胃癌中具有良好的诊断效能,可能作为液体活检诊断早期胃癌的潜在生物标志物.

目的 探讨侧脑室注射miR-219激动剂对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致新生大鼠少突胶质细胞成熟障碍的影响.方法 将出生2d的Sprague-Dawley (SD)大鼠60只随机分为4组,每组15只.对照组:腹腔注射等体积生理盐水,24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照.脂多糖组(LPS组):腹腔注射0.25 mg/kg LPS,24 h后侧脑室注射2μL miRNA阴性对照;miR-219激动剂组(miR-219组):腹腔注射等体积的生理盐水,24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂;LPS加miR-219激动剂组(LPS+ miR-219组):腹腔注射0.25 mg/kg LPS,24 h后侧脑室注射2μL miR-219激动剂.实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑组织中miR-219和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP) mRNA的表达,苏木精伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察脑白质形态学改变,免疫组化观察成熟少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)的表达,免疫印迹法(Western blotting)检测脑组织内MBP和Sox6蛋白的表达.结果 侧脑室注射miR-219激动剂后,miR-219组miR-219的表达增高(P＜0.05);腹腔注射LPS后,LPS组脑白质区组织结构疏松,细胞核固缩,与对照组比较,成熟少突胶质细胞标志物MBP的表达显著下降,少突胶质细胞分化抑制因子Sox6表达明显增多(P＜0.05);相较于LPS组,LPS+ miR-219组MBP表达增多,Sox6表达显著降低(P＜0.05),且与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 侧脑室注射miR-219激动剂可以改善LPS致新生鼠少突胶质细胞成熟障碍.

目的 观察微小RNA(miRNA,miR)-497在膀胱癌细胞株中的表达,探讨miR-497对膀胱癌上皮-间充质转化(EMT)过程的影响.方法 采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-497在膀胱细胞株和正常膀胱黏膜组织中的表达.将miR-497 mimics/inhibitor分别瞬时转染至膀胱癌EJ细胞中,通过显微镜细胞形态学观察、细胞划痕实验、Transwell侵袭实验,分析过表达或下调内源性miR-497的表达对EJ细胞形态、迁移和侵袭的影响;Western blot法检测EMT标志物相关蛋白表达的变化.结果 与膀胱永生化上皮细胞(SV-HUC-1),miR-497在5株膀胱癌细胞株中均呈低表达状态(P =0.000).过表达miR-497后,EJ细胞表现为上皮样细胞形态,EJ细胞的迁移率为(25.33 ±6.11)％,较其阴性对照组(74.00±3.61)％降低2.96倍,侵袭细胞个数为(109 ±3)个,较其阴性对照组[(219±17)个]降低2倍;而抑制miR-497表达后,EJ细胞表现为间质样细胞形态,EJ细胞的迁移率为(74.00±3.61)％,较其阴性对照组[(51.33±6.51)％]增加1.45倍,侵袭细胞个数为(320±14)个,较其阴性对照组[(248±16)个]增加1.29倍.Westem blot结果显示:与阴性对照组比较,过表达miR-497可使EJ细胞的E-钙黏素(E-cadherin)表达增加(P =0.000),N-钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达减少(P=0.001,P=0.000).结论 miR-497可能参与膀胱癌EMT过程的调节.

目的 通过测定人总前列腺特异度抗原(tPSA)、游离前列腺特异度抗原(fPSA)、fPSA与tPSA的比值(f/tPSA)以及miRNA-21a(MIR-27a)在健康成年男性、前列腺增生患者和前列腺癌患者血清中的水平,评估以上指标在前列腺癌早期诊断中的价值.方法 收集任丘市人民医院2013年1月至2017年1月体检、门诊和住院患者589例,包括前列腺癌(Ⅰ～Ⅳ期)73例,前列腺增生219例,对照组为健康成年男性297例.所有前列腺癌均有前列腺活检穿刺病理结果,前列腺增生患者有直肠指检、影像学资料和前列腺电切术后病理结果,健康成年男性有直肠指检、影像学资料和tPSA、fPSA等检测结果.根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估以上指标在前列腺癌诊断中的价值.结果 前列腺增生组中,tPSA、fPSA和MIR-27a与对照组比较均明显上升,差异有统计学意义(P＜0.05),f/tPSA＞0.30,与对照组比较,差异有统计学意义(P＞0.05);前列腺癌组tPSA、fPSA、f/tPSA和MIR-27a均较对照组和前列腺增生组显著增高,差异有统计学意义(P＜0.05).tP-SA的ROC曲线下面积为0.872,最佳临界值为＜4.08 ng/mL,其灵敏度和特异度分别为0.899和0.875;fP-SA的ROC曲线下面积为0.794,最佳临界值为＜0.26 ng/mL,其灵敏度和特异度分别为0.901和0.675;MIR-27a的ROC曲线下面积为0.819,最佳临界值为0.23,其灵敏度和特异度分别为0.743和0.856.结论 MIR-27a、tPSA、fPSA联合检测对前列腺癌早期诊断有较高价值.

目的 通过检测首次发病抑郁症患者外周血中miRNA-219和钙调蛋白激酶Ⅱγ亚基mRNA (γCaMKⅡmRNA)表达水平,分析探讨其与抑郁症之间的关系.方法 纳入符合DSM-5中抑郁发作诊断标准的41例抑郁症患者(抑郁组)和31名健康对照者(对照组),采用HAMD17评估患者的抑郁症状严重程度,采集受试者空腹外周血样本,采用实时荧光定量PCR法检测外周血白细胞中miRNA-219表达水平和γCaMKⅡmRNA表达水平,采用t检验进行组间比较;miRNA-219表达水平、yCaMKⅡmRNA表达水平、HAMD17评分两两之间相关性采用Pearson相关分析.结果 抑郁组外周血白细胞miRNA-219表达水平低于对照组(0.91 ±0.21与1.80±0.24,t=2.753,P=0.007 5),yCaMKⅡmRNA表达水平高于对照组(5.55±0.57与2.16±0.20,t=4.970,P＜0.01),差异均有统计学意义.并且抑郁组外周血白细胞γCaMKⅡmRNA表达水平与HAMD17评分呈正相关(r=0.460,P=0.002 5).结论 抑郁症患者外周血miRNA-219表达水平降低,γCaMKⅡmRNA表达水平升高,提示miRNA-219和γCaMKⅡ表达水平可能与抑郁症发病机制存在一定联系.

目的 探索骨肉瘤 (osteosarcoma, OS) 肺转移的外周血清miRNA的表达差异以及与肺转移的相关性.方法 选取2017年4月至2018年4月西安交通大学医学院附属红会医院肿瘤外科、西安交通大学第一附属医院肿瘤外科和西安交通大学第二附属医院肿瘤外科的88例OS患者 (其中41例发生肺转移) 外周血样本, 使用miRNA微矩阵芯片预筛选6例患者中与OS肺转移相关的miRNA分子;使用qPCR检测OS肺转移相关的差异miRNA分子的表达;使用单因素Logistic回归分析6个差异miRNA分子与OS肺转移的相关性.结果 肺转移与未转移OS患者的血清miRNA差异有统计学意义 (P<0.05) ;Logistic回归分析显示, miR-219-5p、miR-19b-1和miR-25与肺转移关系密切 (P<0.05) .结论 OS患者肺转移前后血清miRNA有明显差异;血清miR-219-5p、miR-19b-1和miR-25与肺转移相关性密切, 可提示OS肺转移的发生, 并作为潜在的预测OS肺转移生物学指标.

目的 探讨miR-1187靶向调控Rho鸟苷交换因子-9 (Arhgef9)在七氟醚致小鼠海马神经元凋亡中的调控作用.方法 通过基因芯片技术测定小鼠海马miRNA.利用miR Walk数据库对差异miRNA的靶基因进行预测.为验证预测结果与实际情况是否相符,同步进行mRNA水平的表达谱芯片实验,筛选出与差异miRNA确有互作关系的mRNA.为说明miRNA与mRNA的互作关系,进一步利用David数据库对靶基因进行注释,最终形成miRNA与mRNA共表达网络.采用RT-PCR法检测海马神经元miR-1187 mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测miR-1187转染后海马神经元存活率,荧光素酶实验检测Arhgef9是否为miR-1187的靶基因.结果 海马神经元凋亡主要与9个miRNA相关,即miR-101b-3p、miR-1187、miR-188-5p、miR-219a-5p、miR-338-3p、miR-425-5p、miR-467a-3p、miR-705、miR-92a-3p.miR-1187在七氟醚诱导海马神经元损伤模型中的相对表达量明显降低(P＜0.05),miR-1187高表达质粒(miR-1187 mimics)转染后,海马神经元存活率明显升高(P＜0.05).miR-1187与Arhgef9存在靶向关系,miR-1187通过与Arhgef9基因mRNA的3'非翻译区互补配对来发挥作用.结论 miR-1187是海马神经元抗细胞凋亡的抑制因子;高表达miR-1187通过靶向调节Arhgef9 mRNA表达来抑制海马神经元凋亡的发生.

目的:分析游离二氧化硅(silicon dioxide,SiO2)粉尘刺激的RAW264.7巨噬细胞源性外泌体miRNA的表达差异.方法:以SiO2(200 mg/L)刺激RAW264.7巨噬细胞48 h(exo_48 h组)后收集上清液,超速离心法提取上清中的外泌体;使用透射电镜扫描、纳米微粒跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)技术、蛋白质印迹法鉴定外泌体;提取外泌体miRNA行高通量测序,比较exo_control组(以不含SiO2粉尘的培养基孵育RAW264.7巨噬细胞48 h)与exo_48 h组外泌体miRNA表达差异;采用miRanda,TargetScan和starBase 3个软件进行差异miRNA的靶基因预测,对靶基因进行GO(gene ontology)和KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)分析,进一步分析基因的生物学功能.结果:在透射电镜下,外泌体为不均匀分布的、圆形或椭圆形的、脂质膜包被的、直径30～100 nm的囊泡;粒径检测显示其体积峰度集中在40～100 nm;蛋白质印迹法显示外泌体标志蛋白质TSG101表达阳性.高通量测序筛选出148个差异表达的外泌体miRNA.与exo_control组相比,exo_48 h组miR-219c-3p,let-7d-3p,let-7a-1-3p,miR-328-3p,miR-365-3p,miR-7219-3p等显著上调,miR-378d和miR-5106等显著下调.靶基因预测结果、GO和KEGG分析结果显示靶基因主要富集在mTOR信号通路、Wnt信号通路、TGF-β信号通路等.结论:SiO2诱导的巨噬细胞产生的外泌体包含丰富的miRNA,且其表达存在显著差异,这些差异的miRNA可能参与了肺成纤维细胞的活化、上皮间质转化等过程.