目的:评价托烷司琼对缺氧复氧心肌细胞焦亡的影响及其与α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)的关系。方法:正常培养的H9C2心肌细胞，采用随机数字表法分成4组( n＝6)：对照组(C组)、缺氧复氧组(H/R组)、托烷司琼+缺氧复氧组(Tro+H/R组)和α7nAchR拮抗剂MLA+托烷司琼+缺氧复氧组(MLA+Tro+H/R组)。除C组外，其余3组均采用缺氧12 h，复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型。Tro+H/R组缺氧前1 h时加入托烷司琼，终浓度10 nmol/L；MLA+Tro+H/R组缺氧前2 h时加入MLA，1 h后加入托烷司琼，终浓度均为10 nmol/L。于复氧6 h时，采用荧光免疫双染caspase-1-AlexaFluor 488/DAPI法确定心肌细胞焦亡率，ELISA法检测上清液IL-1β和IL-18浓度，2，4二硝基苯肼显色法检测上清液LDH活性，Western blot法检测心肌细胞α7nAchR、NOD样受体蛋白-3(NLRP3)和caspase-1表达。 结果:与C组比较，H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度升高，NLRP3和caspase-1表达上调，α7nAchR表达下调( P<0.05)；与H/R组比较，Tro+H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度降低，NLRP3和caspase-1表达下调，α7nAchR表达上调( P<0.05)；与Tro+H/R组比较，MLA+Tro+H/R组细胞焦亡率、上清液LDH活性、IL-1β和IL-18浓度升高，NLRP3和caspase-1表达上调，α7nAchR表达下调( P<0.05)。 结论:α7nAchR参与了托烷司琼抑制缺氧复氧心肌细胞焦亡的过程。

目的:将超声治疗方法用于脓毒症模型大鼠，并初步探讨其可能的作用机制。方法:选择78只雄性SD大鼠，按随机区组法分为假手术组（Sham组， n＝12）、脓毒症模型组（ n＝22）、超声治疗组（ n＝22）、柠檬酸甲基卡可尼丁（MLA）联合超声治疗组（ n＝22）。Sham组仅开腹、找到盲肠、游离盲肠，但不进行盲肠结扎穿孔术（CLP）；脓毒症模型组采用CLP复制脓毒症大鼠模型。术毕，每组大鼠皮下注射预热好的37℃生理盐水。超声治疗组大鼠给予超声治疗〔用飞利浦IU22 L9-3超声仪、9 MHz探头，在脾区每6 s进行击破序列1次，每次1 s，机械指数（MI） 0.72，治疗时间10 min〕。MLA联合超声治疗组于术前30 min腹腔注射α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAChR）特异性阻断剂MLA 4 mg/kg，术后2 h进行超声治疗。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠术后24 h血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β、IL-6）的含量；记录各组大鼠10 d存活率，并用临床疾病评分（CDS）评估各组大鼠表现；光镜下观察各组大鼠肺和结肠组织的病理学改变。 结果:与Sham组比较，脓毒症模型组大鼠10 d存活率降低〔40%（4/10）比100%（6/6）〕，术后24 h CDS显著升高（分：10.73±2.19比6.17±0.58），TNF-α、IL-6和IL-1β含量均明显增加〔TNF-α（ng/L）：42.00±8.92比13.16±3.19，IL-6（ng/L）：129.37±25.04比63.99±12.92，IL-1β（ng/L）：254.98±67.27比76.83±25.39，均 P<0.01〕。与脓毒症模型组比较，超声治疗组大鼠存活率升高〔70%（7/10）比40%（4/10）〕，但差异无统计学意义（ P>0.05），术后24 h CDS显著降低（分：7.64±2.68比10.73±2.19），TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显减少〔TNF-α（ng/L）：16.93±6.02比42.00±8.92，IL-6（ng/L）：73.65±24.38比129.37±25.04，IL-1β（ng/L）：111.86±14.08比254.98±67.27，均 P<0.01〕。与超声治疗组比较，MLA联合超声治疗组大鼠存活率有所降低〔60%（6/10）比70%（7/10）〕，但差异无统计学意义（ P>0.05），术后24 h CDS显著升高（分：9.55±2.72比7.64±2.68），TNF-α、IL-6和IL-1β含量明显增加〔TNF-α（ng/L）：34.61±7.89比16.93±6.02，IL-6（ng/L）：112.92±10.42比73.65± 24.38，IL-1β（ng/L）：212.57±32.16比111.86±14.08，均 P<0.01〕。光镜下可见，脓毒症模型组大鼠肺泡间隔增厚，大量炎性细胞浸润，正常肺组织网状结构消失，肺间质表现出明显的出血和水肿；结肠绒毛组织结构明显异常，细胞水肿、炎性细胞浸润明显，排列紊乱，并可见上皮下间隙及顶端脱落。经过超声治疗后大鼠肺泡间隔与Sham组厚度相当，无明显炎性细胞浸润，并可观察到肺组织网状结构较完整；结肠绒毛形态基本正常，排列有序，细胞水肿不明显，未见明显皮下间隙及顶端脱落。通过MLA拮抗后大鼠肺组织表现为肺泡间隔增厚、炎性细胞浸润，肺网状结构不完整，间质出现出血和水肿；结肠绒毛结构依稀可见，细胞水肿、炎性细胞浸润明显，排列不规整。 结论:超声治疗可改善脓毒症大鼠预后，MLA通过拮抗α7nAChR可逆转超声治疗的抗炎效应，提示超声对脓毒症的保护机制可能与激活α7nAChR介导的胆碱能抗炎通路有关。

目的:评价α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在盐酸戊乙奎醚减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用。方法:SPF级健康雄性C57BL/6小鼠40只，6~8周龄，体质量18~25 g，采用随机数字表法分为4组( n＝10)：对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)、盐酸戊乙奎醚组(PHC组)和α7nAChR抑制剂MLA组(MLA组)。采用腹腔注射脂多糖15 mg/kg的方法制备小鼠内毒素性急性肺损伤模型。PHC组于模型制备前30 min腹腔注射盐酸戊乙奎醚2 mg/kg，MLA组于给予盐酸戊乙奎醚前10 min腹腔注射MLA 10 mg/kg，C组腹腔注射等量生理盐水。与注射内毒素后6 h时处死小鼠取肺组织，HE染色法观察病理学结果，确定肺组织湿重/干重(W/D)比值，ELISA法检测TNF-α、IL-1β和IL-10含量，Western blot法检测α7nAChR表达。 结果:与C组比较，ALI组、PHC组和MLA组肺组织W/D比值、TNF-α和IL-1β含量升高，IL-10含量降低，α7nAChR表达上调( P<0.05)；与ALI组比较，PHC组肺组织W/D比值、TNF-α和IL-1β含量降低，IL-10含量升高，α7nAChR表达上调( P<0.05)；与PHC组比较，MLA组肺组织W/D比值、TNF-α和IL-1β含量升高，IL-10含量降低，α7nAChR表达下调( P<0.05)。PHC组肺组织病理学损伤较ALI组减轻，盐酸戊乙奎醚的这种作用则被α7nAChR抑制剂MLA部分逆转。 结论:α7nAChR参与了盐酸戊乙奎醚减轻小鼠内毒素性急性肺损伤的过程。

目的:探究食欲素-A(orexin-A)和α4β2-N型乙酰胆碱受体(α4β2-nAChR)选择性激动剂RJR-2403分别对新生大鼠离体脊髓腹角神经元自发动作电位影响的差异.方法:应用8～12d新生SD大鼠,麻醉后游离出颈端至骶部的脊髓,保留腰骶膨大节段并制备切片.切片孵育30min,采用木瓜蛋白酶消化19～22 min,转常温孵育45～60 min.沿中央管切取脊髓腹角,使用口径从大到小的巴斯德吸管急性机械分离神经元,静置20 min待细胞贴壁,在倒置显微镜下利用膜片钳记录良好的神经元,联合药理学方法进行功能性研究.在电流钳记录模式下,观察orexin-A和RJR-2403分别对离体脊髓腹角神经元自发放电(动作电位)的影响,并比较多种参数的差异.结果:①本研究应用急性分离的脊髓腹角神经元进行膜片钳记录,所记录的神经元胞体完整,形态多样,能发出较多突起且有分支;②给予orexin-A前的腹角神经元自发动作电位的频率[(3.55±0.66)Hz]低于给药后[(8.26±3.31)Hz](P＜0.01),给药前动作电位幅值[(95.28±7.21)mV]高于给药后[(85.15±5.80)mV](P＜0.05),静息电位和动作电位半幅时程无明显变化;③应用RJR-2403前,腹角神经元的静息电位[(-66.67±43.38)mV]高于给药后[(-60.48±3.38)mV](P＜0.01),给药前放电频率[(2.74±1.60)Hz]低于给药后[(8.94±3.14)Hz](P＜0.001),给药前动作电位幅值[(84.96±4.85)mV]高于给药后[(73.77±5.42)mV](P＜0.01),给药前半幅时程[(4.34±1.52)ms]低于给药后[(5.39±1.80)ms](P＜0.01).结论:Orexin-A和RJR-2403对脊髓腹角神经元自发动作电位均具有正性调制作用,但对于静息电位、半幅时程存在不同作用,可能源于促代谢型受体和促离子型受体介导的作用差异.

目的 评价α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7nAChR)在电针减轻大鼠内毒索性急性肺损伤(ALI)中的作用及其与Janus激酶2信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路的关系.方法 清洁级健康雄性SD大鼠60只,体重200～220 g,8周龄,采用随机数字表法分为6组(n=10):对照组(C组)、ALI组、电针+ALI组(EA组)、α7nAChR拮抗剂α-银环蛇毒素(α-BGT)+ALI组(BA组)、电针+α-BGT+ ALI组(EBA组)和非经非穴+ALI组(SEA组).采用静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg的方法制备大鼠内毒素性ALI模型.EA组和EAB组于模型制备前1～4d(刺激时间9:00至10:00,30 min/次,1次/d)及模型制备过程中电针刺激双侧足三里及内关穴(刺激强度以大鼠肢体出现微颤为宜,疏密波频率2/15 Hz,波宽0.2～0.5 ms,电流强度1～2 mA.SEA组以相同电针参数刺激足三里穴及内关穴旁开0.5 cm非经非穴处.于模型制备前30 min BA组和EBA组腹腔注射α-BGT 1 μg/kg.给予LPS后6h时处死大鼠取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,确定肺湿/干重(W/D)比值,采用ELISA法确定肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量,Western blot法检测α7nAChR、磷酸化JAK2(p-JAK2)及磷酸化STAT3(p-STAT3)的表达水平.结果 与C组比较,余5组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-o、IL-1β、IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调(P＜0.05);与ALI组比较,EA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量降低,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达上调,BA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(p＜0.05),SEA组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与EA组比较,EBA组肺损伤评分、W/D比值和肺组织TNF-α、IL-1β及IL-6含量升高,α7nAChR、p-JAK2及p-STAT3表达下调(P＜0.05).结论 α7nAChR表达上调激活JAK2/STAT3信号通路参与了电针减轻大鼠内毒素性ALI的过程.

目的 评价激活α7烟碱型乙酰胆碱受体对大鼠呼吸机相关肺损伤的影响.方法采用随机数字法将32只雄性Sprague Dawley大鼠分为:对照组(C组)、机械通气组(V组)、烟碱预处理+机械通气组(N组)、甲基牛扁碱(MLA)+烟碱+机械通气组(MLA组),每组8只.C组大鼠气管插管后不进行机械通气,保留自主呼吸,其余各组大鼠机械通气2h.N组大鼠在机械通气前30 min腹腔注射1 mg/kg的烟碱;MLA组大鼠在腹腔注射烟碱前30 min先腹腔注射1 mg/kg的MLA,其余各组大鼠腹腔注射等量等渗NaCl溶液.机械通气结束后即刻处死大鼠,计算各组大鼠肺组织湿重/干重、苏木素-伊红(HE)染色、肺组织损伤病理学评分,并采用Western-blotting检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平.结果C组大鼠肺泡形态结构正常;V组大鼠肺泡形态结构破坏,大量炎症细胞浸润;N组大鼠肺泡形态结构稍破坏,少量炎症细胞浸润;MLA组大鼠肺泡形态结构破坏,肺泡萎陷,较多炎症细胞浸润.4组大鼠肺组织湿重/干重、损伤评分、IL-1β、IL-6及TNF-α蛋白表达水平比较,差异均有统计学意义(F=168.009、647.579、138.005、192.706、178.094,P均<0.05).进一步两两比较发现,V组大鼠肺组织湿重/干重、损伤评分、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平均较C组更高(P均<0.05);N组大鼠湿重/干重、损伤评分、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平均较V组明显降低(P均<0.05);MLA组大鼠肺组织湿重/干重、损伤评分、IL-1β、IL-6、TNF-α蛋白表达水平均较N组明显升高,差异有统计学意义(P均<0.05).结论烟碱对呼吸机相关肺损伤的大鼠模型具有保护作用,其机制与激活α7-nAChR有关.

目的:观察α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)在电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤中的作用.方法:40只健康雄性新西兰大白兔,采用随机数字表法分为假手术组、模型组、电针组和α-银环蛇毒素(α-BGT)组(n=10).采用夹闭股动脉3 h、再灌注4 h的方法制备兔肢体缺血再灌注模型;电针组、α-BGT组于模型制备前1～4 d(30 min/次,1次/d)及模型制备过程中电针足三里穴和肺俞穴(电流l～2 mA,频率2/15 Hz,疏密波);α-BGT组于模型制备前30 min腹腔注射α7nAChR拮抗剂α-BGT(1μg/kg).再灌注4 h时采集颈动脉血样,随后处死兔取肺组织,观察病理学结果并行肺损伤评分,计算肺湿/干重(W/D)比值.采用ELISA法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)含量,Western blot法检测α7nAChR蛋白表达水平.结果:模型组、电针组和α-BGT组再灌注4 h时肺组织W/D比值分别为6.89±1.07、4.56±0.75、8.68±1.49,均明显高于假手术组(2.83±0.43,P<0.05);肺损伤评分分别为7.52±1.05、4.16±0.68、9.23±1.57,均明显高于假手术组(1.19±0.22,P<0.05);TNF-α分别为(13.3±2.3)pg/mg、(11.0±1.6)pg/mg、(14.1±3.0)pg/mg,均明显高于假手术组[(3.2±0.3)pg/mg,P<0.05];IL-1β分别为(9.2±2.0)pg/mg、(7.4±1.7)pg/mg、(10.5±1.9)pg/mg,均明显高于假手术组[(2.1±0.5)pg/mg,P<0.05];IL-6分别为(14.2±2.3)pg/mg、(11.7±2.0)pg/mg、(14.8±1.8)pg/mg,均明显高于假手术组[(4.2±0.7)pg/mg,P<0.05];α7nAChR表达水平分别为(0.55±0.09)、(0.87±0.14)、(0.33±0.08),均明显高于假手术组(0.23±0.04,P<0.05).与模型组比较,电针组再灌注4h时肺组织W/D比值、肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量均显著降低(P<0.05),电针组α7nAChR表达均显著上调(P<0.05).与电针组比较,α-BGT组再灌注4h时肺组织W/D比值、肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量升高(P<0.05),α7nAChR表达下调(P<0.05).结论:α7nAChR表达上调,可能参与了电针减轻肢体缺血再灌注诱发兔肺损伤的过程.

目的 评价腹腔注射右美托咪定对大鼠腹腔粘连的影响及胆碱能抗炎通路在其中的作用.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠40只,体重220～250 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(Sham组)、腹腔粘连组(AA组)、右美托咪定组(DEX组)和右美托咪定+甲基牛扁碱组(DEX-M组).采用盲肠摩擦法建立大鼠腹腔粘连模型.Sham组仅打开腹腔后缝合;AA组分别于腹腔和尾静脉注射生理盐水2 ml;DEX组和DEX-M组分别尾静脉注射生理盐水2 ml和α7烟碱型乙酰胆碱受体拮抗剂甲基牛扁碱2.4 tμg/g(溶于2 ml生理盐水中),同时腹腔注射右美托咪定10μg/kg(溶于2ml生理盐水中).建模后7d时,麻醉下打开腹部切口,观察腹腔粘连形成情况,并采用Phillips法进行评分;采用ELISA检测腹水转化生长因子-β1(TGF-β1)和血清TNF-α的浓度.然后处死大鼠,取盲肠组织及其对侧腹膜及粘连纤维带,光镜下观察病理学结果.结果 与Sham组相比,AA组和DEX-M组腹部粘连评分升高,血清TNF-α浓度升高,AA组、DEX组和DEX-M组腹水TGF-β1浓度升高(P＜0.05);与AA组相比,DEX-M组血清TNF-α和腹水TGF-β1的浓度降低,DEX组腹部粘连评分降低(P＜0.05),DEX组盲肠组织、腹膜及粘连纤维带病理学损伤减轻;与DEX-M组相比,DEX组血清TNF-α浓度升高(P＜0.05),腹水TGF-β1浓度差异无统计学意义(P＞0.05),盲肠组织、腹膜及粘连纤维带病理学损伤加重.结论 腹腔注射右美托咪定可减轻大鼠腹腔粘连,其机制与激活胆碱能抗炎通路,减轻全身炎症反应有关.

目的 评价α7烟碱能乙酰胆碱受体(α7nAChR)激动剂后处理及其联合肢体远隔缺血后处理抑制大鼠心肌缺血再灌注时炎症反应的机制与糖原合成酶激酶?3β(GSK?3β)的关系.方法 成年雄性SD大鼠80只,8周龄,体重290~320 g,采用随机数字表法分成4组(n=20):心肌缺血再灌注组(I∕R组)、α7nAChR激动剂后处理组(P组)、肢体远隔缺血后处理组(L组)和α7nAChR激动剂后处理+肢体远隔缺血后处理组(P+L组).采用结扎左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注损伤模型.P 组再灌注前即刻静脉注射特异性 α7nAChR激动剂PNU2829872 mg∕kg;L组于心肌缺血20 min时采用止血带结扎双侧后肢缺血10 min,心肌再灌注开始时松开后肢结扎;P+L组联合应用P组和L组的干预措施.再灌注120 min时采集静脉血样,采用ELISA法检测血清cTnI和CK?MB浓度;采用伊文氏蓝和TTC双染色法确定心肌梗死面积(IS);采用Western blot法检测心肌磷酸化GSK?3β[p?GSK?3β(Ser536)]、NF?κBp65和磷酸化NF?κBp65(p?NF?κBp65)的表达.结果 与I∕R组比较,P组、L组和P+L组心肌IS、血清cTnI和CK?MB浓度降低,缺血区心肌p?GSK?3β(Ser9)表达上调,p?NF?κBp65表达下调(P<0.05);与L组比较,P+L组心肌IS、血清cTnI和CK?MB浓度降低,缺血区心肌 p?GSK?3β(Ser9)表达上调,p?NF?κBp65表达下调(P<0.05).结论 α7nAChR激动剂后处理及其联合肢体远隔缺血后处理抑制大鼠心肌缺血再灌注时炎症反应的机制可能与抑制GSK?3β活性有关.

目的 为了了解水分子在尼古丁(NCT)与α4β2烟碱乙酰胆碱受体(nAChR)结合过程中的作用机制以及其在构象稳定中的作用,对NCT与α4β2 nAChR的结合进行了分子动力学(MD)模拟.方法 对与激动剂NCT结合的α4β2 nAChR体系运行500 ns的全原子分子动力学模拟.结果 模型表明,关键的水分子存在于α4(+)β2(-)的结合部位,形成氢键连接NCT的吡啶N、β2 L121的骨架NH原子和N109的羧基氧原子.还发现与NCT结合的α4β2 nAChR中,C环开放程度在不同亚基之间有明显的差异,结论桥接水分子通过形成3个氢键连接NCT与受体蛋白,在NCT与α4β2受体的结合中起重要作用.