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CXCR4拮抗剂AMD3100通过增强抑制性神经传递减弱大鼠痫性活动
编辑人员丨1周前
目的:探讨CXCR4特异性拮抗剂AMD3100影响癫痫发作的分子机制。方法:(1)动物实验:36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组,每组12只。癫痫组大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)构建癫痫模型,剂量为40 mg/kg;AMD3100处理组大鼠侧脑室注射5 μL(5 mg/mL) AMD3100 20 min后腹腔注射同等剂量PTZ;对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。采用Racine分级评估各组大鼠癫痫发作等级并记录其癫痫发作潜伏期,采用脑电图(EEG)记录各组大鼠脑神经元异常放电情况,采用ELISA试剂盒检测各组大鼠海马组织 γ-氨基丁酸(GABA)含量。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织神经元γ-氨基丁酸A受体α1亚单位( GABAAR α1) mRNA水平。(2)细胞实验:另取SD大鼠鼠婴(1日龄)培养原代海马神经元,培养7 d后将细胞分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组。癫痫组神经元采用无镁外液诱导的方法构建癫痫细胞模型;AMD3100处理组神经元在含有10 nmol/L AMD3100的无镁外液中培养3 h,随后换为Neurobasal继续培养;对照组采用Neurobasal培养基常规培养。采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元灌流AMD3100(10 nmol/L)后自发性抑制性突触后电流(sIPSC)。 结果:(1)动物实验:AMD3100处理组大鼠发作潜伏期较癫痫组大鼠明显缩短[分别为(663.30±74.84) s、(164.40±17.20) s],差异有统计学意义( t=6.490, P<0.001);AMD3100处理组大鼠4级以上发作次数较癫痫组大鼠明显减少[分别为(3.75±0.39)次、(9.00±0.73)次],差异有统计学意义( t=4.680, P<0.001)。ELISA实验结果显示,3组大鼠GABA含量差异有统计学意义( F=17.850, P<0.001),其中癫痫组明显低于对照组,AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组,差异均有统计学意义( P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示,3组大鼠 GABAAR α1 mRNA含量差异有统计学意义( F=14.400, P<0.001),其中癫痫组明显低于对照组,AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组,差异均有统计学意义( P<0.05)。EEG结果显示,与癫痫组大鼠比较,AMD3100处理组大鼠放电频率有所降低。3组大鼠EEG功率差异无统计学意义( F=3.220, P=0.062),但与癫痫组、对照组大鼠比较,AMD3100处理组大鼠EEG功率有所降低。(2)细胞实验:膜片钳技术检测结果显示,3组神经元sIPSCs的频率和波幅差异均有统计学意义( F=13.670, P<0.001; F=10.920, P<0.001)。与对照组、癫痫组比较,AMD3100处理组神经元sIPSCs的频率和波幅均显著增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:CXCR4拮抗剂AMD3100可通过增强抑制性神经传递降低癫痫发作频率。
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编辑人员丨1周前
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血管性痴呆大鼠海马区域GABAARα5表达的时空变化
编辑人员丨2023/8/6
目的:探究大鼠双侧颈总动脉永久性结扎(BCCAO)后,γ氨基丁酸A型受体α5亚单位(GABAAR α5)在海马区域表达的时空变化.方法:将成年雄性SD大鼠50只随机分为假手术组(n=20)、模型组(n=30).采用双侧颈总动脉结扎建立血管性痴呆大鼠模型,在手术后3、7、28天采用免疫印迹检测整体海马中GABAAR α5蛋白的表达,用间接免疫荧光法分析大鼠海马CA1、CA3和DG区域空间表达变化.结果:术后3天,模型组相比GABAAR α5表达水平假手术组下调(P<0.05),而术后28天GABAAR α5表达水平相术后3天明显回升(P<0.05).模型组术后3天CA1区域GABAAR α5表达水平相比假手术组有所下调,术后28天以上指标较术后3天显著上调(P<0.05),但两组CA3和DG区域GABAAR α5表达水平比较差异并无统计学意义(P>0.05).结论:BCCAO可引起海马区域GABAAR α5表达的下调,并在术后各个时间点呈现时空变化.
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编辑人员丨2023/8/6
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罗格列酮对哮喘小鼠肺组织γ氨基丁酸A受体α亚单位及MUC5AC表达的影响研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探究罗格列酮对哮喘小鼠肺组织γ氨基丁酸A受体α亚单位(GABAARα)及MUC5AC表达的影响.方法 2017年12月—2018年1月,将50只健康雌性BABL/C小鼠随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组,每组10只.动物模型制备分为致敏、激发、取材3部分,哮喘组、地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠均进行致敏、激发,其中地塞米松组小鼠于激发前30 min给予地塞米松雾化吸入,罗格列酮组小鼠给予罗格列酮雾化吸入,联合治疗组小鼠给予地塞米松联合罗格列酮雾化吸入;对照组小鼠在致敏、激发阶段均给予0.9%氯化钠溶液.最后1次激发后24 h取小鼠肺组织进行检测.采用苏木素-伊红染色(HE染色)观察肺组织病理学表现,采用蛋白质印迹法检测肺组织GABAARα及MUC5AC蛋白浓度,采用聚合酶链反应检测肺组织GABAARα及MUC5AC mRNA相对表达量.结果 (1)HE染色结果显示,哮喘组小鼠气道黏膜上皮局部脱落,黏膜下充血水肿,支气管壁及血管壁周围有较多炎性细胞浸润;地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠上述表现较哮喘组减轻.(2)哮喘组、地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC蛋白浓度及其mRNA相对表达量高于对照组,地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC蛋白浓度及其mRNA相对表达量低于哮喘组(P<0.05);而地塞米松组、罗格列酮组及联合治疗组小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC蛋白浓度及其mRNA相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 罗格列酮对哮喘小鼠肺组织GABAARα、MUC5AC表达的影响与地塞米松及地塞米松联合罗格列酮相当,其可能通过下调GABAARα、MUC5AC表达而减少哮喘小鼠气道黏液过度分泌.
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编辑人员丨2023/8/6
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精氨酸加压素对大鼠视前区GABAA受体 亚单位磷酸化的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究精氨酸加压素(AVP)对大鼠视前区γ-氨基丁酸(GABA)A型受体(GABAA受体)亚单位(α、β和γ2)表达和磷酸化的影响.方法:实验分为对照组、AVP组、V1a受体抑制剂+AVP组和V1a受体抑制剂组(均n=10);腹腔注射AVP或V1a受体抑制剂0.5 h后,采用RT-qPCR和Western blot法检测视前区GABAA受体亚单位(α、β和γ2)表达及磷酸化的变化.结果:与对照组相比,AVP或V1a受体抑制剂组大鼠视前区GABAA受体亚单位表达均无显著变化;AVP能显著上调视前区GABAA受体γ2亚单位的磷酸化水平(P<0.05);AVP显著增加蛋白激酶C(PKC)和钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)表达和磷酸化(P<0.01).结论:外源性AVP不影响GABAA受体亚单位(α、β和γ2)表达,但主要通过V1a受体激活PKC和CaMKⅡ,影响γ2亚单位磷酸化水平,从而调制视前区GABAA受体介导的抑制性突触传递.
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编辑人员丨2023/8/6
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中药酸枣仁对斑马鱼睡眠剥夺模型的行为学及神经递质受体的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察酸枣仁对斑马鱼睡眠剥夺模型的睡眠改善及镇静作用,以及对γ-氨基丁酸(GABA)A型受体α1亚单位(GABRA1)、γ2亚单位(GABRG2)和谷氨酸(Glu)N-甲基-D-天冬氨酸受体2A亚单位(GRIN2Aa)、代谢型受体6亚单位(GRM6A) mRNA表达的影响.方法 采用光刺激诱导活体斑马鱼建立睡眠剥夺模型,分别水溶给予不同浓度炒酸枣仁颗粒和艾司唑仑片,应用行为分析仪定量斑马鱼的运动距离和失眠时间,采用RT-PCR检测GABRA1、GABRG2、GRIN2Aa和GRM6A mRNA的相对表达量.结果 在观察的1h内,模型组斑马鱼运动时间和距离均高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05).低、中、高剂量的酸枣仁对睡眠的改善作用分别为0.43、2.21和3.33倍,镇静作用分别为0.97、1.47和2.00倍.与模型组比较,酸枣仁组4种受体mRNA相对表达量降低,其中低、中剂量组GABRA1和GABRG2mRNA相对表达量明显降低(P<0.01),中、高剂量组GRIN2Aa和GRM6A mRNA相对表达量明显降低(P<0.01).结论 低、中、高浓度酸枣仁对斑马鱼睡眠剥夺模型的睡眠有显著改善作用;酸枣仁改善其睡眠的机制可能为调节神经递质受体的表达.
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编辑人员丨2023/8/6
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GABAA受体α亚单位在糖尿病性神经病理性痛大鼠背根神经节中的表达
编辑人员丨2023/8/6
目的:研究γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)在糖尿病致神经病理性疼痛(PDN)大鼠模型背根神经节(DRG)中的表达和功能.方法:正常健康雌性大鼠随机分为对照组(Control)和链脲佐菌素干预组(STZ),利用腹腔注射STZ的方法制备PDN模型,采集尾静脉血测量大鼠的血糖含量;应用热板实验检测热刺激缩足反射潜伏期;应用全细胞膜片钳技术检测PDN大鼠的L4-L6DRG神经元GABA受体介导的电流变化;应用Western Blot技术检测模型GABAA受体α亚基表达情况.结果:与对照组相比,PDN的血糖浓度上调(P<0.05);热刺激缩足反射潜伏期缩短(P<0.05);DRG神经元GABA受体介导的内向电流明显减小(P<0.01);DRG神经元GABAA受体α亚基的表达量明显下调(P<0.01),磷酸化的GABAA受体α亚基表达量明显上调(P<0.01).结论:糖尿病致神经病理性疼痛时,GABAA受体α亚基发生磷酸化,GABA介导的突触前抑制作用减弱.
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编辑人员丨2023/8/6
