目的:研究活性氧响应性抗菌微针对糖尿病小鼠细菌定植全层皮肤缺损创面的影响。方法:采用实验研究方法。合成活性氧响应性交联剂N1-（4-溴苄基）-N3-（4-溴苯基）-N1，N1，N3，N3-四甲基丙烷-1，3-二胺（TSPBA），混合相应成分制成聚乙烯醇-TSPBA（PVA-TSPBA）微针、PVA-ε-聚赖氨酸（ε-PL）-TSPBA微针、PVA-TSPBA-透明质酸钠（SH）微针、PVA-ε-PL-TSPBA-SH微针。将PVA-TSPBA微针分别置于单纯磷酸盐缓冲液（PBS）和含过氧化氢的PBS中，观察浸泡0（即刻）、3、7、10 d微针降解情况，表示其活性氧响应性。将用含过氧化氢的LB培养基培养的金黄色葡萄球菌标准菌株与大肠埃希菌标准菌株各自按随机数字表法（分组方法下同）分为空白对照组（不行任何处理，下同）以及与含相应浓度ε-PL的PVA-ε-PL-TSPBA微针共培养的0 g/L ε-PL组、1.0 g/L ε-PL组、5.0 g/L ε-PL组、10.0 g/L ε-PL组，培养24 h，观察细菌生长情况并计算细菌相对存活率（样本数为3）。将对数生长期的小鼠成纤维细胞系3T3细胞（生长周期下同）分为空白对照组以及用含相应浓度ε-PL的PVA-ε-PL-TSPBA微针浸提液培养的0 g/L ε-PL组、1.0 g/L ε-PL组、5.0 g/L ε-PL组、10.0 g/L ε-PL组，培养24 h，用光学显微镜观察细胞生长情况，用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测并计算细胞相对存活率（以此表示细胞毒性，样本数为6）。取PVA-TSPBA微针与PVA-TSPBA-SH微针，用光学显微镜观察2种微针形貌，用微机控制电子万能试验机检测2种微针机械性能（以临界力表示，样本数为6）。取6只6~8周龄雄性BALB/c小鼠（性别、鼠龄下同），分为PVA-TSPBA组与PVA-TSPBA-SH组（每组3只），用相应微针垂直按压背部皮肤1 min后，观察按压完成后0、10、20 min皮肤情况。另取3T3细胞，分为空白对照组，用含相应浓度ε-PL的PVA-ε-PL-TSPBA微针浸提液培养的0 g/L ε-PL组、单纯5.0 g/L ε-PL组，用含5.0 g/L ε-PL的PVA-ε-PL-TSPBA-SH微针浸提液培养的5.0 g/L ε-PL+SH组，CCK-8法检测并计算培养24、48、72 h细胞相对存活率，以此表示细胞增殖活性（样本数为6）。取18只BALB/c小鼠，通过高糖高脂饮食联合链脲佐菌素注射诱导为糖尿病小鼠模型后，分为无菌敷贴组、0 g/L ε-PL+SH组与5.0 g/L ε-PL+SH组（每组6只），在每只小鼠背部制作全层皮肤缺损创面后滴加金黄色葡萄球菌溶液，制成糖尿病小鼠细菌定植全层皮肤缺损创面模型，0 g/L ε-PL+SH组、5.0 g/L ε-PL+SH组小鼠创面覆盖含相应浓度ε-PL的PVA-ε-PL-TSPBA-SH微针后，3组小鼠创面均外覆无菌手术敷贴。于伤后0、3、7、12 d观察创面愈合情况，计算伤后3、7、12 d创面愈合率；伤后12 d，取创面及创缘皮肤组织行苏木精-伊红染色，观察新生上皮生长及炎症细胞浸润情况。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、Mann-Whitney U检验、Bonferroni法。 结果:随着浸泡时间的延长，置于含过氧化氢PBS中的PVA-TSPBA微针逐渐溶解并于浸泡10 d完全降解，置于单纯PBS中的PVA-TSPBA微针仅发生溶胀而未溶解。培养24 h，5.0 g/L ε-PL组、10.0 g/L ε-PL组金黄色葡萄球菌未见生长，10.0 g/L ε-PL组大肠埃希菌未见生长；1.0 g/L ε-PL组、5.0 g/L ε-PL组、10.0 g/L ε-PL组金黄色葡萄球菌相对存活率较空白对照组明显降低（ P<0.05或 P<0.01），5.0 g/L ε-PL组、10.0 g/L ε-PL组大肠埃希菌相对存活率较空白对照组明显降低（ P<0.01）。培养24 h，空白对照组、0 g/L ε-PL组、1.0 g/L ε-PL组、5.0 g/L ε-PL组、10.0 g/L ε-PL组细胞生长状态良好，组间细胞相对存活率相近（ P>0.05）。PVA-TSPBA微针与PVA-TSPBA-SH微针的针体均呈四棱锥形，排列整齐，其中PVA-TSPBA-SH微针的针体更立体、棱角更分明。PVA-TSPBA-SH微针的临界力明显高于PVA-TSPBA微针（ Z=3.317， P<0.01）。PVA-TSPBA-SH组小鼠按压完成后0 min微针穿透皮肤，10 min后针孔部分消失，20 min后针孔完全消失；PVA-TSPBA组微针未能穿透小鼠皮肤。培养24、48、72 h，5.0 g/L ε-PL+SH组细胞增殖活性均明显高于空白对照组（ P<0.05或 P<0.01）。无菌敷贴组小鼠创面愈合速度缓慢，渗出较多；0 g/L ε-PL+SH组小鼠创面愈合速度前期与无菌敷贴组相近，后期较无菌敷贴组加快，渗出中等；5.0 g/L ε-PL+SH组小鼠创面愈合较另2组快，渗出不多。5.0 g/L ε-PL+SH组小鼠伤后3、7、12 d创面愈合率分别为（40.6±4.2）%、（64.3±4.1）%、（95.8±2.4）%，明显高于无菌敷贴组的（20.4±2.7）%、（38.9±2.2）%、（59.1±6.2）%与0 g/L ε-PL+SH组的（21.6±2.6）%、（44.0±1.7）%、（82.2±5.3）%（ P<0.01）；0 g/L ε-PL+SH组小鼠伤后7、12 d创面愈合率明显高于无菌敷贴组（ P<0.05或 P<0.01）。伤后12 d，5.0 g/L ε-PL+SH组小鼠创面几乎完全上皮化且炎症细胞浸润较少，0 g/L ε-PL+SH组小鼠创面部分上皮化且伴大量炎症细胞浸润，无菌敷贴组小鼠创面未见明显上皮化且伴大量炎症细胞浸润。 结论:基于TSPBA、聚乙烯醇、ε-PL及SH制备的复合微针可顺利刺穿小鼠皮肤并能通过缓慢响应创面中的活性氧从而溶解释放抗菌物质，抑制创面细菌定植，促进糖尿病小鼠细菌定植全层皮肤缺损创面修复。

目的 构建溃疡性结肠炎(UC)小鼠模型,探讨ε-聚赖氨酸、果胶及二者混合物对UC小鼠肠黏膜屏障的影响及可能机制.方法 雄性BALB/c小鼠40只,随机分为对照组、UC组、ε-聚赖氨酸组、果胶组、ε聚赖氨酸+果胶组各8只.所有小鼠给予灌胃预处理,对照组、UC组给予饮用水20 mL/(kg·d),ε-聚赖氨酸组给予ε-聚赖氨酸10 mg/(kg·d),果胶组给予果胶200 mg/(kg·d),ε-聚赖氨酸+果胶组给予ε-聚赖氨酸10 mg/(kg·d)和果胶200 mg/(kg·d),灌胃4周后,UC组、ε-聚赖氨酸组、果胶组、ε-聚赖氨酸+果胶组小鼠自由饮用质量分数3％硫酸葡聚糖溶液9 d构建UC模型,对照组自由饮用饮用水9d.造模后评价5组小鼠疾病活动指数(DAI)评分,测量结肠长度,采用HE染色法观察结肠组织病理形态,采用ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,采用实时荧光定量PCR法检测结肠组织闭合蛋白(Occludin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)mRNA相对表达量,采用Western blot法检测结肠组织Toll样受体 4(TLR4)、核因子-κB p65(NF-κB p65)、p-NF-κB p65 蛋白相对表达量,并计算 p-NF-KB p65/NF-KB p65.结果 (1)UC 组[(6.75±1.91)分]、ε-聚赖氨酸组[(5.75±1.75)分]、果胶组[(3.00±0.76)分]、ε-聚赖氨酸+果胶组[(6.00±3.21)分]DAI评分均高于对照组(0分)(P＜0.05);UC组[(6.96±0.78)cm]、ε-聚赖氨酸+果胶组[(6.79±0.73)cm]结肠长度均短于对照组[(8.10±0.55)cm](P＜0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);UC组、ε-聚赖氨酸+果胶组DAI评分均高于果胶组(P＜0.05),结肠长度均短于果胶组(P＜0.05),ε-聚赖氨酸组与果胶组比较差异均无统计学意义(P＞0.05),UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).(2)对照组结肠组织黏膜上皮结构完整,腺体排列整齐,隐窝正常.UC组黏膜上皮结构不完整,炎症细胞浸润黏膜层2/3以上,以淋巴细胞浸润为主,病变范围＞50％,基底层2/3隐窝被破坏.与UC组比较,ε-聚赖氨酸组黏膜上皮结构尚完整,炎症细胞浸润黏膜层1/3以上,病变范围＞25％,基底层1/3隐窝被破坏;果胶组黏膜上皮结构较完整,炎症细胞浸润黏膜层1/3以下,病变范围和隐窝破坏程度明显减小.与果胶组比较,ε-聚赖氨酸+果胶组炎症细胞浸润增多,病变范围和隐窝破坏程度增大.(3)UC组、ε聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组血清TNF-α水平均高于对照组和果胶组(P＜0.05),果胶组与对照组,UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);UC组、ε-聚赖氨酸+果胶组血清IL-6水平均高于对照组(P＜0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);ε-聚赖氨酸组、果胶组血清IL-6水平均低于UC组(P＜0.05),ε-聚赖氨酸+果胶组与UC组比较差异无统计学意义(P＞0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组、ε聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).(4)UC组、ε-聚赖氨酸+果胶组结肠组织Occludin、ZO-1 mRNA相对表达量均低于对照组和果胶组(P＜0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组,ε-聚赖氨酸组与果胶组,UC组、ε-聚赖氨酸组、ε聚赖氨酸+果胶组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).(5)UC组、ε-聚赖氨酸十果胶组结肠组织TLR4蛋白相对表达量均高于对照组(P＜0.05),ε-聚赖氨酸组、果胶组与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸十果胶组结肠组织p-NF-κB p65/NF-κB p65均高于对照组(P＜0.05P＜0.05),果胶组与对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05);UC组、ε聚赖氨酸+果胶组结肠组织TLR4蛋白相对表达量及p-NF-KB p65/NF-κB p65均高于果胶组(P＜0.05),ε-聚赖氨酸组与果胶组比较差异均无统计学意义(P＞0.05);UC组、ε-聚赖氨酸组、ε-聚赖氨酸+果胶组结肠组织p-NF-κB p65/NF-κB p65及TLR4蛋白相对表达量比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 果胶可通过抑制TLR4/NF-KB信号通路减轻结肠组织炎症,保护肠黏膜屏障,预防小鼠UC发生,而ε-聚赖氨酸可减弱果胶对UC小鼠肠黏膜屏障的保护作用.

ε-聚赖氨酸是一种同聚酰胺生物聚合物,由25～35个L-赖氨酸残基通过α-羧基和ε-氨基缩合形成的酰胺键连接而成.因其独特的结构,ε-聚赖氨酸具有许多优异的性能,如可食性、水溶性、热稳定性、可降解性、广谱抗菌活性和无毒性等.因此,ε-聚赖氨酸己在日本、韩国、美国和中国等国家被广泛用作食品防腐剂.目前,ε-聚赖氨酸主要由白色链霉菌发酵生产.自ε-聚赖氨酸于1977年由日本学者发现以来,ε-聚赖氨酸发酵生产得到了很大提高,对其应用研究也由最初的食品领域拓展到了许多其他的领域.本文首先概述了ε-聚赖氨酸生物合成机理、菌种选育和发酵生产策略,在简要介绍其抑菌机制基础上,着重介绍了ε-聚赖氨酸在食品、医学和材料等领域应用研究进展,最后,对相关研究进行了展望,以期为ε-聚赖氨酸微生物生产及其应用研究提供有益的借鉴.

目的:金黄色葡萄球菌是医院感染中检出率较高的致病菌,运用e-多聚赖氨酸与乳链菌肽对金黄色葡萄球菌及其生物膜的抗性进行研究,试图找出一种新型的抗致病菌的抗菌物质.方法:采用微量肉汤稀释法测定不同浓度的ε-多聚赖氨酸和乳链菌肽对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度(MIC);通过结晶紫染色,运用光密度法,探讨e-多聚赖氨酸和乳链菌肽单独及联合使用对金黄色葡萄球菌生物膜作用的规律.结果:乳链菌肽对金黄色葡萄球菌的MIC为3.76 μmol/L,ε-多聚赖氨酸MIC值为10.99 μmol/L,乳链菌肽与ε-多聚赖氨酸的比例分别为9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9时,MIC值分别为3.20 μmol/L、2.79 μmol/L、4.94μmol/L、4.44 μmol/L、4.02 μmol/L、3.68 μmol/L、6.79 μmol/L、6.29 μmol/L、11.73 μmol/L.ε-多聚赖氨酸与乳链菌肽对金黄色葡萄球菌生物膜的形成具有抑制作用,且呈浓度相关性,抑制效果随浓度增高而增强.结论:乳链菌和e多聚赖氨酸单独使用时,ε-多聚赖氨酸对金黄色葡萄球菌抑菌效果较差,乳链菌抑菌效果较好;若两者联合使用时乳链菌肽和ε-多聚赖氨酸浓度比选择为6∶4、5∶5、4∶6对金黄色葡萄球菌生物膜生长抑制效果较好.

目的 研究ε-多聚赖氨酸(ε-poly-L-lysine,ε-PL)对白念珠菌(Candida albicans)的抑菌活性及抑菌机制.方法 以白念珠菌的标准菌株ATCC64548(氟康唑敏感株)、ATCC64550(氟康唑耐药株)以及临床收集的50株菌为实验菌株,按照CLISI-M27文件中的微量稀释法测定ε-多聚赖氨酸的MIC、MFC和SMIC50值;绘制48h内的浮游菌株时间-生长曲线和生物膜抑制-时间曲线;连续观测并记录4h内的芽管形成率和芽管长度;测定药物处理前后白念珠菌的丙二醛和活性氧(ROS)含量.结果 ε-PL对白念珠的最低抑菌浓度(MIC)为512μg/mL,最低杀菌浓度(MFC)为1024gg/mL,SMIC50为512gg/mL,ε-PL对白念珠菌浮游菌及生物膜的抑菌作用随着浓度的升高作用愈明显.抑菌-时间曲线结果表明ε-PL对白念珠菌的浮游菌和生物膜在12h左右即产生明显抑制作用.芽管实验的结果表明高浓度的ε-PL对白念珠菌的芽管形成率及芽管长度具有明显抑制作用.ε-PL作用于白念珠菌后MDA和ROS含量呈现上升趋势,并且与药物浓度大小成正相关.结论 ε-PL对白念珠菌浮游菌株及生物膜均有良好的抑制作用,高浓度ε-PL对白念珠菌主要毒力菌丝有明显抑制作用,ε-PL作用导致白念珠菌内产生大量的活性氧(ROS)以及产生一定程度的脂质氧化,提示ε-PL可能通过氧化作用发挥抑菌效果.

目的 探讨白藜芦醇(RSV)纳米粒联合丝素凝胶对银屑病的疗效及其机制.方法 以自主合成的新材料维生素E琥珀酸酯-接枝-(ε-多聚赖氨酸)聚合物(VES-g-PLL)为膜材制备新型包载白藜芦醇的载药纳米粒(RVS-NPs),进行质量考察后与丝素蛋白溶液混合制备载药纳米粒-丝素凝胶(RVS-NPs-gel).BALB/c小鼠60只,随机选择15只作为正常对照组,其余小鼠局部皮肤涂抹咪喹莫特乳膏连续8d建立小鼠银屑病皮肤模型,模型建立成功后将银屑病小鼠随机分为银屑病对照组、白藜芦醇溶液凝胶(RVS-gel)组及RVS-NPs-gel组,分别给予空白丝素凝胶溶液、RVS-gel及RVS-NPs-gel包含白藜芦醇20 mg,隔天1次,总共5次.应用银屑病面积和严重程度指数(PASI)评分、HE染色及酶联免疫吸附(ELISA)法研究载药纳米粒结合丝素凝胶对于银屑病的治疗效果及其机制.结果 实验制备的RVS-NPs形态圆整,药物包封率高达(85.54±3.21)％,同时载药纳米粒以絮状物吸附于丝素凝胶的3D结构表面,体外药物释放度实验结果显示72 h后RVS-gel药物累计释放量为(46.0±4.1)％,而RVS-NPs-gel累计释放药物为(30.9±2.5)％,显著降低(P<0.05).动物实验结果显示:咪喹莫特造模银屑病小鼠皮肤出现明显的角质化细胞增殖,皮肤PASI的各项评分包括红斑、鳞屑及厚度明显升高,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-8(IL-8)含量显著升高(P<0.05),而RVS-NPs-gel组小鼠较银屑病对照组及RVS-gel组皮肤PASI评分下降,角质化程度减轻,TNF-α、IL-6和IL-8含量显著下降(P<0.05).结论 白藜芦醇纳米粒联合丝素凝胶能够通过抑制TNF-α、IL-6和IL-8等炎症因子的释放,从而有效治疗银屑病,有望成为临床银屑病治疗的新方法.

[目的]筛选和鉴定产ε-多聚赖氨酸(ε-polylysine,ε-PL)的放线菌菌株,测定所产ε-PL的结构和聚合度,研究其抑制微生物生长的效果.[方法]利用亚甲基蓝和ε-PL因静电排斥而形成透明圈原理筛选ε-PL产生菌,采用Itzhaki方法复筛.考察分离菌株的形态、生理生化特征和16S rRNA基因、gyrB基因序列的同源性鉴定菌种.结合其波谱特征对其所产ε-PL进行结构和聚合度鉴定.采用抑菌圈法考察所产ε-PL对7株指示菌的抑菌活性.[结果]获得3株能够产生ε-PL的放线菌,其中X-18的ε-PL产量最高,达到0.8 g/L,综合形态、生理和分子生物学分析结果,鉴定为白色链霉菌(Streptomyces albulus).根据波谱学特征,并与标准品比对,证实该ε-PL分子聚合度为25-30,抑菌实验结果显示,它对细菌的抑菌效果明显好于真菌.[结论]从土壤中分离到1株抑菌效果较好的ε-PL产生菌S.albulus X-18,丰富了ε-PL产生菌资源.

目的 制备活性多肽奶基质脂质体,对其物理化学性质进行表征并添加于凝胶、溶液和乳液中,制备脂质体制剂.方法 以牛奶、豆奶等奶基质采用薄膜分散法制备脂质体;采用激光粒度仪考察脂质体粒径与电位的分布情况;设计不同的防腐配比筛选脂质体凝胶制剂最优防腐方案;于4℃和室温条件下考察制剂稳定性.结果 2种奶基质脂质体粒径约150 nm,多分散系数均＜0.2,表明分散度良好;脂质体电位约-20 mV,有利于分散稳定.防腐剂α-红没药醇和ε-聚赖氨酸的含量分别为0.5％和0.3％时脂质体凝胶制剂具有优异的防腐性能.将脂质体添加于凝胶、溶液和乳液中,所得脂质体制剂外观均匀分散,稳定性良好,其中所制得的活性多肽奶基质脂质体胶体制剂具有胶体系统所特有的蓝色乳光和丁达尔效应.结论 以牛奶、豆奶等奶基质,采用薄膜分散法制备的脂质体,稳定性好,方法简便易行,添加于各种皮肤外用制剂中,用于递送活性物质,改善皮肤状态.

目的:观察EPL/PCL/HA复合支架能否用于骨缺损的修复.方法:20只新西兰大白兔颅骨上制备4个直径6mm的圆形贯通骨缺损,植入材料分为4组:1.BC,空白对照组;2.PCL组;3.PCL/HA组;4.EPL/PCL/HA组,分别在4周、8周时各处死10只动物.采用大体观察,micro-CT与硬组织磨片及组织切片等观察成骨效果.结果:EPL/PCL/HA复合支架在各时间点成骨效果均好于其他三组.结论:EPL/PCL/HA复合支架可以快速、有效修复兔颅骨临界骨缺损.

以延长双孢蘑菇货架期为目标,探讨壳聚糖和ε-聚赖氨酸处理对采后双孢蘑菇在4℃贮藏过程中生理特性、营养品质和贮藏特性的影响.结果 表明:与对照组双孢蘑菇相比,壳聚糖与ε-聚赖氨酸6∶4复配溶液处理能够有效抑制双孢蘑菇表面微生物的生长和多酚氧化酶活性的增加,保持双孢蘑菇子实体较高的L*值和硬度,延缓双孢蘑菇的质量损失和细胞膜透性的升高,减少双孢蘑菇子实体的腐烂,保持较高商品率.在4℃条件下,壳聚糖与ε-聚赖氨酸6∶4复配溶液对双孢蘑菇的保鲜性能最优,能够有效保持双孢蘑菇的商品品质和延长其贮藏时间.