目的 以三七药渣为原料,通过益生菌发酵比较不同益生菌以及复合益生菌对各指标成分影响的差异,探究最佳发酵工艺.方法 采用单因素、Box-Behnken响应面法优化发酵工艺,并通过体外抗氧化实验评价发酵产物的抗氧化能力.结果 最佳发酵工艺为有氧发酵 48 h、厌氧发酵 36 h,嗜热链球菌、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的比例为 2∶3∶1,料液比0.14 g·mL-1,接菌量 5%,温度 33℃.在最佳发酵工艺条件下,三七药渣中性多糖、酸性多糖、总黄酮的含量分别提高了105.64%、96.98%、123.83%,相较于单菌发酵均显著升高.发酵产物清除 DPPH、ABTS 自由基的 IC50 值分别为 1.774、3.065 mg·mL-1,还原Fe3+的能力为 0.138 mmol FeSO4·g-1,较未发酵药渣显著增强.结论 最佳发酵工艺能显著提高三七药渣中各指标成分含量,显著增强其抗氧化能力,相较单菌发酵各指标成分含量均显著提高,提示上述益生菌之间没有明显的拮抗作用.研究结果为三七药渣的资源化利用提供了科学依据和数据支撑.

目的 研究牛膝Achyranthis bidentataBl.的化学成分及其对细胞增殖的影响.方法 牛膝药渣水提物的分析采用Diaion HP-20大孔吸附树脂、Sephadex LH-20、ODS、硅胶以及HPLC制备柱进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定所得化合物的结构.MTF法评价其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖作用的影响.结果 从中分离得到10个化合物,分别鉴定为cynarasaponin A(1)、人参皂苷R0 (2)、竹节参皂苷Ⅳa(3)、竹节参苷Ⅳa甲酯(4)、竹节参皂苷Ⅳa乙酯(5)、竹节参皂苷Ⅳa丁酯(6)、竹节参皂苷1(7)、姜状三七苷R1(8)、齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(9)、齐墩果酸-3-O-β-D-葡萄糖醛酸乙酯(10).化合物1、6、7、8对HUVEC增殖有明显的抑制作用.结论 化合物1和10为首次从牛膝中分离得到,化合物1、6、7、8有较强的抑制细胞增殖作用.

为考察工业三七药渣中是否含有三七素,探究提取、分离纯化三七素的方法,并考察三七素的止血药理活性.实验以提取过三七总皂苷的工业三七药渣为原料,采用水提醇沉法,过滤沉淀得滤液,回收滤液中的乙醇得粗提液,粗提液经001 ×7阳离子树脂柱分离,薄层鉴别法检测洗脱液中是否含有三七素,收集与三七素对照品显相同斑点的洗脱液,经丙酮结晶,冷冻干燥得三七素供试品;高效液相色谱法测定三七素供试品中三七素的含量;玻片法测定三七素供试品的凝血时间.建立的高效液相色谱法测定三七素含量,该方法准确度、精密度、稳定性均良好,三七素供试品中三七素含量为59.03％;小鼠腹腔注射不同剂量的三七素供试品与阳性组比较,均能显著缩短凝血时间.建立的高效液相色谱法可用于三七素供试品含量的测定;三七素供试品能显著缩短凝血时间;三七素供试品中三七素含量反推到工业三七药渣中含量为0.72％;采用价格低廉的001 ×7阳离子交换树脂柱分离纯化三七素,此方法简单易行,成本低廉,适合大工业生产.综上,从工业三七药渣中提取纯化三七素具有良好的综合利用前景.

目的 从工业三七药渣中提取、分离及纯化三七多糖,测定三七粗多糖及三七多糖洗脱组分的含量、分子量和pH,并考察其对人牙周膜干细胞、小鼠成骨细胞体外增殖活性的影响.方法 以提取过三七总皂苷的工业三七药渣为原料,采用水提醇沉法得到三七粗多糖,通过DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱分离纯化三七粗多糖;采用蒽酮-硫酸法测定三七粗多糖及三七多糖洗脱组分的含量,用高效凝胶渗透色谱法测定其分子量;采用MTT法测定三七粗多糖及三七多糖洗脱组分对人牙周膜干细胞、小鼠成骨细胞体外增殖活性的影响.结果 水提醇沉法得到三七粗多糖的含量为69.7％,得率2.43％;通过DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱分离纯化三七粗多糖,得到水洗脱部分PNPS Ⅰ及NaCl溶液梯度洗脱部分PNPSⅡ～Ⅴ;三七粗多糖、PNPS Ⅰ～Ⅴ重均分子量分别为38.59、32.00、96.98、148.60、154.40、113.60 kDa;在一定浓度范围内,三七粗多糖、PNPS Ⅰ～Ⅱ能促进人牙周膜干细胞的生长,PNPSⅢ～Ⅳ能抑制其生长;三七粗多糖、PNPS Ⅰ～Ⅳ具促进小鼠成骨细胞生长的作用.结论 通过DEAE Sepharose FastFlow阴离子交换层析柱分离纯化三七粗多糖,得到1种中性多糖和4种酸性多糖;三七粗多糖、PNPS Ⅰ～Ⅱ能促进人牙周膜干细胞的体外增殖,三七粗多糖、PNPS Ⅰ～Ⅳ具促进小鼠成骨细胞生长的作用.

目的 从提取过三七总皂苷的工业药渣中提取、分离三七多糖,考察其吸湿、保湿性能及体外抗氧化活性.方法 以工业三七药渣为原料,采用水提醇沉法提取三七粗多糖(crude polysaccharide from Panax notoginseng,CPPN),DEAE Sepharose Fast Flow分离纯化CPPN.以甘油和海藻酸钠为对照,测定三七多糖在相对湿度(relative humidity,RH)为43％和81％下的吸湿性能及干燥硅胶环境下的保湿性能.以DPPH自由基、ABTS+自由基和羟基自由基清除试验考察三七多糖体外抗氧化活性.结果 CPPN经DEAE Sepharose Fast Flow分离得到一种中性多糖(neutral polysaccharide from Panax notoginseng,NPPN)和三种酸性多糖(acid polysaccharide from Panax notoginseng,APPN),分别命名为 NPPN、APPN Ⅰ、APPNⅡ 和 APPNⅢ,其得率分别为27.68％、11.89％、15.41％和21.04％.在 RH 为43％时,吸湿率为甘油＞APPNⅢ＞海藻酸钠＞CPPN＞APPN Ⅱ＞APPN Ⅰ＞NPPN;在 RH 为81％时,吸湿率为甘油＞APPNⅢ＞海藻酸钠＞APPNⅡ＞APPN Ⅰ＞CPPN＞NPPN;APPNⅢ吸湿性优于海藻酸钠.在干燥硅胶环境中,保湿率为APPNⅢ＞海藻酸钠＞CPPN＞APPNⅡ＞甘油＞APPN Ⅰ＞NPPN.对 DPPH 自由基、ABTS+自由基清除率为 CPPN＞APPN Ⅰ＞APPN Ⅲ＞APPN Ⅱ＞NPPN,对羟基自由基清除率为CPPN＞APPNⅢ＞APPNⅡ＞APPN Ⅰ＞NPPN.结论 CPPN及分离得到的各组分多糖均有一定吸湿、保湿性能和体外抗氧化活性,其中APPN Ⅲ吸湿保湿性能最强,CPPN体外抗氧化活性最强.

目的 分离纯化三七药渣中主要多糖组分,分析其单糖组成,并对比研究各组分多糖的抗氧化活性.方法 采用水提醇沉法提取三七药渣粗多糖;经DEAE Fast Flow阴离子交换柱、Sephadex G-50柱色谱法进行分离纯化.采用高效凝胶渗透色谱(HPGPC)法测定其相对分子质量及纯度,通过扫描电子显微镜(Scanning Electron Microscope,SEM)、傅里叶变换红外光谱仪(Fourier Transform Infrared spectroscopy,FT-IR)、HPLC-衍生化等方法对各组分多糖的单糖组成和初级结构进行分析.分析其抗氧化能力以及对RAW 264.7细胞氧化损伤的保护作用.结果 分离得到3个多糖组分(PNPS-0、PNPS-0.2、PNPS-0.3),3者的单糖组成和比例存在差异:PNPS-0主要由D-葡萄糖(52.28％)和D-半乳糖(34.14％)组成;PNPS-0.2主要由D-半乳糖(40.89％)、D-阿拉伯糖(19.38％)和D-葡萄糖(12.25％)组成;PNPS-0.3主要由D-葡萄糖醛酸(40.43％)、D-半乳糖(22.61％)和D-葡萄糖(18.32％)组成.抗氧化结果表明,PNPS-0.3的总还原能力最强,对DPPH自由基、OH-自由基、ABTS自由基以及超氧阴离子自由基的清除活性最高,对RAW 264.7细胞氧化损伤保护作用最好,并呈现浓度相关性.结论 从三七药渣中得到了 3种具有抗氧化活性的多糖片段,抗氧化活性与多糖结构密切相关.为三七资源的二次开发利用提供了新的研究思路.