目的:探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide，LBP)干预雪旺细胞(Schwann cells，SCs)联合异种神经移植体(acellular nerve xenograft，ANX)修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法:取大鼠的坐骨神经SCs，行原代培养，培养至第三代。将0、50、100、150、200、250、500 mg/L的LBP与SCs混合培养，分成七组。在培养皿中培养后第1、3、5、7和9天，用CCK-8法检测各组SCs生物学活性，通过rt-PCR检测各组脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor，BDNF)，神经生长因子(nerve growth factor，NGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)的表达水平，筛选干预SCs的LBP最适浓度。在无菌条件下制备10 mm坐骨神经缺损的大鼠模型，选取兔的胫神经制作ANX，将SD大鼠分为三组，每组10只：ANX组、ANX-SCs组和ANX-LBP-SCs组。术后8周，通过检测坐骨神经功能指数(sciatic nerve function index，SFI)、神经传导速度(motor nerve conduction velocity，MCV)，应用rt-PCR检测再生神经内凋亡因子(Caspase-3)的表达水平，另通过透射电镜比较三组模型的神经移植体内的神经纤维及髓鞘再生。结果:利用CCK-8测定各孔不同时间点SCs活性。在第2～4天，七组的活性差异无统计学意义( P>0.05)，第6～8天150～250 mg/L LBP-SCs组增殖活性强于其他浓度组，差异有统计学意义( P<0.05)。通过q-PCR检测200 mg/L LBP-SCs组中BDNF、NGF及bFGF的mRNA表达量高，与其他组相比差异有统计学意义( P<0.05)。移植术后8周，发现ANX-LBP-SCs组热刺痛实验、SFI检测、神经传导速度数据更优，且Caspase-3表达量最低。透射电镜检测结果显示ANX-LBP-SCs组髓鞘水肿程度及神经纤维再生情况优于其他组。 结论:LBP浓度为200 mg/L时，可促进SCs的增殖，并分泌大量神经营养因子。含有LBP干预的SCs培养体系联合ANX移植可显著促进周围神经再生。

目的:通过血浆代谢组学研究三七皂苷R1(notoginsenside R1,NGR1)治疗神经炎症的分子作用机制.方法:采用腹腔注射 0.83 mg?kg-1 脂多糖(LPS)构建小鼠神经炎症模型,应用NGR1(30 mg?kg-1)进行给药治疗,眼眶静脉丛取血并分离血浆.在使用苏木素-伊红(HE)染色法检测小鼠脑组织损伤情况、采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测神经炎症相关指标及酶联免疫吸附反应(ELISA)技术分析血清炎症因子变化的基础上,应用液相色谱-质谱法(LC-MS)对各组小鼠血浆样品进行代谢组学分析,通过人类代谢组数据库(HMDB)、京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行差异内源代谢物的鉴定,并应用MetaboAnalyst和Metscape数据库进一步分析差异内源代谢物的关键代谢途径,最后通过qRT-PCR检测调控关键代谢途径基因表达水平的变化.结果:NGR1 能够明显改善小鼠脑组织神经损伤,明显降低中枢神经炎症因子离子化钙结合适配分子 1(Iba-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6 的mRNA水平,显著提高转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA水平,显著降低血清炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.此外,代谢组学发现模型组与给药组之间小鼠血浆中皮质酮、吲哚丙酮酸、泛酸、12S-羟基 5Z,8Z,10E,14Z-二十碳四烯酸、PC(18:3(9Z,12Z,15Z)/16:1(9Z))等 22 个差异内源代谢物发生明显变化,主要涉及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢及类固醇激素生物合成等代谢通路.qRT-PCR结果显示,给药后能显著逆转关键代谢途径中 2A型磷脂酶A2(PLA2G2A)、1B型磷脂酶A2(PLA2G1B)、12A型磷脂酶A2(PLA2G12A)、醛酮还原酶 1D1(AKR1D1)、羟基类固醇 11β脱氢酶 1(HSD11B1)、羟基类固醇 11β脱氢酶 2(HSD11B2)mRNA表达水平.结论:NGR1 对LPS诱导的神经炎症具有治疗作用,并可能通过调控皮质酮等关键代谢物及甘油磷脂代谢、亚油酸代谢及类固醇激素生物合成等关键途径发挥抗神经炎症的作用,将为深入研究NGR1 抗神经炎症的作用机制提供参考.

目的 以三七药渣为原料,通过益生菌发酵比较不同益生菌以及复合益生菌对各指标成分影响的差异,探究最佳发酵工艺.方法 采用单因素、Box-Behnken响应面法优化发酵工艺,并通过体外抗氧化实验评价发酵产物的抗氧化能力.结果 最佳发酵工艺为有氧发酵 48 h、厌氧发酵 36 h,嗜热链球菌、两歧双歧杆菌、嗜酸乳杆菌的比例为 2∶3∶1,料液比0.14 g·mL-1,接菌量 5%,温度 33℃.在最佳发酵工艺条件下,三七药渣中性多糖、酸性多糖、总黄酮的含量分别提高了105.64%、96.98%、123.83%,相较于单菌发酵均显著升高.发酵产物清除 DPPH、ABTS 自由基的 IC50 值分别为 1.774、3.065 mg·mL-1,还原Fe3+的能力为 0.138 mmol FeSO4·g-1,较未发酵药渣显著增强.结论 最佳发酵工艺能显著提高三七药渣中各指标成分含量,显著增强其抗氧化能力,相较单菌发酵各指标成分含量均显著提高,提示上述益生菌之间没有明显的拮抗作用.研究结果为三七药渣的资源化利用提供了科学依据和数据支撑.

目的:探讨三七总皂苷(PNS)通过p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路对脂多糖(LPS)诱导活化的BV2小胶质细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法:将BV2小胶质细胞分为空白对照组(Control)、LPS激活组和LPS+三七总皂苷干预组(LPS+PNS).CCK-8法检测BV2小胶质细胞的活力,确定最适合的药物干预浓度.利用Western Blot和免疫荧光检测BV2小胶质细胞中p38 MAPK和TNF-α的表达及p38 MAPK磷酸化水平(p-p38 MAPK)变化.结果:与空白对照组相比,PNS对BV2小胶质细胞的细胞活力无显著差异,最终选定100 mg/L作为药物干预浓度.Western Blot、免疫荧光结果提示,LPS激活后,BV2小胶质细胞中TNF-α的表达显著升高,p38 MAPK磷酸化水平增加(P＜0.05);PNS干预后,与LPS激活组相比,TNF-α表达显著下降,p38 MAPK磷酸化水平降低(P＜0.05).使用p38 MAPK通路抑制剂(SB203580)作用后,PNS联合SB203580组(LPS+PNS+SB203580)中,TNF-α表达及p38 MAPK磷酸化水平变化与LPS+PNS组相比无显著差异(P＞0.05).此外,p38 MAPK在各组的变化无显著性差异(P＞0.05).结论:PNS可能通过p38 MAPK通路抑制活化的BV2小胶质细胞分泌的炎性因子TNF-α的表达.

目的 运用网络药理学和分子对接技术探究三七-淫羊藿治疗股骨头坏死(ONFH)的作用机制.方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台筛选三七-淫羊藿的活性成分及其作用靶点,利用GeneCards?数据库、OMIM?数据库筛选ONFH的相关靶点,取交集后获得三七-淫羊藿治疗ONFH的潜在作用靶点.通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-作用靶点网络,筛选关键活性成分.通过STRING数据库和Cytoscape软件构建蛋白-蛋白相互作用网络,筛选核心靶点.使用DAVID数据库对潜在作用靶点进行功能富集分析和通路富集分析.最后,对关键活性成分与核心靶点蛋白进行分子对接验证.结果 最终获得三七-淫羊藿活性成分30个及其作用靶点214个,ONFH的相关靶点2 112个.取交集后得到三七-淫羊藿治疗ONFH的潜在作用靶点131个.槲皮素、木犀草素、山柰酚、脱水淫羊藿素为三七-淫羊藿治疗ONFH的关键活性成分,蛋白激酶B1、血管内皮生长因子A、原癌基因c-Jun、肿瘤蛋白p53、白细胞介素1β为三七-淫羊藿治疗ONFH的核心靶点.三七-淫羊藿治疗ONFH的潜在作用靶点主要涉及对脂多糖的反应、对外来刺激的反应、细胞缺氧反应等生物过程,以及白细胞介素17信号通路、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、糖尿病并发症中的晚期糖基化终末产物-晚期糖基化终末产物受体信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路等信号通路.分子对接结果显示,关键活性成分与核心靶点蛋白均具有较好的结合活性(结合能≤-5 kcal/mol).结论 三七-淫羊藿治疗ONFH的作用机制可能与调控免疫-炎症反应、调控破骨细胞与成骨细胞的凋亡和分化、改善血运等有关.

目的 研究三七多糖(PNPS)不同组分在D-半乳糖致氧化损伤衰老模型小鼠体内的抗氧化活性及其脏器保护作用.方法 将KM小鼠随机分为正常组、模型组、维生素C(VC)组(给予200 mg·kg-1VC)、粗多糖(CPPN)组、中性多糖(NPPN)组和酸性多糖(APPN-Ⅰ、APPN-Ⅱ、APPN-Ⅲ)组(分别给予400 mg·kg-1 CPPN、NPPN、APPN-Ⅰ、APPN-Ⅱ、APPN-Ⅲ).除正常组外,均用腹腔注射1 g·kg-1 D-半乳糖方法建立氧化损伤衰老小鼠模型.连续给药42 d后处死小鼠,制备血清和肝匀浆.用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量;用四唑盐法测定超氧化物歧化酶(SOD)含量;用双抗体夹心法测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量.结果 正常组、模型组、VC组、CPPN组、NPPN组、APPN-Ⅰ 组、APPN-Ⅱ组和 APPN-Ⅲ组血清 SOD 分别为(15.07±0.69)、(12.79±1.51)、(15.56±1.01)、(13.69±0.96)、(14.27±0.64)、(14.31±0.99)、(14.18±0.79)和(15.85±0.89)U·mL-1,血清 GSH-Px 分别为(105.35±4.97)、(90.36±4.31)、(111.51±7.00)、(113.03±8.06)、(118.77±5.19)、(123.60±8.08)、(131.65±3.60)和(149.22±13.32)ng·L-1,血清MDA 分别为(1.72±0.26)、(4.16±0.92)、(2.26±0.59)、(2.82±0.47)、(2.46±0.50)、(1.98±0.41)、(2.39±0.39)和(2.07±0.24)nmol·mL-1,肝SOD 分别为(234.22±3.84)、(205.04±7.28)、(234.63±6.37)、(214.99±17.66)、(234.13±3.63)、(234.63±3.44)、(233.87±5.63)和(235.42±2.33)U·mgprot-1,肝 GSH-Px 分别为(274.27±23.72)、(207.00±15.22)、(257.68±16.39)、(249.79±18.78)、(252.62±10.92)、(256.25±21.83)、(261.20±17.52)和(263.16±17.98)ng·L-1,肝 MDA 分别为(35.70±3.52)、(49.65±6.32)、(36.15±2.48)、(39.17±4.29)、(37.40±6.19)、(35.34±4.06)、(35.90±5.36)和(33.31±7.64)nmol·mgprot-1.模型组与正常组比较,小鼠血清和肝中的SOD、GSH-Px均显著降低,MDA含量显著升高(均P＜0.01).经三七多糖不同组分治疗后,小鼠体内氧化指标明显改善,其中 APPN-Ⅲ抗氧化活性最好,可提高血清和肝中的SOD、GSH-Px活性,降低MDA的含量(均P＜0.01).结论 三七多糖不同组分在体内均有抗氧化活性和脏器保护作用,其中APPN-Ⅲ的抗氧化活性最好,有很好的脏器保护作用.

目的 构建黄精炮制品多糖的酶水解产物指纹图谱,结合化学计量学方法评价不同蒸晒次数黄精炮制品多糖的差异.方法 采用糖苷酶水解,结合高效薄层色谱(high thin-layer chromatography,HPTLC)、亲水作用色谱-高效液相色谱-蒸发光检测器(hydrophilic interaction liquid chromatography-high performance liquid chromatography-evaporative light scattering detector,HILIC-HPLC-ELSD)和超高效液相色谱-四级杆飞行时间串联质谱(ultra high pressure liquid chromatography-quadrupole time of flight tandem mass spectrometry,UHPLC-QTOF/MS)对相应的酶解产物进行高效分离和检测.由此产生的自下而上的指纹图谱反映了黄精炮制品多糖的变化,通过相似度和偏最小二乘-判别分析(partial least squares-discriminant analysis,PLS-DA)对指纹图谱进行综合评价.结果HPTLC分析发现,果糖随着蒸晒次数的增加逐渐降低,结合色谱分析发现,六蒸六晒和十二蒸十二晒为黄精炮制过程中的转折点.同时根据酶水解中寡糖的变化,利用相似度和PLS-DA对不同蒸晒次数的黄精炮制品进行了清晰的聚类.结合UHPLC-QTOF/MS分析表明,不同蒸晒次数黄精炮制品中含有蔗糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖及蔗果八糖.结论 基于酶解法分析不同蒸晒次数样品的质量动态变化,结合所建立的多元指纹图谱,进一步阐释了不同蒸晒次数黄精炮制品的科学内涵.

目的 探究三七多糖(PPN)对小鼠抗运动疲劳的作用.方法 将100只KM小鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组,每组20只.低、中、高剂量实验组分别给予100、200、400 mg·kg-1 PPN;阳性对照组给予200 mg·kg-1抗坏血酸;阴性对照组给予0.1 mL·10 g-1 0.9％NaCl.5组小鼠每天灌胃给药1次,连续28 d.末次给药后,分别测定负重游泳时间;小鼠非负重游泳90 min后,休息30 min,检测乳酸(LD)、血尿素氮(BUN)、糖原和丙二醛(MDA)水平;以脏器指数和组织病理学检测PPN的安全性.结果 阴性对照组、阳性对照组和低、中、高剂量实验组小鼠体内LD水平分别为(4.76±0.84)、(2.86±0.34)、(3.00±0.69)、(2.35±0.65)、(1.39±0.48)mg·kg-1,BUN 含量分别为(13.65±1.25)、(12.55±0.91)、(12.12±1.24)、(11.06±1.30)、(9.85±1.05)mmol·L-1,肝糖原含量分别为(3.24±0.56)、(11.11±2.16)、(5.61±1.41)、(6.60±1.49)、(12.05±2.25)mg·g-1,MDA 水平分别为(2.36±0.21)、(1.23±0.41)、(1.93±0.23)、(1.73±0.21)、(1.04±0.18)mg prot·mL-1.阳性对照组和低、中、高剂量实验组的上述指标与阴性对照组比较,在统计学上差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).结论 PPN可以增加小鼠运动耐力,具有抗疲劳作用,本研究为PPN在抗疲劳研究领域的应用提供了一定的理论基础.

目的 探究痹祺胶囊祛风除湿、活血止痛功能的药效物质基础.方法 通过建立脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的单核巨噬细胞白血病细胞RAW264.7体外炎症模型、细胞核因子-κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor κB ligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-stimulating factor,M-CSF)与 RAW264.7 细胞共培养建立破骨细胞分化模型、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞RA-HFLS增殖模型,分别探讨痹祺胶囊发挥抗炎活性、抑制破骨细胞形成、抑制RA-HFLS细胞增殖的作用机制及药效物质基础.MTS法检测细胞增殖活性,ELISA法检测细胞上清中一氧化氮(nitric oxide,NO)、TNF-α和白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,TRAP染色法检测破骨细胞分化数量,流式细胞术检测细胞凋亡情况,RT-qPCR法检测细胞中组织蛋白酶K(cathepsin K,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)、基质金属蛋白酶-3(matrix metalloproteinase-3,MMP-3)、RANKL mRNA相对表达情况.结果 痹祺胶囊及其19个单体成分均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞内NO、TNF-α和IL-6的释放,推测19个化合物是痹祺胶囊发挥抗炎作用的药效物质基础.痹祺胶囊及其13个单体成分均能显著减少RANKL和M-CSF诱导RAW264.7分化为破骨细胞的数量,并能明显降低破骨细胞标志基因CTSK和TRAP的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、党参炔苷、茯苓酸、丹参素、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、藁本内酯、甘草次酸和甘草苷为痹祺胶囊发挥治疗骨破坏、缓解关节疼痛作用的主要物质基础.痹祺胶囊及其9个单体成分能明显抑制TNF-α诱导的RA-HFLS细胞增殖,并且能显著促进RA-HFLS细胞的凋亡以及明显降低MMP-3和RANKL基因的相对表达量,推测马钱子碱、士的宁、丹参素、丹参酮ⅡA、阿魏酸、藁本内酯、蜕皮甾酮、次黄嘌呤、甘草次酸为痹祺胶囊中发挥抑制滑膜增生作用的药效物质基础.结论 通过体外细胞实验初步确定马钱子碱、士的宁、党参炔苷、白术内酯Ⅲ、茯苓酸、丹参素、丹参酮ⅡA、丹酚酸B、迷迭香酸、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、阿魏酸、藁本内酯、蜕皮甾酮、牛膝皂苷D、次黄嘌呤、甘草次酸、甘草苷为痹祺胶囊主要药效物质基础.

三七是一种传统中药,具有散瘀止血、消肿定痛的功效.现代药理学研究表明,三七具有抗炎、消除氧自由基、抗氧化、抗衰老等作用,其主要活性成分为三七多糖.因其含有丰富的多糖类物质和复杂的糖结构,三七多糖生物活性多样.研究发现,三七多糖在维护和改善皮肤健康中有重要作用,这与TGF-β/Smad信号通路、Nrf2/AREx信号通路、MAPK信号传导等密切相关.本文对三七多糖在抗皮肤氧化、抗皮肤衰老、防止紫外线诱导皮肤光老化、皮肤保湿、皮肤免疫调节等方面的作用进行综述,以期为三七多糖在皮肤疾病方面的进一步研究提供参考.