目的:探讨促肾上腺皮质激素释放因子2型受体（CRFR2）对慢性偏头痛小鼠痛觉敏化及焦虑的调控作用及潜在机制。方法:将48只C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为对照组、模型组、NBI35965组、K41498组，每组12只。后3组小鼠于第1、3、5、7、9天腹腔注射10 mg/kg硝酸甘油建立慢性偏头痛模型，NBI35965组及K41498组小鼠于第2、4、6、8天双侧三叉神经脊束尾核分别注射100 nL NBI35965、K41498溶液，对照组小鼠注射同体积生理盐水。第1、3、5、7、9天腹腔注射2 h后及第10天上午11时采用Von frey纤维丝检测小鼠眶额部机械痛阈值。于第11天上午11时采用高架十字迷宫实验检测小鼠的焦虑样行为。采用Western blotting实验检测小鼠三叉神经脊束尾核中促肾上腺皮质激素释放因子（CRF）、促肾上腺皮质激素释放因子1型受体（CRFR1）、CRFR2蛋白的表达。采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测小鼠三叉神经脊束尾核中 CRFR1及 CRFR2 mRNA的表达。采用免疫荧光染色检测小鼠三叉神经脊束尾核中降钙素基因相关肽（CGRP）、即刻早期基因（c-fos）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及离子钙结合适配器分子1（Iba-1）蛋白的表达。 结果:（1）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠第3、5、7、9、10天的眶额部机械痛阈值较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠第7、9、10天的眶额部机械痛阈值较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（2）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠的开臂进入次数较少，开臂停留时间较短，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠的开臂进入次数较多，开臂停留时间较长，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（3）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CRF和CRFR2蛋白的表达较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CRF蛋白的表达较低，差异有统计学意义（ P<0.05）。（4）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中 CRFR2 mRNA的表达较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。（5）与对照组比较，模型组、NBI35965组、K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CGRP、c-fos、Iba-1、GFAP蛋白的表达均较高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与模型组比较，K41498组小鼠三叉神经脊束尾核中CGRP及c-fos蛋白的表达较低，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:CRFR2通过调控三叉神经脊束尾核的神经元活化及CGRP释放而影响慢性偏头痛小鼠眶额部痛觉敏化及焦虑样行为的发生发展。

目的:探讨针刺太冲穴对肝阳上亢型偏头痛模型鼠镇痛作用的可能机制.方法:66只SD大鼠随机分为空白对照组(n=10)、模型组(n=56),以附子汤灌胃加右肩颈部皮下注射硝酸甘油建立肝阳上亢偏头痛模型,其中50只大鼠成模,将成模大鼠随机分为模型组、太冲组、非穴组、太冲+DPCPX(A1R拮抗剂)组和太冲+EGF(ERK1/2激动剂)组,每组10只.太冲组、太冲+DPCPX组及太冲+EGF组针刺双侧太冲穴,非穴组针刺双侧胁下非穴,均留针30 min.观察各组大鼠行为学(耳红持续时间、挠头及爬笼次数)、三叉神经节(TG)和三叉神经脊束尾核(TNC)中A1R、ERK1、ERK2、CGRP的mRNA及蛋白水平.结果:除空白对照组外,其余各组均在注射硝酸甘油后3～4 min出现耳红,持续约3 h消失;与模型组比较,太冲组耳红持续时间较短,差异具有统计学意义(P＜0.05),与太冲组比较,非穴组、太冲+DPCPX组及太冲+EGF组耳红持续时间较长,差异具有统计学意义(均P＜0.05);针刺前1 h,除空白对照组外,各组挠头、爬笼次数明显增加且各组间差异无统计学意义(均P＞0.05);针刺后1 h、2 h,与模型组比较,太冲组挠头、爬笼次数减少,差异具有统计学意义(P＜0.05);与太冲组比较,非穴组、太冲+DPCPX组及太冲+EGF组挠头、爬笼次数增加,差异具有统计学意义(均P＜0.05).与空白对照组比较,模型组TG、TNC中ERK1、ERK2、CGRP mRNA和蛋白表达均增加,差异具有统计学意义(均P＜0.05),A1Rm RNA和蛋白表达均减少,差异具有统计学意义(均P＜0.05);与模型组比较,太冲组大鼠TG、TNC中ERK1、ERK2、CGRP mRNA和蛋白表达均减少,差异具有统计学意义(均P＜0.05),A1R mRNA和蛋白表达均增加,差异具有统计学意义(均P＜0.05);与太冲组比较,非穴组、太冲+DPCPX组及太冲+EGF组大鼠TG、TNC中ERK1、ERK2、CGRP mRNA和蛋白表达均增加,差异具有统计学意义(均P＜0.05),A1R mRNA和蛋白表达均减少,差异具有统计学意义(均P＜0.05).结论:针刺太冲穴治疗偏头痛的可能机制是通过激活TG和TNC的A1R,抑制ERK1/2磷酸化,进而减少CGRP的释放来缓解偏头痛.

目的:观察P2X4受体 (P2X4 receptor, P2X4R) 在慢性偏头痛 (chronic migraine, CM) 大鼠三叉神经脊束尾核 (trigeminal nucleus caudalis, TNC) 的表达变化,探讨其在CM中的作用.方法:SD雄性大鼠随机分为5组,对照组 (n = 12)、模型组 (n = 12)、模型+溶剂组 (n = 6)、模型+TNP-ATP 30 nmol组 (n = 6)、模型+TNP-ATP 60 nmol组 (n = 6).硬脑膜反复滴注 "炎性汤" (inflammatory soup, IS) 建立CM模型.von Frey test检测眶周及后足机械痛阈值,Western blot检测P2X4R及神经元激活标志蛋白c-Fos的表达,免疫荧光检测P2X4R定位情况.结果:荧光染色显示P2X4R主要表达于TNC小胶质细胞.与对照组相比,模型组大鼠眶周及后足痛阈值显著降低 (P < 0.01),P2X4R及c-Fos表达量显著上调 (P < 0.05).给予P2X4R抑制剂TNP-ATP后,大鼠眶周及后足痛阈值显著升高 (P < 0.05), c-Fos表达量显著降低 (P < 0.05).结论:TNC小胶质细胞P2X4R表达上调,可能通过影响神经元的激活从而参与CM发病过程.

目的 探讨天麻制剂各有效成分对偏头痛模型大鼠的降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)与腺苷A1受体(adenosine A1 receptor,A1R)表达的影响.方法 将SPF级雄性SD大鼠84只随机分为7组(n=12):假手术组(A组/阴性对照组)、电刺激三叉神经节(electrical stimulation of the trigeminal ganglion,ESTG)模型组(B组)、舒马普坦干预组(C组/阳性对照组)、天麻素干预组(D组)、对羟基苯甲醇干预组(E组)、香英兰醇干预组(F组)、β-谷甾醇干预组(G组).通过建立ESTG模型,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immu-no sorbent assay,Elisa)、免疫荧光及Western-Blot技术检测天麻制剂各有效成分对CGRP与A1R表达的影响.结果 与A组相比,B组大鼠三叉神经节(trigeminal ganglia,TG)、三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)中的CGRP表达明显增高,A1R的表达明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01).与B组相比,C、D组大鼠TG、TNC中的CGRP表达明显降低,A1R的表达明显增高,差异具有统计学意义(P<0.01);而E、F、G组与B组之间差异无统计学意义(P>0.05).与C组相比,D组大鼠TG、TNC中的CGRP、A1R的表达无明显差异(P>0.05).结论 预防应用天麻素,与舒马普坦一样可对偏头痛发作起到一定保护作用,而香英兰醇、对羟基苯甲醇及 β-谷甾醇对缓解偏头痛的作用疗效甚微,且天麻制剂有效成分中天麻素可通过激活A1R及抑制CGRP表达来抑制偏头痛的发生.

目的:观察炎性小体NLRP3(Nod-like receptor protein 3)在慢性偏头痛小鼠三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)中的表达变化,并探讨其在慢性偏头痛中的作用.方法:C57BL6/J雄性小鼠随机分为5组,分别为生理盐水对照组(n=16),模型组(n=16),模型+溶剂组(n=8),模型+NLRP3抑制剂5 mg/kg组(n=8),模型+NLRP3抑制剂10 mg/kg组(n=8).采用腹腔隔日重复注射硝酸甘油(nitroglycerin,NTG)建立慢性偏头痛小鼠模型.使用von Frey test测定小鼠眶周和后足机械痛阈值.Western blot检测NLRP3及神经元活化标志蛋白p-ERK的表达变化,免疫荧光检测NLRP3在TNC的定位情况.结果:反复腹腔注射NTG后,小鼠眶周和后足的机械痛阈显著降低(P<0.05),而TNC部位的NLRP3和p-ERK蛋白表达显著增加(P<0.05).使用NLRP3的小分子抑制剂MCC950可以显著提高小鼠眶周和足底机械痛阈值,降低p-ERK的表达.荧光染色显示NLRP3与小胶质细胞共定位.结论:本研究表明TNC部位NLRP3炎性小体上调,可能通过影响神经元活化状态参与慢性偏头痛的病理生理过程.

目的 观察腹腔注射天麻素对慢性偏头痛大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制.方法 取清洁级成年雄性SD大鼠24只,随机分为空白对照组、托吡酯组、模型组、天麻素组各6只.除空白对照组外,其他三组采用间歇性腹腔注射硝酸甘油(NTG)建立慢性偏头痛模型.注射NTG前30 min,模型组、托吡酯组、天麻素组分别给予腹腔注射生理盐水5 mL、托吡酯30 mg/kg、天麻素200 mg/kg,每日1次,共干预11 d;空白对照组不给予药物干预.干预第3、5、7、9、11天,用Vonfery电子机械痛测试仪、BW-Plantar 390足底热测痛仪测试给予NTG前后大鼠后爪的机械痛阈值与热痛阈值.干预第11天处死大鼠,取大鼠三叉神经节(TG)及三叉神经脊束尾侧核(TNC).分别用RT-PCR法、Western blotting法检测TG、TNC中脑源性神经营养因子(BDNF)、降钙素基因相关肽(CGRP)mRNA及蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组不同时间点基础机械痛阈、基础热痛阈、急性机械痛阈、急性热痛阈低,行为学评分高,模型组BDNF、CGRP mRNA及蛋白相对表达量高(P均<0.05).与模型组比较,托吡酯组、天麻素组不同时间点基础机械痛阈、基础热痛阈、急性机械痛阈、急性热痛阈高,行为学评分低,CGRP、BDNF mRNA及蛋白相对表达量低(P均<0.05).天麻素组与托吡酯组以上指标比较差异无统计学意义(P均>0.05).结论 天麻素可能通过抑制初级感觉伤害感受器释放BDNF、CGRP,从而提高慢性偏头痛大鼠的痛阈,改善其症状.

目的 观察愈风宁心滴丸对硝酸甘油诱导的偏头痛小鼠的影响,探索愈风宁心滴丸预防性治疗血管痉挛性偏头痛的作用及机制.方法 采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激BV2神经小胶质细胞,以愈风宁心滴丸(10、50、100 μmol/L)及葛根素(50 μmol/L)进行干预,收集细胞.将野生型C57BL/6J小鼠随机分成照组、模型组以及愈风宁心滴丸低、中、高剂量(200、360、600 mg/kg)组和葛根素组(37.8 mg/kg),给予药物进行干预,于第3、5、7、9、11天ip硝酸甘油溶液(10 mg/kg)建立小鼠偏头痛模型,第3天开始进行痛觉敏感(机械压痛和热敏耐受)行为学实验;实验结束后,取小鼠血清和脑组织.检测各组BV2细胞活性氧含量;采用Western blotting法检测各组细胞超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)、SOD2蛋白表达以及各组小鼠三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC)区降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)、c-Fos、磷酸化细胞外信号调节激酶(phosphorylated extracellular regulated protein kinases,p-ERK)及促炎细胞因子白细胞介素-6 (interleukin-6,IL-6)蛋白表达;采用qRT-PCR法检测各组细胞SOD1、SOD2、IL-1β、肿瘤坏死因子-α[(tumor necrosis factor-α,TNF-α)mRNA表达以及小鼠TNC区IL-1β、TNF-α mRNA表达;采用免疫荧光检测各组小鼠TNC区CGRP、c-Fos表达;采用生化分析仪检测各组小鼠血清中丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性.结果 愈风宁心滴丸显著上调BV2细胞抗氧化酶SOD1、SOD2 mRNA和蛋白表达水平(P＜0.05、0.01、0.001),降低活性氧水平(P＜0.01、0.001),抑制炎症因子IL-1β和TNF-α rnRNA表达(P＜0.001).与对照组相比,模型组小鼠基础痛阈值显著降低(P＜0.05、0.001),TNC区中CGRP、c-Fos、p-ERK蛋白表达水平显著升高(P＜0.01、0.001),TNC区IL-1β、TNF-α mRNA和IL-6蛋白表达水平显著升高(P＜0.01);与模型组相比,各给药组小鼠基础痛阈值显著升高(P＜0.05、0.01、0.001),TNC区中CGRP、c-Fos、p-ERK蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.01、0.001),TNC区IL-1β、TNF-α mRNA和IL-6蛋白表达水平显著降低(P＜0.05、0.01、0.001),且呈剂量相关性;愈风宁心滴丸对偏头痛小鼠血清中ALT、AST和ALP活性无显著性影响.结论 愈风宁心滴丸可能通过抑制血管扩张、抑制炎症反应、促进抗氧化酶表达等多重途径发挥预防性治疗血管痉挛性偏头痛的作用.

偏头痛是常见的原发性头痛性疾病,是目前世界上第三大流行疾病,第二大致残性神经系统疾病[1].然而,近几年国内外对偏头痛发病机制和治疗药物研究并没有显著进展.50％左右的患者对偏头痛症状复发的治疗并不满意.偏头痛发病机制非常复杂,也存在很多争议.它最初定义为由三叉神经控制的血管异常舒张而引起的血管疾病.随之皮质扩散抑制(cerebral spreading depression,CSD)学说、三叉神经血管反射学说、离子通道和遗传等学说相继问世[2].目前认为偏头痛先兆与CSD相关,而偏头痛与三叉神经血管系统的激活相关[3].三叉神经一级神经元位于三叉神经节内,轴突感受器将来自硬脑膜、三叉神经周围血管伤害性信号感觉传递,它的中央测止于三叉神经脊束尾核(trigeminal nucleus caudalis,TNC),TNC的二级神经元上升投射止于脑干、下丘脑,丘脑核区域处理来自三叉神经血管系统的感觉信号,构成典型偏头痛的病理机制.在血管功能的级联反应中,二级神经元也参与了神经递质的释放,特别是降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP),CGRP 与血管上受体结合后,使脑膜和皮质的血管扩张和血流增加,这两者都会进一步激活血管和脑膜痛觉感受器,导致偏头痛.