目的:研究聚乙烯吡咯烷酮(PVP)修饰的碳化钽(Ta 4C 3)纳米片对人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞放射敏感性的影响。 方法:合成并表征Ta 4C 3-PVP纳米片。利用荧光显微镜观察MDA-MB-231细胞对异硫氰酸荧光素(FITC)标记Ta 4C 3-PVP纳米片的摄取情况。CCK-8法检测不同浓度的Ta 4C 3-PVP纳米片对MDA-MB-231细胞的毒性。将MDA-MB-231细胞分为空白对照组、Ta 4C 3-PVP组、单纯照射组和Ta 4C 3-PVP＋照射组，克隆形成试验检测细胞放射敏感性的改变，酶标仪检测细胞内活性氧(ROS)水平和脂质氧化产物丙二醛(MDA)含量，免疫荧光法检测DNA双链断裂(DSBs)分子标志物γH2AX焦点形成及有丝分裂灾难形成。 结果:成功合成Ta 4C 3-PVP纳米片，呈薄片形貌，水动力直径和厚度分别约为143.93和1.35 nm。FITC标记的Ta 4C 3-PVP被MDA-MB-231细胞摄取后主要分布于细胞质中。Ta 4C 3-PVP纳米片在浓度高达400 μg/ml时，对MDA-MB-231细胞无明显毒性。克隆形成试验结果显示，50和100 μg/ml Ta 4C 3-PVP预处理使受照MDA-MB-231细胞的存活曲线分别较单纯照射组下移，且呈浓度依赖性，低、高浓度Ta 4C 3-PVP预处理的放射增敏比(SER D0 )分别为1.21和1.45。Ta 4C 3-PVP＋照射组于照射后2和12 h细胞内ROS水平均明显高于单纯照射组( q＝20.01、7.193， P< 0.05)，于照射后1、4和8 h Ta 4C 3-PVP＋照射组含≥5个γH2AX焦点的阳性细胞率均明显高于单纯照射组( q＝36.78、14.87、8.217， P< 0.05)，Ta 4C 3-PVP＋照射组于照射后24和48 h的MDA含量均明显高于单纯照射组( q＝14.02、7.015， P< 0.05)，Ta 4C 3-PVP＋照射组于照射后72 h的有丝分裂灾难比例明显高于单纯照射组( q＝16.33， P< 0.05)。 结论:Ta 4C 3-PVP纳米片通过提高辐射诱导的ROS水平增强人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞的放射敏感性。

目的:探讨微小RNA-1910-3p(miR-1910-3p)调控三方基序包含蛋白37(TRIM37)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞生物学行为的影响。方法:通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法评估人非小细胞肺癌细胞(A549细胞系)和人正常肺上皮细胞(BEAS-2B细胞系)中miR-1910-3p的表达水平。采用生物信息学分析、RT-qPCR、蛋白质印迹法(Western blot)分析miR-1910-3p对TRIM37的靶向调控关系。A549细胞分别转染阴性对照模拟物(NC组)、miR-1910-3p模拟物(miRNA-mimic组)、miR-1910-3p抑制剂(miRNA-inhibitor组)，细胞计数试剂盒(CCK-8)和克隆形成实验检测各组细胞增殖能力、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)实验检测各组细胞凋亡率、Transwell小室和细胞划痕实验分别检测各组细胞侵袭率和迁移率。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:RT-qPCR结果显示，A549细胞组中miR-1910-3p表达水平高于BEAS-2B细胞组(1.566±0.019比1.114±0.078， t＝10.920， P<0.01)。生物信息分析结果显示，TRIM37满足与miR-1910-3p的5′端2~8位种子区完全互补配对。RT-qPCR及Western blot结果显示，miR-1910-3p mimic组TRIM37表达水平低于mimic NC组[RT-qPCR(0.787±0.050)比(1.025±0.024)， t＝10.446， P<0.01；Western blot(0.124±0.003)比(0.223±0.003)， t＝47.047， P<0.01]；miR-1910-3p inhibitor组TRIM37表达水平高于inhibitor NC组[RT-qPCR(1.518±0.067)比(1.074±0.077)， t＝10.620， P<0.01；Western blot(0.730±0.005)比(0.243±0.004)， t＝123.124， P<0.01]。在NSCLC细胞中，miR-1910-3p mimic组细胞增殖能力、侵袭细胞数和细胞迁移率高于mimic NC组[相对细胞活力(122.50±4.08)%比(100.00±3.36)%， t＝14.632， P<0.01；克隆形成率(10.625±0.917)%比(6.000±0.500)%， t＝13.100， P<0.01；侵袭细胞数(195.800±25.762)个比(139.400±15.421)个， t＝4.200， P<0.01；细胞迁移率(46.330±4.163)%比(37.330±1.528)%， t＝3.515， P<0.05]，细胞凋亡率低于mimic NC组[(3.393±0.486)%比(8.227±0.465)%， t＝12.451， P<0.05]；miR-1910-3p inhibitor组细胞增殖能力、侵袭细胞数和细胞迁移率低于inhibitor NC组[相对细胞活力(79.79±4.76)%比(100.00±2.31)%， t＝12.914， P<0.01；克隆形成率(5.169±0.391)%比(6.981±0.163)%， t＝7.407， P<0.05；侵袭细胞数(62.800±6.760)个比(138.400±14.673)个， t＝10.464， P<0.01；迁移率(32.670±3.215)%比(39.330±1.528)%， t＝3.244， P<0.01]，细胞凋亡率高于inhibitor NC组[(11.910±0.898)%比(6.320±0.584)%， t＝9.041， P<0.05]。 结论:miR-1910-3p通过负调控TRIM37影响非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡。

目的:探讨miR-26a介导磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B, AKT)信号通路对脑缺血大鼠血管生成的影响。方法:将100只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、miR-NC组和miR-26a组。miR-NC组和miR-26a组分别侧脑室注射5 μl miR-26a模拟物阴性质控品和miR-26a模拟物，假手术组和模型组注射等量生理盐水。采用改良线栓法制作大脑中动脉闭塞模型，假手术组只插线不结扎。各组大鼠各取5只腹腔注射5-溴脱氧尿苷(bromodeoxyuridine, BrdU)，1次/d，连续7 d。将体外培养并转染的大鼠脑微血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells, BMECs)分为对照组、氧葡萄糖剥夺(oxygen-glucose deprivation, OGD)组、miR-NC组和miR-26a组。双荧光素酶实验验证miR-26a对第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10, PTEN)的调控作用。应用Longa评分检测大鼠神经功能损伤。氯化三苯四氮唑(triphenyltetrazolium chloride, TTC)染色法测定脑梗死体积。分别使用四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium, MTT)染色法、膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法和小管形成实验测定BMECs增殖、凋亡和血管生成。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应检测缺血脑组织及BMECs miR-26a表达。免疫荧光双标记法[BrdU/von Willebrand因子(von Willebrand factor, vWF)]检测大鼠血管内皮细胞增殖。蛋白质印迹分析检测缺血脑组织血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor, VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)、血管生成素-2(angiopoietin-2, Ang-2)、PTEN、PI3K、AKT表达。结果:生物信息学及双荧光素酶实验验证了miR-26a对PTEN的靶向调控。与假手术组比较，模型组和miR-NC组缺血脑组织miR-26a、VEGF、bFGF、Ang-2、PI3K、AKT表达和BrdU +/vWF +细胞数量增加，而PTEN表达降低( P均<0.05)；与模型组比较，miR-26a组各项指标效果更加显著( P均<0.05)。与对照组比较，OGD组和miR-NC组BMECs增殖和血管生成能力显著增强，细胞凋亡显著减少( P均<0.05)；与OGD组比较，miR-26a组各项指标效果更加显著( P均<0.05)。 结论:miR-26a能靶向抑制PTEN表达，通过激活PI3K/AKT信号通路上调血管生成相关因子(VEGF、bFGF和Ang-2)，促进脑梗死大鼠血管内皮细胞增殖和血管生成。

[目的]探讨脆弱拟杆菌(Bacteroides fragilis)中六型蛋白分泌系统(T6SS)对肠道屏障的影响及作用机制.[方法]采用自杀载体构建B.fragilis T6SS缺陷株.建立葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的肠炎小鼠模型,并分别补充PBS,B.fragilis WT和B.fragilis ΔT6SS,随后比较三组小鼠疾病特征、肠道屏障完整性的差异.利用荧光定量PCR和免疫组化检测小鼠紧密连接蛋白的表达.采用非靶向代谢组学比较各组小鼠肠道差异代谢物.[结果]T6SS缺失不影响B.fragilis的生物活性.与PBS对照组相比,B.fragilis WT明显改善小鼠的体重丢失、结肠长度等疾病指标,表现出对DSS诱导的肠炎的保护性,而B.fragilis ΔT6SS随着T6SS的敲除丧失了对DSS诱导的肠炎的保护性.小鼠血清中异硫氰酸荧光素葡聚糖含量和肠道病理切片均表明B.fragilis T6SS能改善小鼠肠道屏障的完整性.荧光定量PCR和免疫组化均表明B.fragilis T6SS影响肠道紧密连接蛋白的表达.非靶向代谢组学分析表明,与B.fragilis ΔT6SS组相比,B.fragilis WT组显著上调 96 个肠道差异代谢产物,其中多个代谢产物富集到胆碱能突触代谢和甘油磷脂代谢相关通路.[结论]拟杆菌T6SS改变肠道代谢组并提高肠道细胞紧密连接蛋白的表达,改善肠道屏障的通透性,参与到拟杆菌对肠道屏障的保护性.

目的:明确樱花素(SK)对2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的小鼠克罗恩病(CD)样结肠炎的作用及可能的分子机制.方法:将24只C57BL/6J小鼠随机分为对照(control)组、模型组(TNBS组)和SK(20 mg·kg-1·d-1)干预组,每组8只.采用疾病活动度指数(DAI)、体质量变化评估各组小鼠肠炎症状.以结肠长度、炎症评分及肠黏膜炎症介质肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-17A和IL-1β水平评估结肠炎症程度.通过测量外周血4 kD异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FD4)和肠型脂肪酸结合蛋白(I-FABP)水平、跨上皮电阻(TEER)及肠道细菌移位率评估小鼠肠屏障功能.采用GO功能富集分析和KEGG通路富集分析预测SK可能的作用途径和机制,并用动物实验进行验证.结果:SK干预组小鼠DAI评分和体质量显著低于TNBS组,但高于control组(P<0.05).SK干预组小鼠结肠缩短,组织学炎症评分和肠黏膜TNF-α、IL-6、IL-17A和IL-1β水平较TNBS组显著降低,但仍高于con-trol组(P<0.05).SK干预组小鼠外周血FD4和I-FABP水平显著低于TNBS组,但仍高于干预组(P<0.05),而TEER值则相反(P<0.05).SK干预组小鼠肠道细菌移位到肝脏、脾脏及肠系膜淋巴结的比例显著低于TNBS组,但仍高于control组(P<0.05).GO功能富集和KEGG通路富集分析提示SK的作用可能与细胞凋亡和Toll样受体(TLR)信号相关.TUNEL染色显示SK干预组肠上皮细胞凋亡比例较TNBS组显著下降,但仍高于control组(P<0.05).Western blot实验显示,SK干预组结肠黏膜组织中Bcl-2表达水平显著低于TNBS组,仍高于control组(P<0.05);而Bax/cleaved caspase-3(C-caspase-3)比值则相反(P<0.05).此外,SK干预组TLR4、MyD88及p-NF-κB p65蛋白水平较TNBS组均显著降低,但仍高于control组(P<0.05).结论:SK拮抗肠上皮细胞凋亡从而减轻CD样肠炎小鼠肠屏障功能障碍和肠炎症状可能与抑制TLR4信号激活有关.

目的:基于高效液相色谱(HPLC)指纹图谱及聚类分析对市售阿胶进行质量评价,以期探索可靠的质量控制方法.方法:收集市售的10批阿胶商品药材,采用盐酸水解法制备水解氨基酸样品溶液,以异硫氰酸苯酯(PITC)和三乙胺柱前衍生化后进行HPLC分析.采用Welch ultimate amino acid (4.6 mm×250mm,5μm)色谱柱,流动相A为0.1 mol/L醋酸钠溶液(调pH至6.5)-乙腈(93:7)、流动相B为乙腈-水(80:20),流速为1.0 ml/min,检测波长为254 nm,柱温为40℃.经梯度洗脱,得到各批阿胶中氨基酸含量,测定不同批次阿胶药材中17种氨基酸类成分的含量;使用相似度评价软件及SPSS 21.0软件进行相似度分析和聚类分析(HCA).结果:阿胶中氨基酸衍生溶液36 h内保持稳定,17种氨基酸在线性范围内相关系数r均＞0.995,加样回收率在85.8％～120.2％;10批阿胶的氨基酸指纹图谱具有专属性,相似度均＞0.95,聚类分析结果与相似度结果相似.结论:该方法可靠,操作简便,精密度和重复性良好,可用于阿胶中17种水解氨基酸含量测定;10批阿胶中所含的氨基酸分布及比例比较稳定,将指纹图谱与聚类分析运用于不同来源阿胶的质量鉴别,可为药材特征评价方法的建立提供依据.

目的 研究三伏贴中芥子碱硫氰酸盐(SPT)及细辛挥发油(AEO)促进角质形成细胞HaCaT摄取延胡索乙素(THP)的作用及其机制.方法 采用MTT法检测SPT、AEO和THP对HaCaT细胞活力的影响;根据方中THP自发荧光的特点,采用激光共聚焦扫描显微镜可视化观察SPT及AEO促进HaCaT细胞摄取THP的作用,并用HPLC法测定HaCaT细胞中THP的量;以1,6-二苯基-1,3,5-己三烯(DPH)为荧光探针,利用荧光偏振技术研究SPT、AEO及THP对HaCaT细胞的细胞膜流动性的影响.结果 SPT及AEO均能显著促进THP被HaCaT细胞摄取,且AEO的促进作用优于SPT.SPT、THP、AEO分别作用于DPH标记的HaCaT细胞后,AEO组HaCaT细胞的荧光偏振度和细胞膜微黏度均显著降低,细胞流动性增加,证明AEO是通过提高细胞膜流动性从而促进HaCaT细胞摄取THP,而THP、SPT均不能增加细胞膜流动性.结论 三伏贴中SPT及AEO均可促进HaCaT细胞摄取THP,AEO促进机制与其提高细胞膜流动性相关,而SPT的促进作用不是通过增加细胞膜流动性实现,其具体机制有待进一步探明.

目的:研究光磁双模态分子探针Gd-DO3A-ethylthiourea-fluorescein isothiocyanate(Gd-DO3A-EA-FITC)在脑组织间隙(interstitial space,ISS)成像分析中的应用价值.方法:24只SD雄性大鼠随机分为磁示踪组(6只)、荧光示踪组(6只)和光磁示踪组(12只),光磁示踪组随机分为磁示踪亚组(6只)和荧光示踪亚组(6只).分别在大鼠尾状核区注入磁示踪剂钆-二乙三胺五乙酸(gadolinium-diethylene triamine pentaacetic acid,Gd-DTPA)、光示踪剂异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)和光磁双模态分子探针Gd-DO3 A-EA-FITC,应用磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测示踪剂在脑ISS中的扩散和分布,利用自主研发的脑ISS图像处理系统测量Gd-DO3A-EA-FITC和Gd-DTPA在脑ISS内的扩散系数、清除率、体积分数和半衰期等扩散参数.注射示踪剂2h后,利用激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)对离体脑切片进行荧光信号的采集,并对比分析斜矢状位切片中示踪剂扩散分布的最大面积.结果:Gd-DTPA和Gd-DO3A-EA-FITC在鼠脑内的平均扩散系数分别为(3.31 ±0.11) ×10-4 mm2/s和(3.37±0.15)×10-4mm2/s(=0.942,P=0.360),清除率分别为(3.04±0.37) mmol/L和(2.90±0.51) mmol/L(t=0.640,P=0.531),体积分数分别为17.18％ ±0.14％和17.31％ ±0.15％ (t=1.961,P=0.068),半衰期分别为(86.58 ±3.31) min和(84.61 ±2.38) min (t=1.412,P=0.177),扩散分布最大面积分别为(22.71±1.00) mm2和(23.25±0.68) mm2(t=1.100,P=0.297),两者的各项扩散参数差异均无统计学意义.FITC和Gd-DO3A-EA-FITC在鼠脑内扩散分布最大面积分别为(22.10±1.29) mm2和(22.61±1.16) mm2(t =0.713,P=0.492),两者差异无统计学意义,Gd-DO3A-EA-FITC的扩散面积略大于FITC.结论:Gd-DO3A-EA-FITC与传统的Gd-DTPA的成像结果相同,可用于ISS的测量.

本研究旨在建立小鼠结肠癌肺转移高调节性T细胞(Tregs)浸润模型,现报道如下.一、材料与方法1.动物模型构建:经尾静脉注射BALB/c小鼠结肠癌高转移细胞株(CT26),建立结肠癌肺转移模型.2.病理组织学检测:用Bouins液对小鼠肺组织进行固定、染色,对肺转移灶结节进行分级及计数[1].3.Tregs检测:CD4-异硫氰酸荧光素(FITC)、CD25-别藻青蛋白(APC)、叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)-藻红蛋白(PE)三重染色对小鼠脾、外周血及肺组织中Tregs进行检测.实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测肺组织Foxp3表达.

目的 识别、分析与评价某聚氨酯固化剂生产建设项目中可能存在的职业病危害因素,并提出相应的防护补充措施.方法 采用类比法、工程分析法、检查表法相结合的原则,对拟建工程可能产生的职业病危害因素及防护措施进行定性及定量评价.结果 类比项目生产过程中产生的主要职业病危害因素为苯、甲苯、乙苯、二甲苯、乙酸丁酯、二异氰酸甲苯酯(TDI)、邻苯二甲酸酐、甲基丙二醇、二甘醇、新戊二醇、三羟甲基丙烷、乙二醇、噪声,类比检测的结果均符合职业接触限值的要求.结论 本项目为职业病危害严重的建设项目,若能落实本报告中所提的补充措施及建议,从职业病防护角度分析,该建设项目是可行的.