目的:寻找体外受精（ in vitro fertilization， IVF）过程中合适的精液处理方法。 方法:本研究采用前瞻性随机对照双盲设计，选取300例因女性因素且男性生育力检查未见异常行IVF-胚胎移植（embryo transfer，ET）助孕的不孕夫妇为研究对象，纳入的患者通过计算机产生随机数进行随机化分组，分为浮游组（新型无损伤精子筛选技术，FY组， n=100）、密度梯度组（DG组， n=100）和上游组（SU组， n=100）。收集三组患者受精后剩余的精子观察精子超微结构，并比较三组优选后精子DNA碎片指数（DNA fragment index，DFI）及IVF-ET治疗过程中的受精率、卵裂率、优质胚胎率及妊娠率等指标之间的差异。 结果:FY组精子DFI显著低于DG组和SU组（3.22%±2.73%比8.31%±2.14%比6.43%±2.56%），差异有统计学意义（ P=0.02），FY组的精子头、尾部质膜完整率明显高于其他两组（92.0%±24.2%比80.2%±29.5%比73.2%±30.1%和93.9%±1.2%比80.1%±1.1%比74.9%±1.2%），差异具有统计学意义 （P=0.01， P=0.03）。FY组的优质胚胎率、囊胚形成率明显高于DG组和SU组［44.14%（452/1024）比32.30%（292/904）比32.46%（296/912）和54.40%（396/728）比43.52%（302/694）比46.34%（330/712）］，差异均具有统计学意义（ P均<0.001）。新鲜周期FY组的妊娠率和植入率明显高于DG组和SU组［57.14%（24/42）比33.33%（16/48）比35.56%（16/45）和50.00%（30/60）比27.45%（14/51）比28.26%（13/46）］，差异具有统计学意义（ P=0.04， P=0.02）。复苏周期FY组的妊娠率和植入率明显高于DG组和SU组［52.38%（22/42）比31.25%（10/32）比37.14%（13/35）和52.38%（22/42）比29.41%（10/34）比30.56%（11/36）］，差异具有统计学意义（ P=0.03， P=0.02）。 结论:浮游法可减少对精子造成的物理损伤，提高精子质膜的完整率，降低精子DFI，改善辅助生殖技术结局。

目的:探讨单精子测序结合PCR-反向点杂交（PCR-reverse dot blot，PCR-RDB）技术在东南亚缺失型α地中海贫血胚胎植入前遗传学检测中的应用价值。方法:选取2020年4月24日就诊于广州医科大学附属第三医院妇产科的一对东南亚缺失型α地中海贫血携带者夫妇，针对男方无法提供家系成员样本的情况，本案例采用上游法结合显微操作移液管挑选其5份单精子样本并进行全基因组扩增，通过PCR-RDB技术确定男方单精子样本的地中海贫血基因分型，在-- SEA区域的上下游1 Mb范围内选择单核苷酸多态性位点（single nucleotide polymorphism，SNP）作为遗传标记，进行二代测序分析构建双亲单体型。对6份囊胚活检样本进行全基因组扩增后行二代测序，通过单体型分析胚胎是否携带致病变异，并选取非患病囊胚进行移植。孕20周抽羊水进行产前诊断，验证与单基因病胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing for monogenetic disease，PGT-M）结果是否一致。 结果:女方的致病变异来源于其母亲，男方5份单精子样本的地中海贫血基因分型结果显示有4份为野生型。单精子测序筛选出男方有效位点10个，女方家系连锁分析得到女方有效位点6个，PGT-M结果显示4枚囊胚为αα/-- SEA，2枚为-- SEA/-- SEA，产前诊断结果显示胎儿基因型为αα/-- SEA，与PGT-M结果一致，并于孕40周分娩一健康女婴。 结论:对于家系不全的男性东南亚缺失型α地中海贫血携带者，可采用单精子测序结合PCR-RDB技术筛选SNP位点，通过连锁分析行PGT-M。

目的:探讨不同的精液处理方式对精子DNA碎片指数（DNA fragmentation index，DFI）检测结果的影响，评价当前精液处理方式对男性生育力评估的准确性。方法:本研究采用自身配对设计，选取2021年8月至2022年1月期间在广西壮族自治区妇幼保健院生殖医学中心行体外受精助孕患者在取卵当日获得的50份精液。每一份精液分为3组，进行不同方法处理，A组：精液样本混匀后留取精液原液50 μL；B组：密度梯度离心后留取精液与梯度液交界层的精液50 μL；C组：密度梯度离心后，吸取精子沉淀团加入含有1.0 mL精子洗涤液的试管底部置于培养箱内上游15 min后，吸取50 μL上游液。精液处理后，进行精液常规检测和精子DFI检测。采用Pearson进行分析DFI和精子不动精子百分率、精子前向运动百分率的相关性。结果:C组的精子活动率［（96.83±2.28）%］显著高于A组［（57.16±11.28）%］和B组［（22.54±9.35）%］，组间两两比较和3组之间比较差异均有统计学意义（均 P<0.001）。B组的不动精子百分率［（77.46±9.35）%］、DFI［37.18%（30.41%，47.80%）］高于C组［（3.14±2.31）%、0.78%（0.00%，2.07%）］和A组［（42.83±11.28）%、22.00%（14.75%，29.25%）］，组间两两比较和3组之间比较差异均有统计学意义（均 P<0.001）。Pearson分析结果显示，A组和B组的DFI与不动精子百分率呈正相关（ r=0.304， P=0.032； r=0.612， P<0.001），B组DFI与精子前向运动百分率呈负相关（ r=-0.517， P<0.001）。 结论:对于同一份精液，不动精子的DFI显著高于活动精子的DFI。精液原液的DFI值因受不动精子的干扰，不能真实反映参与受精的活动精子的DNA情况，提示应该选择梯度离心法、上游法或其他方法收集的活动精子进行DFI检测，这样更能准确地评估男性生育力。

目的 比较精子浮游板与临床常用的密度梯度离心结合上游法(简称梯度上游法)在人类精子优选效果上的差异.方法 收集我中心不育症患者的精液样本,在排除无精子症、重度少弱精子症和精液体积小于2mL者后,纳入50例研究者.精液液化后分别用精子浮游板和梯度上游法对等体积的相同精液进行优化处理,回收相同体积的精子并检测浓度、前向运动精子百分率、前向运动精子总数(TMSC)、正常形态精子百分率、精子回收率和精子DNA碎片指数(DFI),比较两种不同处理方法间的差异.结果 与优选前的原精液组相比,浮游板组和梯度上游组优化处理后的精子浓度[(16.08±13.39)×106/mL、(8.88±8.06)× 106/mL vs(60.05±27.21)× 106/mL]、TMSC[(7.41±6.14)×106、(3.98±3.57)× 106 vs(22.24±13.74)× 106]和 DFI[(2.20±3.44)％、(5.20±10.79)％vs(26.38±13.92)％]均显著下降,而前向运动精子百分率[(91.67±4.75)％、(87.86±7.90)％vs(40.21±16.83)％]和正常形态精子百分率[(9.58±5.08)％、(7.72±4.01)％vs(3.58±2.06)％]均显著升高,差异均有统计学意义(P＜0.001);相较于梯度上游组,浮游板组优选后的精子浓度、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率、TMSC和精子回收率[(30.74±13.70)％vs(17.09±9.20)％]更高,而 DFI 更低,操作耗时也更短[(32.38±1.01)min vs(60.08±2.06)min],两组间差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 与传统的密度梯度离心结合上游的方法相比,精子浮游板操作更加简便、耗时更短、制备效果也更好,具有一定的临床应用前景.

目的 探讨精子自发顶体反应率以及两种精子处理方法与体外受精(IVF)胚胎质量的相关性.方法 将200例接受IVF治疗的男性随机分为观察组和对照组,每组100例.对照组患者精液采用密度梯度离心法进行处理,观察组患者采用密度梯度离心法联合上游法优化精子,两组均进行常规IVF授精.比较两组间受精率和优胚率,分析观察组精子自发顶体反应率与胚胎质量的关系.结果 观察组患者受精率明显高于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05),且精子自发顶体反应率与受精率呈负相关(r=-0.890,P<0.05).观察组患者优胚率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且精子自发顶体反应率与优胚率呈负相关(r=-0.647,P<0.05).结论 密度梯度离心联合上游法有助于分离自发顶体反应率更低的精子,从而提高IVF成功率,而精子自发顶体反应率在预测胚胎质量方面具有一定的临床应用价值.

目的 探讨经密度梯度离心结合上游法处理前后精子DNA碎片率的变化以及对体外授精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVF-ET)结局的影响.方法 收集107例行IVF助孕患者的精液,按照WHO标准对处理前精液行精液常规分析,采用精子染色质扩散试验(sperm chromatin dispersion,SCD)检测处理前和处理后精液的精子DNA碎片率,并收集IVF实验室及临床结局.根据处理前精子DNA碎片率将患者分为两组:精子DNA碎片率≤20％的患者为A组,精子DNA碎片率＞20％的患者为B组.结果 处理后精子DNA碎片率显著低于处理前精子DNA碎片率(3.49±3.38％ vs18.69±10.89％,P＜0.001);处理前和处理后精子DNA碎片率均与精子总活动率、前向运动率及受精率有显著负相关关系(Spearman相关系数:-0.508、-0.629、-0.283、-0.299、-0.399、-0.329,P＜0.05)与男方年龄、精液量、精子密度、正常形态率及卵裂率无显著相关关系;B组处理后精子DNA碎片率高于A组,差别有统计学意义(P＜0.05);B组的精子总活动率、前向运动率和受精率均低于A组,差别有统计学意义(P＜0.05);两组男方年龄、女方年龄、不孕年限、获卵数、精液量、精子密度、正常形态率、卵裂率、种植率和妊娠率之间的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 密度梯度离心加上游法处理精液后可以显著降低精子DNA碎片率,精子DNA碎片率与精子活力最密切相关,碎片率升高会降低受精率,但对种植率、妊娠率等临床结局没有显著影响.

目的:探讨洗涤法(SW)、密度梯度离心法(DGC)、上游法(SU)、磁性活性细胞分选法(MACS)对冷冻精液的优选效果,为供精人工授精(AID)和供精体外受精(IVF-D)提供可靠的数据. 方法:门诊收集健康男性精液,制备冷冻精液.冷冻精液复苏后,根据优选处理方法不同分为4组:SW组、DGC组、SU组和MACS组,每组样本各20例.比较分析各组优选前后精子浓度、前向运动精子活率、膜完整性、正常形态率及DNA碎片率等的差异. 结果:SW组,处理前后前向运动精子活率、精子膜完整性、正常形态率及DNA完整率,均无显著性差异(P＞0.05);DGC和SU组中,优选后前向运动精子活率[分别为(78.19±12.13)vs.(34.17±8.61)、(82.20±7.17)vs.(42.86±16.38)]、精子膜完整率[分别为(84.62±5.84) vs.(68.17±6.74)、(81.44±4.47) vs.(65.19±6.15)]、正常形态率[(20.42±4.63) vs.(12.16±5.75)、(25.02±4.61)vs.(10.24±5.37)]及DNA完整率(86.73±7.07) vs.(67.98±6.45)、(88.49±3.09)vs.(67.44±5.89)]均显著高于同组优选前(P＜0.05);MACS组中,优选后冷冻精子的膜完整性[(84.00±5.33) vs.(69.21±7.79)]、正常形态率[(13.72±4.58) vs.(7.90±3.80)]及DNA完整率[(91.95±2.82) vs.(69.79±3.90)]亦显著高于优选前(P＜0.05),但前向运动精子活率没有显著改善(P＞0.05). 结论:四种方法:在处理冷冻精子方面各有优缺点,临床可以根据精液标本的质量或者对于精液制备液的要求来选择不同的精子优化方法.MACS可以较好地优化DNA完整率,其在辅助生殖领域的应用具有一定前景.

目的 探讨直接上游法、密度梯度离心法、密度梯度离心后上游法三种精液优化方法对宫腔内人工授精(IUI)结局的影响.方法 对201 5年1月至201 8年12月在我院生殖中心接受宫腔内人工授精治疗的患者资料进行回顾性分析,根据精液优化方法的不同将患者分为3组,A组:采用直接上游法;B组:采用密度梯度离心法;C组:采用密度梯度离心后上游法,比较三种精液优化方法处理后的精子质量参数与临床妊娠结局.结果 处理前的精子活力及精子正常形态率三组间无统计学意义(P＞0.05),处理后,所有患者前向运动精子量均在1 000万条以上,三组的精子活力及正常形态率均不同程度升高,A组及C组的活力及正常形态率均高于B组,有统计学差异(P＜0.05);C组的精子活力及正常形态率稍高于A组,但无统计学差异(P＞0.05).A组及C组临床妊娠率高于B组,有统计学差异(P＜0.05);A组临床妊娠率高于C组,但无统计学差异(P＞0.05).结论 三种精液优化方法均可显著改善精子质量参数,上游法及密度梯度离心后上游法在改善精子活力及正常形态率方面优于梯度离心法,行IUI后临床妊娠率也较高.