目的:探讨Hedgehog信号通路和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)在胆道闭锁(biliary atresia, BA)肝纤维化进展中的作用，为BA肝纤维化发生机制提供实验依据。方法:选取2019年1月至2020年1月天津市儿童医院普外科12例BA患儿肝组织和4例先天性胆管扩张症(congenital biliary dilatation，CBD)患儿肝组织，通过免疫组织化学观察Hedgehog信号通路配体SHH、效应转录因子GLI2蛋白表达分布情况，并通过蛋白质印迹法、实时荧光定量聚合酶链反应检测其蛋白及mRNA表达情况；通过免疫荧光染色观察EMT标记物神经钙粘蛋白(N-cadherin)及CK19表达分布情况。培养人肝内胆管上皮细胞，使用人重组SHH蛋白(r-SHH)和Hedgehog信号通路抑制剂环巴胺(Cyclopamine)进行外源性干预后，检测Hedgehog信号通路激活水平、EMT标记物E钙黏素(E-cadherin)、N-cadherin蛋白及mRNA表达水平。结果:免疫组织化学实验结果显示，SHH表达于BA胆管上皮细胞胞质中，GLI2表达于BA胆管上皮细胞胞核中。蛋白印迹法实验结果显示，BA组SHH、GLI2蛋白相对表达量分别为2.09±0.43、1.94±0.17，CBD组SHH、GLI2蛋白相对表达量为1.00±0.05、1.00±0.37，组间比较，差异均有统计学意义( P均<0.05)。实时荧光定量聚合酶链反实验结果显示，BA组SHH、GLI2 mRNA的相对表达量分别为2.89±0.96、2.35±0.78，CBD组SHH、GLI2 mRNA的相对表达量分别为1.00±0.34、1.00±0.22，组间比较，差异均有统计学意义( P均<0.05)。免疫荧光染色结果显示，EMT标记物N-cadherin与CK19共表达于BA胆管上皮细胞。使用r-SHH处理激活Hedgehog信号通路效应转录因子GLI2后，促进了EMT(抑制了E-cadherin，增强了N-cadherin)，阻断该通路后，EMT被阻断。 结论:Hedgehog信号通路在BA中高表达，是促进肝内胆管上皮细胞发生EMT的重要诱导通路，其在BA肝纤维化进程中起重要作用，为BA肝纤维化发生机制提供实验依据。

目的:探讨SIRT7在胰腺癌细胞上皮-间充质转化（EMT）中的作用和机制。方法:使用siRNA或质粒转染将胰腺癌细胞分为siControl组、siSIRT7组、过表达SIRT7组、siSIRT7+siCOL4A1组和siSIRT7+siSLUG组。EdU实验、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力，实时荧光聚合酶链反应（qRT-PCR）和Western blot法检测EMT标志物和肿瘤干细胞标志物的表达水平。对敲低SIRT7的胰腺癌细胞进行转录组测序（RNA-seq），探究SIRT7调控的信号通路和靶基因，采用qRT-PCR验证靶基因的转录水平。定量染色质免疫共沉淀实验（q-ChIP）和染色质免疫共沉淀聚合酶链反应（ChIP-PCR）鉴定SIRT7直接调控的靶基因。免疫组织化学法检测人胰腺癌组织（2013—2016年购自武汉塞维尔生物科技有限公司）中SIRT7及靶基因的表达。癌症基因组图谱（TCGA）数据库数据分析SIRT7及其靶基因的表达相关性。KM-Plotter网站用以分析SIRT7和靶基因在胰腺癌中的生存相关性。GeneMANIA、STRING和ENCORI在线工具用以分析SIRT7相关蛋白及miRNAs等。结果:EdU实验结果显示，过表达SIRT7组PANC-1和BxPC-3细胞增殖率分别为（19.33±0.35）%和（17.00±1.89）%，均低于对照组［分别为（31.60±1.37）%和（24.33±0.78）%，均 P＜0.05］；而敲低SIRT7表达组PANC-1和BxPC-3细胞增殖率［分别为（23.94±1.00）%、（27.08±0.97）%］和［（22.00±1.86）%、（25.96±1.61）%］均高于siControl组［分别为（11.80±1.86）%和（13.42±1.39）%，均 P＜0.05］。在PANC-1细胞中，细胞划痕实验结果表明，过表达SIRT7组细胞相对迁移率为（76.67±2.74）%，低于对照组细胞［（100.00±2.13）%， P＜0.05］；而抑制SIRT7表达后细胞相对迁移率［分别为（134.22±4.08）%和（199.82±9.20）%］均高于siControl组细胞［（102.24±3.13）%，均 P＜0.05］。迁移实验中（BxPC-3细胞），过表达SIRT7组细胞迁移数为（28.33±2.62）个，低于于对照组［（45.66±1.69）个， P?0.05］；敲低SIRT7表达组细胞迁移数［分别为（65.66±2.86）个、（82.00±2.94）个］均高于siControl组细胞［（33.00±0.81）个， P＜0.01］。Transwell实验结果表明，过表达SIRT7组细胞侵袭数为（16.33±2.05）个和（34.66±1.69）个，低于对照组［分别为（54.33±4.64）个和（58.66±5.90）个，均 P＜0.05］；而敲低SIRT7表达组细胞侵袭数［分别为（63.66±2.49）个、（69.33±3.29）个和（134.33±3.09）个、（181.66±4.02）个］均高于siControl组细胞［（35.33±2.49）个和（42.00±0.81）个，均 P＜0.05］。qRT-PCR和Western blot结果显示，敲低SIRT7表达后，细胞上皮标志物表达降低，间充质标志物表达增多，肿瘤干细胞标志物增多。RNA-seq分析显示，SIRT7参与调控多种恶性肿瘤相关信号通路，其中包括胰腺癌通路和EMT通路。q-ChIP和ChIP-PCR结果显示，SIRT7可直接结合到靶基因COL4A1和SLUG等的启动子区域；EdU、Transwell和Western blot实验也证明SIRT7与靶基因COL4A1和SLUG在胰腺癌细胞中的功能呈负性相关。免疫组化结果显示，SIRT7在胰腺癌组织中表达下调，COL4A1、SLUG、SOX2在胰腺癌组织中表达上调。GeneMANIA、STRING和ENCORI在线网站分析结果显示，有众多潜在的SIRT7相互作用蛋白和相关miRNA。 结论:在胰腺癌中，SIRT7可以通过抑制COL4A1和SLUG等靶基因的转录，从而抑制胰腺癌细胞的EMT，胰腺癌中SIRT7是一个潜在的肿瘤抑制基因。

目的:研究VPS26在高脂环境中对大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMSC）成骨、成脂分化作用的机制，探讨VPS26对高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的影响。方法:普通成骨诱导液（成骨组）和高脂成骨诱导液（高脂组）培养BMSC，高脂组促进或抑制VPS26的表达，检测成骨和成脂相关基因的表达。细胞诱导第7、14天后行碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）和油红O染色；成骨组细胞采用免疫荧光染色和免疫共沉淀方法检测VPS26与β-联蛋白（β-catenin）的结合，双荧光素酶报告实验检测萤火虫荧光值/海肾荧光值（以下简称TOP/FOP）比值。取18只雄性12周龄高脂血症Wista大鼠（体质量为160~200 g），于其双侧股骨干骺端植入种植体，分为3组，每组6只，分别注射VPS26过表达慢病毒（LV-VPS26组）、阴性对照慢病毒（LV-nc组）和生理盐水（空白对照组），种植体及周围骨组织行显微CT分析和HE、油红O染色评估种植体骨结合和股骨脂滴形成。20只雌性6周龄裸鼠（体质量为30~40 g）均分为5组，每组4只，于背部皮下分别植入不转染和转染了LV-VPS26、LV-nc、shVPS26、shscr慢病毒的成骨组BMSC，取样观察异位成骨。结果:过表达VPS26后高脂组BMSC中ALP的mRNA表达水平（1.56±0.09）显著高于阴性对照（1.01±0.03）（ t=10.09， P<0.001），过氧化物酶增殖物活化受体-γ（peroxisome proliferator-activated receptor-γ，PPAR-γ）和脂肪酸结合蛋白4（fatty acid-binding protein4，FABP4）的mRNA表达水平则显著低于阴性对照（ t=6.44， P<0.001； t=10.01， P<0.001）。蛋白质印迹法结果显示过表达VPS26后高脂组BMSC中ALP、Runt相关转录因子2的蛋白表达较阴性对照增强，PPAR-γ、FABP4则减弱，高脂组骨髓间充质干细胞ALP活性在过表达VPS26后更强，脂滴的形成较阴性对照更弱，数量更少。免疫荧光染色、免疫共沉淀和双荧光素酶报告实验结果显示VPS26与β-catenin存在共定位和相互作用，且TOP/FOP比值显著上升43.10%（ t=-3.17， P=0.034）。VPS26过表达后高脂大鼠种植体骨结合增强而脂滴数量下降，HE染色结果显示VPS26过表达后裸鼠皮下支架周围组织骨量增多。 结论:VPS26通过Wnt/β-catenin通路激活BMSC成骨分化且抑制成脂分化，具有促进高脂大鼠种植体骨结合和裸鼠异位成骨的作用。

目的:探讨前列腺癌细胞中转化生长因子-β受体Ⅱ环状RNA(circTGFBR2)调节核糖核酸结合蛋白2(PTBP2)/胚胎致死性异常视觉样蛋白1(ELAVL1)激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。方法:利用生物信息学方法，寻找与circTGFBR2结合microRNA以及其他相关蛋白结合位点，以及与PTBP2存在相互作用的RNA结合蛋白。PC3转染pcDNA3.1-circTGFBR2后，实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测circTGFBR2的表达。PC3细胞过表达circTGFBR2同时敲低微小RNA(microRNA，miR)-29b，蛋白质印迹法(Western blot)检测ALK5、SMAD2及p-SMAD2表达。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后，利用circTGFBR2特异性探针进行pulldown，检测PTBP2与circTGFBR2的相互作用。过表达circTGFBR2与ELAVL1，检测细胞上皮-间充质转化(EMT)的标志基因E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)及ZMYM1表达，以及Transwell检测细胞迁移。组间比较应用单因素方差分析。结果:分析结果显示circTGFBR2存在多个miR-29b结合的位点，ALK5(又名TGFBR1)mRNA 3’端非编码区(3’UTR)同样存在miR-29b的结合位点，并证实PTBP2与另一个RNA结合蛋白ELAVL1存在相互作用。用转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激PC3细胞发现，circTGFBR2的表达高于对照组(1.83±0.02比1.03±0.02， F＝2 832.200， P<0.01)。PC3分别转染pcDNA3.1-circTGFBR2及对照质粒后，RT-qPCR检测circTGFBR2的表达，可见circTGFBR2组高于对照组(176.41±1.21比1.04±0.02， F＝63 426.15， P<0.01)。应用miR-29b抑制剂或circTGFBR2处理细胞后ALK5的蛋白水平明显高于对照组，应用miR-29b抑制剂同时过表达circTGFBR2后进一步增加ALK5的表达(分别为0.15±0.01、0.48±0.02、0.55±0.01、0.74±0.01， F＝1268.314， P<0.01)，并且SMAD2(分别为1.14±0.02、1.28±0.02、1.42±0.01、1.5±0.25， F＝4.852， P<0.01)和p-SMAD2(分别为0.18±0.02、0.36±0.01、0.65±0.01、0.94±0.02， F＝1663.667， P<0.01)的磷酸化水平也呈相同趋势。Pulldown-MS实验，多个蛋白质能与circTGFBR2结合，并证实PTBP2与circTGFBR2相互作用。与对照组比较，敲低前列腺癌细胞PTBP2或过表达circTGFBR2时，间质标志基因Vimentin表达高于对照组，而上皮样标志基因E-cadherin表达低于对照组，当同时过表达circTGFBR2并敲低PTBP2会逆转上述结果(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01， F＝1319.52， P<0.01；E-cadherin分别为0.80±0.01、0.45±0.03、0.36±0.02、0.9±0.02， F＝614.919， P<0.01)。当过表达circTGFBR2或高表达ELAVL1时，PTBP2与ELAVL1的相互作用减弱，细胞EMT的标志基因E-cadherin表达低于对照组，Vimentin及ZMYM1表达高于对照组，Transwell检测细胞迁移高于对照组，而当同时高表达ELAVL1及circTGFBR2时，上述趋势会进一步增强(Vimentin分别为0.22±0.02、0.87±0.02、0.85±0.02、0.6±0.01， F＝1 319.52， P<0.01；E-cadherin分别为0.93±0.02、0.76±0.02、0.43±0.02、0.27±0.01， F＝1 108.46， P<0.01；ZMYM1分别为0.24±0.01、0.53±0.02、0.32±0.01、1.04±0.02， F＝2 023.794， P<0.01)。 结论:circTGFBR2通过调节PTBP2/ELAVL1激活SMAD2信号途径促进前列腺癌发生发展。

目的:探讨上皮基质相互作用蛋白1（epithelial stromal interaction 1，EPSTI1）在胰腺癌发生发展过程中对癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的作用。方法:对132例胰腺癌组织样本进行免疫组化染色评估，对体外培养的癌细胞进行转染，采用Western blot、Transwell试验分析EPSTI1对胰腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响 。结果:EPSTI1在胰腺癌细胞中的异常高表达可导致癌细胞的上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT），增加胰腺癌细胞的迁移和侵袭（均 P<0.05）。通过与胰腺星形细胞共培养，癌细胞中EPSTI1表达显著升高。EPSTI1与磷酸化蛋白激酶（phosphorylated protein kinase，AKT）相互作用，可诱导AKT磷酸化，促进上述恶性表型（均 P<0.05）。 结论:EPSTI1部分通过调节AKT激活促进胰腺癌细胞迁移、侵袭和EMT。

目的:探讨重组人甲基CpG结合蛋白2(MeCP2)处理的视网膜色素上皮(RPE)细胞中mRNA和N6-甲基腺嘌呤(m6A)改变及其机制。方法:将传代ARPE-19细胞贴壁培养后分为正常对照组和MeCP2组，正常对照组细胞采用正常培养液培养，MeCP2组细胞于含终质量浓度20 ng/ml重组人MeCP2蛋白培养液中，连续培养72 h。提取细胞内总RNA进行转录组测序(RNA-seq)和甲基化免疫共沉淀测序(MeRIP-seq)分析。采用edgeR软件包根据 P<0.05筛选差异表达基因(DEGs)和差异甲基化基因(DMGs)。采用基因本体论(GO)富集分析对差异基因进行生物学功能描述，采用京都基因和基因组百科全书(KEGG)进行通路富集分析。筛选出DEGs与DMGs交集的基因，采用实时荧光定量PCR技术检测各组差异基因mRNA表达水平。 结果:共筛选出DEGs 100个，DMGs 7 441个，富集分析发现DEGs与细胞外基质(ECM)－受体相互作用、细胞分裂、细胞周期和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路等相关，DMGs与微管细胞骨架、血管生成、表皮生长因子受体(ErbB)信号通路、晚期糖基化终末产物(AGEs)－糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路、Notch信号通路和转化生长因子β(TGF-β)信号通路等相关。DEGs中24个基因表达增加，76个基因表达减少；DMGs中5个基因含有高甲基化峰，7 439个基因含有低甲基化峰，注释峰后，正常对照组有7 626个基因发生m6A甲基化，MeCP2组有8 006个基因发生m6A甲基化，2个组间有7 360个交集基因。正常对照组和MeCP2组的m6A甲基化富集于转录本的CDS、内含子和3'-非翻译区(3'UTR)区域，其甲基化比例分别为23.62%/22.27%、48.53%/48.35%和23.66%/25.28%。联合分析发现2个上皮－间充质转化(EMT)相关基因 CSPG5和 RBP1的mRNA和m6A水平均降低。荧光定量PCR结果显示，MeCP2组 GSPG5、 RBP1、 ZNF484 mRNA相对表达量均明显低于正常对照组，差异均有统计学意义( t＝7.885、7.613、7.345，均 P<0.01)。 结论:RPE细胞中MeCP2对EMT的调控机制与m6A甲基化修饰相关。 CSPG5和 RBP1基因可能是m6A甲基化的靶基因，参与MeCP2调控的EMT过程。

目的:探讨钴胺素转运蛋白1(TCN1)在肺腺癌中的表达及其与肺腺癌患者预后的关系，以及TCN1对肺腺癌细胞增殖和迁移侵袭能力的影响。方法:采用非随机抽样的方法选取2020年7月至2021年7月在成都医学院第一附属医院行肺腺癌切除术的患者20例，收集20对经组织病理学证实的肺腺癌样本和距离肿瘤组织至少5 cm的正常肺组织样本。免疫组织化学染色分析TCN1在肺腺癌组织及癌旁正常肺组织中的表达情况，实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测肺腺癌细胞系及正常肺上皮细胞系内TCN1表达情况。下载TCGA数据库中肺腺癌数据，分析TCN1与肺腺癌患者生存预后的关系，使用加权基因共表达网络分析与TCN1关系最密切的模块，用R 3.6.1软件对该模块内的基因进行基因本体注释(GO)和京都基因和基因组百科全书(KEGG)分析，以TCN1的中位值为截断值，将TCGA数据库中的肺腺癌样本分为TCN1高表达组和低表达组，采用GSEA 4.2.3软件分析预测高表达TCN1的肿瘤组织样本内基因富集的信号通路。选用A549肺腺癌细胞系为研究对象，运用噻唑蓝(MTT)和Transwell实验检测敲减TCN1后对A549细胞的增殖和迁移侵袭的影响，采用Western blot检测敲减TCN1后A549肺腺癌细胞内上皮间充质转化(EMT)相关蛋白的表达情况。结果:免疫组织化学染色显示肺腺癌患者肺腺癌组织中TCN1染色为阳性。RT-qPCR和Western blot结果显示，与正常肺上皮细胞系BEAS-2B相比，肺腺癌细胞系A549、LC-2、HCC515和PC14中TCN1普遍高表达( P值均<0.05)。对TCGA数据库中肺腺癌的生存资料进行分析显示TCN1高表达的患者总生存期更短( HR＝1.6， P＝0.002 6)。富集分析结果显示WGCNA筛选出的与TCN1表达最相关的模块内的基因主要涉及胞外基质组成、胞外结构组成、细胞基质黏附等生物学过程以及黏着斑、细胞外基质受体相互作用等相关通路。GSEA软件结果也显示高表达TCN1的肿瘤样本内的基因主要富集在EMT相关通路。MTT结果显示，敲减TCN1 96 h后，A549细胞的增殖能力受到抑制，差异有统计学意义( t＝4.657， P＝0.009)。Transwell实验结果显示，敲减TCN1后，A549细胞的迁移和侵袭能力均受到抑制，差异均有统计学意义( t值分别为10.502、9.604， P值均<0.05)。Western blot结果显示，敲减TCN1后A549细胞内N-cad、ASMA、Slug、Vimentin、Snail等EMT相关蛋白表达降低( P值均<0.05)。 结论:TCN1在肺腺癌组织中为高表达，且与不良预后密切相关。TCN1低表达可能通过抑制EMT影响肺腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

目的:探讨长链非编码RNA Opa相互作用蛋白5-反义转录物1(lncRNA OIP5-AS1)在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌细胞增殖和转移的关系。方法:选取2023年2月至2024年2月期间于河南省驻马店市中心医院和新乡医学院第一附属医院就诊并行结直肠癌根治术的51例结直肠癌患者，荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测所有患者结直肠癌组织和癌旁组织中lncRNA OIP5-AS1的mRNA表达水平；将短发卡RNA(shRNA)空载体(shRNA-Control)、OIP5-AS1敲低质粒(shRNA-OIP5-AS1)转染至HCT116结直肠癌细胞中，采用噻唑蓝(MTT)比色法检测shRNA-Control和shRNA-OIP5-AS1细胞的增殖活力；采用Transwell实验检测shRNA-Control和shRNA-OIP5-AS1细胞的迁移和侵袭能力；采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测两组细胞中波形蛋白(Vimentin)、N-钙黏蛋白(N-Cadherin)、锌指E-盒结合同源盒蛋白1(ZEB 1)、E-钙黏蛋白(N-Cadherin)的蛋白表达，组间计量数据采用独立样本 t检验。 结果:lncRNA OIP5-AS1 mRNA在结直肠癌组织(1.50±0.13)中的表达水平明显高于癌旁组织(0.54±0.08)，差异有统计学意义( t＝45.99， P<0.05)。shRNA-OIP5-AS1细胞(0.80±0.06)的吸光度值明显低于shRNA-Control细胞(1.30±0.04)，差异有统计学意义( t＝16.62， P<0.05)。shRNA-OIP5-AS1细胞迁移细胞数[(74.50±3.73)个]和侵袭细胞数[(66.50±5.09)个]明显低于shRNA-Control细胞[(126.33±6.28)、(109.67±3.88)个]，差异有统计学意义( t＝17.38、16.52， P<0.05)。shRNA-OIP5-AS1细胞E-Cadherin[(5.36±0.28) ng/ml]蛋白表达水平明显高于shRNA-Control细胞[(2.96±0.13) ng/ml]，差异有统计学意义( t＝18.97， P<0.05)。shRNA-OIP5-AS1细胞N-Cadherin[(231.02±27.11)pg/ml]、Vimentin[(5.61±0.40) ng/ml]和ZEB1[(2.59±0.28) ng/ml]蛋白表达水平明显低于shRNA-Control细胞[(656.48±39.49)pg/ml、(8.31±0.36) ng/ml、(6.04±0.26) ng/ml]，差异有统计学意义( t＝21.76、12.32、22.12， P<0.05)。 结论:lncRNA OIP5-AS1在结直肠癌组织中表达水平上调，敲低结直肠癌细胞lncRNA OIP5-AS1的表达可通过抑制细胞的上皮-间充质转化，从而减缓结直肠癌细胞的增殖、转移和侵袭。

卵巢癌的发病率位居女性恶性肿瘤第三位。间充质干细胞（MSC）是肿瘤微环境中的重要组成部分，研究表明MSC可通过分泌多种细胞因子，促进上皮-间质转化（EMT）并增加肿瘤干细胞的比例等抑制或促进卵巢癌细胞增殖、侵袭和转移；MSC能够产生大量外泌体，其分泌的外泌体具有与MSC相似的生物学功能，是介导细胞间信息交流及传递的重要因素，但MSC来源外泌体对肿瘤的作用及机制仍不清楚。因此研究卵巢癌、MSC及其外泌体之间相互作用的机制可能会揭示治疗卵巢癌的新方法。

角膜缘微环境细胞(LNCs)是位于角膜缘、与角膜缘上皮干细胞(LESCs)紧密相连的一类间充质干细胞，能同时表达间充质标志物和多种胚胎干细胞标志物，对调节LESCs的静息、自我更新以及分化状态起着重要作用。近年研究表明，LNCs可通过胶原酶消化法、上皮块消化法、中性蛋白酶－胶原酶消化法以及组织块培养法进行体外分离培养，通过3D Matrigel共培养、Transwell共培养可研究LNCs与LESCs之间的相互作用关系。LNCs与LESCs可通过SDF-1/CXCR4、Notch、BMP、Wnt、Sonic Hedgehog、KIT/AKT等多种信号通路以及神经生长因子、角质形成细胞因子、胰岛素样生长因子等多种细胞因子相互作用。LNCs现已成为角膜上皮组织工程、眼表重建以及角膜再生等研究中的一大热点。本文就LNCs的研究背景、体外分离培养方法、与LESCs的相互作用机制及其应用前景等进行综述。