目的:通过中华猕猴桃花药培养获得单倍体或双单倍体再生植株,以期创新猕猴桃种质,为猕猴桃育种提供材料.方法:以中华猕猴桃栽培品种'桂海四号'雄株花药为外植体,研究不同培养基对愈伤组织诱导、体细胞胚诱导、继代及植株再生的影响,采用流式细胞仪鉴定再生植株倍性.结果:花药在添加1 mg/L 2,4-D和5 mg/L 6-BA培养基上诱导率最高,为58.48%,愈伤组织为淡黄色、结构致密.上述愈伤组织在添加2,4-D的培养基中未形成体细胞胚,而其它激素配比均可产生体细胞胚,在体视镜下可观察到球形胚、心形胚和鱼雷胚阶段.体细胞胚在添加0.05 mg/L NAA、1 mg/L 6-BA 和 0.5 mg/L IBA的培养基上增殖率最高,为53.30%,且状况良好.在添加不同浓度IBA和ZT培养基上,体细胞胚均可分化产生丛生芽,当IBA为0.05 mg/L、ZT为3 mg/L时其再生率最高,为40%.再生植株在添加0.5 mg/L IBA的培养基上生根效果最佳,根多且粗壮.经流式细胞仪鉴定出单倍体、双倍体、三倍体、四倍体和五倍体多种倍性再生植株.结论:该研究初步建立花药—愈伤组织—体细胞胚—植株再生的培养体系,可为中华猕猴桃或其它猕猴桃物种的花药培养提供借鉴,再生单倍体或双单倍体植株是猕猴桃新种质,可为猕猴桃育种提供重要材料.

目的 克隆获得灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides MADS-box家族基因SHORT VEGETATIVE PHASE(SVP),并对其进行生物信息学、时空表达特异性和蛋白原核表达等特性分析.方法 根据灰毡毛忍冬转录组数据设计特异性引物,通过PCR技术克隆LmSVP基因全长;运用生物信息学方法分析其编码蛋白的序列特征;利用实时荧光定量技术(reverse-transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR)分别检测该基因在灰毡毛忍冬2个品种"龙花"和"金翠蕾"叶片、花早期和晚期中的表达水平;最后构建pTOPO-D1-LmSVP原核表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行蛋白表达.结果 LmSVP基因全长1472 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)长720 bp,编码239个氨基酸,蛋白质相对分子质量为26 712.63.进化树分析表明,LmSVP蛋白与中华猕猴桃、小粒咖啡的SVP蛋白亲缘关系最近.qRT-PCR结果显示,LmSVP基因在"龙花"和"金翠蕾"品种中的表达均存在组织特异性表达,其在叶中的表达量显著高于花中;而在花发育不同时期,LmSVP基因表达量没有明显差异.LmSVP在大肠杆菌中成功表达出蛋白,蛋白表达结果显示其相对分子质量约为26 710,与预测相符合.结论 通过对LmSVP基因的全长克隆、序列分析和表达特性鉴定,为进一步研究该基因在调控花蕾型灰毡毛忍冬蕾期长及花冠不开放的功能提供实验基础.

目的:探讨中华猕猴桃根氯仿提取部分(Actinidiachinensis planch extracted by chloroform,EC-ACP)对喉癌HEP-2的增殖抑制及诱导凋亡的作用,并探讨可能的机制.方法:运用CCK-8法检测EC-ACP对喉癌HEP-2的抑制作用及IC50值;流式细胞术检测EC-ACP对喉癌HEP-2的凋亡率及周期的影响;Western blot法检测EC-ACP对喉癌HEP-2细胞蛋白表达的影响.结果:24、48、36 h后不同浓度的EC-ACP作用于HEP-2细胞均能明显的抑制细胞增殖(P＜0.05),且存在时间-浓度依赖性.Annexin V-FITC/PI双染法结果提示EC-ACP作用于喉癌HEP-2细胞48 h后,随着浓度的增加,凋亡率逐渐增加.PI染色结果提示EC-ACP将HEP-2细胞周期阻滞于G1期.Western-blot结果显示随着加药浓度的增加,周期相关蛋白P53表达逐渐增大,周期相关蛋白CyclinD1表达减少.结论:中华猕猴桃根氯仿提取部分可以抑制HEP-2细胞的增值,其发生可能与其促进p53,抑制cyclinD1基因表达有关.

为探讨重庆大巴山区野生猕猴桃资源的分布现状和遗传多样性,进一步保护和挖掘有价值的野生种质资源,本试验在重庆大巴山野生猕猴桃聚集区开展实地调查、采集,重点分析该地区野生猕猴桃果实特异性和多样性.结果显示:重庆大巴山野生猕猴桃集中分布在海拔978～1758 m的高山上,以中华、美味及两者混杂类型分布为主,另有软枣、显脉和硬齿猕猴桃等野生资源分布,该区域以城口县野生猕猴桃资源最为丰富.果实性状分析显示了重庆大巴山野生猕猴桃有着丰富的表型性状多样性,SSR标记从DNA层面也印证了这一点.采集的41个野生资源按成熟期分类可分成3类:早熟资源5个、中熟资源34个和晚熟资源2个.有14个资源的可溶性固形物达到15％以上,4个资源的VC含量达到200 mg/100 g以上.另外,根据资源特异性筛选出5个有较高应用价值的野生资源.重庆大巴山地区蕴含的丰富野生猕猴桃资源可为猕猴桃人工驯化、品种改良提供种质资源.

以中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)品种‘H-1’为材料,研究有机栽培和生态绿色栽培模式对其可溶性固形物、总糖、总酸、Vc、氨基酸、矿物元素和香气等果实品质性状的影响.结果 显示:生态绿色栽培的‘H-1’中,果实可溶性固形物、总糖和Vc含量比有机栽培的果实分别高出15.90％、26.30％和29.25％,其中Vc的差异最为明显;总酸含量与有机栽培种相差不大;有机栽培的‘H-1’中必需氨基酸的含量是生态绿色栽培种的1.69倍,且锌和钙的含量也高于生态绿色栽培,但钾元素含量相差不明显;生态绿色栽培的‘H-1’果实中可检出的果香成分比有机栽培多5种.研究结果表明栽培方式不同,猕猴桃果实品质表现出一定差异,可根据果实鲜食及加工用途的不同选择合适的栽培方式.

目的 探讨中华猕猴桃根提取物对肝癌Bel-7402细胞的放疗增敏作用.方法 采用流式细胞仪分析中华猕猴桃根提取物对Bel-7402细胞凋亡及形态的影响.采用克隆形成法检测Bel-7402细胞存活分数,并绘制细胞存活曲线.结果 流式细胞仪结果显示,与单纯放疗组、单纯药物组相比,联合放疗组Bel-7402凋亡细胞的比例显著增多.从凋亡细胞分布情况进行分析,药物主要引起中、晚期Bel-7402细胞凋亡和坏死,对早期细胞凋亡无明显影响.与单纯放疗组相比,联合放疗组正常细胞数量逐渐减少,而凋亡细胞数量逐渐增多.与单纯放疗组相比,联合放疗组细胞存活曲线显示细胞存活分数明显降低,表明中华猕猴桃根提取物对肝癌细胞Bel-7402具有放疗增敏作用.结论 中华猕猴桃根提取物可能通过诱导细胞凋亡来对Bel-7402细胞产生放疗增敏作用,其机制可能是阻滞肿瘤细胞在G1/M期,从而引起DNA损伤.

褪黑素(MT)在植物生长发育及逆境胁迫响应中发挥重要功能,而茶树中MT合成途径中相关基因仍有待挖掘.以'福鼎大白'茶树品种为材料,采用RT-PCR技术克隆MT合成途径相关酶的编码基因:色氨酸脱羧酶(TDC)、色胺-5-羟化酶(T5H)、5-羟色胺-N-乙酰转移酶(SNAT)和N-乙酰基-5-羟色胺-甲基转移酶(ASMT),对它们的生物信息学特征进行分析,并研究它们在不同组织及非生物胁迫下的表达模式.结果显示,共获得7个MT合成酶基因,即CsTDC1、CsTDC2、CsT5H1、CsSNAT1、CsSNAT2、CsASMT1和CsASMT2;蛋白质特征分析显示,MT合成途径相关酶的编码基因主要定位在叶绿体或胞质中,同时发现CsT5H1含有信号肽输出位点及2个跨膜结构域;进化树分析显示,MT合成酶相关的氨基酸序列主要与中华猕猴桃、欧洲大叶杨、胡桃等木本植物亲缘关系较近.组织表达特异性分析显示,CsASMT1在根中表达量较高,其余基因在叶或茎中的表达量较高.在盐和干旱胁迫处理下,这些基因的表达被显著抑制.本研究表明茶树MT合成途径受逆境胁迫调控,结果可为后续研究MT在茶树生长发育及抗逆调控中的作用提供参考.

目的 探讨中华猕猴桃根治疗肝癌的潜在作用靶点及信号通路.方法 收集癌症基因组图谱数据库(TCGA)和国际癌症基因组联合体数据库(ICGC)截至2021年12月收录的肝癌患者肿瘤组织、正常肝组织的转录组数据及临床信息.代谢相关基因来自MSigDB数据库和Gene Cards数据库.筛选中华猕猴桃根的有效活性成分及靶点.利用R 4.1.1软件获得肝癌组织中差异表达的代谢基因.将差异代谢基因与中华猕猴桃根活性成分的靶基因做交集处理,获得交集基因.交集基因进行GO功能富集分析、KEGG通路富集分析.通过Cytoscape 3.9.0软件建立"中华猕猴桃根药效成分-靶点-疾病"的网络,获取节点的度值较大的靶点.利用vina软件进行分子对接,运用PyMOL软件对结合能的绝对值较大的对接结果进行可视化.结果 最终筛选出15种中华猕猴桃根有效成分化合物,涉及靶点基因326个.MSigDB数据库和Gene Cards数据库最终筛选出321个差异表达的代谢基因,与326个靶点基因进行交集映射,得到ACACA、ACSL4、AKR1C3、CYP1A2、CYP2C19等表达上调或下调的20个抗癌基因.药物活性成分-靶点网络构建结果显示,节点主要涉及槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇等13种活性成分,对应ACACA、ACSL4、AKR1C3、CYP1A2、CYP2C19、CYP2C9等20个潜在靶点.GO富集分析结果显示,其生物学过程主要在脂肪酸代谢过程、长链脂肪酸代谢过程、不饱和脂肪酸代谢过程、烯烃化合物代谢过程、脂肪酸生物合成过程等.KEGG通路富集分析结果显示,信号通路主要涉及化学致癌作用-DNA加合物、花生四烯酸代谢、亚油酸代谢、药物代谢-细胞色素P450等.分子对接共涉及9个代谢途径,POLD1、AKR1C3、CYP2C9、ACACA共4个靶点基因,槲皮素、山奈酚2种有效成分,槲皮素-POLD1、山奈酚-AKR1C3、槲皮素-CYP2C9具有较好的结合活性.结论 槲皮素和山奈酚可能是中华猕猴桃根干预肝癌细胞代谢重编过程中起主要活性的药效成分,其可能通过作用于AKR1C3、CYP2C9、ACACA、POLD1这4个靶点,参与调节肿瘤细胞中的代谢重编过程.

目的 观察中华猕猴桃根提取物增敏索拉非尼对H22 肝癌小鼠移植瘤生长及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 将 24 只H22 肝癌造模成功的小鼠按随机数字表分为 4组:肝癌组给予生理盐水灌胃,猕猴桃根提取物组给予中华猕猴桃根提取物灌胃,索拉非尼组给予索拉非尼灌胃,联合组给予中华猕猴桃根提取物和索拉非尼灌胃,均1 次/d,连续灌胃15 d.荧光素酶标记观察各组小鼠移植瘤生长情况,计算各组小鼠出瘤时间、瘤重、抑瘤率,免疫组化SABC染色法观察瘤组织中TNF-α表达情况.结果 索拉非尼组、联合组小鼠出瘤时间均明显长于肝癌组(P均<0.05),瘤重均明显低于肝癌组和猕猴桃根提取物组(P均<0.05),抑瘤率均明显高于猕猴桃根提取物组(P均<0.05);联合组小鼠出瘤时间明显长于索拉非尼组(P<0.05),瘤重明显低于索拉非尼组(P<0.05),抑瘤率明显高于索拉非尼组(P<0.05).肝癌组瘤组织中TNF-α表达增多,猕猴桃根提取物组、索拉非尼组、联合组TNF-α阳性表达率均明显低于肝癌组(P均<0.05),索拉非尼组、联合组均明显低于猕猴桃根提取物组(P均<0.05).结论 中华猕猴桃根提取物可能通过下调炎症因子TNF-α的表达增敏索拉非尼对H22 肝癌小鼠的抑瘤作用.

目的 对大籽猕猴桃、对萼猕猴桃、软枣猕猴桃、中华猕猴桃 4种猕猴桃属基植物的根进行显微鉴定研究,为准确鉴定生药提供依据.方法 采用显微鉴定法对 4种猕猴桃药用植物根的粉末进行显微鉴定研究.结果 以草酸钙簇晶、淀粉粒、导管之形态特征为主要差异点,编制检索表,可用于鉴定此 4种药用植物根之间的鉴别.结论 4种猕猴桃属植物根粉末显微特征可用于鉴定此4种生药,值得进一步研究.