目的 构建含miR-155的人绒毛膜滋养层细胞来源外泌体,探讨miR-155通过外泌体携带对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖及成管能力的影响.方法 2023年1月至2023年4月于西安市人民医院(西安市第四医院)收集人体正常早孕流产绒毛组织进行人绒毛膜滋养层细胞原代培养,并提取、收集细胞上清中的外泌体;通过透射电镜、纳米粒子追踪分析(NTA)、Western-blot鉴定外泌体;通过药载技术构建含miR-155模拟物(Exo-miR-155 mimics)、抑制物(Exo-miR-155 inhibitor)以及对照物(Exo-NC)的外泌体;q-PCR检测外泌体中miR-155表达;将构建好的外泌体分别与HUVECs共孵育,荧光显微镜检测外泌体摄入情况;CCK-8、成管实验检测摄取外泌体后各组HUVECs细胞增殖、成管能力;q-PCR、Western-blot检测HUVECs中CYR61、VEGF表达水平.结果 分离培养的人绒毛膜滋养层细胞能够显著表达CK-7;人绒毛膜滋养层细胞培养液中提取的外泌体具有典型的形态、粒径并表达外泌体特征性蛋白CD9、CD63;载入外泌体中的miR-155表达与抑制效果显著;与摄取Exo-NC后的HUVECs相比,摄取Exo-miR-155 mimics后的HUVECs增殖与成管能力均下降;且细胞中CYR61 mRNA、VEGF mRNA及蛋白表达水平均降低.结论 miR-155可通过滋养层细胞来源外泌体的携带影响HUVECs增殖及成管能力,以及细胞中血管形成相关蛋白CYR61、VEGF的表达,进而与PE时胎盘功能建立异常和母体全身血管内皮细胞功能障碍相关.

目的 采用生药学方法鉴别藏药乳白香青.方法 采用原植物鉴定、性状鉴定、显微鉴定、薄层色谱分析及DNA条形码鉴定方法进行鉴别.结果 乳白香青的药材断面和粉末显微特征明显;薄层色谱斑点清晰、分离效果好;经对ITS序列进行PCR扩增并测序,首次获得其ITS序列,GenBank注册号为:OQ096626,确定了乳白香青的DNA鉴定条形码.结论 所用方法可为乳白香青药材的鉴定、控制质量及资源开发提供参考.

目的 采用微性状鉴定法来探究市场上出现的小茴香及其常见两种混淆品孜然芹、毒芹,对其进行鉴别,以确保安全用药.方法 采用中药性状鉴别、微性状鉴定、显微鉴别的方法对小茴香及其混淆品孜然芹、毒芹的顶端、果柄、分果接合面等进行鉴别研究.结果 小茴香及其混淆品孜然芹、毒芹在性状鉴别、显微鉴别特征上稍有差异,在微性状鉴别特征上差异较大,其中在顶端、果柄、分果背面和接合面、种子背面和接合面部位有明显的区别.结论 利用中药微性状鉴定法可以很好地区分小茴香及其混淆品.

目的 探讨选择性脑降温对老年脊柱外科内固定患者术后血脑屏障功能及谵妄发生的影响.方法 选取2022年5月-2023年7月在武汉市第四医院静吸复合全身麻醉下行脊柱外科内固定术的患者126例.采用简单随机分组法将患者分为选择性脑降温组(SBC组)和对照组(C组).两组患者均采用液体加温联合体表加温毯,保持加温直至手术结束,SBC组患者使用设定温度为4 ℃的电子冰帽进行选择性脑降温.分别于麻醉诱导前(T0)、麻醉诱导后 30 min(T1)、60 min(T2)、90 min(T3)、120 min(T4)、150 min(T5)、术毕(T6)和出麻醉恢复室(PACU)(T7)时记录患者鼻咽温、肛温,于T6时从患者肘正中静脉抽取患者外周静脉血样,采用免疫磁珠法分离鉴定脑微血管内皮细胞(BMECs),荧光显微镜下计数细胞;术前1天、术后第1天及术后第3天分别采用散射比浊法及酶联免疫吸附试验测定外周血C反应蛋白(CRP)、S100β蛋白浓度;手术后第1～3天同时采用3分钟谵妄诊断量表和谵妄评估量表-98修订版量表(DRS-R-98)评估患者术后谵妄(POD)的发生情况.结果 两组患者性别构成、年龄、体重、文化程度比例、高血压病史率、心脏病史率、糖尿病史率、美国麻醉师协会分级Ⅲ级率、术中低血压、手术持续时间、输液量、失血量、自体血回输量、常规抗菌药物使用率比较,经x2/t检验,差异均无统计学意义(P＞0.05).SBC组T6时静脉血BMECs计数、POD率均低于对照组(P＜0.05).两组患者气管拔管所需时间、热舒适度评分、PACU滞留时间、总住院时间、术后恢复质量量表评分、PACU寒颤率、术后躁动率、术后发热率比较,经t/x2检验,差异均无统计学意义(P＞0.05).两组患者T1～T7时肛温比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间的肛温比较,差异有统计学意义(P＜0.05);②两组患者肛温比较,差异有统计学意义(P＜0.05);③两组患者肛温变化趋势比较,差异有统计学意义(P＜0.05).两组患者术前、术后1 d、术后3d血清CRP、S100β浓度比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间血清CRP、S100β浓度比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);②两组患者血清CRP、S100β浓度比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);③两组患者血清CRP、S100β浓度变化趋势比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).两组患者术后第1天、术后第2天及术后第3天DRS-R-98评分比较,经重复测量设计的方差分析,结果:①不同时间点间的DRS-R-98评分比较,差异有统计学意义(P＜0.05);②两组患者DRS-R-98评分比较,差异有统计学意义(P＜0.05);③两组患者DRS-R-98评分变化趋势比较,差异有统计学意义(P＜0.05).SBC组POD总发生率低于对照组(P＜0.05).结论 选择性脑降温能安全降低行脊柱外科内固定老年患者术中脑局部温度,维持患者血脑屏障结构和功能的稳定,降低患者POD的发生风险.

目的:改良人主动脉平滑肌细胞的原代提取培养方法。方法:采用改良过的组织块贴壁法提取人主动脉平滑肌原代细胞，无多聚左旋赖氨酸(Poly-L-Lysine，PLL)包被为阴性对照组，PLL包被为实验组。采用免疫荧光技术鉴定细胞纯度；蛋白印迹法判断细胞表型变化；细胞计数仪计算传代后细胞的贴壁率；CCK8法鉴定两组细胞生长活力的差别。结果:实验组细胞爬出率及成活率明显高于阴性对照组( P<0.05)；倒置显微镜及免疫荧光显示两组细胞形态与标志蛋白表达差异无统计学意义；蛋白印迹法显示两组细胞表型改变差异无统计学意义；细胞贴壁率比较，实验组细胞明显高于阴性对照组( P<0.05)；CCK8法显示实验组细胞于48、60、72 h时活性明显高于阴性对照组( P<0.05)。 结论:预包被PLL能够提高人主动脉平滑肌细胞的提取效率、贴壁效率和生长活力，同时不会改变细胞表型。

目的:探讨应用化学生物学邻近标记技术（Interaction-dependent fucosyl-biotinylation, FucoID），捕获血液恶性肿瘤慢性髓性白血病（CML）中肿瘤抗原特异反应性T细胞及其临床价值。方法:通过流式细胞术及荧光显微镜成像确定FucoID适用于血液肿瘤CML的实验条件。选取14例CML慢性期患者初诊样本，利用流式细胞术及FucoID对其外周血样本进行肿瘤细胞与T细胞的分离、共孵育与邻近标记，实现肿瘤抗原特异反应性T细胞的表型鉴定，并探讨FucoID在CML中的诊治价值。结果:研究首先确定了FucoID适用于血液肿瘤CML的实验条件。患者CD3 + T细胞比例为（8.96±6.47）%，远低于正常供者的（38.89±22.62）%。患者间肿瘤抗原特异反应性T细胞占比存在差异[（3.34±4.49）%]。CD4 + T细胞中肿瘤抗原特异反应性T细胞比例为（3.95±1.72）%，普遍低于CD8 + T细胞中肿瘤抗原特异反应性T细胞比例[（5.68±2.18）%]。相比肿瘤抗原非反应性T细胞，肿瘤抗原特异反应性T细胞中高度富集CCR7 － CD45RA －效应记忆性T细胞以及CCR7 － CD45RA +效应性T细胞。患者肿瘤免疫反应性强度与其外周血中WBC及HGB水平显著相关（ P值均<0.05），与其他临床基线特征无相关性。 结论:FucoID结合流式细胞术可快速鉴定及分离CML中肿瘤抗原特异反应性T细胞，该方法在CML中的成功应用提示其在血液肿瘤领域具有潜在的临床应用价值。

目的:本研究对2019年陕西省三带喙库蚊标本中分离的病毒(SX1943)进行病毒学和分子生物学鉴定。方法:蚊虫研磨液接种组织培养细胞，对分离物进行病毒学和病毒分子遗传学分析。结果:在2019年于陕西省采集的三带喙库蚊标本中获得1株病毒分离物(SX1943)，将该病毒接种至C6/36细胞后第3天发生明显细胞病变，表现为细胞圆缩、聚集和脱落等，分离物可稳定传代。然而，该批标本在BHK-21细胞连续传代3次均未发现显著细胞病变。SX1943病毒接种至C6/36细胞后经电子显微镜(负染)观察，可见大量圆形病毒颗粒，直径约25 nm。SX1943病毒基因组扩增与测序结果显示，该病毒基因组序列全长为3 594 nt，共编码3种蛋白，分别为非结构蛋白(NS1和NS2)和衣壳蛋白(VP)，3种蛋白的基因长度分别为2 376 nt、1 098 nt和1 136 nt。经病毒分子遗传进化分析发现，SX1943病毒与浓核病毒亚科 Brevidensovirus病毒属中的淡色库蚊浓核病毒(Culex pipiens pallens Densovirus, CppDNV)处于同一进化分支，上述结果提示SX1943病毒为CppDNV。 结论:陕西省三带喙库蚊中分离到CppDNV。

目的:初步探讨血清外泌体长链非编码RNA（lncRNA）对卵巢上皮性癌（卵巢癌）的诊断价值。方法:（1）收集2018年8月至2019年12月在广西医科大学附属肿瘤医院住院治疗的卵巢肿瘤患者，包括卵巢癌35例（恶性组）和卵巢良性肿瘤20例（良性组）；收集同期在本院体检的健康妇女15例（正常组）作为对照。抽取3组妇女的外周静脉血，采用商品试剂盒分离、纯化血清外泌体；外泌体的鉴定：透射电子显微镜观察外泌体的形态，NanoSight纳米颗粒分析技术分析外泌体的粒径分布，蛋白印迹（western blot）法检测外泌体的特异性标志蛋白分化群（CD） 63、CD 81、肿瘤易感基因101蛋白（TSG101）的表达情况。（2）随机抽取恶性组中4例卵巢癌患者（恶性测序组）和正常组中3例健康妇女（正常测序组），采用高通量测序技术分析两组妇女的血清外泌体差异表达的lncRNA，并筛选出差异表达明显的lncRNA；实时荧光定量PCR技术验证筛选出的差异表达lncRNA在恶性测序组和正常测序组妇女血清中的表达，进一步扩大样本量（即恶性组、良性组、正常组共70份血清）验证筛选出的差异表达lncRNA在其中的表达。（3）绘制筛选出的差异表达lncRNA诊断卵巢癌的受试者工作特征（ROC）曲线，评价其敏感度和特异度等诊断效能；构建多因子联合诊断模型，通过logistic回归模型结合ROC曲线，评价其对卵巢癌发生的诊断效能。 结果:（1）透射电子显微镜观察，血清外泌体为脂质双层膜结构，一侧呈凹陷的半球形或杯托样；NanoSight纳米颗粒分析技术分析显示，外泌体颗粒的直径峰值为127.6 nm，直径30~150 nm的外泌体颗粒占58.9%；western blot法检测显示，与卵巢癌细胞系SKOV3细胞相比，血清外泌体的特异性标志蛋白CD 63、CD 81、TSG101蛋白的表达强度明显增强。（2）高通量测序技术分析显示，相对于正常测序组妇女，恶性测序组患者血清外泌体中筛选出差异表达lncRNA 425个（其中上调23个、下调402个）；挑选上调、下调表达异常明显的lncRNA 6个，即FER1L6-AS2、LINC00470、LINC01811、CXXC4-AS1、LINC02343、LINC02428，采用实时荧光定量PCR技术对恶性测序组和正常测序组妇女血清进行验证，其表达情况与测序结果一致。随后对这6个lncRNA进一步扩大样本量验证，恶性组患者血清外泌体中FER1L6-AS2、LINC00470、LINC01811的表达水平分别升高至良性组、正常组妇女的1.66、1.84倍，2.05、2.46倍，2.94、2.35倍，CXXC4-AS1、LINC02343、LINC02428的表达水平分别下降至良性组、正常组妇女的29%、34%，40%、46%，42%、42%，同一lncRNA的表达水平在恶性组与良性组、恶性组与正常组中分别比较，差异均有统计学意义（ P均<0.05），而良性组与正常组分别比较，差异均无统计学意义（ P均>0.05）。（3）6个差异表达lncRNA单独诊断卵巢癌的ROC曲线下面积（AUC）为0.722~0.805，具有中等诊断价值。联合因子预测模型1（包括FER1L6-AS2和LINC01811）、联合因子预测模型2（包括CXXC4-AS1、LINC02343和LINC02428）、联合因子预测模型3（包括FER1L6-AS2、CXXC4-AS1、LINC02343和LINC02428）的AUC分别为0.865、0.934和0.962，各联合因子预测模型的诊断效能均显著高于单一lncRNA的诊断效能（ P均<0.05）。 结论:经实时荧光定量PCR技术验证，高通量测序技术是筛选血清外泌体差异表达lncRNA的有效方法；血清外泌体多个lncRNA联合检测对卵巢癌患者的诊断效能显著高于单一lncRNA检测。检测血清外泌体lncRNA可为卵巢癌的诊断提供新的思路。

目的:研究孕激素对人孕晚期蜕膜基质细胞（decidual stromal cells，DSCs）形态、增殖以及分泌细胞因子的影响，从而探究孕激素在预防自发性早产中的作用机制。方法:人孕晚期DSCs原代培养并鉴定，培养液中加入不同浓度的孕酮，分成10 -6 mol/L组、10 -5 mol/L组和10 -4 mol/L组，对照组培养液不加孕酮。显微镜下观察各组DSCs细胞形态、测量细胞长/宽比值；四甲基偶氮唑盐比色（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）法测定细胞增殖活性；RT-qPCR检测肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素-6（interleukin-6，IL-6）mRNA表达水平。 结果:①DSCs长/宽比值比较：孕酮10 -4 mol/L组（5.87±0.19）、10 -5 mol/L组（5.98±0.27）低于对照组（6.42±0.19），差异有统计学意义（ P<0.001， P=0.002），孕酮10 -4 mol/L组低于10 -6 mol/L组（6.28±0.32），差异有统计学意义（ P=0.005）。②细胞增殖活性比较：孕酮10 -5 mol/L组（0.70±0.04）、10 -4 mol/L组（0.78±0.04）分别高于对照组（0.59±0.05； P=0.027、 P=0.002），10 -4 mol/L组高于10 -6 mol/L组（0.61±0.01， P=0.004）。③ TNF-α mRNA表达比较：孕酮各浓度组均低于对照组（均 P<0.001），10 -5 mol/L组、10 -4 mol/L组均低于10 -6 mol/L组（均 P<0.001）； IL-6 mRNA表达比较：对照组、10 -6 mol/L组、10 -5 mol/L组和10 -4 mol/L组中， IL-6 mRNA表达水平逐渐降低，组间两两比较，差异均有统计学意义（均 P<0.001）。 结论:孕酮能使人孕晚期DSCs形态宽大饱满、促进细胞增殖、降低 TNF-α及 IL-6 mRNA表达水平，提示孕激素在预防自发性早产中起一定作用。

目的:探究白念珠菌anillin家族蛋白Int1对septin细胞骨架组织的调控。方法:构建白念珠菌Int1蛋白的全长及截短的系列片段质粒，使其与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达，通过荧光显微镜观察其胞内定位，鉴定Int1中介导芽颈定位的区域。在模式生物酿酒酵母细胞中，对Int1全长及片段进行过量表达，观察其对细胞生长、细胞形态和septin组织的影响，从而确定Int1中介导与septin相互作用，发挥主要生物学效应的功能区段，研究这一区段与septin的共定位。结果:Int1全长1 661个氨基酸残基，鉴定出一段仅含有209个氨基酸的中间区段Int1-M4(739~947 aa)，在小芽和大芽时期均可以定位在芽颈。过量表达Int1-M4导致细胞产生显著的生长缺陷、芽体变长的细胞形态和septin组织絮乱。在芽体变长的细胞中，Int1-M4与异常的septin结构存在明显共定位。结论:Int1中一段仅含有209个氨基酸的中间区段Int1-M4(739~947 aa)介导了其芽颈定位和与septin的相互作用，在调控septin组织过程中发挥重要功能。