目的 筛选多种常用的微针基质辅料,制备具有合适机械强度和柔韧性的载中华眼镜蛇神经毒素(neurotoxin,NT)可溶性微针(dissolvable microneedles,DMN)(DMN-NT),并对其进行体内外评价.方法 采用两步真空模板填充法制备不同材料构成的DMN,并对其进行力学特性分析,通过重量法对其吸湿性进行考察,利用正置显微镜对其形态特征进行考察,筛选最佳基质材料后制备DMN-NT,并对微针的载药量、机械性能、在体溶解、在体恢复、体外释放度、离体皮肤渗透与稳定性等进行评价.结果 针尖最佳基质材料为20％聚乙烯吡咯烷酮K90(PVPK90)和20％透明质酸(相对分子质量为10000),背衬层最佳基质材料为7.5％羟丙基甲基纤维素(HPMC,E5LV型)和15％聚乙烯醇(PVA-0588).正置显微镜和体式显微镜下观察发现DMN-NT针体垂直,排列整齐;每片DMN-NT的载药量为(172.22±1.30)μg或(17.38±0.57)μg;力学性能测试结果显示,DMN-NT针尖受力可达(39.88±3.09)N,大于微针穿刺皮肤所需的破坏力0.05N,表明DMN-NT有较好的机械强度,亚甲基蓝染色实验结果表明微针具有较好的穿刺性;在体溶解实验结果显示,在10min内DMN-NT大部分溶解;在体恢复实验结果为给药30min后针孔痕迹几乎不见,表明DMN-NT的生物相容性好,安全性高;体外释放结果表明DMN-NT在pH值为7.4的PBS中8min的累积释放率达(93.65+4.29)％;离体皮肤渗透结果显示,10h后微针的累积药物渗透百分率达到(97.99+2.80)％,而药物水溶液中药物几乎没有透过皮肤;DMN-NT稳定性初步评价结果良好.结论 制备的DMN可以穿刺皮肤角质层,具有较好的溶解性和生物相容性,可以高效经皮递送大分子药物.

目的 观察祛腐生肌方治疗中华眼镜蛇咬伤溃疡患者的临床疗效.方法 将60例中华眼镜蛇咬伤后伤口溃疡的患者随机分为治疗组与对照组各30例,两组患者均给予毒蛇咬伤后的常规处理,并清除坏死组织.治疗组在上述治疗基础上,给予祛腐生肌方均匀涂抹在溃疡面上,并外用无菌纱布覆盖和绷带固定妥当.对照组在上述治疗基础上,给予利凡诺尔湿敷溃疡创面.两组患者均每天换药2次,治疗2周.结果 治疗2周后,治疗组患者在溃疡肢体肿胀、皮疹、疼痛、愈合有效率、愈合时间、后遗症等方面的比较,治疗组疗效均优于对照组(P＜0.05).结论 祛腐生肌方对治疗中华眼镜蛇咬伤溃疡后红肿、皮疹、疼痛、愈合有效率、愈合时间、后遗症等疗效显著.

目的 以中华眼镜蛇神经毒素为模型药物制备相转化水凝胶微针,并对其质量以及镇痛作用进行评价.方法 采用两步法制备神经毒素相转化水凝胶微针.利用光学显微镜和扫描电子显微镜对微针形貌进行考察,筛选最佳处方,在最佳处方下对微针的载药量、机械性能、体外溶胀、体外透皮等进行综合评价.最后通过热板实验考察神经毒素相转化水凝胶微针的镇痛作用.结果 针尖部位最佳处方为聚乙烯醇/葡萄糖水溶液(84/16,W/W),背衬层最佳处方为聚乙烯醇水溶液(25%,W/W).光学显微镜和扫描电镜下微针针体垂直,排列整齐,矩阵清晰;HE染色结果表明微针可以刺入皮肤表层为药物递送提供通道.180 min后溶胀率达到210%;载药量可达到23.4%;12 h后体外释放率接近85%;6 h后微针的体外透皮率达到80%,而中华眼镜蛇神经毒素水溶液几乎没有穿过皮肤.药效学实验表明,神经毒素相转化水凝胶微针具有镇痛作用.结论 本实验制备的微针可以刺破皮肤,在体内可以达到镇痛的疗效,为蛋白类药物剂型的开发提供了新的思路和策略.

目的 探讨中华眼镜蛇膜毒素12(MT-12)对膀胱癌细胞的增殖、凋亡及自噬的影响.方法 ①采用CCK-8法检测不同浓度(0.10、0.25和0.50μg/ml)的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120 h后,对膀胱癌RT4、T24细胞增殖能力的影响;②采用流式细胞术检测MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24 h后,对膀胱癌RT4、T24细胞凋亡的影响,主要观察细胞凋亡率的改变;③Pan-Caspase抑制剂和MT-12处理膀胱癌细胞后通过MTT法检测细胞活力;④通过GFP-LC3转染,观察自噬小体形成,通过Western blotting检测自噬标志物的表达情况.结果 CCK-8检测结果显示,不同浓度的MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞0、24、48、72、96和120 h后,MT-12能抑制膀胱癌RT4、T24的细胞增殖.流式细胞术检测细胞凋亡的结果显示,MT-12处理膀胱癌RT4、T24细胞6及24 h后,实验组可以增加凋亡细胞的比例.Pan-Caspase抑制剂V-ZAD-FMK对2株膀胱癌细胞系进行处理后,MT-12并未完全失去对膀胱癌的抑制效果.Western blotting和GFP-LC3转染检测结果显示,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增大,GFP-LC3转染结果自噬体(绿色荧光点)增多.结论 MT-12以浓度-时间依赖的方式抑制膀胱癌RT4、T24细胞的增殖能力,并诱导其调亡;MT-12能够引起细胞的自噬,并且自噬性的死亡可能发生在MT-12对膀胱癌细胞的抑制作用过程中.

目的 制备中华眼镜蛇神经毒素(NT)可溶性微针(DMNs-NT),并考察其理化性质及体外透皮性能.方法 采用两步离心法制备DMNs-NT,并以微针针体的成形性、机械强度及背衬层的柔韧性为指标,考察硫酸软骨素(CS)与聚乙烯吡咯烷酮(PVPk30)的比例、基质液含水量、背衬层材料;HPLC法测定其载药量,正置光学显微镜表征,并考察稳定性;采用Franz扩散池考察其体外透皮性能.结果 通过单因素考察确定DMNs-NT制备的最佳处方工艺为CS与PVP K30比例1∶1、基质材料与加水量比例5∶4、以羧甲基纤维素(CMC)为背衬层材料.DMNs-NT针体呈四棱锥形,表面平整,长度约为500 μtm,每片含药量为(15.4±0.5) μg,药物位于针体上部,3个月内稳定性良好.离体皮肤渗透结果显示,4h后DMNs-NT中NT的累积渗透量可达95.8％,而NT溶液几乎没有透过皮肤,证明可溶性微针对NT透皮递送具有良好的促进作用,能有效穿透大鼠离体皮肤.结论 制备DMNs-NT机械强度及柔韧性好,实现了大分子药物NT的透皮递送.

目的 探讨波动式负压封闭引流术与传统负压封闭引流术(VSD)对中华眼镜蛇咬伤的治疗效果.方法 选取中华眼镜蛇咬伤病人120例,随机分为治疗组与对照组,每组各60例.两组病人均早期给予程序化综合治疗,对照组应用传统VSD治疗,治疗组使用波动式负压封闭引流治疗.对两组病人的治疗效果进行比较分析.结果 两组病人治疗前皮肤组织坏死积分、伤肢肿胀程度及肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).治疗后1～5 d两组病人皮肤组织坏死积分及伤肢肿胀程度均得到改善(F=162.935、238.084,Waldχ2=122.335、164.635,P<0.05),但治疗组皮肤组织坏死积分在第3天开始效果显著提升(F=33.570～238.548,P<0.05),伤肢肿胀程度的效果也更显著(Waldχ2=6.892～8.352,P<0.05).治疗后第3天开始两组CK、LDH、hs-CRP水平开始下降,但治疗组效果更显著(F=38.863～562.686,P<0.05).对照组有效率为73.33％,显著低于治疗组的93.33％(χ2=6.793,P<0.05).结论 波动式负压封闭引流术对中华眼镜蛇咬伤病人的疗效优于VSD.

目的 探讨毒蛇咬伤后症状复发的机制和治疗方法.方法 通过结合文献资料分析1例66岁男性被中华眼镜蛇咬伤的患者,经当地治疗后伤口结痂愈合,咬伤后第11天出现中毒症状再次复发,结合文献资料进行分析.结果 中华眼镜蛇咬伤初期处理后结痂愈合,但在被咬伤后11 d再次出现中毒症状(复发),右手及右前臂中段以下出现轻度红肿伴严重疼痛;经红外线热成像证明,局部温度异常升高,为炎症改变,经非甾体抗炎药等治疗后症状短暂改善,但数小时后复发,于咬伤后第12天追加抗眼镜蛇毒血清1支(1000 U)后红肿消失,疼痛程度及范围明显缩小或减轻;于咬伤后第17天再次追加抗眼镜蛇毒血清1支(1000 U)后症状完全缓解,经随诊3个月未再复发.经检索文献,国内未见系统报道,国外报道仅20余例,且神经毒类蛇和血液毒类蛇咬伤中毒均可发生症状再发.结论 毒蛇咬伤后长时间症状复发较罕见,及时追加抗蛇毒血清治疗是关键救治措施,且可以获得良好预后.

本研究对眼镜蛇科广西华珊瑚蛇(Sinomicrurus peinani)线粒体基因组序列进行测定与分析,并探究其与近缘种的系统发育关系.结果表明,广西华珊瑚蛇线粒体基因组是一条全长19 477 bp的环状DNA,基因组碱基构成为A(33.4％)、T(28.1％)、C(26.6％)和G(11.9％).共编码38个基因,包含2个核糖体RNA(rRNA)基因、22个转移RNA(tRNA)基因、13个蛋白质编码基因及1个线粒体基因控制区(D-loop).13个蛋白质编码基因均采用AUG作为起始密码子,UAA和UGA作为终止密码子;蛋白质编码基因编码频率较高的氨基酸分别为亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、苏氨酸(Thr)和丝氨酸(Ser);相对密码子使用度(RSCU)频率最高的4个密码子依次是CGA、UGA、CUA和CCA.22个tRNA,除tRNASer(一臂两环)外其他均可形成典型三叶草结构.基于眼镜蛇科线粒体基因组系统发育分析结果表明,与广西华珊瑚蛇关系最密切的是中华珊瑚蛇(Sinomicrurus macclellandi),其次是孟加拉眼镜蛇(Naja kaouthia)与眼镜王蛇(Ophiophagus hannah).