目的:基于蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/活化转录因子4(ATF4)/转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)信号通路探讨丹参多酚酸盐对膜性肾病(MN)大鼠内质网应激的影响.方法:将80只雄性SD大鼠随机分配,其中20只为正常组,剩余60只大鼠采用尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法诱导MN病变.将造模成功的大鼠随机分为模型组、贝那普利组和丹参多酚酸盐低、中、高剂量组,每组10只,另取10只正常组大鼠共同进行实验.贝那普利组每日给药剂量为10 mg/kg,丹参多酚酸盐低、中、高剂量组每日给药剂量分别为16.7、33.3、66.7 mg/kg,正常组和模型组予等体积生理盐水,各组均每日灌胃1次,连续4周.检测各组大鼠治疗后24h尿蛋白定量(24 h-UTP);腹主动脉取血分离血清,检测各组大鼠血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)含量;过碘酸六胺银(PASM)染色后光镜观察各组大鼠肾组织病理形态,透射电子显微镜进一步观察各组大鼠肾组织细微结构变化;免疫荧光法检测各组大鼠肾组织免疫球蛋白G(IgG)沉积情况;免疫组化(IHC)法检测各组大鼠肾组织足细胞裂隙膜蛋白(Podocin)、足细胞裂孔隔膜蛋白(Nephrin)表达水平;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠肾组织PERK、ATF4、CHOP、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达.结果:相较于正常组,模型组大鼠的肾组织显示出显著的病理性变化,肾小球基底膜显著增厚,并出现类似钉突的结构改变,同时伴有系膜基质的增生现象,沿毛细血管袢有IgG弥漫性沉积;各给药组大鼠肾组织上述病理改变有所缓解,足细胞损伤减少,IgG沉积减轻.模型组大鼠24 h-UTP水平显著高于正常组(P＜0.01);各给药组大鼠24 h-UTP水平均显著低于模型组(P＜0.05,P＜0.01),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠24 h-UTP水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P＞0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠24 h-UTP水平明显低于贝那普利组(P＜0.01),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠24 h-UTP水平的降低作用具有明显的剂量依赖性(P＜0.01).各组大鼠血清BUN、Scr水平比较差异均无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠肾组织Podocin、Nephrin蛋白表达显著低于正常组(P＜0.05);各给药组大鼠上述蛋白表达均显著高于模型组(P＜0.05),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠上述蛋白表达水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P＞0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠上述蛋白表达水平明显高于贝那普利组(P＜0.05),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠上述蛋白表达水平的升高作用具有明显的剂量依赖性(P＜0.05).模型组大鼠肾组织PERK、ATF4、CHOP、Bax蛋白表达水平均明显高于正常组(P＜0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显低于正常组(P＜0.01);各给药组大鼠肾组织上述蛋白表达水平均较模型组显著改善(P＜0.05,P＜0.01),其中丹参多酚酸盐中剂量组大鼠上述蛋白表达水平与贝那普利组比较差异无统计学意义(P＞0.05),丹参多酚酸盐高剂量组大鼠上述蛋白表达的改善程度显著优于贝那普利组(P＜0.01),丹参多酚酸盐对MN模型大鼠上述蛋白表达水平的改善作用具有明显的剂量依赖性(P＜0.01).结论:丹参多酚酸盐可能通过调控PERK/ATF4/CHOP信号通路,缓解肾组织内质网应激,抑制足细胞凋亡,进而保护肾脏及延缓疾病进展.

目的:观察丹参多酚酸盐干预后急性非ST段抬高型心肌梗死(non-ST segment elevation myocardial infarction, NSTEMI)患者生物标志物的变化。方法:将符合入选标准的2016年1月-2019年12月本院81例NSTEMI患者采用随机数字表法分为2组，治疗过程中，2组各脱落6例，最终对照组34；例、治疗组35例完成研究。对照组采用西医常规疗法治疗，治疗组在对照组基础上静脉滴注0.9%氯化钠注射液250 ml＋注射用丹参多酚酸盐。2组均连续治疗10 d。采用胶乳免疫比浊法检测超敏C反应蛋白(high sensitivity CRP, hs-CRP)，采用双抗夹心免疫化学发光法检测降钙素原(procalcitonin, PCT)、电化学发光法检测N末端B型利钠肽原(N-terminal pro-B-type natriuretic peptide, NT-proBNP)、凝固法检测血浆纤维蛋白原(fibrinogen, FIB)、免疫分析法检测D-二聚体。记录并采集患者住院期间(0～10 d)梗死后心绞痛发作次数，以及院内急性心力衰竭、院内再发心肌梗死、院内恶性心律失常、院内死亡等心血管不良事件。结果:治疗后，治疗组hs-CRP[(2.46±1.76)mg/L比(3.45±0.67)mg/L， t＝2.324]、PCT[(0.52±0.30)ng/L比(0.11±0.08)ng/L， t＝2.059]、FIB[(1.30±0.63)g/L比(1.97±0.67)g/L， t＝2.168]水平均低于对照组( P<0.05)，NT-proBNP和D-二聚体水平具有下降趋势，但组内及组间比较，差异无统计学意义( P>0.05)。住院期间，治疗组梗死后心绞痛发作次数低于对照组( t＝4.019， P＝0.045)；院内急性心力衰竭发生率，以及院内再发心肌梗死、恶性心律失常和院内死亡的发生率组间比较，差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:丹参多酚酸盐可在单纯西药治疗基础上降低NSTEMI患者的炎症反应，缓解高凝状态，减少梗死后心绞痛发作次数。

目的:探讨丹参来源的Sal-miR-58对人胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响及其分子机制。方法:分别采用体外合成的不同浓度的miR-Ctl和Sal-miR-58模拟物处理胶质瘤U251细胞，再给予X线照射。MTT检测Sal-miR-58对U251细胞活力的影响。Hoechst33342/碘化丙啶（PI）双染检测Sal-miR-58对照射后胶质瘤U251细胞凋亡的影响。2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）探针检测Sal-miR-58联合照射对肿瘤细胞活性氧含量的影响。克隆形成实验检测Sal-miR-58联合照射对U251细胞放射敏感性的影响。蛋白质印迹法检测Sal-miR-58调控抗凋亡蛋白造血细胞特异性蛋白1-相关蛋白X-l（HAX1）及凋亡标志蛋白B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、活化的胱天蛋白酶（Cleaved-Caspase）9、Cleaved-Caspase 3的表达情况。多组间比较行单因素方差分析，两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:Sal-miR-58能加重照射后U251细胞增殖的抑制（ P<0.05）。Sal-miR-58促进U251细胞凋亡，并且增加照射后U251细胞活性氧的产生（ P<0.05）。克隆形成实验显示，Sal-miR-58增加U251细胞放射敏感性，放射增敏比为1.43。蛋白质印迹法结果显示，Sal-miR-58抑制放射诱导的U251细胞HAX1表达，且Sal-miR-58能通过阻抑HAX1表达进而抑制Bcl-2表达，促进Caspase 9及Caspase 3的活化。 结论:Sal-miR-58具有增强U251细胞放射敏感性的作用，其可能机制是Sal-miR-58通过下调射线诱导的HAX1表达，促进肿瘤细胞的凋亡。

VEGF与血管内皮生长因子受体（VEGF recepor, VEGFR）结合的信号转导通路是调控血管新生的关键通路，也是疾病基础研究的重点及临床治疗的重要靶点。丹参提取物及主要化合物丹酚酸B在不同疾病中对VEGF/VEGFR信号通路也有双向调节作用，丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA、隐丹参酮可通过该通路抑制血管生成，丹参酮ⅡA磺酸钠可通过该通路促进血管生成。

目的:评价丹酚酸B(Sal B)对脓毒症小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)炎症反应的影响及circACTA2在其中的作用。方法:在体实验：健康雄性C57BL/6小鼠81只，6～8周龄，采用随机数字表法分为3组( n＝27)：假手术组、脓毒症组和Sal B组。采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症模型。模型制备成功后，Sal B组腹腔注射Sal B 7 mg/kg，1次/d，连续2 d。每组随机取20只小鼠用于造模后7 d内测定SBP、DBP、MAP、全血乳酸(Lac)浓度，记录生存情况。造模后48 h时每组随机取7只小鼠，取动脉血管组织，采用免疫荧光染色法测定IL-1β表达，分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定IL-1β 、TNF-α 、IL-6及其mRNA的表达，采用qRT-PCR法测定circACTA2的表达。细胞实验：小鼠动脉VSMC培养后，采用随机数字表法分为6组( n＝3)：对照组(C组)、LPS组、Sal B组、si-circACTA2＋C组、si-circACTA2＋LPS组和si-circACTA2＋Sal B组。LPS组采用LPS(终浓度1 μg/ml)、Sal B组采用LPS(终浓度1 μg/ml)和Sal B (终浓度5 μmol/L)孵育24 h。si-circACTA2＋C组仅用si-circACTA2转染VSMC。si-circACTA2转染VSMC 24 h后，si-circACTA2＋LPS组用LPS (终浓度1 μg/ml)、si-circACTA2＋Sal B组采用LPS(终浓度1 μg/ml)和Sal B (终浓度5 μmol/L)孵育24 h。分别采用Western blot法和qRT-PCR法测定IL-1β 、TNF-α 、IL-6及其mRNA的表达，采用qRT-PCR法测定circACTA2的表达。 结果:在体实验：与假手术组相比，脓毒症组SBP、DBP及MAP降低，全血Lac浓度升高，7 d生存率降低，动脉血管组织IL-1β、TNF-α和IL-6及其mRNA表达上调，circACTA2表达下调( P<0.05)，IL-1β荧光增强。与脓毒症组相比，Sal B组SBP、DBP及MAP升高，全血Lac浓度降低，7 d生存率升高，动脉血管组织IL-1β、TNF-α和IL-6及其mRNA表达下调，circACTA2表达上调( P<0.05)，IL-1β荧光减弱。细胞实验：与C组相比，LPS组IL-1β、TNF-α和IL-6及其mRNA表达上调，circACTA2表达下调( P<0.05)。与LPS组相比，Sal B组IL-1β、TNF-α和IL-6及其mRNA表达下调，circACTA2表达上调( P<0.05)。与si-circACTA2＋C组相比，si-circACTA2＋LPS组IL-1β、TNF-α和IL-6及其mRNA表达上调( P<0.05)。与si-circACTA2＋LPS组相比，si-circACTA2＋Sal B组IL-1β、TNF-α和IL-6及其mRNA表达差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:Sal B可减轻脓毒症小鼠VSMC炎症反应，机制可能与促进circACTA2表达有关。

目的:建立丹参-当归药对配伍前后HPLC指纹图谱及多指标成分含量测定方法，探讨丹参-当归配伍对主要化合物溶出的影响。方法:制备丹参、当归单煎及共煎溶液，采用Eclipse XDB-C 18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以0.1%磷酸水溶液-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱，流速1.0 ml/min，柱温35 ℃，检测波长280 nm，建立丹参-当归药对配伍前后HPLC指纹图谱，求取指纹图谱共有模式，进行色谱峰归属；测定丹参素、咖啡酸、迷迭香酸、丹酚酸B、丹酚酸A、丹参酮Ⅱ A、阿魏酸、绿原酸、洋川芎内酯9种成分含量，分析配伍前后各成分溶出度变化。 结果:HPLC指纹图谱及含量测定方法精密度良好，溶液中各待测成分在48 h内稳定，各色谱峰 RSD值均<5.0%，9种成分在各自线性范围内均有良好的线性关系，回收率均符合相关规定，各样品指纹图谱相似度均>0.9；丹参-当归药对配伍后共标定出17个共有峰，其中10个成分来自丹参，7个成分来自当归，该色谱条件下未发现有新化合物生成；丹参-当归药对配伍共煎后，丹参中迷迭香酸、丹酚酸B及丹参素平均溶出度较丹参单煎组减少（ P<0.05或 P<0.01）；丹参中咖啡酸平均溶出度较丹参单煎组增加（ P<0.01）；当归中绿原酸及阿魏酸平均溶出度较当归单煎组增加（ P<0.05或 P<0.01）；当归中洋川芎内酯平均溶出度与单煎组比较差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:丹参-当归药对配伍共煎后HPLC指纹图谱特征峰均可归属于丹参与当归，该色谱条件下未发现新化合物生成，对指标性成分的溶出度有显著影响。

目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)通过调节丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)途径对膀胱癌动物模型肿瘤增殖及肿瘤组织内凋亡相关因子的影响。方法:选择30只4～5周龄的雄性BALB/-nu裸鼠，购自北京维通利华科技服务有限公司，其中20只注射1×10 7/ml的T24细胞悬液，待肿瘤体积大于0.1 cm 3，根据随机数表法对其进行分组干预，共分为模型组、治疗组，每组10只，另外10只裸鼠作为对照组；模型组及对照组给予生理盐水腹腔内注射，治疗组给予15 mg/kg的TanⅡA腹腔注射，均干预2周；开始干预后每天测量瘤体积1次，绘制肿瘤增殖曲线并在干预结束后将裸鼠处死后取0.1 g肿瘤组织检测半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、脱氧核糖核酸修复酶降解产物(Cleaved PARP)、细胞凋亡调控因子(bax)、B淋巴细胞瘤-2基因蛋白(bcl-2)、丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)水平，采用卡方分析计数资料差异，LSD- t检验及方差检验分析组间或多组间数据差异。 结果:给药7 d后治疗组裸鼠瘤体积明显低于模型组，且差异有统计学意义( t＝4.445， P<0.01)；3组小鼠组织中Caspase-3、Cleaved PARP、bax、bcl-2水平差异有统计学意义( F＝5.937、4.264、6.135、5.364， P<0.01)；相较于模型组，治疗组小鼠组织中Caspase-3、bcl-2明显降低(0.54±0.10、0.56±0.12比0.87±0.12、0.88±0.19)，Cleaved PARP、bax明显升高(0.94±0.21、0.79±0.13比0.65±0.12、0.32±0.08)，且差异存统计学意义( t＝6.681、4.503、3.392、9.731， P<0.01)；3组小鼠组织中p-p38 MAPK、p-ERK水平差异，有统计学意义( F＝3.046、3.216， P<0.05)，相较于模型组，治疗组下小鼠组织中p-p38 MARK及p-ERK水平明显降低(0.61±0.11、0.54±0.11比0.87±0.13、0.69±0.13)，且差异存统计学意义( t＝4.828、4.503， P<0.01)。 结论:TanⅡA通过有效调节p38MAPK/ERK途径实现抑制膀胱癌动物模型肿瘤增殖并调控肿瘤组织内凋亡相关因子。

目的 探讨不同配比丹参-三七(SM-PN)药对抗BV2细胞氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)损伤的保护作用,并探索其可能的作用机制.方法 建立BV2细胞OGD/R模型,实验分为空白组、模型组及不同配比SM-PN+OGD/R组,采用CCK-8法筛选出细胞活力最好的SM-PN配比;Real-time PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β)的mRNA表达;Western blot法检测核因子KB抑制蛋白α(IKBα)、磷酸化核因子κB抑制蛋白α(p-IκBα)、核因子-KB p65(NF-κB p65)、磷酸化核因子-κB p65(NF-κB p-p65)的磷酸化蛋白水平.结果 200 mg·L-1的SM-PN 5∶3组BV2细胞生存率较模型组显著升高(P＜0.05).与模型组比较,SM-PN组能显著下调IκBα和p65蛋白磷酸化水平;SM-PN组iNOS、TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平显著降低(P＜0.05);TGF-β、IL-10 mRNA表达水平显著增加(P＜0.05).结论 SM-PN能减轻OGD/R诱导的BV2细胞炎症损伤,这可能与抑制NF-KB信号通路,促进小胶质细胞从M1向M2型转化抑制炎症反应有关.

丹参酚酸类化合物是丹参发挥保护心血管系统、抗肿瘤与抗纤维化等多种药理作用的一类关键物质基础.以合成丹酚酸A、丹酚酸B和迷迭香酸等丹参酚酸类化合物为目标的微生物细胞工厂的构建,可以实现丹参酚酸类化合物异源高效合成,缓解临床对丹参药材的用药压力.本文就丹参酚酸类化合物的合成生物学、生物合成关键催化酶及其代谢调控等研究现状进行了归纳分析,以期为丹参酚酸类化合物的高效合成与资源应用提供科学依据.

目的 基于网络药理学和分子对接技术筛选补肾活血方防治糖尿病性视网膜病变的质量评价指标,同时建立活性成分的超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UHPLC-QqQ-MS/MS)含量测定方法.方法 利用网络药理学筛选补肾活血方防治糖尿病性视网膜病变的关键化合物和靶点.基于分子对接技术验证化合物和靶点的相关性,确定补肾活血方的活性成分作为质量评价指标.建立补肾活血方活性成分的UHPLC-QqQ-MS/MS含量测定方法.采用ZORBAX SB-C18(2.1 mm×50 mm,1.8 μm)色谱柱,甲醇(A)-0.1%甲酸水溶液(B)作为流动相,在多反应监测模式下进行梯度洗脱.流速:0.3 mL·min-1;进样量:1 μL.结果 网络药理学及分子对接筛选出了 5 个核心靶点及 12 个活性成分(毛蕊花糖苷,松果菊苷,异类叶升麻苷,丹参酮ⅡA,隐丹参酮,二氢丹参酮I,人参皂苷Re、Rd和Rb1,葛根素,大豆苷,鹰嘴豆牙素A),其亲和力良好(结合能≤-5.0 kcal·mol-1).含量测定结果表明,各成分在线性范围内相关性良好(r＞0.999 5),平均加样回收率在 97.57%～101.48%.8 批样品中 12个成分含量分别为 0.027 9%～0.050 6%、0.006 4%～0.022 0%、0.017 1%～0.041 5%、0.009 2%～0.015 4%、0.012 6%～0.020 5%、0.004 4%～0.007 6%、0.334%～0.643%、0.238%～0.530%、0.353%～0.693%、3.411%～6.048%、1.023%～1.352%和 0.000 8%～0.001 8%.结论 基于网络药理学、分子对接和UHPLC-QqQ-MS/MS技术,建立了快速筛选并测定补肾活血方中 12 个活性成分的方法,为全面评价其质量及有效性提供了参考.