目的:研究广泛耐药肺炎克雷伯菌（XDRKP）耐药表型特点及相关耐药机制。方法:收集山西白求恩医院2018年1月至2020年12月内分离的3 201株肺炎克雷伯菌并根据已有药敏结果筛选116株广泛耐药肺炎克雷伯菌纳入研究。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）及梅里埃VITEK-compact 2进行菌株鉴定及药敏试验，药敏结果K-B法或微量肉汤稀释法复核。改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM）联合乙二胺四乙酸协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM）检测XDRKP碳青霉烯酶表型，并与碳青霉烯酶基因扩增结果比对。聚合酶链反应（PCR）扩增耐药基因：碳青霉烯酶基因（blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA）；氨基糖苷耐药基因：16S rRNA甲基化酶基因（rmtA、rmtC、rmtD、rmtG、rmtH、armA、npmA、rmtB、rmtE、rmtF），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；喹诺酮耐药基因：DNA解旋酶保护蛋白qnr家族基因（qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS），外排泵蛋白基因（oqxAB、qepA），氨基聚糖苷修饰酶基因变体［aac（6′）-Ib-cr］；替加环素耐药Tet蛋白基因［外排泵蛋白基因：tet（A）和tet（L）］，核糖体保护蛋白基因［tet（M）］，替加环素修饰酶基因［tet（X）］。对照分析各XDRKP耐药表型与相应耐药基因携带情况间的关系。结果:共收集到XDRKP 116株。头孢菌素类及喹诺酮类抗菌药物耐药率100%（116/116），碳青霉烯类抗菌药物耐药率99.14%（115/116），氨基糖苷类抗菌药物庆大霉素、妥布霉素、阿米卡星耐药率分别为95.69%（111/116）、94.83%（110/116）、88.79%（103/116），磺胺类抗菌药物耐药（44/116）与替加环素耐药（3/116）检出率较低。mCIM联合eCIM试验结果与碳青霉烯酶基因扩增结果一致率95.65%（110/115）。各耐药基因阳性率：blaKPC 90.52%（105/116），blaNDM 10.34%（12/116），rmtB 81.90%（95/116），armA 2.59%（3/116），oxqAB 65.52%（76/116），qnrB 6.03%（7/116）、qnrS 12.93%（15/116）、aac（6′）-Ib-cr 7.76%（9/116），tet（A）21.55%（25/116）。其余各耐药基因未检出。匹配分析发现，共有65株XDRKP耐药表型与耐药基因型不匹配，即抗菌药物耐药表型不能用携带相应耐药基因来解释。结论:XDRKP中各类耐药基因的广泛分布和某些基因［如aac（6′）-Ib-cr、oqxAB］的多重耐药作用是广泛耐药产生的潜在原因。不同菌株针对同一类抗菌药物可能携带一种或多种耐药基因。此外，部分菌株耐药表型与耐药基因不匹配，提示耐药基因的表达调控及存在其他耐药机制也与XDR的产生有关。

目的:了解临沂地区碳青霉烯酶的基因型及耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）对头孢他啶-阿维巴坦（CAZ/AVI）的药物敏感性，为临床合理用药提供依据。方法:选取临沂市人民医院2019年1月至2020年12月临床标本分离获得的179株CRE，用改良碳青霉烯酶灭活试验（mCIM试验）和乙二胺四乙酸（EDTA）协同碳青霉烯酶灭活试验（eCIM试验）与荧光定量PCR快速检测系统GeneXpert 2种方法检测碳青霉烯酶，用K-B法检测CAZ/AVI的药物敏感性。结果:179株CRE中，mCIM阳性174株（97.2%），eCIM阳性147株（84.5%）；产丝氨酸酶27株（15.5%），金属β-内酰胺酶147株（84.5%）。GeneXpert检测结果与mCIM、eCIM表型检测结果一致。174株mCIM阳性菌株对CAZ/AVI的敏感率为33.3%（58/174），其中27株产丝氨酸酶菌株的敏感率为96.3%（26/27），147株产金属β-内酰胺酶菌株的敏感率为100%。结论:临沂地区CRE的碳青霉烯酶型以金属β-内酰胺酶为主。产丝氨酸酶CRE对CAZ/AVI有较高敏感性。

目的 探讨儿童感染ST2735型产NDM-5碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)流行病学特征及耐药机制.方法 收集徐州医科大学附属医院2018年3月-2022年3月临床首次分离的儿童感染的亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌24株,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(eCIM)检测碳青霉烯酶,聚合酶链式反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因,多位点序列分型(MLST)技术和脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法检测其同源性.结果 2018年3月-2022年3月分离出24株亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌,其中发现NDM-5型CRKP 15株,检出率62.50％,这15株CRKP感染患儿均有基础疾病和抗菌药物使用史;15株NDM-5型CRKP菌株对头孢菌素类、碳青霉烯类和头孢他啶/阿维巴坦均耐药.MLST分型以ST2735型(25.00％)为主,PFGE分析显示6株ST2735型CRKP具有高度同源性,且均来自于新生儿重症监护室(NICU).结论 医院NICU存在ST2735型产NDM-5 CRKP的克隆流行,应当加强院感监测及预防,防止其产生新的流行危害.

目的 评估迪尔碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产不同基因型碳青霉烯酶的效能.方法 收集 2018-2020 年广东省中医院临床分离的 73 株非重复 CRE.采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)联合乙二胺四乙酸(EDTA)碳青霉烯灭活试验(eCIM)以及碳青霉烯酶抑制剂检测碳青霉烯酶,采用聚合酶链式反应(PCR)检测 10 种常见β-内酰胺酶基因.以PCR为金标法,评估两种表型试验的临床效能.结果 mCIM试验阳性 54 株,产丝氨酸碳青霉烯酶 20 株,产金属β-内酰胺酶 34 株,符合率为 98.63%(72/73).碳青霉烯酶抑制剂检出 56 株产碳青霉烯酶,产A类酶 22 株,产B类酶 34 株.1 株产OXA-181 的摩根摩根菌为假阴性,2 株不产碳青霉烯酶、高产头孢菌素酶 DHA 的 CRE 为假阳性.碳青霉烯酶抑制剂灵敏度和特异度分别为 98.18%(54/55)和 88.89%(16/18),符合率为 95.89%(70/73).结论 mCIM联合eCIM无法区分A类和D类丝氨酸碳青霉烯酶.碳青霉烯酶抑制剂符合率较 mCIM联合 eCIM试验稍低,能有效鉴别 A类和 B类酶,但在 D类酶和高产 AmpC酶的CRE检测上仍存在不足.碳青霉烯酶抑制剂与 mCIM/eCIM联合能更全面地实现碳青霉烯酶分型,精准指导临床合理用药.

目的 分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的耐药情况及其耐药基因,为该菌感染的治疗和预防提供参考.方法 收集临床分离非重复耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌50株,采用VITEK-2 compact全自动微生物鉴定药敏分析仪进行常规药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)检测碳青霉烯酶,乙二胺四乙酸(EDTA)协同法检测金属酶,PCR扩增和基因测序技术检测其耐药基因.结果 药敏结果显示,肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类、青霉素类、头孢菌素类及氨曲南等抗生素的耐药率高达80%以上.50株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,mCIM试验结果阳性37株,其中EDTA协同试验阳性有3株.PCR结果显示,37株mCIM试验阳性耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中,检测出33株KPC-2型耐药基因,未检测出IMP、VIM、NDM-1、OXA-48等耐药基因.结论 耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗生素表现出高水平耐药,耐药机制主要为产碳青霉烯酶,耐药基因型主要以KPC-2型为主.

目的 了解新药头孢他啶-阿维巴坦(CZA)在耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)中的药物敏感性,为临床合理用药提供依据.方法 选取2015-2017年从临床各科标本中分离获得的96株CRKP,用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)和乙二胺四乙酸(EDTA)协同碳青霉烯灭活试验(eCIM试验)检测碳青霉烯酶,用K-B法检测CZA的药物敏感性.结果 96株CRKP中,mCIM阳性44株(45.83％)、eCIM阳性20株(20.83％)、产丝氨酸酶24株(25.00％)、产金属酶20株(20.83％)、CZA敏感78株(81.25％).其中,疑为假敏感2株.结论 CZA对CRKP存在着较高的敏感性,检测CRKP是否产碳青霉烯酶,以及产酶类型的检测更有利于指导临床对该药物的合理使用.

目的 应用乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活法(eCIM)联合改良碳青霉烯灭活法(mCIM)检测肺炎克雷伯菌(KPN)中碳青霉烯酶的分型,并初步评估其用于分型的效能.方法 以KPN为研究对象,eCIM联合mCIM试验分析产金属酶和丝氨酸酶碳青霉烯酶的表型,以PCR为金标准,评估eCIM联合mCIM试验检测碳青霉烯酶分型的准确率.结果 检测94株耐碳青霉烯类KPN,其中87株mCIM试验阳性,为产碳青霉烯酶株;7株mCIM阴性,为非产碳青霉烯酶株.产碳青霉烯酶菌株中75株eCIM阴性,为丝氨酸酶表型;12株eCIM阳性,为金属酶表型.PCR检测碳青霉烯酶编码基因阳性株87株,其中丝氨酸酶KPC-2基因阳性76株,金属酶IMP基因阳性12株,1株同时携带KPC-2和IMP基因.x2分析两种方法检测结果的一致性,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 eCIM联合mCIM试验检测KPN中碳青霉烯酶分型,与PCR结果一致,不需购买特殊试剂,操作简便,易于推广,可为临床抗感染用药及医院感染控制提供重要参考.

目的 了解该院耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(CRE)的流行特点、耐药现状及分子型别,为控制CRE的传播及临床治疗提供科学依据.方法 收集该院微生物室2017年1月至2019年5月临床标本中分离的91株CRE,使用Vitek 2 Compact全自动细菌鉴定系统进行细菌鉴定和药敏试验,改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)联合检测碳青霉烯酶表型,采用PCR扩增耐药基因,多位点序列分型(MLST)分析菌株间同源性,采用WHONET5.6和SPSS23.0进行统计分析.结果 91株CRE菌株中,肺炎克雷伯菌42株,大肠埃希菌23株,阴沟肠杆菌15株,其他CRE 11株.CRE菌株对替加环素和阿米卡星敏感性较高,但对其他大部分抗菌药物耐药性较高.mCIM筛选碳青霉烯酶的灵敏度为97.1％,特异度为100.0％.60株CRE携带1种碳青霉烯酶基因,8株CRE菌株合并2种碳青霉烯酶基因,毒力基因wcaG检出率为2.4％.耐碳青霉烯类药物肺炎克雷伯菌的MLST结果 是ST11型12株,ST37型8株,ST17型8株,ST147型2株,ST48型1株;耐碳青霉烯类药物大肠埃希菌的MLST结果 是ST167型17株;耐青霉烯类药物阴沟肠杆菌的MLST结果 是ST418型6株,ST93型4株,ST74型2株,ST175型1株.结论 该院CRE菌株对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制复杂.分子型别较多,各菌种呈现不同特点.

目的 分析宁夏地区某三甲综合医院临床标本分离耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)的分布及耐药情况,了解该院CRE耐药基因的主要流行现状,为临床抗感染治疗及医院感染防控提供参考.方法 收集2017年1月1日至2018年12月31日住院患者临床分离的CRE菌株,利用自动化仪器进行细菌鉴定和药物敏感性试验(简称药敏试验)检测,利用改良碳青霉烯酶灭活(mCIM)试验联合乙二胺四乙酸-碳青霉烯酶灭活(eCIM)试验检测耐药菌的表型,并采用PCR检测ESBLs(blaSHV、blaTEM)、碳青霉烯酶(blaKPC、blaNDM、blaVIM、blaIMP、blaOXA-48)共7种主要的耐药基因,最后对数据进行统计分析.结果 临床标本共收集CRE菌株77株,主要为肺炎克雷伯菌52株、大肠埃希菌25株;标本来源主要为痰液、无菌中段尿及血液等;标本来源科室主要为肝胆外科、重症监护室(ICU)和急诊科;药敏试验表明77株耐药菌对β-内酰胺类药物的耐药率均大于95.00％,对喹诺酮类抗菌药物耐药率均为75.00％左右;mCIM试验阳性有58株,eCIM试验阳性有35株、阴性有23株.应用PCR检测耐药基因,ESBLs以blaTEM为主,检出率为49.35％,blaSHV检出率为23.38％;碳青霉烯酶基因以blaNDM为主,检出率为36.36％,其余blaKPC、blaOXA-48阳性率分别为24.68％、15.58％,未检测到blaVIM和blaIMP基因.测序发现28株blaNDM阳性菌中有10株为blaNDM-1,18株为blaNDM-5.结论 宁夏某医院CRE耐药基因检出率较高,CRE对常用抗菌药物耐药率高,应多部门联动加强对CRE的监测与防控,合理应用抗菌药物.

目的 评估双浓度联合改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)筛查碳青霉烯类耐药肠杆菌科细菌(CRE)的临床应用价值.方法 以VITEK 2 Compact N335卡的体外药物敏感性试验结果为标准,采用双浓度联合mCIM在231株分离自临床样本的肠杆菌科细菌中筛查CRE.结果 VITEK 2 Compact N335卡筛选出CRE阳性菌株52株,阴性菌株179株,阳性检出率为22.5％;mCIM筛出CRE阳性菌株52株,双浓度联合mCIM筛出CRE阳性菌株53株,阴性菌株178株,阳性检出率为22.9％.以VITEK 2 Compact检测结果为参考,符合率为98.7％,敏感性为98.1％,特异性为98.9％;将mCIM检测阳性的52株CRE继续进行乙二胺四乙酸改良碳青霉烯灭活试验(eCIM),结果显示有13株肠杆菌科细菌金属-β-内酰胺酶为阳性,金属-β-内酰胺酶占碳青霉烯酶的25％.结论 双浓度联合mCIM筛查CRE具有操作简单、不需要特殊仪器、结果易于观察等优点,适合在各级医院的微生物实验室中推广使用.对mCIM阳性菌株加做eCIM非常必要,有利于临床个性化用药.