目的:探讨纳米荧光探针在大鼠肝癌血供分子影像中的应用，为肝癌的双血供治疗奠定基础。方法:通过二乙基亚硝胺化学诱导法建立12只大鼠肝硬化肝癌模型，15周时行磁共振扫描、切取肝组织行病理切片；通过肝动脉和门静脉应用不同的纳米荧光探针，观测肝癌组织血供的分子影像，组间比较采用两样本均数的 t检验。 结果:12只大鼠13～14周时死亡4只，15周时存活率为66.67%，成瘤率100%。病理切片符合肝细胞性肝癌征象；分子荧光成像在动脉时癌结节5，6-二氯-3，4-二氢-2(1H)-亚胺喹唑啉-3-乙酸乙酯氢溴酸盐(DiI)荧光强度[(2.99±0.41)×10 7]高于周围肝组织[(1.06±0.22)×10 7， t＝-9.410， P<0.05]；而在门静脉时癌结节Alexa fluor 647荧光强度[(1.30±0.29)×10 7]低于周围肝组织[(2.76±0.38)×10 7， t＝7.480， P<0.05]，两者差异均有统计学意义。肝癌玻片扫描提示肝癌结节动脉血供高于周围肝组织，而肝癌结节实质及周围均存在门静脉供血，以周围为著。 结论:二乙基亚硝胺诱导法可建立成熟稳定的肝硬化肝癌模型，纳米荧光探针在微观水平观测到肝癌组织为动静脉复合血供。

目的:构建p53凋亡刺激蛋白2（ASPP2）基因敲除小鼠，用该小鼠建立二乙基亚硝胺（DEN）诱导的肝癌模型以研究ASPP2的生物学功能。方法:构建单链向导RNA寡聚核苷酸，用CRISPR/Cas9系统制备ASPP2基因敲除小鼠。采用PCR法和测序方法鉴定F0、F1代及其子代的基因型。用DEN诱导ASPP2+/-小鼠建立肝癌模型。结果:PCR和测序结果表明F0代小鼠ASPP2基因敲除成功；F1代小鼠基因型符合ASPP2+/-，获得稳定遗传性；F1代自杂交获得ASPP2+/-小鼠DEN诱导的肝癌模型成功率（7/8与3/8）明显高于野生型。结论:基于CRISPR/Cas9系统成功构建ASPP2基因敲除小鼠，ASPP2基因敲除小鼠DEN诱导的肝癌模型成功率明显高于野生型。

背景:在课题组先前研究中发现加味逍遥散具有明显的抗肝癌作用,但具体作用机制不明.目的:基于高通量测序结合生物信息学,探讨加味逍遥散对二乙基亚硝胺慢性诱导的原发性肝癌模型大鼠血浆外泌体miRNA水平的调节作用.方法:将SD大鼠随机分为空白对照组、肝癌模型组、加味逍遥散组.以二乙基亚硝胺持续给药12周诱导肝癌模型,从第17周开始,加味逍遥散组大鼠给予加味逍遥散灌服,每日1次,直至第20周末停药,空白对照组和肝癌模型组大鼠给予等量生理盐水灌胃,通过检测大鼠肝组织的形态结构、肝癌标志物Glypican-3蛋白和血清甲胎蛋白表达验证抗肝癌效应.使用超速离心法分离提取各组大鼠血浆外泌体,利用高通量测序技术筛选出大鼠血浆外泌体中差异表达的miRNA,生物信息学预测加味逍遥散通过肝癌血浆来源外泌体miRNA发挥抗肝癌作用的潜在生物标志物,并进行功能分析.结果与结论:①加味逍遥散对肝癌模型大鼠肝组织的形态结构有显著改善作用,与肝癌模型组相比,加味逍遥散组肝癌标志物Glypican-3蛋白和血清甲胎蛋白的表达均显著降低;②生物信息学分析显示,加味逍遥散组对肝癌模型组上调的miR-223-3p与基因E2F1、NCOA1存在靶向结合位点,并且与肝癌生存率及预后密切相关.由此可见,加味逍遥散对肝癌有治疗作用,可能是通过肝癌血浆来源外泌体miR-223-3p靶向负调控NCOA1/E2F1进而发挥抗肝癌效应.

目的 探究大黄素对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导的肝癌前病变大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase B,Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapa-mycin,mTOR)信号转导通路的调控作用及对铁死亡的影响.方法 采用DEN诱发大鼠肝癌前病变进行肝癌前病变造模.随机将50只雄性SD大鼠分为对照组[未造模+10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃)]、DEN模型组[肝癌前病变造模+10 ml/(kg·d)生理盐水灌胃]、DEN+大黄素组[肝癌前病变造模+80 mg/(kg·d)大黄素浓缩液灌胃]、DEN+护肝片组[肝癌前病变造模+900 mg/kg护肝片灌服]和DEN+大黄素+护肝片组[肝癌前病变造模+80 mg/(kg·d)大黄素浓缩液灌胃+900 mg/kg护肝片灌服],每组各10只大鼠.各组大鼠连续干预治疗12周.生化分析法检测各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)、白蛋白(albumin,ALB)水平;比较各组大鼠的肝脏指数.酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠血清白细胞介素 1β(interleukin 1 beta,IL-1β)、肿瘤坏死因子 α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)、IL-10含量.苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察各组大鼠肝组织病理形态学改变;脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal de-oxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)分析各组大鼠肝组织细胞凋亡情况.免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中铁死亡中心调节因子谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白表达.马松三色染色(Masson's trichrome staining,MASSON)法分析各组大鼠肝组织病理改变.逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测各组大鼠肝组织中PIK3、Akt、mTOR的mRNA水平.结果 与对照组比较,DEN模型组大鼠ALT水平、AST水平、肝脏指数显著升高,ALB水平显著降低(P均＜0.05),血清IL-1β、TNF-α、IL-10含量明显升高(P均＜0.05);肝细胞明显炎性浸润,细胞免疫应答增加,肝细胞形态畸变并出现变性死亡;肝组织中GPX4蛋白表达量明显下降(P＜0.05),PI3K、Akt、mTOR的mRNA表达量明显上升(P均＜0.05).与DEN模型组比较,DEN+大黄素组、DEN+护肝片组、DEN+大黄素+护肝片组大鼠ALT水平、AST水平、肝脏指数显著降低,ALB显著升高(P均＜0.05),血清IL-1β、TNF-α、IL-10含量明显降低(P均＜0.05);肝细胞排列趋向正常,炎性浸润减轻,肝细胞弥漫性纤维化病变减弱,血管及胆管周围肝细胞形态逐渐好转,蓝色胶原纤维组织减少;肝组织中GPX4蛋白表达量明显上升(P均＜0.05),PI3K、Akt、mTOR的mRNA表达量明显下降(P均＜0.05),且上述变化DEN+大黄素+护肝片组改善效果明显优于DEN+大黄素组和DEN+护肝片组(P均＜0.05).结论 大黄素可通过促进组织中铁死亡相关蛋白 GPX4表达来改善大鼠肝癌前病变,其作用机制可能与大黄素调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.

目的 比较盐酸羟考酮和吗啡对肝癌大鼠的术后镇痛效果及免疫细胞功能的影响.方法 给予大鼠50 mg·kg-1 0.19%的二乙基亚硝胺(DENA)腹腔注射,每周2次,连续给药16周,直至肝癌模型构建成功.将18只模型大鼠随机分为阴性对照组(NC)、盐酸羟考酮组(OH组)及吗啡组(MO组),每组6只,进行腹腔探查术后,分别埋入装有生理盐水、盐酸羟考酮和吗啡的Alezt微量泵进行镇痛,分别于术后第1、3、7天进行糖水偏好实验、旷场实验(OFT),7天后心脏采血,流式细胞术检测外周血中NK细胞及Treg细胞百分比.结果 与NC组相比,OH组和MO组大鼠糖水偏好率均显著升高(P＜0.05);旷场试验中,OH组和MO组大鼠移动距离(P＜0.05)及中央格持续时间明显增加(P＜0.05);OH组大鼠糖水偏好率、旷场移动距离及中央格持续时间与MO组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05);OH组和MO组大鼠外周血Treg细胞比例均显著低于NC组(P＜0.05),且OH组表现出比MO组更低的Treg细胞比例(P＜0.05);OH组NK细胞比例显著高于NC组(P＜0.05),而MO组NK细胞比例显著低于NC组(P＜0.05).结论 盐酸羟考酮和吗啡在术后镇痛方面表现出类似效果,而盐酸羟考酮可显著抑制Treg细胞、增加NK细胞,从而增强机体抗肿瘤免疫功能,是更理想的围术期镇痛药物.

目的 探讨原发性肝癌大鼠造模的文献研究现状,并进行总结与评价.方法 以"原发性肝癌""大鼠模型"为关键词检索中国知网(CNKI)、万方数据库文献,检索时限为1996年1月至2021年12月,最终纳入115篇有效文献.对文献的造模方法、造模药物种类及剂量、造模周期以及造模结果评价等进行总结和分析.结果 最常用的原发性肝癌造模大鼠种类为Wistar大鼠,主要造模诱导剂有二乙基亚硝胺(DEN)配制的水溶液、DEN+灭菌食用水、DEN+四氯化碳(CCL4)、DEN+生理盐水、DEN+标准饲料、二乙酰氨基芴(2-AAF)、黄曲霉毒素B1(AFB1)等7种,其中以DEN配制的水溶液最为常用,占63.5％.造模方法有自由饮用法、腹腔注射法、腹腔注射+自由饮用法、灌胃法、皮下注射+自由饮用法、腹腔注射+灌胃法等6种,其中以自由饮用法最常用,占35.7％.主要通过客观评价法对造模结果进行判定,占47.8％.结论 原发性肝癌大鼠造模方法多样,目前尚无统一的标准方法.研究者宜根据自身实验需求选择合适的造模方式.

目的 研究ASPP2 重组腺病毒(ASPP2-ad)对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的小鼠肝细胞癌(HCC)发生的抑制作用及其可能的作用机制.方法 采用DEN腹腔注射联合 0.005%DEN饮水方法 构建小鼠HCC模型.将动物分为DEN处理组和DEN-ASPP2-ad处理组,每组10 只.使用小动物超声成像系统动态观察小鼠HCC形成情况,大体记数肝脏肿瘤数量,采用免疫组化法检测肿瘤组织Ki67 表达,采用流式多重蛋白定量技术检测小鼠血清IL-1β、IL-6、KC、IL-2和TNFα水平,采用Western blot法检测组织AFP、caspase3、cyclinD1、PCNA、p-IKK、IKK、p-IκB、IκB、p-p65 和p65 蛋白表达,采用实时定量PCR法检测Nfatc1 mRNA水平.结果 DEN诱导24 周后,DEN组小鼠肝脏肿瘤数为(9.9±1.9)个,显著多于DEN联合ASPP2-ad组[(3.9±1.2)个,P＜0.05];DEN组小鼠Ki67 阳性细胞数为(91.4±9.1)个,显著多于DEN联合ASPP2-ad组[(56.6±10.5)个,P＜0.05];在实验40 周末,DEN组小鼠生存率为65.2%,显著低于DEN联合ASPP2-ad组的90.0%(P＜0.05);DEN组小鼠血清ALT和AST水平分别为(271.5±143.8)U/L和(299.3±221.4)U/L,均显著高于DEN-ASPP2-ad干预组[分别为(101.7±44.6)U/L和(124.1±75.0)U/L,P＜0.05];DEN联合ASPP2-ad组血清IL-6 和TNFα水平分别为(8.1±1.6)MFI和(8.1±1.0)MFI,均显著低于DEN组[分别为(16.3±0.4)MFI和(26.3±5.3)MFI,P＜0.05];DEN/ASPP2-ad处理组AFP、Cyclin D1 和PCNA表达减弱,而caspase-3 表达增强,NF-κB信号通路蛋白(p-IKK、p-IκB和p-p65)表达减弱,p-IKK/IKKα、p-IκB/IκB和p-p65/p65 比值也降低,NF-κB下游癌基因Nfatc1 表达减弱(P＜0.05).结论 ASPP2-ad可能通过调控NF-κB通路显著抑制DEN诱导的炎性增殖反应,阻抑HCC的发生,值得深入研究.

[目的]探讨茯苓酸调节Hippo信号通路对二乙基亚硝胺(DEN)诱导的肝癌大鼠的治疗作用.[方法]取SD大鼠随机分为对照组、模型组、茯苓酸低剂量(3.5 mg/kg)组、茯苓酸中剂量(7 mg/kg)组、茯苓酸高剂量(14 mg/kg)组、氟尿嘧啶(50 mg/kg)组,每组 10 只,模型组和给药组大鼠通过腹腔注射DEN诱导建立肝癌模型,对照组大鼠腹腔注射等剂量 0.9%氯化钠溶液,以茯苓酸和氟尿嘧啶分组处理后检测各组大鼠血清肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平;检测各组大鼠体质量变化、肝脏指数、肝表面癌结节数、最大癌结节体积;以苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠肝组织病理形态并比较其炎症细胞浸润数;以试剂盒检测大鼠血清炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-17、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)水平;以蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肝组织Hippo信号通路相关蛋白[Yes相关蛋白(YAP)、LATS1]表达.[结果]与对照组比较,模型组大鼠肝组织发生明显癌变,给药结束后体质量、血清SOD、CAT水平显著降低(P＜0.05),血清ALT、AST、IL-6、IL-17、TNF-α与MDA水平、肝脏指数、肝表面癌结节数、最大癌结节体积、炎症细胞浸润数、肝组织LATS1 蛋白表达及p-YAP1/YAP1 显著升高(P＜0.05);与模型组比较,茯苓酸低、中、高剂量组、氟尿嘧啶组大鼠肝组织癌变症状均减轻,给药结束后体质量、血清SOD、CAT水平升高(P＜0.05),血清ALT、AST、IL-6、IL-17、TNF-α与MDA水平、肝脏指数、肝表面癌结节数、最大癌结节体积、炎症细胞浸润数、肝组织LATS1 蛋白表达及p-YAP1/YAP1 降低(P＜0.05),且茯苓酸各组呈剂量依赖性(P＜0.05);茯苓酸高剂量组与氟尿嘧啶组大鼠比较,各指标比较差异无统计学意义(P＞0.05).[结论]茯苓酸可降低Hippo信号通路活性,抑制DEN诱导的炎症和氧化应激,减轻大鼠肝组织损伤并缓解其癌变症状,改善大鼠肝功能.

目的 建立经尾动脉途径肝癌大鼠经导管肝动脉化疗栓塞术(TACE)模型,并探讨其可行性、有效性和安全性.方法 0.01％二乙基亚硝胺(DEN)溶液连续诱导大鼠12周建立肝癌模型,12周后通过MRI明确肿瘤大小.当最大肿瘤长径＞5 mm时,在DSA引导下经尾动脉插管,并将微导管置于肝固有动脉进行TACE,治疗后复查CT了解瘤内碘油沉积.观察大鼠术后1周生存率及相关并发症情况.检测术前及术后3、7 d大鼠ALT、AST、TBil及CRE水平.术后7 d行肝、肺、双肾及脾脏组织病理学检查.结果 TACE模型成功建立,尾动脉置管用时(6.9±1.4)min.造影显示大鼠肝内肿瘤染色明显,术后CT显示瘤内碘油沉积密实,组织病理学结果显示肿瘤大面积坏死,坏死区周缘Caspase3、HIF-1 alpha表达水平明显升高.肺、肾、脾脏大体标本未发现明显异位栓塞.所有大鼠行为无异常.术后3 d大鼠ALT、AST、TBil较术前明显上升(P＜0.05),术后7 d明显下降,但仍高于术前(P＜0.05),手术前后CRE水平无明显差异(P＞0.05).结论 经尾动脉入路可以安全、有效地完成对大鼠原发性肝癌的TACE治疗.

目的 探讨扁蒴藤素(Pris)通过调节ROS/ASK1/JNK信号通路对二乙基亚硝胺(DEN)诱导大鼠肝细胞癌(HCC)的影响.方法 随机取6只SD大鼠作为对照组,其余大鼠采用注射DEN的方式构建HCC大鼠模型.将造模成功的大鼠随机平分为HCC组、Pris组(0.8 mg/kg Pris)、Vaccarin组(100 mg/kg ROS/ASK1/JNK信号通路抑制剂Vaccarin)、Pris+Vaccarin组(0.8 mg/kg Pris+100 mg/kg Vaccarin),连续注射1周,每组均6只大鼠.HCC组和对照组注射等量生理盐水.测量体质量、肝质量以及肝脏体质量比;ELISA法检测肝功能、炎性因子、抗氧化指标、ROS水平;HE染色检测肝脏病理变化;Western blot检测凋亡标志物(Bax、Bcl-2和cleaved-Caspase-3)以及ROS/ASK1/JNK信号通路蛋白表达.结果 对照组大鼠表现出正常的肝脏组织结构;HCC组可以观察到部分肝细胞坏死,出现局灶性结节性增生现象,HCC组较对照组体质量、Bax、cleaved-Caspase-3、ROS、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK水平显著下降(P<0.05),肝脏质量、肝脏体质量比、ALT、AST、ALP、LDH含量、IL-6、TNF-α、CCL-2含量、SOD、GR、GPx、CAT含量、Bcl-2蛋白水平显著增加(P<0.05);Pris组改善了肝细胞坏死以及局灶性结节性增生现象,Pris组较HCC组体质量以及Bax、cleaved-Caspase-3、ROS、p-ASK1/ASK1、p-JNK/JNK水平显著升高(P<0.05),肝脏质量、肝脏体质量比、ALT、AST、ALP、LDH含量、IL-6、TNF-α、CCL-2含量、SOD、GR、GPx、CAT含量、Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05),而Vaccarin组趋势相反;Vaccarin逆转了Pris对HCC大鼠的抗癌效果.结论 Pris可能通过激活ROS/ASK1/JNK信号通路对HCC大鼠起到一定的抑癌作用.