目的:探讨基于二氢卟吩e6（chlorin e6，Ce6）的光动力疗法（photodynamic therapy，PDT）联合抗生素替硝唑（tinidazole，TNZ）对牙周炎大鼠的体内外抑制作用。方法:采用正畸钢丝结扎法对18只SD大鼠建立牙周炎模型，建模成功后按随机数字表法随机分为以下6组（每组3只）：阳性对照组、Ce6 组、TNZ 组、混合物Ce6/TNZ 组、Ce6加光照（Ce6+L）组、Ce6/TNZ加光照（Ce6/TNZ+L）组；采用甲基噻唑基四唑（methyl thiazolyl tetrazolium，MTT）实验考察Ce6（质量浓度为0~20 mg/L）、TNZ（质量浓度为0~16.6 mg/L）及其混合物Ce6/TNZ对成纤维细胞L929的毒性；采用荧光探针法检测Ce6、TNZ和Ce6/TNZ及结合635 nm激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min）对牙周炎大鼠牙菌斑生物膜中活性氧生成的触发效应，评价Ce6的光动力性能；采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）实验和活菌/死菌染色法考察各种治疗的体外抗菌性能，并计算Ce6介导的PDT联合TNZ的合用指数（combination index，CI）。采用凋亡试剂盒流式检测各种治疗对鼠巨噬细胞RAW264.7凋亡的诱导效应。各组大鼠局部给药后行激光照射（功率0.5 W/cm 2，时间5 min），治疗结束后用显微CT评价PDT联合TNZ对牙周炎大鼠牙槽骨吸收的抑制效应。 结果:Ce6、TNZ、Ce6/TNZ在预设浓度范围内L929细胞存活率均在90%以上。激光照射后，Ce6与Ce6/TNZ的牙菌斑生物膜中呈现出非常显著的绿色荧光，触发了菌斑内活性氧大量生成；但在不同浓度下，Ce6/TNZ的牙菌斑存活率分别为（85.4±5.5）%、（76.0±8.9）%、（61.7±0.6）%、（56.3±2.6）%、（43.5±0.6）%，均显著低于Ce6和TNZ组（ P<0.01），且各药物浓度点对应的CI<1.0，具有显著的协同效应。Ce6+L与Ce6/TNZ+L具有显著强于Ce6与Ce6/TNZ的细胞凋亡诱导活性（ P<0.01）。牙周炎大鼠体内，Ce6/TNZ联合激光照射能有效抑制牙槽骨的吸收，牙槽骨体积、骨体积分数分别为（1.49±0.07）mm 3和（47.08±0.71）%，颊、腭侧釉质牙骨质界至牙槽嵴顶距离分别减小至（2.13±0.07）和（1.94±0.10）mm。 结论:基于Ce6的PDT联合抗生素TNZ对牙周炎大鼠有协同治疗作用，能有效杀伤牙菌斑，诱导巨噬细胞凋亡，抑制牙槽骨吸收。

目的:制备负载光敏剂二氢卟吩e6(chlorin e6,Ce6)的金纳米星(gold nanostars,GNS),研究其对肺癌A549细胞的光动力作用效果.方法:GNS经巯基聚乙二醇(SH-PEG-NH2)修饰后与光敏剂Ce6振荡过夜,制备出具有光动力治疗效应的探针GNS-PEG@Ce6,检测其表征、形态和包封率,通过激光共聚焦显微镜比较A549细胞对探针GNS-PEG@Ce6与Ce6的吞噬作用.应用MTT法检测探针GNS-PEG@Ce6对A549细胞增殖的抑制效果,通过流式细胞仪检测探针GNS-PEG@Ce6与Ce6对A549细胞凋亡的影响.结果:探针GNS-PEG@Ce6的粒径为100 nm左右,具有良好的分散性和稳定性,Ce6的包封率为50％左右.探针GNS-PEG@Ce6以胞吞方式进入细胞,主要分布于细胞质内,且较Ce6能更有效地进入细胞.探针GNS-PEG@Ce6对A549细胞的增殖抑制作用强于Ce6(P＜0.05),流式细胞仪检测证明了探针对细胞有极为明显的致凋亡效果.结论:以GNS作为载体能有效地增加肺癌A549细胞对Ce6的摄取,从而进一步增强Ce6对肺癌A549细胞的杀伤效果.

目的:研究二氢卟吩e6(Ce6)磷酸盐缓冲液(PBS)溶液及其脂质体在荷瘤小鼠体内的药物动力学特性,并验证Ce6脂质体的肝脏靶向性和肿瘤靶向性.方法:荷瘤小鼠尾静脉注射Ce6溶液或其脂质体后,通过HPLC测定不同时间点血浆及组织中Ce6的质量浓度,流动相乙腈-0.2％磷酸盐(50:50),检测波长403 nm.采用DAS 2.1.1软件计算药动学参数,以8h内相对摄取率(RE)来评价Ce6对主要器官的靶向性.结果:Ce6溶液和Ce6脂质体在荷瘤小鼠血浆中的药动学模式均符合二室模型,分布相半衰期(t1/2α)分别为1.516,0.507 h;消除相半衰期(t1/2β)分别0.457,1.366 h;清除率(CL)分别为0.178,0.067 L·h-1·kg-1;药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为16.734,51.475 mg·h·L-1.在肝、脾、肿瘤组织中,RE分别为1.149,1.477和1.277.经统计学分析,Ce6溶液和Ce6脂质体的药动学结果有显著性差异(P＜0.05).结论:Ce6脂质体在体内的药物代谢清除速度更缓慢,分布更迅速、广泛,并能选择性聚集于肝脏和肿瘤组织.Ce6脂质体制剂可继续开发以用于治疗肝癌.

目的 研究合成的白蛋白-纳米声敏剂(HSA Ce6 NAs)对神经胶质瘤体外声动力学治疗的增效作用.方法 采用人血清白蛋白(HSA)和二氢卟吩e6 (Ce6)构建白蛋白纳米声敏剂;以活性氧(ROS)探针DCFH-DA检测纳米药物在不同超声条件下ROS水平;荧光检测方法评估HSA-Ce6 NAs和Ce6的细胞内摄取,以及联合超声处理后HSA-Ce6NAs及Ce6细胞后ROS的水平;最后,用标准MTT法测定各组的细胞活性.结果 HSA-Ce6 NAs介导ROS产生依赖于超声刺激,ROS探针荧光强度呈时间依赖性和超声强度依赖性增强;HSA-Ce6NAs在细胞内摄取量显著高于Ce6 (P＜0.01);HSA-Ce6 NAs+ US组细胞内ROS水平高于Ce6+US (P＜0.01);HSA-Ce6NAs+US组肿瘤细胞活力比Ce6+ US组减低约20％ (P＜0.01).结论 HSA-Ce6 NAs具备超声灵敏度好、细胞内吞噬水平高等优势,应用于声动力治疗时,能提高肿瘤细胞内ROS,降低细胞活性.

目的 探讨替拉扎明(TPZ)联合二氢卟吩e6(Ce6)介导的光动力学疗法(PDT)对人乳腺癌的治疗作用.方法 将人乳腺癌MCF-7细胞分为空白对照组、空白激光组、Ce6组、TPZ组、Ce6+激光组、TPZ+激光组、Ce6+TPZ组和Ce6+TPZ+激光组.空白对照组、空白激光组细胞不给予药物处理,Ce6组、Ce6+激光组细胞均加入15 mg·L-1 Ce6,TPZ组、TPZ+激光组细胞均加入6 mg·L-1 TPZ,Ce6+TPZ组、Ce6+TPZ+激光组细胞均加入15 mg·L-1 Ce6和6 mg·L-1 TPZ;给药一定时间后,空白激光组、Ce6+激光组、TPZ+激光组、Ce6+TPZ+激光组细胞用650 nm激光以1.5 W·cm-2照射2 min,空白对照组、Ce6组、TPZ组和Ce6+TPZ组细胞不做激光处理.采用二氯荧光黄双乙酸盐法检测MCF-7细胞内活性氧(ROS)水平,单细胞凝胶电泳法检测细胞内DNA损伤情况,流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡情况,Western blot法检测MCF-7细胞内Bcl-2和Bax蛋白表达情况.结果 Ce6+TPZ+激光组MCF-7细胞存活率低于Ce6组、Ce6+激光组、TPZ组、TPZ+激光组和Ce6+TPZ组(P<0.05).与空白对照组、空白激光组、TPZ组和TPZ+激光组比较,Ce6组和Ce6+TPZ组细胞中出现少量绿色荧光,而Ce6+激光组和Ce6+TPZ+激光组细胞中呈现大范围的绿色荧光,且荧光强度较强,表明ROS大量生成.Ce6+TPZ+激光组细胞DNA拖尾百分比显著高于Ce6+TPZ组、Ce6+激光组和TPZ+激光组(P<0.05).Ce6+TPZ+激光组细胞凋亡率、Bax/Bcl-2比值高于Ce6+TPZ组、Ce6+激光组和TPZ+激光组(P<0.05).结论 TPZ联合Ce6介导的PDT可以有效抑制人乳腺癌细胞增殖,为乏氧肿瘤的PDT联合治疗提供了新的思路.

合成基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases,MMPs)响应的mPEG-CPLGLAGG(PDDC)聚合物,与紫杉醇、二氢卟吩e6(Ce6)共组装形成纳米胶束,评价其对结肠癌细胞HCT-116增殖和凋亡的影响.以碳化二亚胺/N-羟基琥珀酰亚胺为缩合剂,将MMPs响应的多肽CPLGLAGG通过酰胺化反应接支到mPEG上,采用核磁共振氢谱和红外光谱对其结构进行表征.将PDDC与紫杉醇、Ce6共组装制备成纳米胶束,动态光散射和透射电镜测试粒径分布和形态,荧光光谱和HPLC检测载药量、包封率及体外释放.以纳米粒子刺激结肠癌细胞HCT-116,CCK-8法检测细胞毒性,流式检测细胞摄取和凋亡诱导作用,荧光法观察对ROS生成的影响.结果 显示:PDDC聚合物对HCT-116增殖基本无影响,具有良好的安全性,可与紫杉醇、Ce6共组装形成粒径100 nm左右的纳米胶束.该纳米粒子具有良好的稳定性和MMP-2响应性,能在肿瘤微环境中特异性的释放药物;易被HCT-116细胞摄取,并可显著抑制HCT-116细胞的增殖、诱导细胞凋亡和ROS生成,且作用优于紫杉醇、Ce6单药及联合应用.PDDC包埋的紫杉醇与Ce6能有效促进HCT-116细胞凋亡,且表现出明显的协同效应,表明该聚合物可作为潜在的药物载体用于纳米药物输送及恶性肿瘤的治疗.

本文探讨光敏剂二氢卟吩e6钛合物BF01光动力对人肝癌细胞株BEL-7402体外杀伤效应和体内抑瘤效应及其作用机制.实验采用CCK-8法检测同一激光强度不同给药浓度(0、0.8、1.6、3.2、6.4 μmol·L-1)的光敏剂BF01光动力对BEL-7402细胞的抑制率和半数抑制浓度(IC50),通过流式细胞术检测BEL-7402细胞死亡方式,DAPI染色观察细胞凋亡特征,光动力照射后检测BEL-7402活性氧、共聚焦显微镜观察亚细胞定位,建立裸鼠人肝癌细胞模型,绘制肿瘤生长曲线,观察治疗效果,动物实验经华东理工大学伦理委员会批准.实验结果显示,BF01-PDT治疗组能明显抑制BEL-7402肿瘤细胞增殖,BF01的浓度为6.4 μmol·L-1时,其杀伤率达86％,IC50是2.46 μmol·L-1,检测细胞死亡方式主要是以晚期凋亡为主,DAPI染色细胞核的形态呈现出凋亡的特征,活性氧水平随给药浓度增加而增加,亚细胞定位在线粒体.体内实验表明,光敏剂BF01介导的光动力疗法对人肝癌细胞及小鼠体内肿瘤生长抑制作用明显,因此新型BF01光敏剂具备良好的应用前景.

目的 制备负载CoFe2O4@MnFe2O4磁性纳米粒子(简称:Co@Mn MNPs)与二氢卟吩e6(简称:Ce6)的多功能纳米胶囊(简称:MNCPs),研究MNCPs对胃癌的靶向性磁共振成像与光动力治疗效果.方法 采用微乳液法制备双亲性高分子聚异丁烯-铝-马来酸酐(简称:PMA)微泡包载Co@Mn MNPs与Ce6的纳米胶囊,在其表面偶联靶向分子叶酸,形成PMA-Co@Mn/Ce6-FA MNPs,制备出具有靶向性诊断与治疗的多功能纳米胶囊.检测MNCPs的表征了解其特征,并利用细胞实验探测细胞对MNCPs的利用,另外利用胃癌荷瘤裸鼠研究MNCPs在小鼠体内的磁共振成像与靶向性治疗效果.结果 MNCPs粒径约(150±15)nm,呈单分散的球形,包封率为(97％),包载量约(3.1％).细胞实验证明肿瘤细胞对MNCPs有较好的摄取,并且摄入的MNCPs对肿瘤细胞的毒性极小,还可以在633nm激光照射下对肿瘤细胞产生良好的光动力治疗(PDT)效果.动物实验证明MNCPs能增强小鼠体内肿瘤部位的磁共振成像效果,对胃癌具有显著的靶向性光动力治疗效果.结论 多功能纳米胶囊对胃癌具有靶向性磁共振诊断与光动力治疗作用.

目的 制备共包载化疗药顺铂(CDDP)和光敏剂二氢卟吩e6(Ce6)的脂质体(PC-Lip),对其结构和性质进行表征,并在细胞水平上考察其体外抗肿瘤的效果.方法 采用薄膜分散法制备PC-Lip,并制备了单包载顺铂及Ce6的脂质体(CDDP-Lip、Ce6-Lip),进行对照,对脂质体的形态、粒径、Zeta电位、包封率及释药行为等进行表征.考察脂质体与4T1细胞的作用,包括脂质体对细胞的毒性、细胞内活性氧(ROS)水平及细胞损伤机制.结果 制得的PC-Lip为分散均匀的球形,粒径80.1 +2.1 nm,平均水合粒径为128.9±4.1 nm,分散系数＜0.3,且带负电,CDDP和Ce6的包封率分别为80.14％、95.48％;体外释放结果表明:包载后具明显的缓释效果,在中性和酸性介质中,CDDP的释放T1/2分别为16.85、14.88 h,Ce6的释放T1/2分别为39.09、135.46 h.细胞实验证明:PC-Lip的细胞摄取量较游离CDDP、Ce6分别提升了4.1、3.3倍;光照后,与游离药物组比较,PC-Lip处理组4T1肿瘤细胞的IC50下降2.0倍,细胞内ROS的水平增加3.5倍,使线粒体的膜电位下降4.46倍(细胞凋亡);免疫荧光染色实验中光强度增加13％,表明脂质体促进铂与DNA形成加合物,导致细胞损伤增强.结论 成功制备了具有良好化疗和光动力治疗作用的PC-Lip,有利于提高药物的靶向抗肿瘤效果.

目的 探讨载二氢卟吩e6纳米脂质微泡介导的超声靶向微泡破坏技术及声动力治疗对肝癌移植瘤的协同抑制作用.方法 制备Ce6-MB并检测其形态、粒径及包封率.将H22肝癌皮下移植瘤小鼠随机分为对照组、Empty-MB组、Ce6组、Ce6-MB组.治疗5次后计算抑瘤率,冰冻切片观察Ce6肿瘤聚集情况,HE、TUNEL染色观察细胞及组织凋亡情况,RT-qPCR及免疫组化法检测Bcl-2、Bax的基因及蛋白表达.结果 Ce6-MB为分散均匀纳米级球形微泡,包封率为40.85％±3.09％,Ce6-MB组比Ce6组肿瘤聚集更多Ce6.与对照组相比,Empty-MB、Ce6、Ce6-MB组均可抑制肿瘤生长,Bax mRNA和蛋白高表达,Bcl-2低表达,以上结果以Ce6-MB组为显著(P＜0.01).结论 成功制备载Ce6纳米脂质微泡,超声靶向微泡破坏技术协同Ce6介导的声动力疗法可有效治疗小鼠肝癌移植瘤.