目的 探讨细胞色素P450 家族成员2E1(CYP2E1)介导酒精性心肌病心肌纤维化的作用及可能的机制.方法 将心脏成纤维细胞分为:对照组(control)、酒精组(ethanol,100 mmol/L)、二烯丙基硫醚组(diallyl sulfide,DAS,CYP2E1 抑制剂,100 μmol/L)及酒精+DAS组(ethanol+DAS);利用激光共聚焦显微镜技术检测心脏成纤维细胞活化为肌成纤维细胞的标志蛋白α-SMA,应用Western blotting检测成纤维细胞中CYP2E1 的蛋白表达水平,以及由成纤维细胞生成的细胞间质Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)水平和具有调控纤维化的重要细胞因子TGF-β1 的水平.将心脏成纤维细胞分为4 组:对照组(control)、肿瘤坏死因子β1 组(TGF-β1,10 ng/ml)、DAS组(100 μmol/L)及TGF-β1+DAS组.利用激光共聚焦显微镜技术检测心脏成纤维细胞活化为肌成纤维细胞的标志蛋白α-SMA.结果 与对照组相比,酒精组心脏成纤维细胞CYP2E1、α-SMA及Collagen Ⅰ蛋白表达水平都显著升高(P＜0.01);与酒精组相比,酒精+DAS组酒精对心脏成纤维细胞的上述效应被显著抑制(P＜0.05).同时,与对照组相比,酒精组心脏成纤维细胞TGF-β1 蛋白水平显著升高(P＜0.01);与酒精组相比,酒精+DAS组心脏成纤维细胞TGF-β1 蛋白的水平未受显著影响(P＞0.05).与对照组相比,TGF-β1 组α-SMA表达水平显著升高(P＜0.01);与TGF-β1 组相比,TGF-β1+DAS组α-SMA的表达水平显著降低(P＜0.01).结论 酒精通过促进TGF-β1 蛋白水平增加,导致CYP2E1 蛋白水平升高,刺激心脏成纤维细胞活化成为肌成纤维细胞,并促进细胞外基质生成,最终导致心脏纤维化.

目的:对茖葱鳞茎、茎叶、花柱、须根4个部位的挥发性化学成分进行测定分析,为探究茖葱不同部位的有效成分提供参考,为进一步开发茖葱的药用价值提供理论依据.方法:采用顶空固相微萃取(headspace solid phase microextraction,HS-SPME)技术提取茖葱4个部位的挥发油,运用气相色谱-质谱联用法(gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS)对挥发油成分进行分析和鉴定,采用色谱峰面积归一化法确定各成分的相对含量.结果:从茖葱4个部位中共分离鉴定出179种挥发性成分,共有化合物12种.从鳞茎中鉴定出甲基烯丙基二硫醚、二烯丙基二硫醚、二甲基二硫醚等57种成分,质量分数占98.94％;茎叶中鉴定出1,3-二噻烷,2-己烯醛,二甲基二硫醚等48种成分,质量分数占97.36％;花柱中鉴定出1,3-二噻烷、二甲基二硫醚等82种成分,质量分数占92.90％;须根中鉴定出二甲基二硫醚,1,3-二噻烷,二甲基三硫醚等51种成分,质量分数占85.89％.结论:茖葱4个部位挥发油的量和成分均存在一定的差异,但主要成分都为含硫化合物,含硫化合物最多的部位是鳞茎,占总质量分数79.75％.

为优化大葱挥发油提取工艺并建立气相-质谱联用法(GC-MS)分析大葱挥发油成分,并研究大葱挥发油的抗菌活性.本研究通过单因素实验和正交实验对超声时间,料液比和提取时间的考察,采用超声辅助水蒸气蒸馏的方法提取大葱挥发油,优化出大葱挥发油提取最佳工艺为超声40 min,料液比1:3,蒸馏时间3h.大葱挥发油实际提取率为0.042 96％.运用GC-MS对其主要化学成分进行鉴定,通过NIST质谱库检索,鉴定了其中42个主要化合物,运用峰面积归一法确定各个组分的含量,其中主要物质为含硫化合物,含量较多的是氟胞嘧啶、烯丙基异丙基硫醚、丙烯基甲基硫醚,二甲基三硫化物、二丙基三硫化物、四硫化物、噻吩、噻烷和噻唑类.抗菌实验表明大葱挥发油对所选取得8种菌株均有很好的活性.本实验提取工艺优化后使提取率增加,抗菌实验表明大葱的挥发油具有抗菌作用,而成分分析鉴定出大量硫化物,可能为抑菌有效成分.

目的 建立消肿Ⅰ号挥发性成分指纹图谱,以期为这一内病外治对抗癌性疼痛的中药制剂的进一步研究提供科学基础.方法 采用顶空静态加热萃取技术提取消肿Ⅰ号低温易挥发性成分,采用顶空-气相色谱-质谱(HS-GC-MS)联用技术进行分析,使用Agilent HP-5MS毛细管色柱(0.25μm×0.25 mm×30 m)分离;程序升温:初始温度60℃,保持5 min,以10℃/min升至120℃,保持3 min,以5℃/min升至170℃,保持5 min;分流进样,进样口温度150℃,进样量1μL,载气为高纯氦气(纯度≥99.999％),载气流量1.0 mL/min,质谱条件为EI源,轰击电压70 eV,正离子模式,离子源温度230℃.结果 检验10批次样品,各批次相似度均在0.90以上,得到17个共有峰,分别进行识别与归属以及相对含量的计算.结论 消肿Ⅰ号挥发性成分复杂,其中主要组成成分为仲丁基-1-丙烯基二硫化物、二烯丙基二硫醚等物质,同时含许多萜类促透皮吸收剂.

目的 探讨二烯丙基三硫醚(DATS)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺炎的改善作用,并探讨其作用机制.方法 小鼠随机分为对照组、模型组及DATS 20、40、80 mg/kg预防组和DATS 20、40、80 mg/kg治疗组.通过ip LPS制备小鼠急性肺炎模型,考察DATS对血清生化指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、炎症因子一氧化氮(NO)、细胞白介素8(IL-8)和肿瘤坏死因子 α(TNF-α)、肺组织中髓过氧化物酶(MPO)、NO、NF-κB p65的影响.结果 DATS 40、80 mg/kg预防组和DATS 40、80 mg/kg治疗组能显著降低AST、NO、IL-8和TNF-α 水平(P<0.05),DATS 80 mg/kg预防组和DATS 80 mg/kg能显著降低LDH水平(P<0.05),显著升高SOD水平(P<0.05).DATS 80 mg/kg预防组和DATS 80 mg/kg治疗组能显著升高MPO和NO水平(P<0.05),并能抑制NF-κB p65的转移.结论 DATS对LPS诱导的肺部氧化损伤和炎症反应有一定的逆转作用,与DATS抑制NF-κB核转移和MPO活性有关.

目的 制备大蒜素二烯丙基三硫醚(DATS)微乳(DATS-MEs),评价该微乳载药系统对肿瘤细胞增殖和迁移能力的影响.方法 以HS15为乳化剂,PEG400助乳化剂,DATS 作为油相,水滴定法制备DATS 水包油微乳;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,评价DATS-MEs 对小鼠Lewis 肺癌(LLC)细胞及小鼠黑色素瘤B16BL6细胞体外增殖的影响;采用划痕实验评价DATS-MEs 对LLC 细胞及B16BL6细胞体外水平移行能力的影响.结果 制备的DATS-MEs 稳定,外观澄清透明,分散良好;粒径为(16.72±0.22)nm,多分散系数为0.03±0.01,Zeta 电位为(?4.98±0.11)mV,DATS 在微乳中的包封率为82.89％,载药量为6.28％,在水中的溶解度与裸药组相比增加了约2 367倍.10、30、50 μmol/L 的DATS-MEs与大蒜素裸药均能有效抑制LLC细胞和B16BL6细胞的增殖及迁移,并且具有剂量依赖性,其中DATS-MEs的药效强于DATS裸药.结论 将DATS 制成微乳,可提高其稳定性,可以有效解决DATS 在水中溶解性差的问题,对LLC 细胞及小鼠黑色素瘤B16BL6细胞具有较好的增殖抑制能力及迁移抑制能力,具有更好的抗肿瘤增殖及转移的潜力.

细胞色素P4502E1(cytochrome P4502E1,CYP2E1)是一种能够代谢内源性或外源性物质的细胞色素P450酶,主要位于内质网上,参与类固醇、脂肪酸、前列腺素和药物、致癌物质和环境污染物等外源性化学物质的氧化代谢.在酒精性肝病、非酒精性肝病、心血管疾病、艾滋病、糖尿病、帕金森综合征等疾病的病理进程中,CYP2E1的表达水平升高,产生活性氧(reactive oxygen species,ROS),引起氧化应激、DNA、蛋白质和脂质的失活,进而造成体内重要器官损伤,因此可以通过靶向抑制CYP2E1进而治疗多种疾病的.二烯丙基硫醚(diallyl sulfide,DAS)是大蒜中的一种有效成分,后发现可作为CYP2E1的选择性抑制剂,可以通过抑制CYP2E1,降低ROS、氧化应激的产生,细胞的凋亡.本文主要综述DAS靶向抑制CYP2E1对相关疾病治疗的潜在作用.

本研究从肺转移小鼠黑色素瘤细胞B16BL6中提取外泌体(exosome,Exo),制备了大蒜素二烯丙基三硫醚(diallyl trisulfide,DATS)含药外泌体(DATS-Exo)载药系统,探索该载药系统的抗肿瘤转移作用.采用差速超速离心法提取B16BL6细胞上清液中外泌体,并对外泌体的形态、粒径及电位进行表征,采用Western blot法检测外泌体特异分子CD9、TSG101、Flotillin 1及肺亲和蛋白α6的表达水平.应用超声方法制备DATS-Exo载药系统并进行表征,计算载药量.采用荧光显微镜及流式细胞术考察B16BL6对外泌体的摄取情况.采用经典的划痕实验法,评价DATS-Exo的体外抗迁移能力.建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,动物实验获得南京中医药大学伦理委员会的同意,考察DATS-Exo的体内组织分布情况及抗肿瘤转移作用.结果 表明,制备的DATS-Exo粒径为112.3±1.98 nm、多分散系数为0.24±0.08、zeta电位为-24.33±4.11 mV,呈茶托样结构.测得其蛋白浓度为1312.33±6.27μg·mL-1.DATS-Exo的载药量为0.33％±0.02％.B16BL6细胞能够摄取DATS-Exo,有效抑制B16BL6细胞的迁移,效果均强于DATS.DATS-Exo能够在肺组织聚集,并具有显著抑制肺转移作用.本研究结果表明,利用肺转移肿瘤细胞衍生的外泌体具有肺亲和性,并且具有载药性能,所制备的含药外泌体能够实现抑制肿瘤转移.

目的 探讨二烯丙基硫醚(diallyl sulfide,DAS)对二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)和四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的小鼠肝癌合并肝纤维化的干预效果.方法 14日龄雄性ICR小鼠随机分为4组:正常对照组、模型组(DEN+CCl4)、DAS低剂量干预组和DAS高剂量干预组,每组15只.除对照组外,小鼠出生第14天时腹腔注射DEN(25 mg/kg)诱发小鼠肝癌;小鼠出生6周时,每周腹腔注射CCl4(1 ml/kg)2次,持续给予14周诱发肝纤维化.DAS低和高剂量干预组在腹腔注射CC14前2小时分别灌胃DAS(20或40 mg/kg),每天1次,连续给药16周.检测血清丙氨酸氨基转移酶(Alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(Aspartate transaminase,AST)、γ-谷氨酰转肽酶(Gamma-glutamyl transferase,GGT)的活力和甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)的含量,比较各组小鼠肝脏系数、肝脏表面癌结节数目,并对肝脏进行病理组织学检查及天狼猩红染色.结果 与正常对照组相比,模型组小鼠肝脏系数明显增加,血清ALT、AST、GGT的活力升高(P＜0.05),AFP含量显著增加(P＜0.05);与模型组相比,DAS干预组小鼠各项指标均明显改善(P＜0.05).DAS干预后肝脏系数明显降低、肝脏表面增生癌结节数目明显减少(P＜0.05).其中高剂量干预组小鼠肝脏表面癌结节数目和血清中AFP含量显著低于低剂量干预组(P＜0.05).HE染色和天狼猩红染色结果表明,与模型组相比,DAS低、高剂量干预组小鼠肝组织切片中肿瘤区减少、细胞核异型性降低,肝纤维化明显减轻.结论 DAS的干预显著抑制了DEN和CCl4诱发的小鼠肝癌合并肝纤维化的进展.