目的:探讨间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征（IC/BPS）模型小鼠的膀胱外周感觉神经元的兴奋性和P2X受体介导的嘌呤能信号传导的变化。方法:雄性C57小鼠50只，2月龄，体质量16~20 g。通过在膀胱壁上注射逆行示踪荧光染料3′-四甲基吲哚羰花青高氯酸盐（DiI），标记腰骶（LS：L 6~S 2）和胸腰（TL：T 13~L 2）背根神经节中的膀胱感觉神经元。两周后，在第1、3和5天腹腔注射环磷酰胺（CYP，80 mg/kg，1次/48 h）建立间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征（IC/BPS）小鼠模型（CYP组， n=25），对照组（ n=25）小鼠腹腔注射等量生理盐水。第6天取小鼠膀胱组织，使用苏木精-伊红（HE）染色法评估膀胱组织病理学改变，髓过氧化物酶（MPO）测试评估组织炎症水平，并使用全细胞膜片钳记录LS和TL背根神经节中的DiI阳性膀胱感觉神经元的兴奋性和三磷酸腺苷（ATP）诱导的P2X受体电流。 结果:与对照组相比，80 mg/kg CYP未诱发显著组织学改变或影响MPO水平，但提高了LS和TL膀胱感觉神经元的兴奋性：CYP组和对照组LS神经元基强度分别为（119±9）、（144±8）pA，TL神经元基强度分别为（123±10）、（162±17）pA；相比于对照组，CYP组LS和TL神经元基强度均显著降低，差异均有统计学意义（ t=2.025、2.047，均 P<0.05）。给予P2X受体激动剂ATP灌流后，CYP组的LS膀胱感觉神经元的P2X受体电流类型发生了显著变化：CYP组LS神经元的P2X2受体介导持续性电流比例为39.3%，显著高于对照组的9.5%；P2X2/3受体介导的慢脱敏电流比例为60.7%，显著低于对照组的90.5%，差异有统计学意义（ P=0.025），提示CYP组小鼠LS神经元中的P2X2受体功能上调；TL膀胱感觉神经元的P2X受体电流类型（主要为P2X2/3受体介导的慢脱敏电流和P2X3受体介导的快脱敏电流）占比无明显变化。 结论:IC/BPS模型小鼠的膀胱神经元兴奋性升高，并且LS神经元的P2X受体电流成分出现变化，提示膀胱神经元的兴奋性升高和P2X受体的功能上调早于器质性病理改变，感觉神经元嘌呤能信号传导变化可能是IC/BPS的重要病理机制。

目的:探讨细胞色素P450 17(CYP17)基因多态性与尿道下裂的关系。方法:使用病例对照研究方法，对就诊于贵州医科大学附属医院、贵州省人民医院和贵阳市妇幼保健院的尿道下裂患儿和正常对照组儿童各206例，按年龄进行配对，进行体格检查，同时对尿道下裂组患儿进行临床分型；采用聚合酶链反应(PCR)和限制内切酶(RFLP-PCR)对CYP17基因多态性进行检测；采用自动双向测通的方法对目的基因进行测序；采用化学发光法检测血清性激素水平；应用SPSS 16.0统计学软件对数据进行统计学分析。结果:尿道下裂组与对照组患者A1A1、A1A2和A2A2 3种基因型频率符合Hardy-Weinberger遗传平衡法则；两组间患者基因型分布频率存在差异( χ2＝4.673， P<0.05)；两组间野生型和突变型的分布不同，对尿道下裂的患病可能产生影响( χ2＝6.773， P<0.05)。Logistic回归分析发现，野生型CYP17(A1A1)基因型可能增加了尿道下裂的患病风险[比值比( OR)＝0.111，95%可信区间( CI)＝1.140～71.038， P<0.05]；CYP17A1A1基因型增加前段型尿道下裂的风险性( OR＝2.271，95% CI＝1.231～4.846， P<0.05)；尿道下裂组T/E2低于对照组( P<0.05)。 结论:CYP17基因多态性可能与尿道下裂的有密切关系；CYP17(A1A1)可能是尿道下裂易感基因型。

目的:探讨细胞色素P450 1A1（CYP1A1）对巨噬细胞吞噬大肠杆菌（ E.coli）能力的调控作用及机制。 方法:①体外培养小鼠单核/巨噬细胞白血病细胞株RAW264.7（RAW），用感染复数（MOI）为30的 E.coli刺激细胞40 min，并设甘油对照组，观察感染时CYP1A1的表达变化。②体外培养CYP1A1过表达RAW细胞（CYP1A1/RAW）、CYP1A1敲除RAW细胞（CYP1A1 KO/RAW），用MOI为30的 E.coli刺激细胞40 min，并以阴性对照RAW细胞（NC/RAW）为对照，观察细胞吞噬功能与CYP1A1表达的关系，以及CYP1A1对吞噬受体〔清道夫受体A（SR-A）〕及其信号通路〔丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）通路〕的调控作用。③体外培养NC/RAW、CYP1A1 KO/RAW细胞，用1 μmol/L细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂U0126预处理2 h后，再用MOI为30的 E.coli刺激细胞40 min，并设磷酸盐缓冲液（PBS）对照组，观察CYP1A1是否通过调节MAPK通路调控巨噬细胞的吞噬功能。④体外培养RAW细胞，用100 nmol/L的CYP1A1羟化酶活性产物12（S）-羟基二十碳四烯酸〔12（S） - HETE〕预处理2 h后，再用MOI为30的 E.coli刺激细胞40 min，并设PBS对照组，观察巨噬细胞的吞噬功能是否与CYP1A1羟化酶代谢产物有关。⑤体外培养CYP1A1过表达且羟化酶活性位点突变的RAW细胞（CYP1A1m/RAW），用MOI为30的 E.coli刺激细胞40 min，并设CYP1A1/RAW对照组，观察巨噬细胞的吞噬功能是否与CYP1A1羟化酶活性有关。 结果:①与甘油对照组相比， E.coli刺激后RAW细胞中CYP1A1 mRNA表达显著增加（2 -ΔΔCt：7.79±0.71比1.00±0.00， P<0.05），提示CYP1A1可能参与调控感染进程。②与NC/RAW细胞相比， E.coli刺激40 min后CYP1A1/RAW细胞吞噬 E.coli菌落数明显降低（×10 3 CFU/mL：4.67±3.06比15.67±5.03， P<0.05），而CYP1A1 KO/RAW细胞吞噬 E.coli菌落数则显著增加（×10 3 CFU/mL：46.00±5.29比15.67±5.03， P<0.05），说明CYP1A1可负性调控巨噬细胞吞噬功能。同时，与NC/RAW细胞相比，CYP1A1/RAW细胞中SR-A mRNA表达明显下调（2 -ΔΔCt：0.31±0.03比1.00±0.00， P<0.05），且ERK的活化水平明显降低；而CYP1A1 KO/RAW细胞中SR-A mRNA表达明显上调（2 -ΔΔCt：3.74±0.25比1.00±0.00， P<0.05），且ERK活化增强，说明CYP1A1可以负性调控吞噬受体及其信号通路。③与PBS相比，U0126预处理可显著抑制CYP1A1敲除诱导的SR-A mRNA表达上调（2 -ΔΔCt：0.62±0.05比4.38±0.39， P<0.05），ERK活化水平也被抑制，同时可阻遏CYP1A1敲除导致的巨噬细胞吞噬能力增强〔细胞吞噬 E.coli菌落数（×10 3 CFU/mL）：12.67±1.15比45.33±4.16， P<0.05〕，说明CYP1A1可通过抑制ERK活化而减弱巨噬细胞的吞噬功能。④与PBS相比，12（S）-HETE预处理后，RAW细胞的吞噬功能并无明显变化〔细胞吞噬 E.coli菌落数（×10 3 CFU/mL）：17.00±1.00比16.33±2.52， P>0.05〕，说明CYP1A1对巨噬细胞吞噬功能的调控作用可能并非通过其羟化酶代谢产物12（S）- HETE实现。⑤与单纯过表达CYP1A1的RAW细胞相比，CYP1A1m/RAW细胞的吞噬功能并无明显变化〔细胞吞噬 E.coli菌落数（×10 3 CFU/mL）：3.67±1.15比3.33±0.58， P>0.05〕，说明CYP1A1也并非通过其羟化酶活性来调控巨噬细胞的吞噬功能。 结论:CYP1A1可通过抑制ERK活化降低SR-A表达，从而负性调控巨噬细胞的吞噬功能，但此调控效应与CYP1A1羟化酶活性及其致炎产物12（S）- HETE均无关。

目的:利用生物信息学分析方法挖掘反复胚胎种植失败患者相关关键基因及通路，探讨其对子宫内膜容受性的影响。方法:从GEO数据库中下载GSE26787数据集及GSE111974数据集为研究样本，以重复植入失败的患者及既往正常妊娠的女性的子宫内膜组织数据为研究对象，使用R语言将原始数据经过质量分析、归一化、探针和基因名转换，构建表达矩阵后，利用limma包进行差异基因的筛选，进而利用DAVID数据库进行GO及KEGG分析，再使用String数据库及Cytoscape软件筛选关键基因。结果:得到两数据集共同关键基因 PTGS2、 PLCB1、 MGP、 CYP3A5、 LPAR3、 VCAM1、 ALPL、 SLC1A1、 SLC4A7、 SULT1E1及关键通路hsa01100。 结论:本研究所得的关键基因及通路可通过调控子宫内膜氧化还原及代谢状态进而影响子宫内膜容受性，可作为研究其相关作用的靶点。

目的:研究I型血红素加氧酶（HO-1）/一氧化碳（CO）介导的槲皮素对大鼠原代肝细胞酒精性氧化损伤保护作用及其潜在机制。方法:二步胶原酶技术分离培养大鼠原代肝细胞。在乙醇染毒同时，加入槲皮素（100 μmol/L）或/和血红蛋白（100 μmol/L），或不同剂量的CO释放分子（CORM-2，5～50 μmol/L）共同作用，作用结束后检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）、天冬氨酸转氨酶（AST）活性，细胞丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平。乙醇染毒肝细胞与槲皮素、CORM-2、血红蛋白、锌原卟啉Ⅸ单独或联合作用，检测细胞微粒体内CYP2E1的活性。数据统计分析采用方差分析（ANOVA）和组间比较（SNK-检验）。结果:乙醇染毒同时加入100 μmol/L的槲皮素，乙醇诱导的AST与LDH的释放明显减少，GSH消耗与MDA升高程度也明显下降；而血红蛋白（CO阻断剂）不仅使槲皮素的保护效应丧失，反而进一步加重了乙醇所致的脂质过氧化。CORM-2能减少乙醇诱导的肝细胞AST与LDH释放，GSH消耗与MDA生成也明显减轻，且这种保护作用呈剂量依赖性。乙醇导致细胞CYP2E1活性显著升高，槲皮素或CORM-2能抑制CYP2E1的活性，血红蛋白或锌原卟啉Ⅸ则消除了槲皮素的这种抑制效应，使CYP2E1活性升高。当槲皮素、CORM-2和锌原卟啉Ⅸ与乙醇共同孵育肝细胞时，CYP2E1活性并未升高，与乙醇组比较反而明显下降， P值均< 0.05，差异均有统计学意义。 结论:HO-1的代谢产物CO介导了槲皮素对肝细胞酒精性氧化损伤的保护作用，这种保护效应可能与其抑制CYP2E1活性有关。

目的:研究1，2-二氯乙烷（1，2-dichloroethane，1，2-DCE）染毒过程中不同脑区细胞色素P450 2E1（cytochrome P-450 2E1，CYP2E1）表达的变化，探讨CYP2E1对1，2-DCE中毒引起的脑水肿形成的影响和作用。方法:于2018年12月，选择雌性SPF级昆明种小鼠40只随机分为对照组、染毒1、2和3 d组共4组，每组10只。将染毒组小鼠置于100 L静式染毒柜中（5只/柜），以1.2 mg/L 1，2-DCE每天吸入染毒3.5 h，分别染毒1、2和3 d，对照组不进行染毒，其他处理方式与染毒组相同。分别于染毒结束后次日处死，取脑组织并分区，采用HE染色法对不同脑区进行组织病理学观察，检测不同脑区丙二醛（malondialdehyde，MDA）、还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）含量和过氧化氢酶（catalase，CAT）活力；同时以蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测不同脑区中CYP2E1、occludin和claudin5蛋白含量，再以实时荧光定量PCR法检测CYP2E1、occludin和claudin5 mRNA表达水平。实验数据采用SPSS 20.0进行统计分析，多组组间比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA），组间两两比较采用SNK（q检验）法分析。结果:与对照组比较，染毒2 d和3 d组小鼠小脑组织出现明显的脑水肿改变；与对照组比较，染毒3 d组小鼠小脑组织中MDA含量、CYP2E1蛋白和mRNA表达水平明显增高，差异均有统计学意义（P<0.05）；与对照组比较，各个染毒组小鼠小脑组织中GSH含量、CAT活力及occludin和claudin5蛋白表达水平明显降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。各组小鼠额叶皮质组织中上述指标差异均无统计学意义（P>0.05）。结论:1，2-DCE染毒可以诱导小鼠小脑组织中CYP2E1的表达增强，引起脑组织氧化损伤和脑水肿，对小鼠额叶皮质组织中CYP2E1的表达无明显影响。

目的:探究湖南地区21-羟化酶缺乏症基因突变特点及基因型与临床表型的关系。方法:收集2016年3月至2017年3月就诊于中南大学湘雅二医院儿科并确诊为21-羟化酶缺乏症的48例患儿，根据患儿的临床表现及生化特点，分为失盐型(SW)和单纯男性化型(SV)。采用Sanger测序和多重连接探针扩增技术(MLPA)检测 CYP21A2基因突变，将基因诊断阳性者按突变严重程度分为重度突变组、中度突变组、未知突变组，探讨基因型与临床表型的关系。 结果:1．在48例2－羟化酶缺乏症患儿中SW型28例，SV型20例。SW型初诊年龄明显小于SV型，差异有统计学意义( U＝44.5， P<0.05)，SW型患者肾上腺危象发生率高，SV型患者骨龄提前及性早熟发生率较高。2. CYP21A2基因异常阳性者44例，阳性率达91.7%，88个等位基因共检测到14种变异，分别为I2G、Del、I173N、R357W、R484fs(c.1451_1452delGGinsC、c.1450dupC)、R483fs、G111Vfs*21、Q319X、c.292＋1G>A、c.377C>G、E6Cluster、p.H393Q、m.1647C>T，最常见的3种变异分别为I2G(36.4%)、I173N(20.4%)和Del(22.7%)，其中p.H393Q、m.1647C>T为2种新发变异。SW型中最常见的变异为I2G(47.3%)和Del(27.3%)；SV型中最常见的变异为I173N(48.5%)。3.重度突变组29例，其中SW型26例；中度突变组13例，其中SV型12例。重度突变组对SW型的预测值为89.7%，中度突变组对SV型的预测值为92.3%。 结论:湖南地区21-羟化酶缺乏症的热点突变基因为I2G、I173N、Del，三者共占79.5%，重度突变组对SW型、中度突变组对SV型的预测值高，基因型与临床表型密切相关。

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)分析苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠血清中内源性标志物的影响,并结合网络药理学研究其发挥药效的作用通路.方法 将40只大鼠随机分为正常组、模型组、达英-35组和苍附导痰组,每组10只.采用来曲唑法诱导多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠模型,造模成功后,达英-35组给予达英-35灌胃,苍附导痰组给予苍附导痰汤灌胃,每天1次,连续28 d.ELISA法检测大鼠血清促卵泡生长激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)含量差异水平;苏木精-伊红(HE)染色法观察大鼠卵巢组织病理形态学变化;采用UHPLC-QE-MS分析各组大鼠血清样品,基于主成分分析法(PCA)及正交偏最小二乘判别分析法(OPLS-DA)筛选出相关差异代谢物,并依据MetaboAnalyst数据库查询相关代谢通路.采用网络药理学探究苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的关键靶点,使用KEGG数据库富集分析作用通路,并借助MetScape插件构建"代谢物-反应-酶-基因"网络.结果 与正常组相比,模型组大鼠血清中FSH含量明显上升(P＜0.05),LH、T、E2含量显著上升(P＜0.01);与模型组相比,达英-35组大鼠血清中LH、T、E2含量显著降低(P＜0.01),苍附导痰组大鼠血清中T明显降低(P＜0.05),LH、E2含量显著降低(P＜0.01).与模型组比较,达英-35组和苍附导痰组大鼠卵巢组织形态明显改善;代谢组学筛选15个苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的差异代谢物,涉及类固醇激素生物合成、甘油磷脂代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等途径.网络药理学分析显示苍附导痰汤治疗多囊卵巢综合征的核心靶点为AKT1、ESR1、EGFR等,KEGG富集显示涉及内分泌抵抗、类固醇合成、雌激素信号通路等;采用MetScape插件构建"代谢物-反应-酶-基因"网络,发现6个关键靶点CYP1B1、CYP19A1、AKR1C1、AKR1C3、HSD17B1、HSD17B2,以及涉及类固醇激素生物合成通路.结论 苍附导痰汤对多囊卵巢综合征大鼠显示出潜在的治疗作用,这可能与其对类固醇激素合成代谢路径的调节作用有关,治疗的内源性标志物包括17a-羟基孕烯醇酮、孕酮、皮质酮,这些指标有助于监测治疗效果.

目的:探究以成纤维细胞生长因子受体(FGFR)非对称二聚化模型为结构基础设计成纤维细胞生长因子19(FGF19)的非促肿瘤型改构体,并对其增殖活性和代谢活性进行评估,使其成为治疗胆汁淤积症的候选药物之一.方法:利用pymol软件分析蛋白晶体结构并设计FGF19改构体,将构建好的FGF19改构体(FGF19F159A)与FGF19野生型(FGF19WT)的质粒转化到大肠杆菌感受态细胞中,经过诱导表达、变性、复性获得正确构象的蛋白,经过镍柱亲和层析与分子排阻色谱方法纯化得到目的蛋白;通过蛋白邻位连接技术(PLA)对比FGF19WT和FGF19F159A诱导受体二聚化的程度;MTT实验检测细胞增殖活性;Western blot实验检测磷酸化成纤维细胞生长因子受体底物2(P-FRS2)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(P-ERK)、胆固醇7α-羟化酶(Cyp7Al)的蛋白表达水平;免疫组化法检测动物肝脏中促增殖指标Ki67和增殖细胞核抗原(PCNA)的蛋白表达水平;RT-qPCR法检测动物肝脏中肿瘤指标甲胎蛋白(AFP)、细胞周期蛋白A2(CCNA2)、表皮生长因子受体(EGFR)的相对mRNA水平;质谱法测定肝脏中胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、熊去氧胆酸(UDCA)、鹅去氧胆酸(CDCA)的含量;以db/db小鼠为模型,连续给药1个月,监测药物的慢性降糖效果,糖耐量实验检测其对糖耐量的改善能力.结果:以蛋白结构为基础成功构建了 FGF19F159A,经过表达纯化得到了高纯度的目的蛋白;PLA结果显示,与FGF19WT组相比,FGF19F159A诱导受体二聚化的能力明显减弱(P＜0.01);MTT实验显示,与FGF19WT组相比,FGF19F159A的促增殖活性明显减弱(P＜0.05);Western blot实验表明,与FGF19WT组相比,FGF19F159A明显下调P-FRS2和P-ERK的蛋白表达水平(P＜0.05);免疫组化结果显示,与FGF19WT组相比,FGF19F159A组Ki67和PCNA的蛋白表达水平显著降低(P＜0.01);与FGF19WT组相比,FGF19F159A组AFP、CCNA2、EGFR的mRNA水平明显降低(P＜0.01);与FGF19WT组相比,FGF19F159A组肝脏中Cyp7Al的蛋白表达水平,胆汁酸CA、DCA、UDCA、CDCA的含量差异无统计学意义(P＞0.05);与FGF19WT组相比,FGF19F159A组的降糖能力和改善糖耐量的能力差异无统计学意义(P＞0.05).结论:基于FGFR非对称二聚化模型设计的FGF19改构体FGF19F159A能够在极大减弱细胞增殖活性的同时保留其代谢活性,有望成为治疗胆汁淤积症的候选药物.

目的 研究逍遥丸治疗代谢相关脂肪性肝炎(MASH)大鼠的机制.方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组,n=8)和模型组(n=16),模型组给予高脂饮食+四氯化碳背部皮下注射+饥饱失常+夹尾,联合刺激4周建立MASH模型,再随机分为MOD组和逍遥丸组(XYW组),每组各8只.XYW组大鼠给予逍遥丸灌胃,其他两组给予0.9％氯化钠溶液灌胃.给药4周后,对不同组别大鼠的血清生化及氧化应激指标进行检测.HE染色和油红O染色对大鼠肝组织进行病理切片观察.Western blot对大鼠肝脏中细胞色素P450 2E1(CYP2E1)、凋亡相关因子配体(FasL)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达进行检测.RT-qPCR检测肝组织CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 mRNA相对含量.结果 XYW组大鼠的一般情况较MOD组有显著改善,肝指数较MOD组下降(P＜0.01),体质量指数较MOD组上升(P＜0.01);XYW组血清中三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、天冬氨酸氨基转氨酶、丙氨酸氨基转移酶、丙二醛、单核细胞趋化蛋白-1、TNF-α、白细胞介素(IL)-18水平较MOD组降低(均P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇、超氧化物歧化酶、IL-10水平较MOD组升高(均P＜0.05);光镜下可观察到XYW组肝细胞内脂滴含量较MOD组明显减少;XYW组肝组织CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1的蛋白水平较MOD组降低(均P＜0.05),CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 mRNA 相对含量较MOD组降低(均P＜0.05).结论 逍遥丸通过调节CYP2E1、FasL、TNF-α、TGF-β1 在 MASH 大鼠肝组织中的转录表达,减少肝脏脂肪酸蓄积,从而达到治疗MASH的目的.