目的 构建特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)寒湿证病证结合小鼠模型,并对模型进行宏观表征及微观指标评价.方法 将Balb/c小鼠随机分为正常对照组、疾病模型组、寒湿证组、病证结合组,每组 6 只.其中正常对照组小鼠外涂基质液;疾病模型组小鼠外涂二硝基氯苯(dinitrochlorobenzene,DNCB),模拟特应性皮炎疾病模型;寒湿证组小鼠在外涂基质液基础上,采用人工气候箱模拟寒湿环境[温度(4±2)℃、相对湿度(90±5)%],并结合高脂饲料喂养模拟寒湿证;病证结合组小鼠在DNCB造模基础上,结合寒湿证证候模拟方法进行复合造模.采用经皮水分流失测量仪对动物经皮水分流失(transepidermal water loss,TEWL)进行测量和评估;对小鼠皮炎和寒湿证证候情况进行观察评价;对搔抓行为进行记录分析;HE染色观察小鼠背部皮肤组织病理改变,并对其表皮厚度和炎症细胞浸润情况进行分析;Western blot法检测皮肤中紧密连接蛋白 1(Claudin-1)、瞬时受体电位香草酸 3(transient receptor potential vanilloid 3,TRPV3)和TRPV4 蛋白的表达水平;利用流式细胞术分析淋巴结辅助性T细胞17(helper T cells 17,Th17)/调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)比值.结果 与疾病模型组比较,病证结合组小鼠的证候评分明显升高(P<0.001),TEWL值明显升高、背部皮肤表皮厚度明显增加(P<0.05),背部皮肤的Claudin-1、TRPV3 蛋白表达量显著降低(P<0.01),而TRPV4 蛋白表达显著升高(P<0.05).结论 采用DNCB进行特应性皮炎疾病造模,并结合寒湿环境及高脂饮食的寒湿证造模方式,能够成功构建特应性皮炎寒湿证病证结合小鼠模型.该研究为后续深入探索特应性皮炎寒湿证病证结合动物模型构建及中药复方对AD的药效学研究提供了较理想的动物模型.

目的:探讨不同浓度2，4-二硝基氯苯（DNCB）诱导的特应性皮炎（AD）样小鼠模型特点及皮肤菌群改变。方法:将30只雄性、无特定病原级BALB/c小鼠按随机数字表法等分为3组：阴性对照组小鼠背部涂抹200 μl丙酮和橄榄油（体积比为3∶1）每周2次，连续6周；高、低浓度DNCB组小鼠于第1周的第1、3天均涂抹1% DNCB 200 μl，第2周起分别涂抹0.5%、0.1% DNCB 200 μl，每周2次，连续5周。末次给药24 h后评估皮损严重程度，测量经表皮水分丢失和角质层含水量。实验结束后处死小鼠，切取背部皮肤行组织病理学检查。每组取3只小鼠背部全层皮肤组织样本，通过Illumina Miseq PE300型高通量测序仪检测小鼠背部皮肤菌群16S rRNA基因V3-V4可变区，并分析皮肤菌群的组成结构及不同菌属相对丰度变化。采用单因素方差分析比较3组间各指标的差异，Games-Howell法进行两两多重比较。结果:高、低浓度DNCB组小鼠皮损严重程度评分分别为（9.83 ± 2.45）分、（2.71 ± 0.56）分，均显著高于阴性对照组[（0.51 ± 0.12）分]， t值分别为-7.19、-2.85，均 P < 0.05。高、低浓度DNCB组经表皮水分丢失值均显著高于阴性对照组（ t值分别为-7.72，-2.68，均 P < 0.05），而角质层含水量显著低于阴性对照组（ t值分别为6.77、5.99，均 P < 0.05）；高浓度DNCB组经表皮水分丢失值显著高于低浓度DNCB组（ t=2.76， P < 0.05），而高、低浓度DNCB组间角质层含水量差异无统计学意义（ P > 0.05）。3组间棒状杆菌属相对丰度差异有统计学意义（ F=249.85， P < 0.001），高浓度DNCB组棒状杆菌属丰度显著升高。3组小鼠皮肤样本observed species和Chao1指数差异均无统计学意义（均 P > 0.05），而高浓度DNCB组Shannon指数显著低于阴性对照组和低浓度DNCB组（ t值分别为6.96、-6.37，均 P < 0.05）。 结论:DNCB可诱导小鼠皮肤形成AD样皮炎，其皮损严重程度、屏障功能受损程度与DNCB浓度相关；高浓度DNCB组小鼠皮肤菌群物种多样性明显下降，高浓度DNCB造模对研究AD的微生物学变化更具优势。

目的:研究皮肤光损伤、变应性接触性皮炎和银屑病这3种常见皮肤炎症损伤模式中角质形成细胞S100A8/A9表达的调控效应差异。方法:选取6 ~ 8周龄野生型C57BL/6JGpt小鼠分别进行以下几组实验：①使用单次中波紫外线（UVB）照射小鼠脱毛背部，构建皮肤光损伤模型（UVB组， n = 4），对照组不照射（ n = 4）；②使用2，4-二硝基氯苯（DNCB）涂抹小鼠右耳构建变应性接触性皮炎模型（DNCB组， n = 4），小鼠左耳涂抹基质对照（对照组， n = 4）；③小鼠脱毛背部外用咪喹莫特乳膏构建银屑病样皮炎模型（咪喹莫特组， n = 4），对照组小鼠涂抹凡士林（ n = 4）。使用苏木精-伊红（HE）染色检测各组小鼠皮肤样本组织病理变化，免疫组化及Western印迹法检测小鼠背部表皮或耳部皮损中S100A8和S100A9的表达。体外培养的HaCaT细胞分别进行以下几组实验：①UVB组细胞接受单次50 mJ/cm 2 UVB照射，对照组不照射；②采用模拟变应性接触性皮炎中炎症环境的肿瘤坏死因子α（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）（两者简称为TI）处理HaCaT细胞（TI组），对照组加入相应溶媒处理；③采用模拟银屑病样炎症环境的5种细胞因子[白细胞介素17A（IL-17A）、IL-22、IL-1α、抑瘤素M和TNF-α，简称为M5]处理HaCaT细胞（M5组），对照组加入相应溶媒。采用实时荧光定量PCR、Western印迹法和酶联免疫吸附试验分别测定S100A8和S100A9的转录、表达和胞外分泌水平。 结果:免疫组化及Western印迹检测显示，在皮肤光损伤、变应性接触性皮炎和银屑病这3种炎症小鼠模型皮损组织中，S100A8、S100A9表达量均明显高于相应的对照组，且免疫组化结果显示，这两种蛋白在银屑病样皮炎模型中增多更为显著。体外细胞实验中，单次UVB、TI和M5分别处理HaCaT细胞12 h后S100A8、S100A9转录水平明显高于相应对照组，处理24 h后亦均高于相应对照组[S100A8、S100A9 mRNA表达水平：UVB组比对照组分别为6.14 ± 0.60比1.00 ± 0.08，2.58 ± 0.06比1.02 ± 0.22，均 P < 0.01；TI组比对照组分别为3.90 ± 0.75比1.00 ± 0.02，2.42 ± 0.30比1.01 ± 0.13，均 P < 0.05；M5组比对照组分别为157.59 ± 9.30比1.00 ± 0.11，251.37 ± 6.63比1.00 ± 0.03，均 P < 0.001]；24、48 h，UVB组、TI组和M5组的S100A8/A9分泌蛋白水平均显著高于相应的对照组（均 P < 0.001），但其响应模式存在一些差异，在银屑病样皮炎模型中响应更为显著；同时，M5组HaCaT细胞中S100A8、S100A9胞内蛋白表达水平显著高于对照组（ t = 4.66、4.63，均 P < 0.01），而UVB组和TI组HaCaT细胞中S100A8、S100A9胞内蛋白表达水平低于对照组（UVB组比对照组： t = -3.75、-3.34， P = 0.020、0.029；TI组比对照组： t = -3.30、-4.50， P = 0.030、0.011）。 结论:角质形成细胞在3种常见皮肤炎症损伤后响应活跃，其效应分子S100A8、S100A9作为机体的损伤相关分子密切参与UVB诱导的皮肤光损伤、变应性接触性皮炎和银屑病中炎症反应，尤其在银屑病样皮炎中响应可能更为显著。

目的 探讨蛇床子散对湿疹大鼠Th1/Th2免疫功能的影响,并分析其治疗湿疹的作用机制.方法 将50只SD大鼠随机分为空白组、模型组、蛇床子散高剂量组、蛇床子散低剂量组、冰柏液组,每组10只.采用2,4-二硝基氯苯复制大鼠湿疹模型.空白组及模型组予以0.9%生理盐水外涂背部皮损,蛇床子散高剂量组予以2.32 g·mL-1蛇床子散水煎液外涂,蛇床子散低剂量组予以1.16 g·mL-1蛇床子散水煎液外涂,冰柏液组予以冰柏液原液外涂,早晚各1次,共14天.末次给药后,观察大鼠背部皮损情况并进行皮损表观评分;HE染色观察湿疹大鼠皮损病理学改变,并进行半定量评分;ELISA法检测大鼠血清IFN-γ、IL-4、IL-18、IL-33水平;流式细胞术检测血清Th1/Th2比例.结果 与空白组相比,模型组大鼠皮损评分明显升高(P<0.05),背部出现水肿、红斑、鳞屑、苔藓样变等一系列皮损;病理切片可见表皮角化过度,角质层增厚,表皮海绵水肿,表皮大量炎症细胞浸润等,皮损半定量评分显著升高(P<0.05);血清IL-4、IL-18、IL-33水平明显升高(P<0.05),而IFN-γ水平明显降低(P<0.05);血清Th1/Th2比例降低(P<0.05);与模型组比较,蛇床子散高、低剂量组及冰柏液组大鼠背部皮损明显改善(P<0.05),病理切片可见表皮结构恢复正常,角质层变薄,表皮海绵水肿消失,表皮炎症细胞消失,皮损半定量评分降低(P<0.05);血清IL-4、IL-18、IL-33水平降低(P<0.05),而IFN-γ水平升高(P<0.05),血清Th1/Th2比例明显升高(P<0.05);且蛇床子散高、低剂量组疗效优于冰柏液组(P<0.05).结论 蛇床子散可有效改善湿疹大鼠皮损,修复湿疹大鼠皮损病理损伤,降低炎症因子水平,其机制可能与抑制IL-4、IL-18、IL-33等炎症因子分泌,促进IFN-γ释放,恢复Th1/Th2失衡有关.

目的 探讨连术饮(LZY)对特应性皮炎(AD)样小鼠模型Th17/Treg免疫失衡及芳香烃受体表达的影响.方法 采用 2,4-二硝基氯苯(DNCB)反复刺激BALB/c小鼠背部皮肤后建立AD样小鼠模型.56 只小鼠随机分为7 组(空白组,模型组,盐酸西替利嗪组,连术饮低、中、高剂量组,空白+连术饮中剂量组),每组 8 只.造模第15 天,模型组及空白组灌服生理盐水0.1 mL/(10 g·d),连术饮低、中、高剂量组分别按连术饮生药量6.5、13.0、26.0 g/(kg·d)的中药水溶液灌胃,空白+连术饮中剂量组按连术饮生药量13.0 g/(kg·d)的中药水溶液灌胃,盐酸西替利嗪组灌服1.3 mg/(kg·d)的盐酸西替利嗪溶液,连续治疗14d,观察各组小鼠背部皮损评分、组织病理学改变,测量局部皮肤角质层含水量,流式细胞术检测外周血辅助性T(Th)淋巴细胞亚群Th17 细胞及调节性T细胞(Treg)水平、ELISA实验检测小鼠血清的IgE、IL-17A、IL-22、IL-10、TGF-β的表达水平,RT-PCR检测小鼠皮肤组织ROR-γt、Foxp3、AhR的mRNA表达水平.结果 末次给药后,与空白组比较,模型组小鼠背部皮损评分显著升高,背部皮肤局部角质层含水量显著降低;组织病理学表现为角化过度伴角化不全,棘层肥厚,海绵水肿,表皮突向下延伸,真皮层可见明显的炎症细胞浸润;Th17 细胞比例显著增加(P<0.01),Treg细胞比例明显降低(P<0.01),Th17 与 Treg 细胞比值增大(P<0.01);血清 IgE、IL-17A、IL-22 表达水平均明显升高(P<0.05),IL-10、TGF-β的表达水平显著下降(P<0.05);皮肤组织ROR-γt、AhR的mRNA表达水平均显著升高(P<0.05),Foxp3 的 mRNA 表达水平明显降低(P<0.05),空白+连术饮中剂量组AhR表达水平显著升高(P<0.05).治疗后,连术饮降低了小鼠背部皮损评分,升高了局部皮肤角质层含水量;连术饮可升高Treg细胞比例,降低Th17 细胞比例及Th17/Treg 细胞比值;连术饮治疗后,血清IgE及Th17 相关细胞因子IL-17A、IL-22 水平下降,ROR-γt 的 mRNA 表达水平降低,Treg 相关细胞因子 IL-10、TGF-β 升高,Foxp3 的mRNA表达水平增加.结论 连术饮可能通过下调ROR-γt、上调Foxp3以及调节AhR的表达改善小鼠AD样皮炎、Th17/Treg免疫失衡状态.

目的 制备一种律草黄酮外用凝胶,探讨其对湿疹的治疗作用.方法 采用溶剂提取法提取葎草中的黄酮,以卡波姆940作为凝胶基质,葎草黄酮水溶液作为分散介质,甘油作为保湿剂和增稠剂,制备葎草黄酮凝胶,对凝胶的酸碱度以及体外释放率进行质量评价.采用2,4-二硝基氯苯在小鼠背后建立特异性湿疹模型,造模成功后,连续10 d小鼠背部涂抹律草黄酮凝胶.观察记录湿疹小鼠30 min内瘙痒次数和瘙痒持续时间,免疫组织化学方法检测湿疹小鼠背部皮损处PAR-2的表达,酶联免疫吸附法测定血浆白细胞介素(IL)-2和IL4的含量以及皮损组织中白三烯B4(LTB4)和白三烯C4(LTC4)的含量.结果 葎草黄酮最优提取条件为液料比20∶1,提取温度70 ℃,提取时间90 min,提取剂浓度60％乙醇,葎草黄酮得率为1.780 3％;葎草黄酮凝胶最优制备条件为卡波姆940含量为4.72％,甘油含量为15.75％,粗黄酮含量为0.79％.制备的葎草黄酮凝胶外观呈棕黄色,均匀细腻,pH范围在6～7之间,葎草黄酮凝胶中黄酮含量为3.20 mg/g,葎草黄酮凝胶48 h的体外释放率为68％.葎草黄酮凝胶显著降低了湿疹小鼠30 min内瘙痒次数与瘙痒持续时间(P＜0.01),抑制湿疹小鼠皮损中PAR-2的表达(P＜0.01),上调湿疹小鼠血浆中IL-2的表达(P＜0.01),下调血浆中IL4的表达(P＜0.01),减少皮损组织中LTB4和LTC4的表达水平(P＜0.01).结论 成功制备葎草黄酮凝胶.葎草黄酮凝胶可以通过调节机体Th1/Th2平衡、抗炎和止痒对湿疹小鼠发挥治疗作用.

目的 探讨青蒿软膏治疗湿疹的效果及其可能的免疫调节机制.方法 将70只昆明(KM)小鼠随机分为正常对照组,模型组,阳性药物组,青蒿软膏低(0.4 g·g-1)、中(0.8 g·g-1)、高(1.6 g·g-1)剂量组,药物对照组.除正常对照组和药物对照组外,其余各组小鼠均采用2,4-二硝基氯苯涂抹于腹部及耳部皮肤,建立湿疹模型.给药期间,各治疗组小鼠每日涂抹相应药物,连续12 d.观察小鼠耳部肿胀程度和厚度变化,并进行耳部变应反应评分;取耳部皮肤组织进行苏木精-伊红(HE)染色,观察病理学改变;测定各组小鼠的脏器指数;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清中干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-4(IL-4)等炎症因子的水平.结果 在第15天时,与正常对照组相比,模型组小鼠耳厚度差异显著增加,耳部变应反应评分显著升高(P＜0.001);与模型组相比,青蒿软膏低、中剂量组小鼠耳厚度差异显著下降(P＜0.05),耳部变应反应评分呈剂量依赖性下降,但差异不显著.在第19天时,与正常对照组相比,模型组小鼠耳厚度差异显著增加,耳部变应反应评分显著升高(P＜0.001),血清中IFN-γ、IL-2 和TNF-α水平显著降低(P＜0.001),而IL-6 和IL-4水平显著升高(P＜0.001);与模型组相比,青蒿软膏低、中剂量组小鼠耳厚度差异不显著,耳部变应反应评分呈剂量依赖性下降,但差异不显著,青蒿软膏低剂量组小鼠血清中IFN-γ和TNF-α水平显著升高(P＜0.05),IL-2 水平升高但差异不显著,IL-6水平和IL-4水平显著下降(P＜0.05),青蒿软膏中剂量组小鼠血清中IFN-γ、IL-2 和TNF-α水平显著升高(P＜0.05),IL-6和IL-4水平显著下降(P＜0.001).在实验末期,与正常对照组相比,模型组小鼠耳部肿胀度显著增加(P＜0.001),耳部皮肤组织出现明显的炎性细胞浸润,脾脏指数显著升高(P＜0.01);与模型组相比,青蒿软膏低、中剂量组小鼠耳部肿胀度显著改善(P＜0.001),青蒿软膏低剂量组小鼠耳部皮肤组织的炎性细胞浸润减轻,脾脏指数显著下降(P＜0.05).结论 青蒿软膏对湿疹有明显的治疗效果,其机制可能与调节Th1/Th2细胞功能平衡、抑制过敏性炎症反应有关.

目的 通过比较 2,4-二硝基氯苯(2,4-Dinitrochlorobenzene,DNCB)诱导特应性皮炎(Atopic Dermatitis,AD)小鼠疾病模型、"外湿+饮食失节+番泻叶灌胃"复合因素诱导脾虚湿蕴证小鼠模型,以及两者病证结合模型,建立特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合小鼠研究模型,探索该方法的可行性.方法 采用"外湿+饮食失节+番泻叶灌胃"复合因素造模方法,探索构建小鼠(Balb/c)脾虚湿蕴证,进一步应用DNCB诱导Balb/c小鼠出现特应性皮炎样病变,建立脾虚湿蕴证特应性皮炎病证结合模型.观察各组小鼠一般情况及体质量,进行脾虚、湿证症状评分;通过比较各组皮损程度、EASI评分、经皮水分散失(TEWL)值、脾脏系数和胸腺系数评价小鼠特应性皮炎严重程度;测定小鼠肌酐、葡萄糖、总胆固醇、甘油三酯、胃泌素、淀粉酶水平.结果 (1)在脾虚湿蕴证造模期间,与正常组比较,脾虚湿蕴证组、脾虚湿蕴型特应性皮炎组小鼠出现肥胖、精神萎靡、毛发污秽油腻、腹泻、肛周清洁度差等情况.在结合施加特应性皮炎模型后,与正常组比较,特应性皮炎组(P＜0.001)、脾虚湿蕴证组(P＜0.05)、脾虚湿蕴型特应性皮炎组(P＜0.001)的体质量都有所降低.(2)与特应性皮炎组比较,脾虚湿蕴型特应性皮炎组的皮损程度更严重,EASI评分(P＜0.05)、TEWL值(P＞0.05)更高.(3)与正常组比较,特应性皮炎组的脾脏系数升高(P＜0.001)、胸腺系数降低(P＜0.001);与特应性皮炎组比较,脾虚湿蕴型特应性皮炎组脾脏系数(P＞0.05)、胸腺系数都降低(P＜0.05).(4)血清生化指标结果显示,与正常组比较,脾虚湿蕴证组小鼠肌酐(P＜0.01)、葡萄糖(P＜0.001)、总胆固醇(P＞0.05)、甘油三酯(P＞0.05)、胃泌素(P＜0.001)水平升高,淀粉酶水平降低(P＜0.01);与特应性皮炎组比较,脾虚湿蕴型特应性皮炎组小鼠肌酐(P＞0.05)、葡萄糖(P＜0.05)、总胆固醇(P＞0.05)、甘油三酯(P＞0.05)、胃泌素(P＜0.001)水平升高,淀粉酶水平降低(P＞0.05).结论 "外湿+饮食失节+番泻叶灌胃"复合因素结合DNCB诱导特应性皮炎脾虚湿蕴病证结合小鼠模型既可表现出明显的脾虚湿蕴证中医指征,也可表现出特应性皮炎病样特征,可作为可靠的特应性皮炎脾虚湿蕴证中医病证结合动物模型,为后续脾虚湿蕴型特应性皮炎病理机制探讨、中药复方药效评价、药理机制探讨等方面研究提供参考.

目的 探究嗜黏蛋白阿克曼菌(Akkermansia muciniphila,AKK)对 2,4-二硝基氯苯(2,4-dichloronitrobenzene,DNCB)诱导的特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)小鼠的干预作用及肠道菌群的影响.方法 将72只BALB/c小鼠随机分高、低剂量活菌组与巴氏灭菌组、模型组与空白组,每组12只.采用DNCB构建AD小鼠模型,使用不同剂量的AKK活菌和巴氏灭活菌灌胃干预4周.观察各组小鼠背部皮损、脾肿大和皮肤组织病理情况,测定血清IgE水平,检测背部皮肤组织中IL-4和IFN-γ在mRNA转录和蛋白上的表达水平.收集小鼠粪便样品,采用16S rRNA测序了解肠道菌群结构及丰度变化.结果 AKK干预后未明显改善AD小鼠的皮损、脾肿大及皮肤组织病理损伤情况,血清IgE水平升高,IL-4水平除低剂量活菌组的mRNA转录水平外均降低,低剂量活菌组和高剂量灭活组的IFN-γ水平在mRNA和蛋白水平上均表达升高;各干预组肠道菌群多样性增加,厚壁菌门/拟杆菌门比值降低.结论 AKK虽未明显改善AD小鼠的皮肤病变,但在一定程度上缓解了小鼠体内的炎症反应,改善了其肠道菌群多样性和结构.

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对特应性皮炎(AD)大鼠的保护作用及潜在机制.方法 将 SPF级 SD大鼠分为对照(Control)组、AD 模型(AD)组、AD+EGCG 治疗(EGCG)组、AD+地塞米松阳性对照(DXM)组、AD+EGCG+TLR4 激动剂(TLR4)组,每组 18 只.根据临床损伤严重程度计算皮肤损伤评分;ELISA 检测炎症因子的表达;HE染色观察组织学变化;流式细胞仪分析 Th1 和 Th2 阳性细胞比例;Western blot 检测 TLR4/MyD88/NF-κB通路相关蛋白水平.结果 与Control组比较,AD组大鼠背部皮肤损伤程度较重,病理学损伤评分增加(P<0.05),白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)水平及 Th1 细胞百分比降低,白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-13(IL-13)水平及Th2 细胞百分比升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平升高(均P<0.05).与 AD组比较,EGCG组和DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分降低,Th1 细胞百分比、IL-2、IFN-γ水平升高,IL-4、IL-13水平、Th2 阳性百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平下降(均P<0.05).与 EGCG组比较,DXM组大鼠皮肤损伤评分及皮肤损伤病理学评分、Th1、Th2 细胞百分比、TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平差异无统计学意义(均P>0.05),TLR4 组大鼠皮损评分及皮肤损伤病理学评分升高,皮损组织中 Th1 细胞百分比降低,Th2 阳性百分比及 TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白水平上调(均P<0.05).结论 EGCG可以通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,维持 Th1/Th2平衡来抑制炎症反应,进而降低 AD的严重程度.