目的 研究不同地域支气管扩张症(简称支扩)患者下呼吸道背景微生物差异.方法 收集2021年9月-2022年9月解放军总医院海南医院及解放军总医院第八医学中心收治的稳定期支扩患者75例的肺泡灌洗液进行宏基因组测序,并对结果进行对比分析.结果 南、北支扩患者下呼吸道丰度最高的菌属是普氏菌属、奈瑟菌属和罗斯氏菌属,菌种是产黑色普雷沃菌、中间普雷沃菌和龋齿罗氏菌;不同地域支扩患者下呼吸道背景微生物存在差异,北方组丰度最高的菌属是普氏菌属、奈瑟菌属和罗斯氏菌属,菌种是产黑色普雷沃菌、黏滑罗氏菌和龋齿罗氏菌;南方组丰度最高的菌属是普氏菌属、奈瑟菌属和罗斯氏菌属,菌种是中间普雷沃菌、产黑色普雷沃菌和龋齿罗氏菌;以铜绿假单胞菌和流感嗜血杆菌为致病菌的背景菌群其α多样性无统计学差异.结论 我国南北方稳定期支扩患者下呼吸道背景微生物存在差异,北方组产黑色普雷沃菌、黏滑罗氏菌、龋齿罗氏菌多见,南方组中间普雷沃菌、产黑色普雷沃菌、龋齿罗氏菌多见,该研究对支扩的治疗提供新思路.

目的 探讨牙髓牙周病变患者感染根管的主要致病菌及其影响因素分析.方法 选取2020年2月—2021年8月成都大学附属医院收治的88例牙周牙髓病变患者,根据是否根管感染分组为感染组(38例)和未感染组(50例).分析感染患者病原菌的分布构成,采用单因素和多因素一般Logistic回归分析影响感染的危险因素.比较两组患者血清和龈沟液白细胞介素-1β(IL-1β)、干扰素-γ(IFN-γ)水平,并采用受试者工作特征曲线分析IL-1β、IFN-γ水平对根管感染的诊断效能.结果 88例患者中感染38例(43.18%),共检出46株病原菌,其中革兰阳性菌28株(60.87%),包括葡萄球菌属(21.74%)、微单胞菌(17.39%)、粪肠球菌(13.04%)、放线菌(4.35%)及其他革兰阳性菌(4.35%);革兰阴性菌18株(39.13%),包括中间普氏菌(15.22%)、福塞类杆菌(10.87%)、牙龈卟啉单胞菌(4.35%)、产黑普雷沃菌(4.35%)及其他革兰阴性菌(4.35%).两组患者性别构成、年龄、体重指数、收缩压、舒张压比较,差异均无统计学意义(P>0.05).感染组刷牙时间<3 min、刷牙次数1次、喜食甜食、龋牙占比高于未感染组,血清和龈沟液中IL-1β和IFN-γ水平高于未感染组(P<0.05).多因素一般Logistic回归分析结果显示:刷牙时间<3 min[(OR)=1.950(95%CI:1.116,3.410)]、刷牙次数1次[(OR)= 2.192(95%CI:1.100,4.371)]、喜食甜食[(OR)=1.754(95%CI:1.081,2.847)]、龋牙[(OR)=2.252(95%CI:1.166,4.352)]、血清IL-1β≥7.69 ng/mL[(OR)=1.842(95%CI:1.195,2.841)]、龈沟液IL-1β≥22.59 ng/mL[(OR)=1.519(95%CI:1.032,2.235)]、血清IFN-γ≥11.73 ng/mL[(OR)=1.701(95%CI:1.147,2.522)]、龈沟液IFN-γ≥8.33 ng/mL[(OR)=1.495(95%CI:1.032,2.165)]均是根管感染的危险因素(P<0.05).龈沟液IL-β为22.59 ng/mL时曲线下面积最高,为0.850(95%CI:0.763,0.937),血清IL-β为7.69 ng/mL时敏感性最高,为86.8%(95%CI:0.826,0.908),龈沟液IL-β为22.59 ng/mL时特异性最高,为92.0%(95%CI:0.895,0.937).结论 牙髓牙周病变患者根管感染病原菌主要为革兰阳性菌,刷牙时间、刷牙次数、喜食甜食、龋牙、血清IL-1β≥7.69 ng/mL、龈沟液IL-1β≥22.59 ng/mL、血清IFN-γ≥11.73 ng/mL、龈沟液IFN-γ≥8.33 ng/mL均是根管感染的影响因素,其中感染患者的血清和龈沟液IL-1β、IFN-γ均处于高表达状态,对于根管感染具有良好的诊断效能.

目的 基于时间序列分析,研究产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,Pm)刺激原代人口腔角质形成细胞(primary human oral keratinocytes,pHOKs)后基因表达的时间趋势,以探究Pm与pHOKs相互作用的潜在机制.方法 利用生物信息学方法分析pHOKs分别与Pm共培养4、24h后的高通量测序结果,使用Mfuzz聚类算法将具有相似时间表达模式的基因划分聚类,并进行GO、KEGG以及STRING网络分析,进一步利用Cytoscape软件取交集得到枢纽基因(Hub基因).采用实时荧光定量PCR检测Hub基因的表达.结果 Pm刺激pHOKs 4、24 h分别有1 456个和1 386个差异表达基因.通过Mfuzz将其划分为3个聚类,其中簇1基因随时间延长其表达呈现下降的趋势,主要参与上皮细胞分化和上皮细胞向间充质细胞转化等生物学过程;簇2基因随时间延长其表达呈现上升的趋势,主要参与细菌感染、视黄醇代谢等过程;簇3基因表达在刺激前期上调、后期下调,主要参与细胞因子相关信号通路等过程.在PPI网络中筛选出簇1 Hub基因为VEGFA、GDNF;簇2中的Hub基因为PTGS2、ICAM1等;簇3中的Hub基因为IL-6、CCL2等.RT-qPCR检测结果显示,VEGFA、PTGS2、IFIT1、IRF1与测序数据中随着时间延长基因的表达趋势一致.结论 本研究对Pm刺激pHOKs过程中相关生物学分子的动态模式进行了深度挖掘,发现与视黄醇代谢相关的基因以及负调控EMT的基因在OLP中异常表达,Pm入侵上皮细胞后可能通过一些适应性机制逃避免疫监视,该发现有助于进一步探究Pm在口腔扁平苔藓中的致病机理.

目的 探索口腔共生菌在口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)的发生发展中的作用及其机制.方法 收集OLP患者及正常对照组(48例)颊拭子,采用高通量测序方法检测OLP患者颊黏膜菌群结构,并通过qPCR方法进行验证;检测OLP病损组织中产黑普氏菌及细胞炎症因子的含量,并分析其相关性.结果 OLP患者颊黏膜菌群多样性大于正常对照组,且其菌群结构与正常对照组显著不同,差异有统计学意义(P＜0.05);产黑普氏菌在OLP患者颊黏膜表面菌群构成比高于正常对照组,且在门、科、属、种各层次上的差异均有统计学意义(P＜0.05);产黑普氏菌在OLP患者病损组织中含量升高,且与IL-6呈正相关(P＜0.05).结论 共生菌可能在促进口腔扁平苔藓免疫失衡中发挥重要作用,其具体机制值得深入研究.

目的:探讨不同分期的牙周炎患者骨硬化蛋白水平和细菌分布及骨硬化蛋白与常规牙周检查指标的相关性.方法:选择广州市花都区妇幼保健院2017年3月-2019年6月治疗的牙周炎患者,根据牙周炎严重程度分为Ⅱ期组(n=27)、Ⅲ期组(n=42)和Ⅳ期组(n=22),另选择同期牙周健康者作为对照组(n=30).在患者治疗前、治疗后3个月分别收集患牙颊面、舌面近中侧位点的龈沟液及菌斑,进行细菌培养,对照组在体检当天进行以上操作.采用酶联免疫吸附法检测龈沟液中骨硬化蛋白表达水平.采用SPSS 23.0软件包分析数据,BI分级与骨硬化蛋白的相关性分析采用Spearman相关系数分析法,PD、CAL与骨硬化蛋白的相关性采用Pearson分析法.结果:治疗前、治疗后Ⅱ期组患者平均PD、平均CAL显著小于Ⅲ期组及Ⅳ期组(P＜0.05);治疗前Ⅳ期组平均CAL显著大于Ⅲ期组(P＜0.05);治疗后Ⅱ期组、Ⅲ期组、Ⅳ期组平均PD、平均CAL均显著小于本组治疗前(P＜0.05);治疗后Ⅲ期组平均PD显著小于Ⅳ期组(P＜0.05).治疗前Ⅱ期组BI分级2级(85.19％)显著高于Ⅲ期组(19.05％)和Ⅳ期组(18.18％)(P＜0.05);治疗前Ⅲ期组3级(64.29％)显著高于Ⅱ期组3级(14.81％)(P＜0.05).治疗前Ⅱ期组骨硬化蛋白表达水平显著低于Ⅲ期组及Ⅳ期组(P＜0.05),治疗后Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期组骨硬化蛋白表达水平显著低于本组治疗前(P＜0.05);治疗后Ⅱ期组骨硬化蛋白表达水平显著低于Ⅲ期组及Ⅳ期组(P＜0.05).不同牙周炎分期患者治疗前、治疗后PD、CAL、BI分级与龈沟液骨硬化蛋白均呈正相关(P＜0.05).Ⅳ期组检出细菌数目大于Ⅲ期组及Ⅱ期组,各期牙周炎患者均以厌氧菌为主,优势菌为牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、伴放线放线杆菌、核梭杆菌、产黑色素普氏菌.结论:骨硬化蛋白表达水平与牙周炎患者PD、CAL、BI分级密切相关,不同分期牙周炎患者龈沟液、牙菌斑中细菌定植水平不同.检测骨硬化蛋白水平、牙周微生物培养鉴定.有助于对牙周炎严重程度进行评估,为后续治疗方案的选择提供参考.

目的 探索产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,Pm)侵入口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)病损组织的可能机制.方法 收集OLP患者病损组织和正常黏膜组织,应用免疫组织化学染色检测闭锁小带蛋白-1(zonula occludin-1,ZO-1)和连接黏附分子-1 (junctional adhesion molecule-1,JAM-1)的表达.将Pm与人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)共培养,通过Transwell小室实验检测荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖4KD(FITC-dextran 4KD,FD4)的渗透量,观察Pm对HOK上皮屏障功能的影响,并采用qPCR检测ZO-1和JAM-1的表达改变.结果 OLP患者病损组织中ZO-1、JAM-1的表达显著低于正常组织(P＜0.01,P＜0.0001).FD4的渗透量随Pm浓度增加而增加(P＜0.05).Pm与HOK细胞共培养后,ZO-1、JAM-1表达均显著减少(P＜0.005;P＜0.05),并随着Pm浓度增加或时间延长而降低.结论 Pm可能通过抑制紧密连接蛋白ZO-1、JAM-1的表达而破坏OLP上皮组织屏障,从而侵入上皮组织导致慢性炎症,在口腔扁平苔藓发生发展中起到重要作用.

目的 探讨胃癌组织中Foxp3+Tregs和浆细胞样树突状细胞(pDCs)与胃微生物群失调的关系.方法 选择我院2018年2月-2020年2月诊治的胃癌患者97例(收集其胃癌组织标本和癌旁标本)和同期健康者40例,胃癌患者根据类型分为肠型、弥漫性和混合型,分别为31例、28例、38例.采用免疫组化染色、Western blot法测定胃癌组织中Foxp3+Tregs、pDCs表达,16S rRNA法检测胃微生物群,并分析各指标表达差异及相关性.结果 肠型、弥漫性和混合型癌巢组织中Foxp3+Tregs、pDCs表达量逐渐升高(P＜0.05).胃癌患者鞘氨醇单胞菌、幽门螺杆菌、单形拟杆菌水平低于健康者,而痤疮丙酸杆菌、咽峡炎链球菌、产黑普氏菌高于健康者;不同类型胃癌患者氨醇单胞菌、幽门螺杆菌、单形拟杆菌、痤疮丙酸杆菌、咽峡炎链球菌、产黑普菌水平比较差异有统计学意义(P＜0.05).痤疮丙酸杆菌、咽峡炎链球菌、产黑普菌与Foxp3+Tregs、pDCs数量呈正比关系(P＜0.05).结论 胃癌癌旁和癌巢组织微生境中细菌丰度降低,不同类型胃癌肿瘤微生境中有不同的优势微生物;组织中Foxp3+Tregs、pDCs与胃微生物群失调相关.

目的 探究产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,P.m)作用下原代人口腔角质细胞(primary human oral keratinocytes,pHOK)的转录组变化,并在人口腔角质形成细胞(human oral keratinocyte,HOK)细胞系中进行验证.方法 分离培养pHOK,并与P.m共培养4 h与24 h,提取总RNA,构建基因文库,转录组测序,分析差异表达基因,并进行基因本体论(gene ontology,GO)通路分析与京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclo?pedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,在HOK与P.m共培养模型中采用qRT?PCR及Western Blot对差异基因进行验证.结果 在pHOK与P.m共培养4 h组与对照组间上调表达的差异基因有:淋巴细胞胞浆蛋白1(lymphocyte cytosolic protein 1,LCP1)、角蛋白7(keratin 7,KRT7)、纤毛和鞭毛相关蛋白251(cilia and flagel?la associated protein 251,CFAP251)等,下调表达的差异基因有:含FERM、RhoGEF和Pleckstrin结构域蛋白1(FERM,ARH/RhoGEF and Pleckstrin domain protein 1,FARP1)、WW结构域转录调控因子1(WW domain contain?ing transcription regulator 1,WWTR1)、含Discoidin、CUB和LCCL结构域蛋白2(Discoidin,CUB and LCCL domain?containing protein 2,DCBLD2)等,共1788个差异表达基因;24 h组与对照组间上调表达的差异基因有:LCP1、补体C1s(complement C1s,C1S)、犬尿氨酸酶(kynureninase,KYNU)等,下调表达的差异基因有:磷酸丝氨酸转氨酶?1(phosphoserine aminotransferase 1,PSAT1)、FARP1、FKBP型脯氨酰异构酶10(FKBP prolyl isomerase 10,FKBP10)等,共1832个差异表达基因;其中共同差异表达基因(common differentially expressed genes,cDEGs)有LCP1、KYNU、长链非编码RNA958(long intergenic non?protein coding RNA 958,LINC00958)等1090个,差异均具有统计学意义.通过GO数据库分析,cDEGs主要富集到细菌对脂多糖的反应、对细菌来源分子的反应、细胞的顶端部分等;通过KEGG分析,cDEGs富集到的通路有白介素?17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路、Toll样受体通路等;从cDEGs中筛选肌球蛋白1B(myosin1B,MYO1B)在HOK与P.m共培养模型中进行验证,qRT?PCR及Western Blot检测结果表明,MYO1B的表达在对照组和P.m刺激组之间存在显著性差异(P<0.001),且其表达随P.m刺激时间的延长及刺激浓度的增大而递增.结论 P.m对口腔角质细胞的转录组存在重要影响.