目的 探究微小RNAa(miR)-34a调控磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路对口腔癌细胞生物学行为的影响及机制.方法 选择口腔癌细胞系Tca8113、OEC-M1、OC3及人口腔角质形成细胞HOK,并对其中miR-34a相对表达量进行检测.将Tca8113细胞分为miR-34a组(转染miR-34a模拟物)、miR-34a NC组(转染miR-34a模拟物对照物)和不做处理的NC组,观察转染24、48、72 h时各组细胞增殖率,并比较各组细胞凋亡率、迁移细胞数、侵袭细胞数及PI3K/AKT通路相关因子表达.结果 miR-34a在Tca8113、OEC-M1、OC3细胞中的表达较HOK细胞明显减少(P＜0.05).miR-34a组细胞增殖率较NC组明显减少,凋亡率较NC组明显增加(P＜0.05).miR-34a组细胞迁移及侵袭细胞数均较NC组明显减少(P＜0.05).miR-34a组细胞PI3K、AKT mRNA及p-PI3K、p-AKt蛋白表达均较NC组明显减少(P＜0.05).结论 miR-34a在口腔癌细胞中呈低表达,上调其表达可抑制口腔癌细胞增殖、侵袭及迁移能力并促进口腔癌细胞凋亡,其作用机制可能是通过抑制PI3K/AKT通路实现的.

目的:通过研究miR-503靶向回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元(reversion inducing cysteine rich protein with Kazal motifs,RECK)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)进展中的作用.方法:将人OSCC细胞SCC-4分为NC inhibitor组(转染miR-503 inhibitor阴性对照序列)、miR-503 inhibitor组(转染miR-503 inhibitor)、si-NC组(转染RECK siRNA阴性对照序列)、si-RECK组(转染RECK siRNA)、miR-503 inhibitor + si-NC组(共转染miR-503 inhibitor和RECK siRNA阴性对照序列)和miR-503 inhibitor + si-RECK组(共转染miR-503 inhibitor和RECK siRNA).实时定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测miR-503和RECK在各组SCC-4 细胞及永生化人口腔角质形成细胞RT7 中的表达;Western blotting检测RECK蛋白的表达;TargetScan预测miR-503 的靶基因并通过双荧光素酶报告基因检测来验证miR-503 与RECK的靶向关系;CCK-8 和EdU染色检测各组细胞的增殖能力;Transwell小室检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测各转染组细胞凋亡情况.结果:相比RT7 细胞,miR-503 在SCC-4 细胞中高表达(P＜0.05),RECK则呈低表达(P＜0.05);与NC inhibitor组相比,miR-503 inhibitor组细胞中RECK mRNA及RECK蛋白的表达水平均显著升高(P＜0.05);TargetScan数据库及荧光素酶报告基因分析显示了RECK 和 miR-503 之间的靶向关系(P＜0.01),提示miR-503 可靶向抑制RECK的表达;与NC inhibitor组相比,miR-503 inhibitor组SCC-4 细胞的增殖能力、侵袭能力均显著下降(P＜0.05),而细胞的凋亡则显著增加(P＜0.01),抑制miR-503 表达降低了OSCC细胞的增殖、侵袭并加速凋亡;与si-NC组相比较,si-RECK组细胞增殖、侵袭能力均显著增加(P＜0.05),而细胞凋亡能力显著下降(P＜0.05),敲低RECK增加了OSCC细胞的增殖、侵袭并降低凋亡;与miR-503 inhibitor + si-NC组相比较,miR-503 inhibitor + si-RECK组细胞中RECK mRNA的表达水平和细胞凋亡能力均显著下降(P＜0.05),细胞增殖、侵袭能力显著增加(P＜0.05),敲低RECK可削弱miR-503 inhibitor对OSCC细胞生物学行为的抑制作用.结论:miR-503 在OSCC细胞中表达上调,抑制miR-503 可削弱其对靶基因RECK的下调,从而降低肿瘤细胞的增殖与侵袭能力,并促进细胞的凋亡.

目的 基于时间序列分析,研究产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,Pm)刺激原代人口腔角质形成细胞(primary human oral keratinocytes,pHOKs)后基因表达的时间趋势,以探究Pm与pHOKs相互作用的潜在机制.方法 利用生物信息学方法分析pHOKs分别与Pm共培养4、24h后的高通量测序结果,使用Mfuzz聚类算法将具有相似时间表达模式的基因划分聚类,并进行GO、KEGG以及STRING网络分析,进一步利用Cytoscape软件取交集得到枢纽基因(Hub基因).采用实时荧光定量PCR检测Hub基因的表达.结果 Pm刺激pHOKs 4、24 h分别有1 456个和1 386个差异表达基因.通过Mfuzz将其划分为3个聚类,其中簇1基因随时间延长其表达呈现下降的趋势,主要参与上皮细胞分化和上皮细胞向间充质细胞转化等生物学过程;簇2基因随时间延长其表达呈现上升的趋势,主要参与细菌感染、视黄醇代谢等过程;簇3基因表达在刺激前期上调、后期下调,主要参与细胞因子相关信号通路等过程.在PPI网络中筛选出簇1 Hub基因为VEGFA、GDNF;簇2中的Hub基因为PTGS2、ICAM1等;簇3中的Hub基因为IL-6、CCL2等.RT-qPCR检测结果显示,VEGFA、PTGS2、IFIT1、IRF1与测序数据中随着时间延长基因的表达趋势一致.结论 本研究对Pm刺激pHOKs过程中相关生物学分子的动态模式进行了深度挖掘,发现与视黄醇代谢相关的基因以及负调控EMT的基因在OLP中异常表达,Pm入侵上皮细胞后可能通过一些适应性机制逃避免疫监视,该发现有助于进一步探究Pm在口腔扁平苔藓中的致病机理.

目的 探究微小RNA 217(miRNA-217)对口腔癌细胞中内质网应激介导的自噬与凋亡的影响及其分子机制.方法 培养人口腔癌细胞和人正常口腔角质形成细胞,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-217与高迁移率族蛋白 A2(HMGA2)表达水平;将人口腔癌细胞系SAS分为对照组、miR-NC组、miR-217 mimic组和miR-217 mimic+4-PBA组4组,脂质体法进行转染和内质网应激抑制剂4-苯丁酸处理后,流式细胞术检测细胞凋亡率,Hoechst33342染色观察细胞凋亡情况,细胞免疫荧光染色检测细胞中微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达,蛋白质免疫印迹(Western Blot)测定细胞中自噬相关蛋白LC3I、LC3II及Beclin-1的表达水平,RT-qPCR和 Western Blot测定细胞内质网应激相关分子CCAAT/增强予结合蛋白同源蛋白(CHOP)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及天冬氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)的表达水平;双荧光素酶报告基因检测实验和 Western Blot验证 miR-217对 HGMA2的靶向作用.结果 与人正常口腔角质形成细胞HNOK比较,人口腔癌细胞HSC3、SAS、SCC15、FaDu中miR-217相对表达量下调而HMGA2相对表达量上调(P<0.05);与对照组比较,miR-217 mimic组SAS细胞凋亡率升高,有大量呈亮蓝色高荧光的凋亡细胞,LC3荧光强度升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin-1蛋白相对表达量均上调,GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量均上调(P<0.05);而与 miR-217 mimic组比较,miR-217 mimic+4-PBA组SAS细胞凋亡率下降,呈亮蓝色高荧光的凋亡细胞明显减少,LC3荧光强度降低,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值与Beclin-1蛋白相对表达量均下调,GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA相对表达量与蛋白相对表达量也均下调(P<0.05);HM-GA2与miR-217在特定区域存在碱基互补现象,且miR-217靶向负调控HGMA2表达.结论 miR-217可能通过促进内质网应激途径诱导口腔癌细胞发生自噬与死亡,其机制可能与靶向负调控HMGA2表达相关.

目的 观察不同剂量的X射线照射后,金雀异黄酮干预治疗对人永生化皮肤表皮角质形成细胞(HaCaT)、人正常肺上皮细胞(Beas-2B)、人舌癌细胞(Tca-8113)、人口腔鳞状细胞(HCS-4)的抑制率和凋亡情况,探讨金雀异黄酮联合X射线照射对口腔癌治疗的有效性.方法 取人HaCaT、Beas-2B、Tca-8113、HCS-4细胞进行常规体外培养,将细胞分为 4组:对照组(未加金雀异黄酮且不进行X射线照射)、金雀异黄酮组、X射线组和金雀异黄酮+X射线组.其中,金雀异黄酮组将金雀异黄酮(浓度分别为 1.25、2.50、5.00、10.00、20.00 μmol/L)加入 4种细胞中处理 12 h;X射线组用X射线(剂量分别为 1、3、7 Gry)对 4种细胞照射 24 h;金雀异黄酮+X射线组根据X射线剂量不同,得到 4种细胞的金雀异黄酮最佳处理值,用流式细胞仪和噻唑蓝法测定 4种细胞的凋亡水平和细胞抑制率,并进行分析.结果 4种细胞加入不同浓度的金雀异黄酮后,HaCaT和Tca-8113两种细胞抑制率提高,差异有统计学意义(P<0.001),且与加入的金雀异黄酮浓度呈正相关,在 20.00 μmol//L浓度下细胞抑制率达到峰值.4种细胞进行不同能量值X射线照射后,仅有HSC-4细胞抑制率高于其他 3种细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与X射线剂量呈正相关,当剂量为 7 Gry时达到最高.仅有HaCaT细胞经金雀异黄酮和射线照射后细胞凋亡水平提高,差异有统计学意义(P<0.001).金雀异黄酮组HaCaT、Tca-8113细胞的凋亡水平高于其他两种细胞(P<0.001),但经射线照射后,HaCaT、Beas-2B、HSC-4细胞的凋亡水平有所提高(P<0.001).与其他 3组比较,金雀异黄酮+X射线组对HSC-4细胞的抑制作用更强,且细胞凋亡水平更高,差异有统计学意义(P<0.001).结论 金雀异黄酮与X射线联合作用能有效抑制HCS-4和Tca-8113细胞的增殖,促进癌细胞凋亡,二者联用对口腔癌治疗有效.

目的:检测miR-34a在口腔鳞癌组织中的表达,探讨其是否可以通过调节SATB2的表达影响口腔鳞癌的增殖、迁移和侵袭.方法:采用实时定量RT-PCR的方法检验口腔鳞癌和正常组织、细胞中miR-34a基因的表达水平;在过表达SATB2的HN6细胞中转染miR-34a mimic质粒后,采用CCK-8实验检测细胞增殖能力的变化,流式细胞术检验细胞周期,细胞划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力的变化,细胞侵袭实验检测miR-34a对细胞侵袭能力的影响;同时提取细胞内总蛋白,采用Western blot的方法检测与侵袭相关的基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9以及SATB2的表达;通过裸鼠荷瘤模型检验miR-34a对SATB2表达及移植瘤生长的影响.结果:miR-34a在口腔鳞癌组织和口腔鳞癌细胞系HN6中呈低表达,而在癌旁组织和人口腔角质形成细胞中呈高表达,差异具有统计学意义(P<0.05);在过表达SATB2的HN6细胞中转染miR-34a mimic质粒后,细胞的增殖,迁移和侵袭能力明显减弱;在裸鼠皮下荷瘤实验中,转染了miR-34a mimic质粒的过表达SATB2的HN6细胞所成的瘤体较对照组明显减小(P<0.05).结论:miR-34a可以通过抑制SATB2的表达来抑制口腔鳞癌的增殖、迁移和侵袭.

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0002203对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞系恶性生物学行为的影响.方法 纳入OSCC患者40例,使用实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织、癌旁组织、OSCC细胞系和人口腔黏膜角质形成细胞(HOK)中的表达水平.慢病毒感染SCC15和CAL27细胞,实时荧光聚合酶链反应检测环状RNA hsa_circ_0002203的表达,细胞计数(CCK-8)实验检测细胞增殖能力,划痕实验和Transwell迁移及侵袭实验检测细胞迁移侵袭能力,流式细胞凋亡实验检测细胞凋亡水平,蛋白质印迹法检测细胞增殖凋亡侵袭相关蛋白的表达.通过裸鼠成瘤实验观察hsa_circ_0002203对SCC15细胞体外成瘤能力的影响.结果 环状RNA hsa_circ_0002203在OSCC组织的表达低于癌旁组织(P<0.01),在OSCC细胞系中的表达低于人类角质形成细胞(P<0.001).慢病毒感染SCC15和CAL27细胞后hsa_circ_0002203的表达增加;SCC15和CAL27细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,凋亡水平增加;裸鼠肿瘤体积、质量减小,生长速度降低.结论 环状RNA hsa_circ_0002203在口腔鳞状细胞癌中的低表达可以增强肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制肿瘤细胞凋亡.

目的 研究黄连素与戊间甲酚联合使用对粪肠球菌的抗菌作用.方法 采用微量肉汤稀释法和活菌菌落形成单位(CFU)分别测定黄连素和戊间甲酚对粪肠球菌的最小抑菌浓度(MIC);悬液定量杀菌试验和死活菌染色检测黄连素和戊间甲酚对浮游和生物膜状态粪肠球菌的杀灭效果;扫描电子显微镜观察黄连素和戊间甲酚对粪肠球菌成熟生物膜结构的影响;CCK-8细胞增殖毒性检测试剂盒和乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒测定黄连素和戊间甲酚对人口腔黏膜上皮角质细胞(HOK)的毒性.结果 黄连素的MIC为512μg/mL,戊间甲酚的MIC为0.0233％;悬液定量杀菌试验表明,512μg/mL黄连素或0.00233％戊间甲酚单独使用时对浮游状态粪肠球菌杀灭效果较弱,但二者联合使用时表现出协同抗菌作用;死活菌染色和扫描电子显微镜结果表明二者联合使用时对生物膜状态粪肠球菌杀灭效果较弱,但可影响生物膜结构;512μg/mL黄连素和0.00233％戊间甲酚单用(或联用)处理HOK细胞时,其存活率远大于损伤率,细胞毒性较低.结论 黄连素与戊间甲酚对粪肠球菌具有协同抗菌作用,且生物安全性较好.

目的 探究DZIP1通过Wnt/β-catenin信号通路对口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR和Western blot检测DZIP1和Wnt/β-catenin信号通路相关基因mRNA表达和蛋白表达,CCK-8检测细胞活力,克隆形成实验检测口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力.结果 与人口腔角质形成细胞相比,人OSCC细胞系TSCCA,Tca8113和SCC25中DZIP1的mRNA表达和蛋白表达均显著升高;与阴性对照组(negative control,NC)相比,敲低DZIP1显著降低SCC25细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因的mRNA表达和蛋白表达(P＜0.05),显著降低细胞活力(P＜0.05),显著抑制细胞增殖(P＜0.05),显著降低细胞迁移和侵袭能力(JP＜0.05),LiCl显著升高SCC25细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因的mRNA表达和蛋白表达(P＜0.05),显著升高细胞活力(P＜0.05),显著促进细胞增殖(P＜0.05),显著升高细胞迁移和侵袭能力(P＜0.05);与si-DZIP1组相比,si-DZIP1 +LiCl显著升高SCC25细胞Wnt/β-catenin信号通路相关基因的mRNA表达和蛋白表达(P＜0.05),显著升高细胞活力(P＜0.05),显著促进细胞增殖(P＜0.05),显著升高细胞迁移和侵袭能力(P＜0.05).结论 DZIP1通过影响Wnt/β-catenin信号通路促进口腔鳞状细胞癌增殖、迁移和侵袭.

目的 探索产黑普氏菌(Prevotella melaninogenica,Pm)侵入口腔扁平苔藓(oral lichen planus,OLP)病损组织的可能机制.方法 收集OLP患者病损组织和正常黏膜组织,应用免疫组织化学染色检测闭锁小带蛋白-1(zonula occludin-1,ZO-1)和连接黏附分子-1 (junctional adhesion molecule-1,JAM-1)的表达.将Pm与人口腔角质形成细胞(human oral keratinocytes,HOK)共培养,通过Transwell小室实验检测荧光素异硫氰酸酯-葡聚糖4KD(FITC-dextran 4KD,FD4)的渗透量,观察Pm对HOK上皮屏障功能的影响,并采用qPCR检测ZO-1和JAM-1的表达改变.结果 OLP患者病损组织中ZO-1、JAM-1的表达显著低于正常组织(P＜0.01,P＜0.0001).FD4的渗透量随Pm浓度增加而增加(P＜0.05).Pm与HOK细胞共培养后,ZO-1、JAM-1表达均显著减少(P＜0.005;P＜0.05),并随着Pm浓度增加或时间延长而降低.结论 Pm可能通过抑制紧密连接蛋白ZO-1、JAM-1的表达而破坏OLP上皮组织屏障,从而侵入上皮组织导致慢性炎症,在口腔扁平苔藓发生发展中起到重要作用.