目的:获得乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)C2蛋白的HBV多肽。方法:同源重组法构建含1.2倍HBVC2全基因组表达重组体；脂质体法转染HepG2和Huh-7细胞；荧光定量PCR法检测HBV DNA水平；双抗体夹心酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)法检测乙型肝炎表面抗原(HBsAg)和E抗原(HBeAg)的水平；免疫荧光法检测核心抗原(HBcAg)水平和分布。电转染法转染人永生化B淋巴细胞系(B-lymphoblastoid cell line，BLCL)，液相色谱串联质谱(liquid chromatography-mass spectrography/mass spectrometry，LC-MS/MS)法分离鉴定HBV多肽，生物信息学预测亲合力，并检索已报道序列。结果:成功构建了含3881 bp目的片段的HBVC2全基因组的重组体，即pAAV/HBV1.2 C2。HepG2和Huh-7细胞转染重组体后24、48和72 h，培养上清液中HBV DNA、HBsAg和HBeAg均呈现较高水平；HBcAg多分布在细胞核，均在48 h表达水平达高峰。从5株BLCLs细胞裂解液中检出来源于HBsAg、HBeAg和HBcAg的HBV多肽(序列长度≥8aa)共95条。比较分析共同序列和包含或重叠(≥8aa)序列，67条多肽形成了11个HBV多肽热点核心区域，有92条已见报道。51(53.68%)条多肽有相应的人类白细胞表面抗原(human leukocyte antigen，HLA)等位基因分型，而与5株细胞所携带HLA等位基因一致的共有21条。 结论:成功构建和表达了pAAV/HBV1.2 C2，获得了真实世界的HBVC2多肽谱。

患者女，22岁。因右眼反复眼红、视力下降伴前房积脓7个月于2021年5月26日到深圳大学总医院眼科就诊。患者既往健康，否认手术史。患者曾于外院诊断为"右眼全葡萄膜炎"，并给予局部和全身糖皮质激素（以下简称为激素）治疗后好转，但反复发作，间隔时间逐渐缩短。眼部检查：患者右眼视力手动，矫正不能提高；左眼视力0.25，最佳矫正视力（BCVA）1.0。右眼、左眼眼压分别为11、14 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）。左眼眼前节及眼底未见异常。右眼结膜混合性充血（++），角膜后尘状沉着物（++），房水闪辉（++~+++），细胞（++~+++），前房2 mm积脓，晶状体后灰白色颗粒状混浊；玻璃体颗粒状、絮状混浊（图1A），细胞（+++）；眼底窥不清（图1B）。B型超声检查，右眼玻璃体混浊（图1C）。光相干断层扫描检查，右眼黄斑区神经上皮层增厚，表面强信号条带（图1D）。超声生物显微镜（UBM）检查，前房大量点状中回声，玻璃体混浊（图1E，1F）。抽血送检人类白细胞抗原（HLA）-B51（+）。诊断：右眼全葡萄膜炎？右眼眼内炎？双眼屈光不正。

免疫检查点阻断疗法的出现标志着肿瘤治疗进入新时代，部分患者因此获益。近年来，自然杀伤细胞受体家族成员2A(natural killer group 2 member A，NKG2A )和人类白细胞抗原E(human leukocyte antigen E，HLA-E )作为新的免疫检查点受到广泛关注，且与多种肿瘤细胞的免疫逃逸有关。NKG2A主要表达于大部分自然杀伤(natural killer，NK)细胞表面并在CD8 ＋T细胞上选择性表达。其配体HLA-E在多种肿瘤细胞中表达增强。目前，部分研究显示，NKG2A抑制剂参与的肿瘤联合免疫治疗可以明显提高肿瘤患者对免疫治疗的总体反应率。因此，NKG2A有望成为肿瘤免疫检查点治疗的新靶点，为肿瘤患者提供治疗新策略。

患者，女，25岁，因"右眼视物模糊2年，左眼视物模糊9个月"于2022年1月24日至山东中医药大学附属医院眼科就诊。2020年1月患者因发热诱发右眼视物模糊，就诊于当地医院，查体右眼黄斑区散在点状黄白色病灶，诊断为右眼脉络膜炎，予右眼球后注射曲安奈德后症状缓解；2021年4月接种人乳头瘤病毒疫苗10 d后右眼视物模糊加重、左眼出现视物模糊，于某专科医院查见结核菌素试验、抗弓形体抗体、巨细胞病毒抗体、单纯疱疹病毒抗体、类风湿因子、人类白细胞抗原B27、抗核抗体阴性，行双眼球内注射康柏西普，治疗期间双眼视力持续下降。2022年1月患者双眼视物模糊加重，为求进一步诊治，遂来我院就诊。症见：双眼视物模糊伴视物变形、眼前固定黑影遮挡，偶有闪光感，舌质淡，舌体胖大，边有齿痕，苔黄腻，脉滑涩。眼科检查：视力：右眼0.08，矫正无提高；左眼0.25，-5.25 D=0.5；双眼眼压12 mmHg（1 mmHg= 0.133 kPa）；裂隙灯显微镜及眼底检查示：右眼前节（-），眼底视网膜豹纹状改变，黄斑区数个黄白色圆形萎缩灶，融合成片（见图1A）；左眼前节（-），眼底黄斑区数个黄白色圆形变性灶（见图1B）。光学相干断层扫描（OCT）示：右眼视网膜色素上皮（RPE）驼峰样隆起伴神经上皮层下积液（见图1C），椭圆体带部分缺失及穿凿灶（见图1D）；左眼RPE隆起及视网膜逆行穿凿灶（见图1E）；双眼病灶下局部脉络膜巩膜组织信号增强。眼底荧光素血管造影（FFA）示：病灶部位呈高荧光并逐渐染色渗漏，晚期荧光素潴留；对应部位吲哚菁绿血管造影（ICGA）呈现低荧光，晚期荧光素渗漏（见图2）。光学相干断层扫描血管成像（Optical coherence tomography angiography，OCTA）示：右眼视网膜层片状团簇样新生血管，脉络膜层粗大新生血管（见图3A）；左眼脉络膜层团簇样新生血管（见图3B）。西医诊断：双眼点状内层脉络膜病变（Punctate inner choroidopathy，PIC），双眼脉络膜新生血管（CNV）；中医诊断：视瞻昏渺（湿热内阻证）。治疗：予双眼球内注射康柏西普注射液；中医治疗以祛湿清热、宣畅气机，予以三仁汤加减，整方如下：薏苡仁35 g、杏仁9 g、豆蔻仁12 g、通草12 g、淡竹叶9 g、厚朴9 g、滑石15 g，水煎服，日1剂。

患者，男，57岁，因"视力突然下降1个月余，注药后加重半月余"就诊于山东省中医院眼科。2021年3月患者因眼部不适就诊于当地医院，裸眼视力检查示：右眼1.0，左眼1.0。眼底彩照未见明显异常（见图1）。4月视力突然下降就诊于外院。患者自述未有高血压、糖尿病病史。外院裸眼视力检查示：右眼0.3，左眼0.2。眼底彩照示：双眼视网膜可见点片状出血，视网膜动脉变细，静脉充盈（见图2A-B）。光学相干断层扫描血管成像（Optical coherence tomography angiography，OCTA）示：双眼浅、深层供血破坏，可见异常血流信号，黄斑区水肿（见图2C-D）。眼底荧光素血管造影（FFA）示：双眼动静脉充盈迟缓，可见荧光渗漏及无灌注区，晚期动静脉管壁着色（见图3A-C）。光学相干断层扫描（OCT）示：双眼黄斑区水肿（见图3D-E）。外院诊断：双眼糖尿病性视网膜病（Diabetic retinopathy，DR）；双眼黄斑水肿。入院查体：糖化血红蛋白测定为6.7%；白细胞指数为13.68×10 9/L，中性粒细胞百分比为88.9%，中性粒细胞绝对值为12.17×10 9/L；血糖为8.65 mmol/L，余其他指标均正常。人类白细胞抗原B27（Human Leukocyte Antigen B27，HLA-B27）示：弱阳性；补体C3+C4、凝血四项、抗核抗体测定、抗核抗体谱测定、感染系列、C反应蛋白、血液免疫球蛋白（G、A、M）、抗中性粒细胞浆抗体检测均未见明显异常。外院给予双眼玻璃体腔注射康柏西普眼用注射液（浪沐）0.5 mg。注药次日，患者自觉视力下降明显，裸眼视力检查示：右眼指数/50 cm，左眼指数/50 cm；FFA示：双眼动脉灌注不良，荧光渗漏及荧光遮蔽，黄斑水肿，晚期血管壁着色（见图4A-D）；OCT示：双眼黄斑水肿（见图4E-F）。先后行2次视网膜激光治疗，视力提升至右眼0.2，左眼0.5。5月因视力持续下降就诊于山东省中医院，刻下症见：双眼视力下降，纳眠可，二便调。眼科检查示：裸眼视力右眼0.15，左眼0.08；双眼眼前节无异常，晶状体皮质混浊，玻璃体透明。眼底检查示：双眼视盘界欠清色淡，视网膜动脉血管变细呈白线状，静脉充盈但未见明显迂曲，A（动脉）：V（静脉）=1:3,平行血管可见点片状出血，黄斑区出血、水肿，中心凹反光（-），视网膜周边部可见激光斑（如图5A-B）。OCT示：双眼黄斑区水肿、出血（见图5C-D）。眼内液化验结果示：白细胞介素-6（Interleukin-6，IL-6）为30.4 pg/ml；血管内皮生长因子-A（Vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A）为31.0 pg/ml；血管细胞黏附分子（Vascular cell adhesion molecule，VCAM）为1704.8 pg/ml，可排除病毒可能性。诊断为：双眼缺血型视网膜血管炎；双眼视网膜不全动脉阻塞；双眼黄斑水肿。治疗：给予泼尼松45 mg/d，15 d后减量为35 mg，之后逐渐减量；复方血栓通胶囊（广东众生药业股份有限公司），每天1.5 g，1天3次，治疗半个月后裸眼视力恢复至右眼0.2，左眼0.15。

目的:鉴定分析人类白细胞抗原(human leukocyte antigens，HLA)新等位基因A*24：191序列，并对其MHC蛋白分子三维结构及其氨基酸残基改变在空间结构中的可能影响进行模拟预测分析。方法:应用Luminex及PCR-SBT进行序列鉴定。应用Phyre2及RCSB PDB分析软件，对其MHC蛋白分子三维结构进行模拟预测分析。Histocheck对比分析与A*24常见等位基因间差异。结果:相较A*24：02序列，新等位基因A*24：191在256、265、270位发生G>C、G>C、A>T改变。MHC分子三维结构预测分析显示，相较HLA-A*24：02，A*24：191第62位氨基酸残基由A*24：02的酸性谷氨酸(Glu)改变为中性谷氨酰胺(Gln)，(Risler’s score, R＝2)，其残基侧链伸展方向都为自α螺旋向外指向groove凹槽；65位由向α螺旋内伸展小分子中性甘氨酸(Gly)改变为向螺旋上外伸展的长链碱性精氨酸(Arg)( R＝52); 66位由长链碱性赖氨酸(Lys)改变为中性天冬酰胺(Asn)( R＝31)，伸展方向都为自α螺旋指向groove凹槽。以上残基均位于构成抗原肽结合凹槽侧壁α螺旋上。其总相异性值DSS Score＝3.85。从蛋白分子表面结构模拟图像上，可以清楚看到氨基酸残基改变致α螺旋表面结构形状发生明显改变。 结论:分析预测以上氨基酸残基性质、大小及构型的改变，将可能改变其多肽结合功能，并影响其与TCR及抗体的结合特性。

目的:探讨人类白细胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)-E基因与2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)的相关性。方法:选择深圳市人民医院确诊的T2DM患者254例作为病例组，同期选取深圳市血液中心参加无偿献血的健康献血者272例作为对照组。采用聚合酶链式反应-直接测序分型法(polymerase chain reaction-sequence based typing，PCR-SBT)对两组人群进行HLA-E基因第3外显子和启动子区进行序列测定，比较分析病例组与对照组的基因频率。结果:HLA-E*01：01与HLA-E*01：03的差异主要体现在第3外显子756碱基处，当756位碱基只有G峰时，为HLA-E*01：03纯合子，当756位碱基只有A峰时，为HLA-E*01：01纯合子，当756位碱基是G＋A峰时，为HLA-E*01：01/E*01：03杂合子。HLA-E*01：03基因频率比较结果显示，病例组中的HLA-E*01：03阳性基因频率显著高于健康对照组，差异有统计学意义[例(%)：189(87.10)比209(76.84)， χ2＝8.39， P<0.05]。当NT-26位只有G时，为HLA-E*01：01：01：01纯合子，当NT-26位碱基只有T峰时，为HLA-E*01：01：01：06纯合子，当NT-26位碱基是G＋T峰时，为HLA-E*01：01：01：01/E*01：01：01：06杂合子。NT-26T基因频率比较结果显示，病例组与对照组NT-26T基因频率的组间差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:HLA-E*01：03基因是T2DM的易感基因，其可能成为预测、诊断或治疗T2DM的一项指标。

例1 　女，18岁。因周身鳞屑性红斑伴发热及关节疼痛8年，于2020年6月就诊于我院皮肤科。患者8年前无明显诱因出现多发红斑伴脱屑，5年前逐渐弥漫至全身，2年前先后出现双膝关节、足跖、足跟、足趾关节及腰部疼痛。1年前就诊于我院风湿免疫科，诊断为银屑病性关节炎，给予甲氨蝶呤7.5 mg每周1次，治疗1月余，疗效欠佳，后自行停药。体检：体温37.9 ℃，心率125次，呼吸23次，血压115/80 mmHg。心肺听诊无异常，腹部柔软，无压痛、反跳痛等；腋下及腹股沟可触及多个肿大淋巴结。皮肤科情况：头面、躯干、四肢弥漫肿胀性红斑伴脱屑，累及98%体表面积；双手足指（趾）均可见水肿性红斑伴脱屑，有关节压痛，不伴关节肿胀、变形；双手足指（趾）甲均可见甲板增厚，部分远端分离。骶髂关节、双膝关节、足跟和足底疼痛。母亲有银屑病史。实验室检查：血常规白细胞9.98 × 10 9/L，血小板602 × 10 9/L，中性粒细胞6.84 × 10 9/L，单核细胞0.85 × 10 9/L；尿常规示尿潜血++，尿白蛋白±，尿白细胞酯酶+++；红细胞沉降率59 mm/1 h，C反应蛋白17.2 mg/L，血人类白细胞抗原B27测定阴性。骶髂关节CT平扫示双侧骶髂关节面密度增高、毛糙，关节面下可见多发锯齿样骨质破坏，双侧骶髂关节间隙变窄。血电解质、血脂、梅毒甲苯胺红不加热血清试验、梅毒抗体、梅毒螺旋体明胶凝集实验、HIV抗体、抗核抗体、抗dsDNA抗体、类风湿因子、丙型肝炎病毒抗原、抗体和乙型肝炎病毒表面抗原、e抗原、e抗体、核心抗体定量检测以及结核感染T细胞检测均无异常，乙型肝炎病毒表面抗体阳性，乙型肝炎病毒DNA低于检测下限（100 IU/ml）。胸CT检查：两肺间质纹理增多。诊断：红皮病型银屑病（erythrodermic psoriasis，EP）合并关节病型银屑病。治疗：于2020年6月26日给予依奇珠单抗皮下注射，第0周160 mg，之后第2、4、6周各80 mg。2周时红斑脱屑明显好转，银屑病皮损面积和严重程度指数（psoriasis area and severity index，PASI）评分改善达50%，关节疼痛明显减轻，但2周后皮疹复发，于第6周时恢复至治疗前的周身弥漫性红斑伴发热，关节疼痛较治疗前好转。于2020年8月5日更换为阿达木单抗皮下注射，第0周80 mg，第1周40 mg，之后每2周40 mg，随访至第16个月。阿达木单抗治疗第3周时，患者周身弥漫性红斑伴脱屑较前明显改善，皮肤肿胀消退，PASI评分改善达30%。第5周时，皮损较前进一步好转，仅遗留散在细碎鳞屑，出现正常色泽皮肤，达到PASI60。第12周时，原有弥漫性红斑脱屑基本消退，仅四肢及头皮可见少量点状红斑及鳞屑，达到PASI95，关节疼痛症状也基本消失。见图1。随访至2021年11月，患者未出现严重不良事件。

对于以下医学检验工作者比较熟悉的常用词汇,本刊允许在论文撰写中直接使用其缩略语,可以不标注中文.磷酸盐缓冲液(PBS)核糖核酸(RNA)脱氧核糖核酸(DNA)聚合酶链反应(PCR)酶联免疫吸附试验(ELISA)免疫球蛋白G(IgG)免疫球蛋白A(IgA)免疫球蛋白M(IgM)免疫球蛋白D(IgD)免疫球蛋白E(IgE)白细胞介素(IL)肿瘤坏死因子(TNF)干扰素(IFN)人类白细胞抗原(HLA)系统性红斑狼疮(SLE)类风湿关节炎(RA)人类免疫缺陷病毒(HIV)甲型肝炎病毒(HAV)乙型肝炎病毒(HBV)丙型肝炎病毒(HCV)

目的 探讨长链非编码RNA人类白细胞抗原复合体18(lncRNA HCG18)调控微RNA-497-5p(miR-497-5p)/细胞周期蛋白E1(CCNE1)轴对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法分别检测2018年5月至2021年5月收集的恩施土家族苗族自治州中心医院DLBCL病人淋巴组织、良性淋巴结增生病人的淋巴组织、人正常B细胞永生化细胞HMy2.CIR、DLBCL细胞系SU-DHL-1、OCI-LY8、U2932中HCG18、miR-497-5p表达及CCNE1蛋白表达,将OCI-LY8细胞分为Ct组(正常培养的OCI-LY8细胞)、pcDNA组(细胞转染过表达物阴性对照)、pcD-NA-HCG18组(细胞转染HCG18过表达物)、si-NC组(细胞转染小干扰RNA阴性对照)、si-HCG18组(细胞转染HCG18小干扰RNA)、si-HCG18+inhibitorNC组(细胞转染HCG18小干扰RNA和抑制物阴性对照)、si-HCG18+miR-497-5p inhibitor组(细胞转染HCG18小干扰RNA和miR-497-5p抑制物),CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,蛋白质印迹法检测CCNE1、增殖细胞核抗原(PCNA)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,双萤光素酶验证HCG18与miR-497-5p、miR-497-5p与CCNE1的关系.结果 在DLBCL淋巴组织和细胞中,HCG18、CCNE1蛋白高表达,miR-497-5p低表达,且在OCI-LY8细胞中HCG18、CCNE1蛋白表达上调最高,miR-497-5p表达下调最多(P<0.05),因此,以OCI-LY8细胞进行后续研究,与si-NC组比较,si-HCG18组HCG18(0.26±0.03比1.01±0.01)、CCNE1蛋白(0.45±0.03比1.44±0.19)表达降低,miR-497-5p(1.95±0.14比1.03±0.02)表达升高(P<0.05),与pcDNA组比较,pcDNA-HCG18组HCG18(1.96±0.23比1.02±0.01)、CCNE1蛋白(2.33±0.21比1.42±0.18)表达升高,miR-497-5p(0.28±0.02比1.02±0.02)表达降低(P<0.05),与si-HCG18组、si-HCG18+inhibitor NC组比较,miR-497-5p表达降低(1.21±0.09比1.95±0.14、1.94±0.13),CCNE1蛋白(0.87±0.08比0.45±0.03、0.44±0.04)表达上调(P<0.05),沉默HCG18可抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭行为及PCNA、MMP-9蛋白表达,诱导细胞凋亡及Bax蛋白表达,而上调HCG18则呈相反趋势,下调miR-497-5p逆转了沉默HCG18对OCI-LY8细胞增殖、侵袭、凋亡的影响,HCG18靶向调控miR-497-5p/CCNE1.结论 沉默HCG18可能通过调控miR-497-5p/CCNE1抑制OCI-LY8细胞增殖、侵袭,诱导细胞凋亡.