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miR-29a-3p靶向 SGMS2调控PCOS卵巢颗粒细胞慢性炎症的机制研究
编辑人员丨6天前
目的:探究miR-29a-3p/ SGMS2轴对人类卵巢颗粒样肿瘤细胞系(human ovarian granulosa-like tumor cell line,KGN)炎症反应的调控机制。 方法:通过构建并验证过表达和敲低miR-29a-3p及 SGMS2转染KGN细胞模型,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-29a-3p与 SGMS2的结合;MTT法检测各组细胞的增殖;免疫荧光法观察增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)和Ki67蛋白荧光强度;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素(interleukin,IL)-6、IL-1β和鞘磷脂的表达;Western blotting检测细胞中Caspase-3、cleaved-Caspase-3、 SGMS2和p-p65蛋白表达。 结果:miR-29a-3p与 SGMS2之间存在位点结合,且能够负向调控 SGMS2的表达水平。KGN细胞中过表达 SGMS2能够增高其吸光度值( P=0.007),并增强其PCNA和Ki67蛋白的免疫荧光强度(均 P<0.001);过表达 SGMS2能够降低KGN细胞的凋亡率( P=0.001),升高炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和鞘磷脂的表达水平(均 P<0.001)。过表达 SGMS2时KGN细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和 SGMS2蛋白表达量升高( P=0.001, P<0.001, P<0.001)。而敲低 SGMS2时,以上结果具有与过表达 SGMS2相反的变化趋势。 结论:miR-29a-3p与 SGMS2之间存在靶向负向调节关系, SGMS2能够促进KGN细胞的炎症反应,可为多囊卵巢综合征等妇科内分泌疾病的治疗提供靶点。
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编辑人员丨6天前
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槐耳颗粒联合TEC新辅助化疗对中晚期乳腺癌患者疾病控制率及血清HER2-ECD、TAP水平的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨槐耳颗粒联合多西他赛+表柔比星+环磷酰胺(TEC)新辅助化疗对中晚期乳腺癌患者疾病控制率及血清人类表皮生长因子受体2胞外片段(HER2-ECD)、肿瘤异常蛋白(TAP)水平的影响。方法:选取2013年4月至2016年6月中国医科大学附属盛京医院收治的中晚期乳腺癌患者94例进行前瞻性研究,以简单随机化法分为观察组( n=47)、对照组( n=47)。对照组予以TEC新辅助化疗,观察组予以TEC新辅助化疗联合槐耳颗粒治疗,均治疗12周。对比两组疗效、不良反应发生率与治疗前、治疗12周后细胞免疫功能指标(CD8 +、CD4 +、CD4 +/CD8 +)、血清HER2-ECD、TAP水平,治疗后随访3年,对比两组治疗后1年、2年、3年生存率。 结果:观察组治疗12周后疾病控制率高于对照组( P<0.05);治疗期间,观察组胃肠道反应、中性粒细胞减少、血小板减少、肝功能异常发生率低于对照组( P<0.05);观察组治疗12周后血清CD8 +水平低于对照组,血清CD4 +、CD4 +/CD8 +水平高于对照组( P<0.05);观察组治疗12周后血清HER2-ECD、TAP水平低于对照组( P<0.05);观察组治疗后3年生存率高于对照组( P<0.05)。 结论:槐耳颗粒联合TEC新辅助化疗治疗中晚期乳腺癌患者,可降低患者血清HER2-ECD、TAP水平,增强机体免疫功能,减轻毒副反应,提高远期生存率,疗效显著。
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编辑人员丨6天前
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基于网络药理学探讨川芎嗪对急性坏死性胰腺炎大鼠胰腺组织的保护机制
编辑人员丨6天前
目的:基于网络药理学探讨川芎嗪治疗急性坏死性胰腺炎(ANP)大鼠的核心靶点及其潜在的分子机制。方法:通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)及人类疾病信息相关数据库(CTD、DisGeNET、GeneCards、OMIM)筛选出川芎嗪作用靶点与ANP相关靶点,利用Uniprot数据库进行交集,导入STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,再导入Cytoscape软件进一步分析,利用cytoHubba插件得到关键靶点。对关键靶点进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,最后通过PyMol和AutoDockTools软件进行分子对接。将30只雄性SD大鼠随机分为对照组、ANP组和川芎嗪治疗组(川芎嗪组)。采用胰胆管逆行注射4%牛磺胆酸钠建立ANP大鼠模型,川芎嗪组在制模后经腹腔注射10 ml/kg川芎嗪注射液。造模后12 h,取胰腺组织,常规行病理学检查,免疫组织化学染色观察关键靶点在胰腺组织中的蛋白表达;眼眶取血,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定血清IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果:药物平台筛选出137个川芎嗪作用靶点,疾病数据库筛选出513个ANP相关靶点,通过交集得到的25个靶点,最终获得白蛋白(ALB)、表皮生长因子受体(EGFR)、胱天蛋白酶3(CASP3)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)和B细胞淋巴瘤样蛋白1(BCL2L1)共5个关键靶点。GO功能富集分析生物学过程主要涉及生殖结构、系统发育,对抗生素、化学应激和活性氧的反应等,细胞组成主要为囊泡腔、膜筏、膜微区和分泌颗粒腔等靶蛋白,分子功能主要包括SH2域、磷酸酪氨酸残基、蛋白酶结合及蛋白酪氨酸激酶和核受体活性等;KEGG通路富集分析主要为Ras信号通路、PI3K-Akt信号通路、铂类药物耐药、磷脂酶D信号通路和EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药等。5个关键靶点分子对接的平均结合能为-4.20 kcal/mol。胰腺组织病理学检查结果示ANP组大鼠腺体结构较紊乱,小叶间隙明显增大,腺泡、血管周围以及腺体间隙均可见中性粒细胞浸润;川芎嗪组大鼠胰腺小叶间隙略微增大,中性粒细胞轻度浸润。ANP组大鼠胰腺组织EGFR、CASP3和MAPK1蛋白表达量较对照组显著升高,川芎嗪组表达量较ANP组显著降低( P值均<0.01);ANP组BCL2L1蛋白表达量较对照组显著升高,川芎嗪组又较ANP组显著升高( P值均<0.05)。ANP组大鼠血清IL-6和TNF-α水平较对照组显著增高,川芎嗪组则均较ANP组显著降低( P值均<0.01)。 结论:川芎嗪可以通过激活多种信号通路,减轻ANP后的炎症反应和氧化应激损伤,增强抗凋亡基因的表达,阻断细胞凋亡半胱天冬酶解级联反应,对ANP大鼠胰腺组织起保护性作用。
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编辑人员丨6天前
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lncRNA H19调控TGF-β1的表达及对人卵巢颗粒细胞功能的影响
编辑人员丨6天前
目的:探讨多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)颗粒细胞lncRNA H19基因和转化生长因子(transforming growth factor,TGF)-β1之间的关系及对颗粒细胞增殖和凋亡的影响。 方法:分别以浓度2 μg/L、4 μg/L、10 μg/L TGF-β1处理人类卵巢颗粒细胞株KGN,采用Q-PCR方法检测H19的表达水平,分别构建H19过表达质粒pcDNA3.0-H19和 siH19-1617并转染KGN,采用Western blotting方法检测TGF-β1的表达情况,采用CCK8法检测颗粒细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测颗粒细胞凋亡情况。结果:加入TGF-β1后,H19的表达量较未处理的KGN细胞的表达量增加,当TGF-β1浓度≥4 μg/L时H19的表达量显著增多,差异具有统计学意义( P=0.023);H19过表达后,TGF-β1表达量显著高于转染空质粒的对照组KGN+pcDNA3.0-NC( P=0.017),H19沉默后TGF-β1表达量显著低于对照组KGN+NC( P<0.001)。H19过表达后KGN细胞在48 h和72 h增殖能力增强,凋亡能力减弱;H19沉默后KGN细胞在48 h和72 h增殖能力减弱,凋亡能力增强。 结论:H19可调控下游蛋白TGF-β1的表达,并可促进PCOS卵巢颗粒细胞增殖,抑制细胞凋亡。
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编辑人员丨6天前
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多囊卵巢综合征关键基因的筛选及其与疾病进展和预后的相关性分析
编辑人员丨2023/12/30
目的:通过生物信息学方法筛选多囊卵巢综合征(PCOS)的关键基因并分析其与PCOS进展和预后的相关性.方法:在GEO数据库中下载GSE34526 数据集的表达谱,利用R软件筛选数据集中PCOS患者卵巢颗粒细胞(n=7)和正常颗粒细胞(n=3)的差异表达基因(DEGs),对DEGs进行基因本体论(GO)和京都百科全书基因和基因组(KEGG)富集分析,识别关键基因.使用单样本基因富集分析(ssGSEA)评分量化每个PCOS样本中的免疫信号的富集水平,进行抗肿瘤免疫和促肿瘤抑制评分.利用人类蛋白质图谱数据库(HPA)分析关键基因在卵巢癌(OC)、乳腺癌(BRCA)和子宫内膜癌(UCEC)中的蛋白表达水平,绘制ROC曲线分析 3 年、5 年和 10 年癌症生存率.结果:本研究共筛选出 16 个DEGs,GO和KEGG分析结果显示DEGs在PCOS患者的细胞黏附分子(CAMs)、补体和凝血级联、上皮细胞迁移和炎症反应的正向调控等通路中富集,进一步筛选出 2 个关键基因,ITGAM和HMOX1.二者与促炎免疫细胞(如巨噬细胞、MDSCs、中性粒细胞、浆细胞样树突状细胞、调节性T细胞)的相关性分析显示,ITGAM(P分别为 0.001、<0.001、0.051、0.04、<0.001)和HMOX1(P分别为<0.001、0.001、<0.001、<0.001、0.001)与以上促炎免疫细胞呈正相关,即发挥促炎作用.在OC、BRCA和UCEC组织中,ITGAM和HMOX1蛋白水平较高,而对照组无表达.作为不良预后因素,ITGAM显著影响PCOS继发的OC患者的生存(P=0.0046),ITGAM在OC中 3、5、10年生存预测率ROC曲线下面积(AUC)均>0.5,其中10 年AUC>0.59.HMOX1 在BRCA、OC和UCEC中的 3年AUC>0.5,在BRCA中的10年AUC>0.6,均有较好的预测效能.ITGAM+HMOX1 联合预测在BRCA中的 3、5、10 年AUC分别为 0.51、0.498、0.606,在OC中分别为 0.563、0.537、0.481,在UCEC中分别为0.556、0.479、0.472.结论:ITGAM和HMOX1可以作为PCOS的潜在诊断和治疗靶点,其表达水平可以评价PCOS病情发展及预后.
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编辑人员丨2023/12/30
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载脂蛋白B作为预测体外受精-胚胎移植技术新生儿结局的临床研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 研究分析卵泡液(FF)样本成分载脂蛋白B(APOB)浓度和体外受精联合胚胎移植技术(IVF-ET)或卵胞浆内单精子显微注射技术(ICSI)的关系.方法 选取61例接受IVF-ET或ICSI的患者,分析体外受精的颗粒细胞中滤泡液的APOB浓度和APOB基因和蛋白质表达的相关性.运用四分位数模型对FF中发现的APOB水平的量进行统计分析.结果 FF样品中检测到APOB的量[平均值:(244.6G185.9) ng/m1].当FF中的APOB>112ng/m1 [即包括在四分位数Q2、Q3和Q4]时,获得卵母细胞和受精卵母细胞的概率显著增加(P<0.001).如果APOB水平在112~330ng/m1(即在Q2和Q3)或112~230ng/m1(即在Q2中)时,第2天获得胚胎和优质胚胎的概率显著升高(P=0.047).结论 APOB与卵母细胞恢复、卵母细胞受精和胚胎质量之间具有较强的相关性,当进行体外受精时,APOB可作为预后生物标志物.
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编辑人员丨2023/8/6
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母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤的临床分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)的临床特征、诊断、治疗方法及疗效,以提高临床对该病的认识.方法 选择2017年8月21日,清华大学附属北京清华长庚医院血液科收治的1例BPDCN患者为研究对象.本例患者2016年11月于外院被诊断为BPDCN,随后接受5个疗程CHOP(环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松)-21方案化疗,获得部分缓解(PR)后,于2017年6月复发,为进一步治疗就诊于本院血液科.入院后,结合患者病史,并根据临床表现、骨髓检查及相关实验室检查结果进行诊断.2017年8月25日患者接受VDCP(长春地辛+柔红霉素+环磷酰胺+地塞米松)方案化疗,其中长春地辛的治疗策略为4 mg/d,d1、8、1 5、22应用;柔红霉素为60 mg/d,d4~5应用,80 mg/d,d6应用,60 mg/d,d15~16应用;环磷酰胺为1.7 g/d,d4、15应用;地塞米松为17 mg/d,d1~7应用;共化疗3个疗程.回顾性分析本例患者的实验室检查结果、进一步确诊及对疾病进展进行评估及疗效,并且对相关文献进行复习,探讨BPDCN诊疗的研究进展.结果 ①本次入院后,患者骨髓细胞流式细胞术检测结果示,原始细胞分布区域可见异常细胞群,约占有核细胞的9.4%,表达人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD4、CD38、CD56、CD123,部分细胞表达CD33.骨髓细胞形态学检查结果示,骨髓细胞增生明显活跃,粒细胞系比例为38.0%、红细胞系比例为24.0%,粒、红细胞系比值为1.58∶1;可见巨核系细胞,以及成片增生的异型淋巴样细胞;原始细胞比例为27.0%,考虑为BPDCN骨髓侵犯.骨髓细胞免疫组织化学检测结果示,CD4(+)、CD56(+)、CD123(+)、CD68(+)、CD235(红细胞系+)、髓过氧化物酶(MPO)(粒细胞系+)、末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)(-)、CD117(<1%)、CD3(-)、CD20()、CD23(-)、T细胞内抗原(TIA)-1(+),颗粒酶B(-).患者头皮活组织检查结果示,皮肤组织真皮全层可见肿瘤细胞弥漫性单一性浸润,未累及表皮;免疫组织化学检测结果示,CD4(+)、CD43(+)、CD56(+)、CD123(弱+)、TdT(散在+)、CD117(-)、CD3(-)、CD20(-)、CD23(-)、TIA-1(-)、颗粒酶B(-)、CD68(散在+).②本例患者确诊为BPDCN,入院时患者综合评估为疾病进展(PD).③VDCP方案化疗结束后,患者头皮、颜面、躯干皮疹全部消退;粒细胞计数恢复至正常参考值范围内;骨髓涂片结果示,骨髓增生明显活跃,粒细胞系比例为50.0%、红细胞系比例为36.5%,粒、红细胞系比值为1.37∶1,原始粒细胞比例为0.5%,可见异常淋巴细胞比例为3.5%.综合评价患者疗效为完全缓解(CR).患者拒绝继续治疗,于发病后20个月后(2018年2月)死亡.结论 BPDCN非常罕见,病程呈侵袭性,目前尚无标准治疗方案,预后差.
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编辑人员丨2023/8/6
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骨髓呈灶型分布的侵袭性自然杀伤细胞白血病伴噬血细胞综合征的临床分析
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨骨髓呈灶型分布的侵袭性自然杀伤细胞白血病(ANKL)伴噬血细胞综合征的临床特点及预后.方法 选择2016年8月29日,淮安市第一人民医院血液科收治的1例骨髓呈灶型分布的ANKL伴噬血细胞综合征患者为研究对象.根据本例患者临床表现及相关检查结果对其进行诊断.本例患者治疗方案拒绝接受化疗,给予静脉滴注地塞米松10 mg/d×12 d,控制骨髓噬血现象;给予静脉滴注膦甲酸钠氯化钠注射液2.4 g/次×2次/d×4d,进行抗病毒治疗;抗感染方案为,先给予静脉滴注头孢哌酮钠舒巴坦钠1.5 g/次×3次/d×3d,效果欠佳;随后更换治疗方案为静脉滴注替考拉宁,第1天,400 mg/次×2次/d,第2天开始400 mg/d×7d;静脉滴注亚胺培南西司他丁钠1 g/次×3次/d×7d;同时给予输注红细胞制剂5U,血小板制剂2U,新鲜血浆325 mL等进行输血治疗.回顾性分析本例骨髓呈灶型分布的ANKL伴噬血细胞综合征患者的实验室检查结果、诊断及疗效等临床资料,并且结合相关文献复习,探讨ANKL诊治的研究新进展.结果 ①入院后,本例患者血常规检查结果出现异常的指标,白细胞计数为2.28×109/L,中性粒细胞计数为1.32×109/L,红细胞计数为2.75×109/L,血红蛋白(Hb)水平为68 g/L,血小板计数为89×109/L,单核细胞计数为0.42×109/L,淋巴细胞计数为0.52×109/L.凝血功能检查结果出现异常的指标,国际标准化比值(INR)为1.18,凝血酶原活动度(PTA)为77%,活化部分凝血酶原时间(APTT)为46.2 s,其余指标均在正常参考值范围内.EB病毒(EBV)定量检测结果为8.74×103copies/mL(正常参考值范围为<3.00×103 copies/mL).巨细胞病毒(CMV)检测结果呈阴性.肝功能检查结果示,乳酸脱氢酶(LDH)水平为293 U/L,其余指标均在正常参考值范围内.腹部CT结果示脾大.超声检查结果示肝、脾大.患者2016年8月30日骨髓(部位:右髂前)涂片结果示,ANKL细胞比例为4%.骨髓细胞免疫分型结果可见2个亚群细胞,P1比例为8.4%,P2比例为3.8%,P1抗原包括髓过氧化物酶(MPO)(0.1%)、cCD3(81.7%)、CD2(79.6%)、CD5(80.3%)、CD7(70.2%)、CD56(5.9%);P2抗原包括MPO(0.1%)、CD2 (98.2%)、CD7 (97.8%)、CD56 (92.0%)、人类白细胞抗原(HLA)-DR (98.4%).31种白血病常见融合基因及4种常见髓系基因突变均呈阴性,TCR/IGH基因重排亦呈阴性.2016年9月1日骨髓(部位:左髂后)涂片结果示,ANKL细胞(组织细胞样)比例为1.5%.骨组织活检结果未见显著异常.2016年9月5日复查骨髓(部位:左髂前)涂片结果示ANKL细胞比例为70.5%,过氧化物酶(POX)染色结果呈阴性,偶见噬血细胞.免疫分型结果可见1个亚群细胞比例为50.1%,其抗原包括MPO(0.1%)、CD2(92.6%)、CD7(92.2%)、CD56 (82.2%)、HLA-DR(85.9%)、CD38(85.1%).染色体核型分析结果示,46XX,add(4) (q35),add(13) (q34)[1]/46,XX[19].此外,患者反复高热,热峰为39℃,持续时间>1周.②本例患者诊断为骨髓呈灶型分布的ANKL伴噬血细胞综合征.③治疗后,2016年9月8日本例患者Hb水平、血小板计数、红细胞计数进行性下降;2016年9月12日白细胞计数、胆红素水平、氨基转移酶水平、LDH水平进行性升高;凝血功能异常(2016年9月15日复查纤维蛋白原水平为1.61 g/L);2016年9月13日EBV定量结果为8.74×103 copies/mL,多发淋巴结肿大;肝、脾进行性增大.2016年9月16日患者出现呼吸衰竭、脉氧下降、心功能不全,患者家属放弃进一步治疗,患者死亡.结论 骨髓呈灶型分布的ANKL伴噬血细胞综合征临床过程具有侵袭性,短期内病情恶化,预后差.
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编辑人员丨2023/8/6
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细胞自噬对中性粒细胞功能调节的研究进展
编辑人员丨2023/8/6
细胞自噬是一种进化上高度保守的胞内降解系统,旨在实现维持细胞稳态以应对不同的细胞应激.在生理状态下,细胞自噬水平通常较低;而在氧化应激、营养饥饿和各种病原体刺激下会显著上调.过去的许多研究都表明细胞自噬在多种组织细胞和生理功能调控中有重要意义.早期研究发现了细胞自噬和中性粒细胞死亡之间的联系,这是与炎症密切关联的必要过程.在人类系统和小鼠模型中表明,细胞自噬在中性粒细胞驱动的炎症和防御病原体方面起着至关重要的作用.细胞自噬对中性粒细胞主要功能的发挥至关重要,包括脱颗粒、活性氧产生和中性粒细胞胞外诱捕网的释放.细胞自噬对中性粒细胞分化以及主要功能(包括脱颗粒、活性氧产生和中性粒细胞胞外诱捕网的释放)的发挥至关重要.集中讨论了细胞自噬对中性粒细胞的作用,即从中性粒细胞在骨髓中产生到炎症反应和NETosis细胞死亡.
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编辑人员丨2023/8/6
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降钙素基因相关肽下调肺炎克雷伯菌脂多糖所致炎症反应
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对肺炎克雷伯杆菌脂多糖(LPS)诱导炎症反应的影响.方法 体外培养肺炎克雷伯杆菌提取其LPS,不同浓度LPS刺激BEAS-2B细胞后,通过免疫荧光法检测细胞内人类β防御素2(hBD-2)的活化情况,并检测不同浓度CGRP处理后细胞内hBD-2的活性;MTT试验以及流式细胞术分别检测LPS刺激以及CGRP共同处理后BEAS-2B细胞的增殖以及凋亡水平;最后以中性粒细胞明胶酶相关载脂蛋白(NGAL)作为其特异性颗粒的标记物,检测CGRP处理后细胞内中性粒细胞颗粒的释放水平.结果 免疫荧光检测结果显示,不同浓度LPS刺激均能够显著增加细胞内hBD-2的相对表达量,而用CGRP处理后则会显著抑制hBD-2的表达;50 ng/ml、100 ng/ml和200 ng/ml的LPS对BEAS-2B细胞的细胞活性无显著影响,而用400 ng/ml LPS处理24 h,则能够显著降低细胞活性,促进细胞凋亡.当用10 nmol/L CGRP与LPS共同处理时,能明显增加细胞活性,抑制细胞凋亡;不同浓度的LPS均能刺激中性粒细胞特异性颗粒的释放.而10 nmol/L CGRP则能够显著抑制LPS引起的中性粒细胞特异性颗粒释放.结论 CGRP能够抑制hBD-2表达、促进细胞增殖并减少中性粒细胞的脱颗粒,进而下调肺炎克雷伯杆菌LPS诱导的炎症反应.
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编辑人员丨2023/8/6
