目的:探究miR-29a-3p/ SGMS2轴对人类卵巢颗粒样肿瘤细胞系（human ovarian granulosa-like tumor cell line，KGN）炎症反应的调控机制。 方法:通过构建并验证过表达和敲低miR-29a-3p及 SGMS2转染KGN细胞模型，双荧光素酶报告基因实验检测 miR-29a-3p与 SGMS2的结合；MTT法检测各组细胞的增殖；免疫荧光法观察增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）和Ki67蛋白荧光强度；流式细胞术检测细胞凋亡；酶联免疫吸附法检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白介素（interleukin，IL）-6、IL-1β和鞘磷脂的表达；Western blotting检测细胞中Caspase-3、cleaved-Caspase-3、 SGMS2和p-p65蛋白表达。 结果:miR-29a-3p与 SGMS2之间存在位点结合，且能够负向调控 SGMS2的表达水平。KGN细胞中过表达 SGMS2能够增高其吸光度值（ P=0.007），并增强其PCNA和Ki67蛋白的免疫荧光强度（均 P<0.001）；过表达 SGMS2能够降低KGN细胞的凋亡率（ P=0.001），升高炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β和鞘磷脂的表达水平（均 P<0.001）。过表达 SGMS2时KGN细胞中cleaved-Caspase-3、p-p65和 SGMS2蛋白表达量升高（ P=0.001， P<0.001， P<0.001）。而敲低 SGMS2时，以上结果具有与过表达 SGMS2相反的变化趋势。 结论:miR-29a-3p与 SGMS2之间存在靶向负向调节关系， SGMS2能够促进KGN细胞的炎症反应，可为多囊卵巢综合征等妇科内分泌疾病的治疗提供靶点。

背景 术后认知功能障碍(POCD)是增加患者术后发病率和死亡率的重要原因之一.炎症反应和铁死亡是POCD发生的重要机制假说,而电针改善POCD患者学习和记忆功能机制尚不明确.目的 观察电针对老年POCD大鼠学习记忆及炎性细胞因子和海马神经元铁死亡的影响,探讨电针改善POCD的作用机制.方法 2022年1月—2023年2月选取18～20月龄SD大鼠72只,按照随机数字表法分为3组:对照组(n=24)、模型组(n=24)和电针组(n=24).根据术后 3、7 d两个观察时间点将每组大鼠分为 2 个亚组(对照组术后 3 d亚组、对照组术后 7 d亚组,模型组术后3 d亚组、模型组术后 7 d亚组,电针组术后 3 d亚组、电针组术后 7 d亚组),每组 12 只.采用剖腹探查手术建立POCD模型,选取电针组大鼠百会穴和内关穴进行电针刺激.采用Morris水迷宫装置检测大鼠行为学表现,酶联免疫吸附试验检测血清、海马中白介素(IL)6、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,海马组织脂质过氧化物(LPO)、Fe2+,免疫印迹法检测海马酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(ACSL4)、铁蛋白重链 1(FTH1)、血磷脂酰胆碱酰基转移酶 3(LPCAT3)蛋白表达水平.采用透射电镜观察海马区神经细胞超微结构.结果 术后 3、7 d大鼠组别与时间对大鼠术前认知功能训练逃避潜伏期均不存在交互作用(P交互>0.05),训练时间对逃避潜伏期主效应均显著(P时间<0.05),组别对逃避潜伏期主效应均不显著(P组间>0.05).模型组术后3 d亚组逃避潜伏期高于对照组术后3 d亚组、电针组术后 3 d亚组,穿越平台次数、目标象限停留时间低于对照组术后 3 d亚组、电针组术后 3 d亚组,电针组术后3 d亚组穿越平台次数低于对照组术后3 d亚组(P<0.05).模型组术后7 d亚组逃避潜伏期高于对照组术后7 d亚组、电针组术后 7 d亚组,穿越平台次数低于对照组术后 7 d亚组,目标象限停留时间低于对照组术后 7 d亚组、电针组术后 7 d亚组(P<0.05).模型组术后 3 d亚组血清IL-6、TNF-α高于对照组术后 3 d亚组、电针组术后 3 d亚组,电针组术后3 d亚组TNF-α高于对照组术后3 d亚组,IL-10高于对照组术后3 d亚组、模型组术后3 d亚组(P<0.05).模型组术后 7 d亚组血清IL-6 高于对照组术后 7 d亚组,TNF-α高于对照组术后 7 d亚组、电针组术后 7 d亚组,电针组术后 7 d亚组IL-10 高于对照组术后 7 d亚组、模型组术后 7 d亚组(P<0.05).模型组术后 3 d亚组海马IL-6、TNF-α高于对照组术后 3 d亚组、电针组术后 3 d亚组,电针组术后 3 d亚组IL-6、TNF-α高于对照组术后 3 d亚组,IL-10 高于对照组术后 3 d亚组、模型组术后 3 d亚组(P<0.05).模型组术后 7 d亚组海马IL-6、TNF-α高于对照组术后 7 d亚组、电针组术后 7 d亚组,电针组术后 7 d亚组IL-10 高于对照组术后 7 d亚组、模型组术后 7 d亚组(P<0.05).模型组术后 3 d亚组Fe2+、LPO、ACSL4、LPCAT3 高于对照组术后 3 d亚组、电针组术后 3 d亚组,电针组术后3 d亚组高于对照组术后3 d亚组,模型组术后3 d亚组FTH1低于对照组术后3 d亚组、电针组术后3 d亚组,电针组术后 3 d亚组低于对照组术后 3 d亚组(P<0.05).模型组术后 7 d亚组Fe2+、LPO、ACSL4、LPCAT3 高于对照组术后 7 d亚组、电针组术后 7 d亚组,FTH1低于术后 7 d亚组、电针组术后 7 d亚组(P<0.05).模型组术后 3、7 d亚组海马组织视野内细胞核双核膜结构清晰,核周隙未见明显增宽,形态不规则,表面凹凸不平;核内染色质浓缩边集;胞质内少量线粒体膜破裂,膜结构消失;部分内质网明显扩张;并可见部分髓鞘断裂,排列紊乱;电针组术后 3、7 d亚组较模型组明显改善.结论 炎性细胞因子失衡和神经元铁死亡可能是POCD发生的重要病因机制;电针能够改善POCD老年大鼠的学习记忆能力,其发挥脑保护作用机制可能与其调控全身和中枢炎性细胞因子水平以及神经元细胞铁死亡途径有关.

目的 探讨神经鞘磷脂酶在乳腺癌患者中的表达及免疫细胞调节作用机制.方法 2016年6月-2018年3月乳腺癌患者67例设为观察组;选择同期治疗的乳腺良性疾病患者56例设为对照组.采用免疫印迹法(Western blot)法完成观察组与对照组神经鞘磷脂合成酶SMS1和SMS2蛋白表达水平;采用流式细胞仪测定两组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平.结果 乳腺癌组织中SMS1和SMS2阳性率与肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移差异有统计学意义(P＜0.05);Western blot法结果表明:观察组乳腺癌组织中SMS1和SMS2蛋白相对表达量,高于癌旁组织与对照组(P＜0.05);观察组CD3+、CD4+、CD4+/CDS+水平,均低于对照组(P＜0.05);观察组CD8+水平,高于对照组(P＜0.05).结论 神经鞘磷脂合成酶SMS1和SMS2水平在乳腺癌患者中呈高表达,与免疫细胞水平具有一定的相关性.

目的 探讨神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)基因沉默对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响以及机制分析.方法 体外培养MCF-7细胞,分别转染siRNA control(SiR-Con)和SMS2 siRNA(SiR2),用MTT法筛选肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导MCF-7细胞凋亡的剂量(IC50)、采用薄层层析法(TLC)检测SMS2基因沉默后MCF-7细胞内SMS酶活性水平并用Hoechst 33258/PI染色法检测细胞凋亡情况.采用qRT-PCR和Western blot检测B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化.结果 随着TNF-α(50～800 ng/mL)浓度的增加,对MCF-7细胞增殖抑制率也逐渐增加,IC50为205.7 ng/mL.经TNF-α作用后,TNF-α组、SiR-Con组和SiR2组MCF-7细胞内SMS酶活性灰度值明显低于CTL组,且细胞凋亡率和坏死率均高于CTL组;以SiR2组细胞SMS酶活性为最低,凋亡率和坏死率为最高(P<0.05).SiR2组细胞Bcl-2表达量低于其他3组,而Bax和caspase-3基因表达则高于其他3组(P<0.05).结论 SMS2基因沉默可降低MCF-7细胞内SMS酶活性,通过抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,同时上调促凋亡基因Bax和caspase-3的表达,提高TNF-α诱导肿瘤细胞凋亡的作用.

目的:探讨神经鞘磷脂合成酶2(SMS2)的表达与阿霉素(ADR)致乳腺癌细胞线粒体损伤的相关性.方法:采用过表达慢病毒感染法构建并筛选SMS2过表达的乳腺癌MCF-7细胞.CCK-8实验检测细胞对ADR的IC50值,选择适当浓度的ADR药物作用条件处理细胞后,使用MitoSOX试剂染色检测线粒体ROS水平,检测细胞内ATP水平以评估线粒体功能;电镜观察线粒体超微结构的异同;Western blot检测线粒体细胞色素C的释放水平和细胞凋亡相关蛋白Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase 3、Bcl-2、Bax表达水平.结果:SMS2过表达的MCF-7细胞对ADR的IC50值为(2.42±0.073)μmol/L,而对照组细胞IC50值为(0.62±0.036)μmol/L(P<0.01).2μmol/L ADR处理细胞24 h后,SMS2过表达的MCF-7细胞内线粒体ROS水平降低(P<0.05);细胞内ATP水平增加(P<0.05);电镜观察示线粒体结构性损伤减轻;线粒体细胞色素C的释放水平降低(P<0.05);抗凋亡蛋白Bcl-2表达增加,促凋亡蛋白Cleaved-PARP、Cleaved-Caspase 3、Bax的表达减少(P<0.05).结论:SMS2过表达可能通过减轻ADR对乳腺癌MCF-7细胞线粒体的损伤作用,进而抑制细胞凋亡.

目的:本文基于脂质组学方法研究芒柄花黄素(Formononetin)对脑缺血再灌注损伤大鼠脑皮层组织磷脂代谢通路的影响及潜在机制.方法:采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,将SD大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、芒柄花黄素25、50mg/kg组.神经行为学评分、TTC染色以及尼氏染色用于动物模型的药效学评价,并采用脂质组学技术结合多元统计方法对各组间的磷脂代谢物进行表征,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测磷脂代谢相关酶mRNA的表达.结果:与假手术对照组比较,模型对照组大鼠神经功能评分、脑梗死体积显著增加(P＜0.01),脑组织神经元形态发生破坏;大鼠脑缺血损伤组织中磷脂代谢物神经酰胺(Cer)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPC)水平显著升高(P＜0.01),鞘磷脂(SM)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)含量显著减低(P＜0.01);酸性鞘磷脂酶(Asmase)、中性鞘磷脂酶(Nsmase)、磷脂酶A2(Pla2)mRNA表达显著上调(P＜0.01),而鞘磷脂合成酶1(Sms1)、鞘磷脂合成酶2(Sms2)mRNA表达显著下调(P＜0.01);与模型对照组相比,芒柄花黄素可增加大鼠脑缺血损伤组织中PC、PE、SM的含量和上调Sms1代谢酶mRNA的表达(P＜0.05),降低Cer、LPC的含量和下调Smase、Nsmase、Pla2 mRNA代谢酶的表达(P＜0.05).结论:芒柄花黄素可改善大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能与调控磷脂代谢通路相关代谢酶的mRNA表达有关.