N6-腺苷酸甲基化（m6A）是真核生物mRNA最常见的转录后修饰行为之一。m6A修饰可加速mRNA的代谢和翻译，在细胞分化、胚胎发育和免疫应答等过程中发挥重要作用。作为一种可逆的表观遗传修饰，m6A修饰在许多生理和病理过程中发挥着重要作用。m6A修饰与呼吸系统疾病的发生发展密切相关，m6A修饰调控因子可能成为调控呼吸系统疾病的潜在作用靶点。本文对m6A修饰在肺癌、急性肺损伤（ALI）、哮喘、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病（COPD）等呼吸系统疾病发生发展中的作用进行了综述，旨在为呼吸系统疾病的发病机制及药物作用靶点研究提供参考。

肺纤维化是多种异质性肺间质疾病的终末期，以肌成纤维细胞的过度增殖、细胞外基质的沉积和肺实质的破坏为特征。甲状腺和肺来源于同一内胚层细胞，甲状腺激素影响慢性阻塞性肺疾病、肺癌等多种肺疾病的发生、发展和预后。本文就甲状腺激素在肺纤维化的作用和机制进行综述，以期为甲状腺激素在矽肺中的作用和机制研究提供新思路。

目的:研究川芎嗪对人胚肺成纤维细胞株MRC-5增殖及胶原蛋白的影响。方法:培养MRC-5细胞株，按随机数字表法分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。对照组用不含药物的无血清DMEM处理，低、中、高剂量组分别用含有5、10、20 mg/L川芎嗪的无血清DMEM处理。干预24、36、48 h后，采用MTS法检测细胞增殖抑制率；干预48 h后，采用流式细胞术检测细胞周期比例，采用TUNEL染色观察细胞凋亡情况，Western blot法检测Bcl-2、Bax、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、周期素依赖性蛋白激酶抑制因子P27(p27)蛋白水平，ELISA检测培养基中TGF-β1、Ⅰ型胶原(collagen type Ⅰ, Col-Ⅰ)、Col-Ⅲ水平。结果:干预24、36、48 h时，低、中、高剂量组细胞增殖抑制率较对照组升高( P<0.05)。干预48 h后，与对照组比较，低、中、高剂量组细胞周期G0/G1期比例增加，S期比例明显减少( P<0.05)；凋亡率[(6.59±0.95)%、(10.92±2.25)%、(16.58±3.25)%比(1.38±0.34)%]明显增加( P<0.05)；Bcl-2[(0.79±0.13)、(0.52±0.06)、(0.31±0.05)比(0.91±0.15)]、CyclinD1[(0.62±0.08)、(0.50±0.06)、(0.27±0.04)比(0.83±0.14)]蛋白表达明显降低，Bax[(0.45±0.07)、(0.50±0.06)、(0.79±0.13)比(0.32±0.06)]、p27[(0.39±0.07)、(0.75±0.13)、(0.96±0.16)比(0.20±0.05)]蛋白表达增加( P<0.05)；培养基中TGF-β1、Col-Ⅰ、Col-Ⅲ水平降低( P<0.05)。 结论:川芎嗪可抑制MRC-5细胞增殖及胶原蛋白产生，其机制可能与诱导细胞周期阻滞、调节增殖及细胞周期相关蛋白表达有关。

目的:通过体内实验和体外实验探讨地高辛对博莱霉素诱导肺纤维化小鼠的作用及其可能机制。方法:①体内实验：将60只C57/BL6J小鼠按随机数字表法分为对照组、肺纤维化模型组（模型组）、吡非尼酮（300 mg/kg）组及地高辛1.0 mg/kg、0.2 mg/kg组，每组12只。一次性气管内滴注博莱霉素5 mg/kg制备小鼠肺纤维化模型；对照组给予等量无菌生理盐水。制模后次日起各组灌胃相应药物，每日1次，持续28 d；对照组及模型组给予等量生理盐水。处死小鼠取肺组织，检测肺系数；苏木素-伊红（HE）及Masson染色后，光镜下观察肺组织形态学和胶原变化；采用免疫组化法检测肺组织中肌成纤维细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）及细胞外基质（ECM）胶原蛋白（COL-Ⅰ、COL-Ⅲ）阳性表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测肺组织中ECM纤维连接蛋白（FN）、转化生长因子-β（TGF-β）及磷酸化Smad3（p-Smad3）的蛋白表达。②体外实验：体外培养人胚肺成纤维细胞（HFL-1），当细胞密度达到70%~90%时分为空白对照组、细胞活化模型组（模型组）、吡非尼酮（2.5 mmol/L）组及地高辛100 nmol/L、50 nmol/L组。给予相应药物处理3 h后，除空白对照组外，其余各组加入诱导剂TGF-β处理48 h制备细胞活化模型。Western blotting检测细胞中α-SMA、FN、p-Smad3蛋白表达及磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）通路蛋白PI3K、Akt的磷酸化（p-PI3K、p-Akt）水平。结果:①体内实验结果：与对照组比较，模型组小鼠肺泡结构破坏明显，大量炎症细胞浸润，肺间质内胶原沉积，且肺组织中ECM沉积增加，α-SMA、FN、TGF-β、p-Smad3的蛋白表达水平均显著升高，说明博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型制备成功。与模型组比较，地高辛可以显著抑制气道炎症、胶原纤维沉积，减少ECM沉积，降低α-SMA、FN、TGF-β、p-Smad3的蛋白表达，且效果优于吡非尼酮组，除FN外以地高辛1.0 mg/kg组效果更好〔α-SMA（ A值）：5.37±1.10比9.51±1.66，TGF-β蛋白（TGF-β/GAPDH）：0.09±0.04比0.33±0.23，p-Smad3蛋白（p-Smad3/GAPDH）：0.05±0.01比0.20±0.07，均 P<0.01〕。②体外实验结果：与空白对照组比较，模型组细胞FN、α-SMA、p-Smad3及PI3K/Akt信号蛋白表达均增加，表明TGF-β诱导的成纤维细胞活化模型建立成功。与模型组比较，地高辛可以显著抑制成纤维细胞活化，明显降低FN、α-SMA、p-Smad3及PI3K/Akt通路蛋白表达，且效果优于吡非尼酮组，其中以地高辛100 nmo/L组FN、α-SMA及p-Akt表达降低更为明显〔FN蛋白（FN/GAPDH）：0.21±0.15比0.88±0.22，α-SMA蛋白（α-SMA/GAPDH）：0.20±0.01比0.50±0.08，p-Akt蛋白（p-Akt/GAPDH）：0.30±0.01比0.65±0.10，均 P<0.01〕。 结论:地高辛对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化具有保护作用，其机制可能与调节PI3K/Akt信号通路抑制成纤维细胞活化有关，并呈一定剂量依赖性。

目的:探讨硫氧环蛋白过氧化物酶-2（Prx-2）过表达对转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人胚肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法:将人胚肺成纤维细胞随机分为对照组（DMEM培养液）、TGF-β1组（5 μg/L TGF-β1）、阴性对照组（5 μg/L TGF-β1+慢病毒空载体）、Prx-2组（5 μg/L TGF-β1+慢病毒Prx-2过表达载体）。采用MTT法检测各组细胞增殖情况，免疫荧光法检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量用以反映活性氧（ROS）水平，Western blot检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、p-P38、I和III型胶原蛋白及Prx-2水平。用SPSS 18.0软件进行统计分析，计量资料以 ± s表示，组间比较采用分差分析，两两比较用LSD- t检验。 结果:慢病毒成功转染，Prx-2组Prx-2蛋白水平明显高于对照组，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，TGF-β1组细胞增殖能力明显增高，差异有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，Prx-2组细胞增殖能力明显降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，TGF-β1组细胞8-OHdG、p-JNK、p-P38及I、III型胶原蛋白水平均明显增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，Prx-2组8-OHdG、p-JNK、p-P38及I、III型胶原蛋白水平均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，阴性对照组差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:Prx-2过表达可能通过抑制ROS和JNK、P38通路激活，抑制TGF-β1促成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

目的:构建基于血管化机制的骨不连类器官芯片，并探讨无菌性骨不连发生机制。方法:设计半开放微流控芯片，实现人骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stromal cells，BMSC）、人胚肺成纤维细胞（human fetal lung fibroblast 1，HFL1）与人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）共培养，建立三维器官芯片体系。设置HFL1与HUVEC不同比例与BMSC共培养，分为对照组（HFL1∶HUVEC=1∶1）、纤维化组（HFL1∶HUVEC=3∶1）与血管化组（HFL1∶HUVEC=1∶3）。通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、茜素红（alizarin red）染色观察BMSC成骨分化情况，qPCR分析成骨标志基因 SP7、 RUNX2、 ALPL、 BGLAP及血管化相关基因 KDR、 VWF转录情况，Western blot检测成骨标志蛋白RUNX2和ALP表达水平。 结果:BMSC、HFL1和HUVEC共培养体系中BMSC正常生长且出现明显生物矿化行为，血管内皮细胞能够形成有序血管结构，证实体系构建成功。相较对照组，纤维化组BMSC成骨分化下降趋势不明显，矿化标志基因 ALPL和 BGLAP相对表达量为0.55±0.19、0.42±0.27，差异均有统计学意义（ P<0.05）；血管化组基因 KDR和 VWF下调，相对表达量为0.49±0.17、0.49±0.21，差异均有统计学意义（ P<0.05）。相较对照组，血管化组BMSC成骨分化基因 SP7、 RUNX2、 ALPL和 BGLAP上调，相对表达量分别为2.91±0.52、3.83±1.87、3.22±1.29和5.21±1.46，差异均有统计学意义（ P<0.05）；血管化基因 KDR、 VWF上调，相对表达为8.24±2.84、5.32±1.67，差异均有统计学意义（ P<0.05）。Western blot结果表明RUNX2、ALP在血管化组中表达增加，纤维化组中表达减少。 结论:骨不连类器官芯片能够部分模拟骨不连局部微环境，纤维化可能导致骨形成能力和血管化水平显著下降，是无菌性骨不连发生的潜在重要原因。

目的:探讨自噬诱导剂雷帕霉素及抑制剂3-甲基腺嘌呤对水痘-带状疱疹病毒（VZV）感染豚鼠背根神经节模型中病毒结构及功能蛋白生物合成的影响及机制。方法:在人胚肺成纤维细胞（HELF）中培养扩增VZV，同时分离提取豚鼠外周血单个核细胞（PBMC），VZV-HELF与PBMC共培养18~20 h，离心收集VZV-PBMC。32只豚鼠随机平均分为4组，每组8只：空白对照组于内眦静脉丛注射自体PBMC；自噬抑制组、自噬诱导组、VZV感染组分别先腹腔注射3 mg/kg 3-甲基腺嘌呤溶液、0.5 mg/kg雷帕霉素溶液、相同体积的0.9% NaCl溶液，2 h后均于内眦静脉丛注射VZV-PBMC 50 μl。14 d后，处死各组豚鼠，取背根神经节组织，透射电镜观察病毒颗粒形态及自噬囊泡形态及数目，Western印迹检测VZV核衣壳蛋白（NCP）和立即早期蛋白62（IE62）及自噬相关蛋白Beclin-1和p62的表达，免疫组化检测VZV感染的背根神经节中抗VZV抗体的表达。统计分析采用两独立样本 t检验、单因素方差分析、LSD- t检验或Kruskal-Wallis H检验。 结果:透射电镜下，VZV感染组背根神经节中可见核衣壳病毒粒子及散在的自噬体结构。空白对照组、VZV感染组、自噬诱导组及自噬抑制组自噬囊泡数量[ M（ Q1， Q3）]分别为0、5（4，6）、7（5，9）、0个，差异有统计学意义（ H = 135.60， P<0.01），VZV感染组显著高于空白对照组及自噬抑制组（均 P<0.05），但与自噬诱导组差异无统计学意义（ P>0.05），而自噬诱导组显著高于自噬抑制组（ P<0.05）。Western印迹显示，VZV感染组IE62蛋白表达水平（1.49 ± 0.06）显著高于空白对照组（0.50 ± 0.09）， t = 9.17， P<0.05；自噬抑制组抗VZV抗体表达显著低于自噬诱导组和VZV感染组（ t值分别为9.24、7.78，均 P < 0.01），而自噬诱导组与VZV感染组抗VZV抗体表达差异无统计学意义（ P > 0.05）。 结论:VZV感染豚鼠背根神经节后发生了自噬；通过抑制自噬，豚鼠背根神经节中部分VZV结构及功能蛋白的表达水平下降。

目的:探讨重组人血管内皮抑制素联合培美曲塞对非小细胞肺癌患者血清肿瘤标志物及血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的影响。方法:选取2016年6月至2018年6月义乌市中心医院确诊的非小细胞肺癌患者102例，采用随机数字表法分为对照组（ n=51例）和观察组（ n=51例），对照组在常规治疗基础上联合培美曲塞化疗，观察组在对照组治疗基础上联合重组人血管内皮抑制素化疗，两组均以3周为1个周期，治疗2个周期后，观察两组近期疗效及药物不良反应，同时分别于治疗前后检测两组血清肿瘤标志物，包括糖类癌抗原125（CA125）、癌胚抗原（CEA）和细胞角蛋白19片段（CYFERA21-1），并检测两组血清VEGF、bFGF水平变化情况。 结果:观察组治疗有效率为80.39%（41/51），高于对照组的58.82%（30/51），组间差异有统计学意义（χ 2=10.995， P<0.001）；观察组治疗后血清CA125、CEA、CYFERA21-1水平分别为（236.92±20.85）U/L、（10.83±2.12）pg/L、（2.06±0.32）pg/L，均低于对照组的（303.86±27.51）U/L、（16.53±2.96）pg/L、（3.42±0.51）pg/L（ t=11.307、9.128、13.172，均 P<0.001）。观察组治疗后血清VEGF、bFGF水平分别为（112.52±19.38）μg/L、（12.95±1.87）pg/L，均低于对照组的（185.02±30.14）μg/L、（20.84±2.61）pg/L （t=11.797、14.328，均 P<0.001）；对照组药物不良反应总发生率为17.65%（9/51），观察组为13.73%（7/51），两组差异无统计学意义（χ 2=0.580， P=0.445）。 结论:采取重组人血管内皮抑制素联合培美曲塞化疗能降低非小细胞肺癌患者血清肿瘤标志物及VEGF、bFGF水平，可有效控制患者体内肿瘤细胞活性，用药安全、有效。

目的:构建巨噬细胞-成纤维细胞体外模型模拟肺纤维化过程，探讨纳米二氧化硅（SiNPs）暴露致肺纤维化的关键机制。方法:于2021年1月，取对数生长期的人单核细胞白血病（THP-1）细胞，分别采用0、25、50、100 μg/ml SiNPs处理24 h，收集THP-1细胞上清液分别作用于对数生长期的对照组和低、中、高剂量组人胚肺成纤维（MRC-5）细胞，继续培养24 h。检测不同组别MRC-5细胞增殖情况。检测MRC-5细胞上清液中细胞羟脯胺酸（Hyp）、白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达水平。检测高剂量组MRC-5细胞中的差异蛋白表达情况，应用GeneCard数据库中肺纤维化相关蛋白对高剂量组MRC-5细胞进行差异肺纤维化蛋白的筛选。应用GO分析对高剂量组的差异肺纤维化蛋白进行富集分析，应用String数据库构建高剂量组的差异肺纤维化蛋白的相互作用（PPI）网络，使用CytoHubba软件筛选高剂量组的关键差异肺纤维化蛋白。使用Pearson相关分析计算关键差异肺纤维化蛋白之间的相关系数，Western blotting检测不同组别中关键差异肺纤维化蛋白表达。结果:与对照组比较，低、中、高剂量组MRC-5细胞增殖率增加（ P<0.05）。与对照组比较，低、中、高剂量组细胞上清液中Hyp、IL-1β的表达水平均升高（ P<0.05），高剂量组细胞上清液中IL-6、TNF-α蛋白表达水平均升高（ P<0.05）。用GeneCard数据库结合高剂量组差异表达蛋白共筛选出26个差异肺纤维化蛋白，GO分析显示，差异肺纤维化蛋白主要调控细胞外基质水解、细胞炎症反应、组织修复和细胞增殖等生物过程。CytoHubba软件计算出基质金属蛋白酶9（MMP9）和基质金属蛋白酶组织抑制因子1（TIMP1）是PPI网络中的关键节点蛋白。相关分析结果显示，MMP9蛋白与基质金属蛋白酶1（MMP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、TIMP1和表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达相关（ r=0.97、0.98、0.94、0.93， P<0.05）。Western blotting结果显示，与对照组比较，低、中、高剂量组TIMP1蛋白表达均升高（ P<0.05），而MMP9蛋白表达仅在高剂量组增加（ P<0.05）。 结论:SiNPs暴露后体外细胞肺纤维化模型中MRC-5细胞的差异肺纤维化表达蛋白主要调控细胞外基质水解、组织修复、细胞炎症等生物过程，且MMP9、TIMP1蛋白可能是影响SiNPs暴露后MRC-5细胞纤维化进程的关键蛋白。

目的:在牛Ⅱ型胶原免疫诱导类风湿节炎大鼠的基础上，气管注入博来霉素，构建RA合并肺纤维化大鼠模型来观察JAK2抑制剂CEP33779对RA大鼠肺纤维化的改善程度及可能机制。方法:①体内研究：将SD大鼠随机分为正常组、单纯肺纤维化组、肺纤维化CEP治疗组、RA合并肺纤维化组、RA合并肺纤维化CEP治疗组。造模当天（d0）大鼠尾部皮下注射牛Ⅱ型胶原0.2 ml（1 mg/ml）构建RA模型；造模第13天（d13）气管内注射100 μl博来霉素（2.5 mg/kg）诱导肺纤维化模型；造模第14天（d14）治疗组予以CEP（10 ml/kg每日1次）灌胃，共4周。测定大鼠右后足关节肿胀度并行关节炎指数评分，检测肺顺应性（Cst）和肺比重，HE和Masson染色观察左肺病理变化，蛋白免疫印迹法（WB）检测右肺胞外基质水平。②体外研究：TGF-β1（10 ng/ml）刺激人胚肺成纤维细胞（HFL1）24 h和48 h后，用免疫荧光法检测p-JAK2表达；HFL1接种培养板后，设置空白组、TGF-β 1刺激组、TGF-β 1+LY2109761（TGFβ-R1/2抑制剂，0.5 mmol/L和2 mmol/L）组、TGF-β 1+CEP（0.1 mmol/L和1.0 mmol/L）组共育48 h，WB测定TGFβ-R2、α-SMA、JAK2、Col1表达水平。多组间比较采用Tukey′s检验，两组间比较采用独立 t检验。 结果:①体内研究：与正常组（1.45±0.04）相比，RA+PF+Vehicle组第13天大鼠关节肿胀度升高[（2.54±0.16）， t=16.02， P<0.001]，CEP治疗3 d后第16天开始大鼠平均关节炎指数评分、足趾体积降低[（2.89±0.11）， t=5.78， P<0.001；（1.92±0.13）， t=6.85， P<0.001]。肺纤维化大鼠肺组织有不同程度的肿大，肺比重升高、Cst下降，肺炎症和纤维化程度升高[（0.96±0.06）， t=19.76， P<0.001；（0.26±0.09）， t=17.64， P<0.001；（3.63±1.51）， t=6.00， P<0.001；（1.75±0.71）， t=5.84， P<0.001]。CEP灌胃后，RA合并肺纤维化大鼠肺肿胀减轻，肺比重下降、Cst增加[（0.82±0.05）， t=5.76， P<0.001；（0.43±0.18）， t=2.31， P=0.038]，肺组织纤维化和炎症程度评分[（3.00±1.00），（1.56±0.52）]均有下降趋势，但差异无统计学意义。CEP可抑制肺纤维化大鼠肺组织中TGF-β 1、TGFβ-R 2、α-SMA、Fn和JAK2的表达，5组间差异均有统计学意义（ F=9.02， P=0.017； F=4.86， P=0.048； F=6.57， P=0.032； F=11.26， P=0.010； F=13.32， P=0.007）。②体外研究：TGF-β 1可刺激HFL1表达更强的磷酸化的JAK2（p-JAK2）荧光信号；WB可见TGFβ-R2、α-SMA、JAK2和Col1表达显著增加，LY、CEP干预后，上述蛋白呈浓度依赖性减少，5组间差异均有统计学意义（ F=337.30， P<0.001； F=20.61， P<0.001； F=100.60， P<0.001； F=180.90， P<0.001）。 结论:JAK2抑制剂对RA相关肺纤维有改善作用，其机制可能是通过干扰JAK2与TGF-β 1信号通路的"串话"来减轻TGF-β 1所致的肺纤维化。