目的:探讨硫氧环蛋白过氧化物酶-2（Prx-2）过表达对转化生长因子β1 （TGF-β1）诱导的人胚肺成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法:将人胚肺成纤维细胞随机分为对照组（DMEM培养液）、TGF-β1组（5 μg/L TGF-β1）、阴性对照组（5 μg/L TGF-β1+慢病毒空载体）、Prx-2组（5 μg/L TGF-β1+慢病毒Prx-2过表达载体）。采用MTT法检测各组细胞增殖情况，免疫荧光法检测8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）含量用以反映活性氧（ROS）水平，Western blot检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶（p-JNK）、p-P38、I和III型胶原蛋白及Prx-2水平。用SPSS 18.0软件进行统计分析，计量资料以 ± s表示，组间比较采用分差分析，两两比较用LSD- t检验。 结果:慢病毒成功转染，Prx-2组Prx-2蛋白水平明显高于对照组，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，TGF-β1组细胞增殖能力明显增高，差异有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，Prx-2组细胞增殖能力明显降低，差异有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，TGF-β1组细胞8-OHdG、p-JNK、p-P38及I、III型胶原蛋白水平均明显增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，Prx-2组8-OHdG、p-JNK、p-P38及I、III型胶原蛋白水平均明显降低，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与TGF-β1组比较，阴性对照组差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:Prx-2过表达可能通过抑制ROS和JNK、P38通路激活，抑制TGF-β1促成纤维细胞增殖和胶原合成的作用。

目的:研究硫氧还原蛋白5(TXNDC5)-过氧化物还原酶2(Prx2)对前列腺癌细胞耐药性的影响。方法:体外培养前列腺癌PC3细胞，采用化疗药物环磷酰胺(5、10、15 μmol/L)干预24 h，另设空白对照组，采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测PC3细胞中TXNDC5的表达水平。在PC3细胞中给予不同浓度环磷酰胺处理的同时沉默TXNDC5，CCK-8法检测siTXNDC5组和siNC组细胞增殖活力，活性氧检测试剂盒测定活性氧自由基含量。在PC3细胞株及其环磷酰胺耐药细胞株中给予10 μmol/L环磷酰胺处理并同时沉默TXNDC5表达，检测细胞增殖活力。蛋白质印迹法检测在PC3细胞中沉默TXNDC5对Prx2蛋白表达的影响。在过表达TXNDC5的PC3细胞中沉默Prx2表达，检测Vec-Ctrl组、pcTXNDC5组、siNC组、siPrx2组、pcTXNDC5+siPrx2组的细胞增殖活力和活性氧自由基含量。结果:与空白对照组相比，环磷酰胺处理可显著提高前列腺癌PC3细胞中TXNDC5 mRNA和蛋白的表达量。10、15 μmol/L环磷酰胺处理PC3细胞12 h后，与siNC组相比，siTXNDC5组细胞增殖活力明显受抑(0.44±0.08 vs. 0.74±0.10， t＝3.647， P＝0.031；0.30±0.04 vs. 0.53±0.06， t＝6.115， P＝0.006)。10 μmol/L环磷酰胺处理PC3细胞6、12 h，与siNC组相比，siTXNDC5组细胞内活性氧自由基的生成量显著增加(2.68±0.19 vs. 1.58±0.26， t＝-6.027， P＝0.005；4.56±0.37 vs. 2.73±0.26， t＝-6.995， P＝0.003)。采用10 μmol/L环磷酰胺处理PC3及其耐药细胞株12 h，与siNC组相比，siTXNDC5组细胞增殖活力均明显受抑。蛋白质印迹法结果表明沉默TXNDC5可显著抑制Prx2的表达。沉默Prx2表达可显著抑制因TXNDC5过表达导致的细胞增殖活力升高和活性氧自由基含量降低的趋势。10 μmol/L环磷酰胺处理PC3细胞12 h，Vec-Ctrl组、pcTXNDC5组、siNC组、siPrx2组和pcTXNDC5+siPrx2组细胞增殖活力分别为0.52±0.07、0.69±0.03、0.56±0.05、0.43±0.05、0.58±0.07，差异有统计学意义( F＝8.868， P＝0.003)，pcTXNDC5+siPrx2组细胞增殖活性低于pcTXNDC5组( P＝0.045)；上述5组细胞活性氧自由基含量分别为3.26±0.46、2.09±0.49、3.16±0.38、4.62±0.26、2.87±0.36，差异有统计学意义( F＝16.037， P<0.001)，pcTXNDC5+siPrx2组活性氧自由基含量高于pcTXNDC5组( P＝0.036)。 结论:TXNDC5可通过调控Prx2的表达，降低前列腺癌细胞中活性氧自由基的水平，从而增强前列腺癌细胞对化疗药物的耐药性。

目的:检测非小细胞肺癌患者硫氧化还原蛋白1(Trx-1)和环氧化酶2(COX-2)表达并探讨其临床意义。方法:选取2019年1月至2021年1月诊治的120例非小细胞肺癌患者为研究对象，检测组织取自本院胸外科手术切除的肺癌标本(取肺癌组织及距离肿瘤边缘>2 cm的癌旁组织)。链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法(SP)法检测肺癌组织及癌旁组织Trx-1和COX-2的表达。分析Trx-1和COX-2阳性率与临床病理因素的关系。计量资料比较行 t检验；计数资料采用 χ2检验。采用Spearman秩相关分析。采用Spearman秩相关分析Trx-1和COX-2表达的相关性。 结果:肺癌组织中Trx-1和COX-2阳性率显著高于癌旁组织[63.33%(76/120)比20.0%(24/120)、59.17%(71/120)比15.0%(18/120)]，差异有统计学意义( χ2＝44.589、48.289， P<0.05)。Trx-1和COX-2阳性率在TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度中的差异有统计学意义( χ2＝9.234、15.191、22.166、13.752、8.277、11.974， P<0.05)，Ⅲ期、有淋巴结转移及肿瘤分化程度低分化患者Trx-1和COX-2阳性率显著高于Ⅰ期+Ⅱ期、无淋巴结转移、高分化及中分化等患者。非小细胞肺癌患者肺癌组织Trx-1和COX-2阳性患者平均疾病进展时间为(20.54±2.63)个月，3年生存率为37.10%(23/62)；其他患者平均疾病进展时间为(23.61±3.18)个月，3年生存率为63.79%(37/58)，Trx-1和COX-2阳性患者患者平均疾病进展时间和3年生存率显著低于未过量表达患者( t或 χ2＝5.778、8.543， P<0.05)。 结论:非小细胞肺癌患者中Trx-1和COX-2均呈高表达，可用于评估非小细胞肺癌患者病情及预后。

[目的]在全基因组上鉴定中华按蚊Anopheles sinensis血红素过氧化物酶(heme peroxidase,HPX)家族基因,并预测其基本特征,探究双翅目中5种代表性昆虫HPX基因的系统发育关系和进化.[方法]以NCBI数据库中黑腹果蝇Drosophila melanogaster和家蚕Bombyx mori等昆虫HPX基因编码的氨基酸序列为询问序列,通过本地Blast搜索鉴定中华按蚊基因组上HPX家族基因,并鉴定了冈比亚按蚊Anopheles gambiae、致倦库蚊Aedes aegypti和埃及伊蚊Culex quinquefasciatus基因组上的HPX基因;基于冈比亚按蚊HPX基因的命名系统,对中华按蚊HPX基因进行命名;运用生物信息学方法预测了中华按蚊HPX基因的特征,包括基因的结构及在scaffold的定位,氨基酸的替换率和保守结构域,蛋白质3D结构等,通过与冈比亚按蚊共线性分析定位了中华按蚊HPX基因在染色体上的位置;基于HPX核苷酸序列,采用PAUP4.0和MEGA6.0软件利用最大相似法构建了5个双翅目代表性种HPX基因的系统发生树.[结果]中华按蚊基因组共有20个HPX基因,冈比亚按蚊、埃及伊蚊和致倦库蚊基因组分别有18,14和12个HPX基因.这4种蚊虫的HPX蛋白都被分类进入Peroxinectin,Peroxidasin,DBLPX和DUOX 4个亚家族,其氨基酸的分子量介于61.6～186.6 kD之间(除AsHPX8为29.6 kD).中华按蚊20个HPX基因共具有98个外显子,75个内含子,其外显子与内含子分布模式在基因间差异较大.中华按蚊HPX基因被定位到10个scaffold上,对应到冈比亚按蚊的2R,3R,2L,3L和X染色体.这些中华按蚊HPX基因编码的氨基酸序列(除DUOX)都具有1个血红素结合位点和5个Ca2+结合位点,在N端和C端各具有2个半胍氨酸位点并界定了两个二硫键.中华按蚊与冈比亚按蚊同源基因对的ω值都小于1,说明HPX基因在进化过程中没有受到明显的环境选择压力.系统发育关系研究表明,5种双翅目昆虫的HPX基因可以分为16个组,其中11个组在进化上呈明显的单系,具有至少83％的bootstrap支持.[结论]本研究提供了中华按蚊的HPX基因的基础信息.不同蚊虫种具有相似分子量的HPX蛋白,这与HPX家族蛋白结构的高度保守性有关.蚊虫的DUOX随着主要功能位点的缺失逐渐失去其功能,这与其特殊环境适应相关.DBLPX亚家族的peroxidase结构域在HPX家族所有亚家族中是最保守的.

抗甲状腺药物(propylthiouracil,PTU)特别是硫脲类目前广泛用于甲状腺功能亢进的治疗,其不良反应包括皮疹、皮肤瘙痒、肝胆系统损害、白细胞和网状内皮系统异常以及抗中性粒细胞胞质抗体(antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)等,自1993年首次报道的该类药物引起的相关性血管炎[1]不足百例,多发生在使用PTU的中后期,与其剂量无直接关系,多发生于持续用药大于3年的患者.AAV包括韦格纳肉芽肿、显微镜下型多血管炎、变应性肉芽肿性血管炎和坏死性新月体性肾炎.主要累及小血管壁,以血管壁纤维素坏死样炎性反应为主要病理特征,血清ANCA检测呈阳性.其检测方法主要有两种:(1)间接免疫荧光法:用酒精固定的中性粒细胞有两种形态,胞浆型的主要靶抗原为蛋白酶3(PR3),与韦格纳肉芽肿高度相关,环核型的主要靶抗原为髓过氧化物酶(MPO),与显微镜下型多血管炎和坏死性新月体性肾炎密切相关[2];(2)酶联免疫吸附法,两种方法联合使用可使ANCA相关性血管炎诊断的特异性大幅度提高,可达98％.

目的 探讨外源性硫化氢(H2S)对家兔心肺复苏(CPR)后肠黏膜屏障的影响及作用机制.方法按随机数字表法将44只雄性新西兰白兔分为假手术组(Sham组,n＝12)、心脏停搏后综合征(PCAS)组(n＝16)、H2S干预组〔PCAS+硫氢化钠(NaHS),n＝16〕.采用气管夹闭窒息法制备动物PCAS模型,心脏停搏(CA)5 min后开始CPR ;而Sham组麻醉后不夹闭气管插管,其余操作同PCAS组.PCAS+NaHS组于CPR开始前1 min经耳缘静脉注射NaHS 0.5 mg/kg,此后1.5 mg·kg-1·h-1持续泵入3 h ;Sham组和PCAS组则给予等体积生理盐水.自主循环恢复(ROSC)后24 h处死各组家兔,留取门静脉血及小肠组织备检.采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记法检测血清FITC-葡聚糖(FD-4)水平以反映肠黏膜通透性;对小肠组织行苏木素-伊红(HE)染色后光镜下观察黏膜的形态学改变,并进行肠黏膜损伤评分;采用免疫组化法检测肠黏膜组织中紧密连接蛋白ZO-1表达;采用硫代巴比妥酸显色法测定小肠组织丙二醛(MDA)含量,用黄嘌呤氧化法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)测定髓过氧化物酶(MPO)水平,以反映小肠组织氧化应激反应及炎症反应情况;采用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测小肠组织凋亡蛋白〔天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)〕及自噬相关蛋白(Beclin-1、LC3)的表达.结果 Sham组、PCAS组和PCAS+NaHS组分别有12、13和14只动物CPR成功,均有12只动物存活到实验结束.与Sham组相比, PCAS组门静脉血清FD-4水平明显升高(mg/L :11.95±0.59比1.43±0.48,P＜0.05),光镜下观察小肠组织损伤及炎性细胞浸润程度明显加重,小肠损伤评分明显升高(分:4.21±0.37比0.36±0.18,P＜0.05),免疫组化显示小肠组织中紧密连接蛋白ZO-1阳性细胞明显减少,小肠组织中MDA含量及MPO活性明显增加〔MDA (nmol/mg):3.65±0.32比1.54±0.24,MPO(U/g):362±35比 134±18,均P＜0.05〕,而SOD活性明显下降(U/mg:78.84±7.49比115.48±8.48,P＜0.05),活化型caspase-3、Beclin-1及LC3蛋白表达水平显著增强(caspase-3/β-actin :1.11±0.08 比 0.21±0.02,Beclin-1/β-actin :2.08±0.11 比 0.42±0.03,LC3/β-actin :1.05±0.07 比0.37±0.05,LC3-Ⅱ/LC3 -Ⅰ:1.28±0.14比 0.17±0.02,均P＜0.05).与PCAS组相比,PCAS+NaHS组门静脉血清FD-4水平明显降低〔FD-4(mg/L):5.59±0.48比11.95±0.59,P＜0.05〕,小肠组织病理损伤及炎性细胞浸润程度减轻,小肠损伤评分明显下降(分:2.18±0.47比4.21±0.37,P＜0.05),ZO-1阳性细胞明显增加,小肠组织中MDA含量、MPO活性显著下降〔MDA(nmol/mg):2.65±0.31比3.65±0.32,MPO(U/g):251±21比362±35,均P＜0.05〕,而SOD活性显著升高(U/mg :96.86±7.52比78.84±7.49,P＜0.05),活化型caspase-3、Beclin-1及LC3蛋白表达显著减弱(caspase-3/β-actin :0.72±0.06比1.11±0.08,Beclin-1/β-actin :0.96±0.08比2.08±0.11,LC3/β-actin :0.72±0.06比 1.05±0.07,LC3-Ⅱ/LC3 -Ⅰ:0.83±0.09比 1.28±0.14,均P＜0.05).结论 外源性H2S可减轻CA家兔复苏后肠黏膜屏障损伤,其机制可能与上调紧密连接蛋白ZO-1表达以及抑制氧化应激、炎症反应、凋亡和自噬相关.

目的:探讨天王补心丹加减对对氯苯丙氨酸(PCPA)所致失眠大鼠硫氧还蛋白(Trx)系统抗氧化损伤的作用机制.方法:60只雄性SD大鼠随机分为空白组、造模组.造模组以腹腔注射PCPA造模,注射剂量为150 mg·kg-1,间断注射7d.造模成功后,依次分为模型组(等容生理盐水),天王补心丹加减低、中、高剂量组(8.8,17.6,35.2 g·kg-1·d-1)和艾司唑仑组(0.1 mg·kg-1 ·d-1),每组10只.自发活动视频分析系统监测大鼠昼夜活动节律,透射电镜观察大鼠下丘脑视交叉上核(SCN)形态及细胞器完整性,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平,免疫荧光(IF)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测SCN细胞硫氧环蛋白2(Trx2),硫氧环蛋白还原酶2(TrxR2)的表达.结果:与空白组比较,模型组大鼠活动时间显著增加(P＜0.01),昼夜节律紊乱,线粒体嵴断裂,数量减少,排列紊乱,伴空泡化和髓鞘样变,SOD,GSH-Px活性下降且MDA含量显著升高(P＜0.01),Trx2的蛋白表达量显著降低(P＜0.01),TrxR2蛋白表达量显著增加(P＜0.01);与模型组比较,天王补心丹中、高剂量组能够明显改善大鼠昼夜节律紊乱,减少活动时间(P＜0.01),同时线粒体水肿程度减轻,部分嵴尚完整,SOD,GSH-Px活性升高,MDA水平明显降低(P＜0.05,P＜0.01),Trx2蛋白表达明显升高,TrxR2蛋白表达明显下降(P＜0.05).结论:天王补心丹加减对失眠模型大鼠的改善作用与调控Trx抗氧化系统中Trx2与TrxR2的蛋白表达有关.

目的:探讨逐瘀通脉胶囊联合法舒地尔对2型糖尿病(T2DM)下肢动脉硬化闭塞症(ASO)患者疗效及应激状态的影响.方法:将100例T2DM合并ASO患者分为研究组(50例)和对照组(50例),对照组采用法舒地尔治疗,研究组采用逐瘀通脉胶囊联合法舒地尔治疗,对比两组治疗前后动脉硬化指标[踝肱指数(ABI)、足背动脉血流量]、血流变指标[血浆黏度、全血黏度(低切)、全血黏度(高切)]、凝血功能指标[血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)]、氧化应激指标[丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、硫氧还蛋白(TRX)、髓过氧化物酶(MPO)活性]、跛行距离,观察两组疗效和安全性.结果:研究组治疗后ABI、足背动脉血流量、跛行距离高于对照组[(0.99±0.16) vs (0.81±0.12),(0.79±0.27) vs (0.57±0.09) m/(s· cm2),(569.93±135.34) vs (415.72±112.28) m/10 min],差异具有统计学意义(P＜0.05).研究组治疗后血浆黏度、全血黏度(低切)、全血黏度(高切)、FIB低于对照组[(2.00±0.26) vs (2.31±0.32) mPa/s,(13.79±1.27) vs (20.57±2.05)mPa/s,(8.93±0.34)vs(11.72±1.28)mPa/s,(2.73±0.35) vs (3.49±0.43) g/L,P＜0.05],PT、APTT高于对照组[(12.85±2.63) vs (11.93±1.74)s,(42.95±5.36) vs (36.95±4.38)s,P＜0.05].研究组治疗后MDA、TRX、MPO低于对照组[(2.10±0.96) vs (4.31±1.32) mmol/L,(48.93±10.34) vs (78.72±12.28) ng/mL,(72.85±15.63) vs (96.03±12.14) U/L,P＜0.05],SOD高于对照组[(163.79±21.27)vs(110.57±12.05)nU/mL,P＜0.05].研究组总有效率高于对照组(94.00％vs 80.00％,x2=13.025,P＜0.05),两组不良反应率(6.00％ vs 10.00％,x2=1.035,P＞0.05)对比无差异.结论:逐瘀通脉胶囊联合法舒地尔可显著改善T2DM合并ASO患者临床症状,改善下肢局部血液循环,抑制应激反应,疗效确切,安全性高.

目的 研究萝卜硫素对矽肺模型大鼠肺组织纤维化、氧化应激及抗氧化通路核因子E2相关因2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)通路的影响.方法 选择SD大鼠并随机分为对照组、模型组和萝卜硫素组,对照组支气管灌注生理盐水,后两组给予1 ml含有50 mg/ml二氧化硅的生理盐水支气管灌注以建立矽肺模型.造模当天开始,萝卜硫素组给予5 mg/kg萝卜硫素腹腔注射,对照组和模型组给予等剂量生理盐水腹腔注射,1次/d,连续8周.取肺组织进行HE染色并检测胶原蛋白、氧化应激介质的含量及Nrf2/ARE通路分子的表达量.结果 与对照组比较,模型组大鼠HE染色可见明显的病理变化且肺组织中胶原蛋白-I(Col-I)、胶原蛋白-III(Col-III)、丙二醛(MDA)的含量及Nrf2、ARE的表达量明显增多,超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)的含量及Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap-1)的表达量明显减少,差异均有显著性(P<0.05);与模型组比较,萝卜硫素组大鼠HE染色可见病理变化减轻且肺组织中Col-I、Col-III、MDA的含量及Keap-1的表达量减少,SOD、GSH的含量及Nrf2、ARE的表达量明显增多,差异均有显著性(P<0.05).结论 萝卜硫素能够缓解矽肺模型大鼠肺组织纤维化及氧化应激,且该作用与Nrf2/ARE通路的激活有关.

目的 探讨大鼠肉瘤同源基因A/Rho相关螺旋卷曲蛋白激酶(RhoA/ROCK)信号通路在肿瘤坏死因子α(TNF-α)促进单核细胞增生性李斯特(Lm)感染致内皮细胞通透性升高的调控作用.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为未感染细胞对照组、TNF-α处理组(100 ng/mL TNF-α处理2h)、Lm感染组(以MOI=10的Lm感染2h,加入庆大霉素杀菌0.5h)、TNF-α处理的Lm感染组(Lm感染组细胞加入100 ng/mL TNF-α处理2h)、Y-27632联合TNF-α处理的Lm感染组(细胞用50 μmol/L ROCK抑制剂Y-27632处理30 min,再如上进行Lm感染和TNF-α刺激).Western blot法检测HUVEC的RhoA、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、闭合蛋白(occludin)、ROCK蛋白水平,检测辣根过氧化物酶(HRP)渗漏量分析HUVEC通透性变化,用异硫氰酸荧光素(FTTC)标记的鬼笔环肽染色检测纤维型肌动蛋白(F-actin)细胞骨架的改变.结果 TNF-α可降低Lm感染的内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、occludin的表达,促进其通透性升高、细胞骨架重排,并上调RhoA和ROCK的表达.ROCK抑制剂Y-27632可明显抑制TNF-α所致的HUVEC细胞骨架重排及通透性增高的作用.结论 TNF-α促进感染Lm的血管内皮细胞通透性增高可能通过RhoA/Rock信号通路调控.