目的:制备伏立诺他(SAHA)羟丙基-β-环糊精包合物(SAHA-CD)滴眼液，观察其对小鼠碱烧伤角膜新生血管(CNV)的抑制作用。方法:使用羟丙基-β-环糊精包合的方法制备SAHA质量分数分别为0.1%、0.2%和0.4%的SAHA-CD滴眼液，采用高效液相色谱法测定滴眼液中SAHA含量。取SPF级昆明小鼠75只，建立右眼角膜碱烧伤模型，采用随机数字表法随机将小鼠分为5个组，每组15只，其中0.1% SAHA-CD组、0.2%SAHA-CD组、0.4%SAHA-CD组和地塞米松组，造模后即刻分别给予相应药物点眼，模型对照组即刻给予0.9%氯化钠注射液点眼，每日4次，每次5 μl，连续6 d。荧光素钠染色观察角膜上皮愈合情况并采用EyeStudio软件计算角膜上皮缺损面积。制作角膜铺片并采用ImageJ软件计算CNV的长度和面积。采用苏木精-伊红染色法观察角膜组织病理特征。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测角膜组织中血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)质量浓度。结果:制备的质量分数为0.1%、0.2%和0.4%的SAHA-CD滴眼液中SAHA含量分别为标示量的97.62%、98.33%和98.14%。造模后，各组模型眼角膜水肿、混浊。给药第6天，各组CNV长度和面积总体比较差异均有统计学意义( F＝7.655、8.802，均 P<0.01)，其中0.2%SAHA-CD组、0.4%SAHA-CD组和地塞米松组CNV面积显著小于模型对照组，0.1%SAHA-CD组、0.2%SAHA-CD组和地塞米松组CNV长度显著小于模型对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。给药第3天和第6天，各组角膜中VEGF、bFGF和MMP-9蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(第3天： F＝6.345、7.149、18.650，均 P<0.01；第6天： F＝6.749、5.105、5.023，均 P<0.01)，其中0.2%SAHA-CD组角膜中VEGF、bFGF和MMP-9蛋白表达量均低于0.1%SAHA-CD组、0.4%SAHA-CD组和模型对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:SAHA-CD滴眼液可抑制小鼠碱烧伤后CNV的形成和发展。

目的:探索依托泊苷(VP-16)对人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus-1, HIV-1)潜伏感染的激活作用并研究其潜在的分子机制。方法:将HIV-1潜伏感染细胞系J-Lat分为二甲基亚砜(DMSO)处理组、VP-16处理组及伏立诺他(SAHA)处理组，利用流式细胞技术检测细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, GFP)阳性比例，评估高浓度VP-16对HIV-1潜伏感染的激活效率；通过流式细胞技术检测VP-16在不同作用浓度及不同作用时间下对HIV-1潜伏感染的激活效果；通过流式细胞技术检测在VP-16作用下J-Lat细胞中CD25、CD69及白介素-6(interleukin-6, IL-6)的表达情况；运用双荧光素酶报告系统检测VP-16对HIV-1长末端重复序列(long terminal repeat, LTR)转录水平的影响；使用蛋白质印迹技术(western blot, WB)检测VP-16作用下蛋白沉默信息调节因子1(silent information regulator 1, SIRT1)及核因子κB(nuclear factor κB, NF-κB)乙酰化p65的表达水平；利用慢病毒介导的靶向SIRT1短发夹RNA(SIRT1 short-hairpin RNA, SIRT1-shRNA)敲低J-Lat细胞的SIRT1表达并检测相应的激活效果。结果:流式细胞技术分析结果显示，VP-16能够特异性地激活HIV-1潜伏感染细胞系J-Lat，其激活效果存在浓度依赖和时间依赖；VP-16激活HIV-1潜伏感染的同时会一定程度上调J-Lat细胞的CD25及CD69，但IL-6的表达水平无明显变化；双荧光素酶报告实验提示VP-16通过NF-κB信号通路正向调控HIV-1 LTR的转录水平；WB结果表明VP-16能够抑制SIRT1的蛋白表达并促进NF-κB p65的乙酰化水平；慢病毒SIRT1-shRNA成功敲低J-Lat细胞中SIRT1的mRNA和蛋白表达，能够有效激活HIV-1潜伏感染。结论:VP-16通过抑制SIRT1表达从而上调NF-κB p65的乙酰化水平，继而促进HIV-1 LTR的转录并最终激活HIV-1的潜伏感染。

目的:探索高原性肺高血压（HAPH）患者外周血单个核细胞基因表达特征，挖掘可能的发病机制和潜在的治疗药物。方法:本研究为现况性病例对照研究，从世居云南省丽江市的纳西人群中，采用超声心动图筛选出6例HAPH受试者及4例正常对照，作为HAPH组和对照组。收集两组受试者的一般临床资料并采集肺动脉压力相关指标。采集受试者的外周血单个核细胞进行RNA测序，对比两组间基因表达差异，进行富集分析、转录因子基因表达调控网络构建及药物相似性分析；并与特发性肺高血压（IPAH）公共数据进行对比、分析两种亚型的疾病在生物学过程及信号通路上的相似性。结果:6例HAPH患者年龄（68.1±8.3）岁，男性2例（2/6）；4例对照组受试者年龄（62.3±10.9）岁，男性2例（2/4）。HAPH组三尖瓣反流速度、三尖瓣压力梯度及肺动脉收缩压较对照组明显升高（ P<0.05）。RNA测序结果示，与对照组相比，HAPH组外周血单个核细胞中显著高表达基因有174个，显著低表达基因有169个，这些差异表达的基因与220个生物学过程、52个分子功能和23个细胞组分相关。筛选到HAPH与IPAH共同的生物学过程21个、信号通路2条，多数与炎症和免疫反应相关。经转录因子基因表达调控网络构建筛选到ZNF384、SP1、STAT3等与HAPH高相关性的转录因子。药物相似性分析筛选出了曲古菌素A和伏立诺他两种潜在的治疗HAPH的药物。 结论:HAPH患者与正常人群外周血单核细胞基因表达上存在较大的差异，炎症和免疫功能紊乱是主要致病因素。曲古菌素A和伏立诺他是治疗HAPH的潜在药物。

目的:探讨伏立诺他作为组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂应用于促进软骨炎症修复作用及其机制。方法:首先进行大鼠体内实验，设置为对照组和退变组，造模成功后进行软骨取材，取大鼠软骨，进行切片行免疫组织化学HDAC-2染色，继而提取cDNA和蛋白质分别进行HDAC-2的基因、蛋白检测。然后于体外实验部分，体外分离培养大鼠软骨细胞，设置为对照组、白细胞介素-1组、白细胞介素-1＋伏立诺他组，通过实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测HDAC-2、Ⅱ型胶原(Col2a1)、蛋白多糖(Acan)的基因表达，使用蛋白质印迹法(Western blot)检测乙酰化及总H3组蛋白表达，使用免疫荧光法标记HDAC-2蛋白。确定伏立诺他的效应后，最终使用大鼠退变模型，设置为退变组和退变＋伏立诺他组，于注射7 d后进行取材，并做番红O染色及阿利新蓝染色。两组间比较行 t检验。 结果:退变组大鼠软骨的HDAC-2免疫组化蛋白分布高于对照组，其基因转录活性显著升高(0.96±0.05比1.34±0.12， t＝5.83， P<0.01)。体外实验部分，白细胞介素-1诱导HDAC-2的基因表达显著升高(0.87±0.11比1.88±0.64， t＝3.12， P<0.05)且免疫荧光强度增加。伏立诺他处理后，软骨细胞的H3组蛋白乙酰化比例升高(对照组0.41±0.17比伏立诺他组1.09±0.12， t＝5.63， P<0.01)。白细胞介素-1可抑制软骨细胞的Col2a1及Acan转录活性(4.86±0.64比2.28±0.49， t＝5.53， P<0.01；2.72±0.75比1.29±0.31， t＝3.06， P<0.05)，而加入伏立诺他后，软骨细胞的Col2a1及Acan转录活性恢复(2.28±0.49比4.05±0.72， t＝3.53， P<0.05；1.29±0.31比2.58±0.58， t＝3.38， P<0.05)。后续体内实验设置退变组及退变＋伏立诺他组，可见退变＋伏立诺他组软骨的缺损、平整度、胶原纤维分布均优于退变组。 结论:伏立诺他抑制HDAC-2活性，调控组蛋白去乙酰化，提高Ⅱ型胶原及蛋白多糖表达，促进骨炎症损伤修复。

目的:研究中药砒霜的主要成分三氧化二砷(As2O3)抑制宫颈癌Hela细胞生长、侵袭、迁移的机制,观察As2O3对宫颈癌Hela细胞组蛋白脱乙酰基酶1(HDAC1)、E-钙黏蛋白表达的影响,以及联合HDAC1抑制剂伏立诺他(SAHA)的协同作用.方法:以宫颈癌Hela细胞作为载体,随机分为空白对照组、As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组4组,采用CCK-8法测定不同药物浓度对Hela细胞活性的抑制情况,并筛选后续实验药物浓度;采用Transwell法、划痕法检测各组药物对Hela细胞侵袭、迁移能力的影响;采用实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白免疫印迹法检测HDAC1和E-钙黏蛋白的mRNA表达情况与蛋白表达情况.结果:随着各组药物浓度增加,Hela细胞的活性逐渐降低.As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的Hela细胞活性均低于空白对照组(P＜0.05).As2O3 组、SAHA组、As2O3+SAHA组穿越Transwell小室膜的细胞数量均少于空白对照组(P＜0.05);As2O3+SAHA组的细胞数量少于As2O3组、SAHA组(P＜0.05);As2O3组的细胞数量少于SAHA组(P＜0.05).As2O3 组、SAHA组、As2O3+SAHA组的Hela细胞迁移百分比均低于空白对照组(P＜0.05);As2O3+SAHA组的Hela细胞迁移百分比低于As2O3组、SAHA组(P＜0.05);As2O3组的Hela细胞迁移百分比低于SAHA组(P＜0.05).As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平均低于空白对照组(P＜0.05);As2O3组的HDAC1 mRNA表达水平高于SAHA组(P＜0.05);As2O3+SAHA组的HDAC1 mRNA表达水平低于As2O3组、SAHA组(P＜0.05).As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平均高于空白对照组(P＜0.05);As2O3+SAHA组的E-钙黏蛋白mRNA表达水平高于As2O3 组、SAHA组(P＜0.05).As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平均低于空白对照组(P＜0.05);As2O3+SAHA组的HDAC1蛋白表达水平低于As2O3组、SAHA组(P＜0.05).As2O3组、SAHA组、As2O3+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平均高于空白对照组(P＜0.05);As2O3+SAHA组E-钙黏蛋白的蛋白表达水平高于As2O3组、SAHA组(P＜0.05).结论:As2O3抑制Hela细胞的最佳浓度为8 μmol/L,联合SAHA时,最佳抑制浓度为4 μmol/L.As2O3可能通过抑制HDAC1的表达,同时促进升高E-钙黏蛋白的表达,与SAHA发挥协同作用抑制Hela细胞生长、侵袭、迁移.

目的 探讨伏立诺他(SAHA)调节白细胞介素6(IL-6)/信号转导及转录活化因子3(STAT3)信号通路对干燥综合征(SS)大鼠免疫功能的影响.方法 采用弗氏完全/不完全佐剂免疫诱导法构建SS大鼠模型,并将造模成功的大鼠分为模型组,SAHA低、中、高剂量组(25、50、100 mg/kg)和SAHA高剂量+IL-6/STAT3信号通路激活剂组(100 mg/kg SAHA+0.05 mg/kg重组IL-6蛋白),每组10只;另选10只健康大鼠为对照组.各组大鼠腹腔注射相应药液/生理盐水,每天1次,连续2周.检测各组大鼠的饮水量(1 d)、唾液流量(10 min)和脾脏指数、颌下腺指数,观察其颌下腺组织病理变化,检测其血清干扰素γ(IFN-γ)、IL-17、IL-10水平和外周血T淋巴细胞亚群分化情况,并检测其颌下腺组织中IL-6/STAT3信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与对照组比较,模型组大鼠颌下腺组织可见明显的淋巴细胞局灶性浸润,腺泡细胞明显减少;其饮水量,脾脏指数,颌下腺组织病理评分,血清IFN-γ、IL-17水平,外周血辅助性T细胞1(Th1)、Th17比例,以及颌下腺组织中IL-6蛋白的表达水平和STAT3蛋白的磷酸化水平均显著升高(P＜0.05);唾液流量、颌下腺指数、血清IL-10水平和外周血调节性T细胞(Treg)比例均显著降低(P＜0.05).与模型组比较,SAHA各剂量组大鼠颌下腺组织病理损伤均有所减轻,各定量指标均显著改善,且有剂量依赖性(P＜0.05);重组IL-6蛋白可逆转SAHA对大鼠上述指标的改善作用(P＜0.05).结论 SAHA可减轻SS大鼠的颌下腺损伤,调节其免疫功能,上述作用可能与抑制IL-6/STAT3信号通路有关.

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂伏立诺他(suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA)对糖尿病大鼠肾小管间质纤维化的作用及其可能机制.方法 SD大鼠分为3组:对照组(Con)、糖尿病(diabetes mellitus,DM)组及SAHA治疗组,每组9只.以链脲菌素(streptozotocin,STZ)诱导糖尿病,于成模第9周治疗组给予剂量为25 mg· kg-1·d-1的SAHA灌胃.16周末处死大鼠,检测相应生化指标,观察肾组织病理改变,免疫组化及Western印迹检测肾组织转化生长因子β1 (transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad2、Smad3、Smad7、胶原蛋白Ⅰ (collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)和胶原蛋白Ⅲ(collagenⅢ,Col-Ⅲ)的定位及蛋白表达.结果 与Con组相比,DM组大鼠血糖、尿微量白蛋白/尿肌酐之比值(urinary trace albumin/urinarycreatinine,ACR)、三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)增加,肾小管间质纤维化病变增加,肾组织中Smad7蛋白减少,TGF-β1、磷酸化(p)-Smad2和p-Smad3蛋白增多,Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白在间质沉积增多,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与DM组比较,SAHA治疗组ACR降低,肾小管间质的纤维化病变减轻,Smad7蛋白表达增加,TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达减少,Col-Ⅰ和Col-Ⅲ蛋白在间质的沉积减少,差异均有统计学意义(均P＜ 0.05).结论 SAHA可能通过提高Smad7蛋白水平,恢复TGF-β1信号通路的适度转导,进而减轻糖尿病大鼠肾小管间质纤维化病变.

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA,商品名伏立诺他)是否能通过提高限制型心肌病小鼠野生型心肌肌钙蛋白I(WT-cTnI)的表达以改善其舒张功能.方法 选取雄性3月龄cTnI R193H限制型心肌病模型小鼠16只并随机分为SAHA组(n=6)、二甲基亚砜(DMSO)组(n=5)和对照组(n=5),分别给予SAHA 50mg/kg、DMSO 1ml/kg、生理盐水1ml/kg皮下注射,持续56d.采用Western blotting检测小鼠心肌细胞核组蛋白H3的乙酰化水平(acH3)及cTnI蛋白表达水平,采用染色质免疫共沉淀法(ChIP)比较cTnI编码基因Tnni3启动子GATA和MEF2关键区域acH3水平,采用荧光定量PCR检测Tnni3的mRNA表达水平,应用小动物高频超声仪评估小鼠心功能.结果 与对照组比较,SAHA组心肌细胞核acH3水平和Tnni3启动子关键区域acH3水平均明显升高(P＜0.05);与DMSD组比较,SAHA组心肌细胞核acH3水平无明显改变(P＞0.05),Tnni3启动子关键区域的acH3水平明显升高(P＜0.05).3组cTnI蛋白和Tnni3mRNA表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,DMSO组心脏收缩指标左室缩短分数(LVFS)、左室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、心输出量(CO)及舒张指标等容舒张时间(IVRT)、E峰减速时间(DT)、舒张早期充盈血流(E峰)、舒张晚期充盈血流(A峰)无明显改变(p＞0.05),Tei指数及E/A比值明显升高(P＜0.05);SAHA组IVRT、DT明显延长(p＜0.05),Tei指数明显增高(P＜0.05),E峰、A峰明显降低(P＜0.05),E/A比值明显改变,LVFS、LVEF、SV、CO明显降低(p＜0.05).与DMSO组比较,SAHA组IVRT明显升高(P＜0.05),E峰、E/A比值明显下降(P＜0.05),LVFS、LVEF、CO明显降低(P＜0.05).结论 50mg/kg SAHA干预可上调限制型心肌病小鼠心肌细胞Tnni3启动子GATA&MEF2区域acH3水平,但对cTnI蛋白和Tnni3 mRNA表达以及心脏舒张功能可能没有改善作用,甚至会损害其舒张功能和收缩功能.

目的 建立顶空毛细管气相色谱法测定伏立诺他原料药中有机溶剂残留.方法 色谱柱为DB-5石英毛细管柱(30m×0.53 mm×3 μm),载气为氮气,检测器为氢火焰离子化检测器,以程序升温方式使伏立诺他中石油醚(其主要组分)、甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯、四氢呋喃达到完全分离;并采用GC-MS对石油醚(60～90℃)中主要组分进行分析鉴定,其主要组分为2-甲基戊烷、3-甲基戊烷和正己烷,这3个主要组分的限度按正己烷残留量的限度试验.结果 8种有机溶剂在相应的检测范围内与峰面积线性关系良好,回收试验符合要求.伏立诺他原料药中除了甲醇和乙醇外,其他有机溶剂均未检出.结论 该方法灵敏、准确,适用于伏立诺他原料药质量控制中的有机残留溶剂检查.

目的:检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓单个核细胞(BMMNCs)红系转录因子(GATA-1),组蛋白去乙酰化酶(HDAC1)的表达水平,分析经HDAC抑制剂(HDACI)伏立诺他(SAHA)、扶正、祛邪中药复方对不同证型MDS患者BMMNCs干预后的HDAC1,GATA-1表达变化,探讨MDS红系转录与表观遗传学组蛋白去乙酰化的可能关联性,以及扶正、祛邪中药对其干预的作用机制.方法:收集确诊MDS患者正虚组10例,瘀毒组5例以及正常组3例BMMNCs进行体外培养.采用实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测扶正、祛邪药物及SAHA干预前后HDAC1和GATA-1 mRNA和蛋白水平.结果:MDS患者GATA-1 mRNA和蛋白水平均低于正常人(P＜0.05),HDAC1mRNA和蛋白水平均高于正常人(P＜0.05),正虚型患者与瘀毒型患者间未发现明显差异;经HDACI(SAHA)干预后HADC1水平下降,同时GATA-1水平显著上升(P＜0.01),扶正、祛邪中药能上调各组GATA-1表达水平,下调HADC1表达水平(P＜0.01).结论:表观遗传学组蛋白乙酰化与红系转录水平异常与MDS发病有关,扶正、祛邪中药对正虚、瘀毒型MDS患者BMMNCs的组蛋白乙酰化和GATA-1表达水平均具有调控作用.在MDS患者的BMMNCs中,HDAC1与GATA-1表达呈负相关趋势,可能存在经HDAC调控红系转录的信号通路,中药具有HDACI类似的干预作用,但扶正、祛邪中药间尚未发现明显差异.