目的:分离并筛选健康女性阴道中的卷曲乳酸杆菌并评估其体外益生特性，为进一步筛选有效治疗女性生殖系统疾病的微生态制剂提供新型菌株。方法:2023年4月至2023年5月期间采集海军军医大学第二附属医院体检中心10名健康女性阴道分泌物并分离筛选卷曲乳酸杆菌，通过16S rRNA序列鉴定卷曲乳酸杆菌，并测定其生长特性、产酸能力、产H 2O 2能力、抑菌能力。 结果:从10名健康女性阴道内共分离并鉴定出39株卷曲乳酸杆菌。本实验卷曲乳酸杆菌的生长对数期为10~40 h，其中卷曲乳酸杆菌4-5及卷曲乳酸杆菌6-7生长速度较快。本实验卷曲乳酸杆菌的pH在8~24 h内下降速度较快，48 h菌液的pH稳定在3.89~4.05之间，其中卷曲乳酸杆菌6-6、6-7、6-9、6-11的产酸性能较好。筛选的10株卷曲乳酸杆菌均能产H 2O 2，其中卷曲乳酸杆菌4-5、4-11、6-5、6-7产H 2O 2性能较好。卷曲乳酸杆菌6-5、6-7和6-9抑制白假丝酵母菌的效果较好，其抑菌圈直径分别为（20.90±0.31）mm、（20.61±0.70）mm、（21.73±0.37）mm；卷曲乳酸杆菌4-5、6-5和6-7抑制金黄色葡萄球菌的效果较好，其抑菌圈直径分别为（20.95±0.07）mm、（23.52±0.49）mm、（23.49±0.34）mm；卷曲乳酸杆菌6-5、6-6和6-7抑制大肠埃希菌的效果较好，其抑菌圈直径分别为（19.03±0.23）mm、（18.20±0.18）mm、（18.55±0.29）mm。 结论:卷曲乳酸杆菌6-5和卷曲乳杆菌6-7产酸能力、产H 2O 2能力、抑菌活性较好，具有优良的生物学特性，有望成为用于治疗女性生殖系统疾病微生态制剂的备选菌株。

[背景]宁夏贺兰山东麓是中国生态最佳、酿酒葡萄质量最优产区之一,也是中国"葡萄酒地理标志产品"保护区域之一.[目的]筛选宁夏本土优良酵母菌株,比较分析各个酿酒酵母菌株对赤霞珠葡萄酒香气质量的影响,并结合感官评价筛选对葡萄酒风味影响较大的酿酒酵母菌株.[方法]将筛选出的 11 株起酵速度快,而且对高浓度酒精、SO2 和葡萄糖及低酸环境有较强耐受力的酵母菌株进行 26S rDNA 鉴定,确定酵母种类.不同酿酒酵母发酵的赤霞珠葡萄酒通过顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用技术测定其香气化合物.[结果]筛选出 11 株可在 15%酒精度、500 g/L葡萄糖、350 mg/L SO2 和pH 3.0 环境下生长的酵母菌株,对其进行 26S rDNA鉴定,确定10 株酵母菌株H5、G9、G3、X8、G14、L10、H3、X11、Z17、Z24 为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae),一株酵母菌L1 为发酵毕赤酵母(Pichia fermentans).测定的所有香气化合物中,酯类物质是赤霞珠葡萄酒香气物质的主要组分,其次是醇类.其中,乙酸乙酯、乙酸异戊酯、正己酸乙酯、辛酸乙酯、癸酸乙酯、1-辛烯-3-醇和β-大马士酮等的香气活性值较高,对赤霞珠葡萄酒的香气贡献最大,赋予葡萄酒苹果味、香蕉味、蘑菇味、茴香味、甜味等令人愉快的气味.对不同酿酒酵母赤霞珠葡萄酒样香气物质进行聚类分析发现,酒样 G14 和 H3 与商业酵母 XR 最为接近,在对赤霞珠葡萄酒特征香气影响方面较一致.[结论]酿酒酵母G14 和H3 具有良好的酿酒潜力,可以作为本土优良酵母用于葡萄酒发酵,为提高宁夏地区葡萄酒质量奠定基础.

木糖利用能力和抑制物耐受能力优良的工业酿酒酵母菌株以及合理的糖化发酵工艺是纤维素燃料乙醇生产的两个关键.对一株工业酿酒酵母菌的磷酸戊糖途径转醛醇酶基因TAL1进行差异过表达, 评价其在8种典型抑制物存在时对菌株利用木糖的影响;利用TAL1过表达菌株研究油菜秸秆预处理物料中抑制物含量高低对分步糖化发酵 (SHF) 、预糖化-同步糖化发酵 (P-SSF) 和同步糖化发酵 (SSF) 3种不同糖化发酵方式发酵过程的影响, 探讨高固含量发酵的可行性.结果显示, TAL1基因过表达提高了菌株的木糖代谢能力和对8种典型抑制物的耐受能力, 适度过表达菌株表现最优, 有抑制物存在时的木糖消耗速率提升了20％-70％.秸秆预处理物料中抑制物总含量约为4 g/L时, SHF无法正常发酵, SSF的乙醇收率接近70％, 略高于P-SSF;当物料中抑制物总含量下降到约2 g/L时, 3种方式都能顺利发酵, SSF表现最优, 96 h时的乙醇收率为86.5％, 但SSF (96 h) 和P-SSF (112 h) 所需糖化发酵总时间远低于SHF (144 h);总固含量约为25％的分批补料-同步糖化发酵 (FB-SSF) 的乙醇浓度和乙醇收率分别达到54.2 g/L和67.2％.上述结果表明, TAL1基因适度过表达提升了菌株的木糖发酵和抑制物耐受能力, 菌株已具备比较优秀的发酵和耐受抑制物的能力;预处理物料中抑制物含量相对较高时采用SSF或P-SSF工艺, 而抑制物浓度相对较低时, 3种糖化发酵方式都可以采用, 但SSF所需发酵时间最短, 生产能力最高.

为筛选猕猴桃酒专用酵母,通过酵母菌的分离、显微镜观察和杜氏管产气试验、耐受试验、发酵力测定试验以及酵母凝集性试验,筛选出一株性能优良的菌株命名为L36.实验表明,该菌能够耐受的酒精度为14％,可耐受的二氧化硫质量浓度为250 mg/kg,主发酵CO2失重量为15.04 g,凝集性强.利用L36菌株酿造的猕猴桃原酒酒精度可达10.57％ vol,Vc含量可达29.1 mg/100 mL,酸度为11.52 g/L.通过分子生物学鉴定,确定该菌为毕次酵母属.本试验通过从猕猴桃表面筛选出优良的野生酵母,可作为果酒酵母的筛选的参考依据.

筛选出高效降三酰甘油降胆固醇菌株,为新型药物、食品的制备提供优良菌株.从样品中筛选分离出酵母菌株,并测定菌株降三酰甘油能力,采用磷硫铁比色法测定菌株降胆固醇能力,通过耐酸、耐胆盐及毒性实验研究菌株各项性能,通过生理生化及26S rDNA法对菌株进行鉴定.结果 显示,试验筛选出1株高效降脂降胆固醇酵母菌EAM-ZT003T,降三酰甘油能力高达80.2％,菌株具有很好的耐酸、耐胆盐能力,为期42 d的小鼠毒性试验发现,小鼠未出现异常体征,未发现异常死亡,且解剖观察各器官一切正常,菌株经26S rDNA鉴定为解脂亚罗酵母菌(Yarrowia lipolytica).

利用前期筛选得到的优良果酒发酵菌种酿酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae,Sc)和东方伊萨酵母菌(Issatchenkia orientalis,Io),通过混合培养研究其生长规律;以山乌桕蜂蜜为主要发酵基质,通过感官评定和电子鼻比较了混合接种发酵和加曲发酵两种蜂蜜酒产品的感官特性和香气特征.结果 表明,在有氧条件纯培养时,Sc和Io在30 h达到最大生长量都为2.2×108 CFU/mL;而厌氧条件纯培养时,Sc在30 h达到最大生长量为3.5×10 7CFU/mL,Io在45 h达到最大生长量为0.5×107CFU/mL.在有氧混合培养45 h后,Sc和Io的最大生长量分别为10.2×107 CFU/mL和37.9×107 CFU/mL,Sc/Io比率呈下降趋势;在厌氧混合培养条件下,在同一发酵周期内,Sc和Io最大生长量分别为21×106 CFU/mL和1.4×106 CFU/mL,Sc/Io比率先(30 h)上升后下降;有氧培养条件下最大生长量明显高于厌氧培养.感官评定结果,加曲发酵法得分为66.4分,混合发酵法得分为78.2分,混合发酵酿制的蜂蜜酒口感较好,并保留了蜂蜜特有的蜜香.通过电子鼻系统对山乌桕蜂蜜汁和两种不同发酵方法生产的蜂蜜酒进行LDA(线性判别)分析、PCA(主成分)分析,其中LDA分析第一、第二主成分总的贡献率达100％,PCA主成分分析总贡献率为99.94％,表明发酵过程中山乌桕蜂蜜汁的风味发生了变化,且不同发酵方式的山乌桕蜂蜜酒香气具有差异.研究结果为开发利用天然植物资源的发酵精深加工与提高产品质量提供参考依据.

目的 筛选并鉴定出可以抗真菌且益生特性优良的乳杆菌菌株,为研制预防和治疗人体真菌性阴道炎症的微生态制剂奠定坚实的理论基础.方法 利用经典的微生物方法,将健康人体阴道内乳杆菌分离出来;利用发酵工程学、细胞生物学以及药理学方法,将分离出的乳杆菌中益生特性优良且可以抑制白假丝酵母菌的优势菌株筛选出来,利用分子生物学方法,将筛选出的优良乳杆菌菌株进行鉴定.结果 筛选出1株产酸性能优良,产过氧化氢,具有较强黏附能力,且能够抑制白假丝酵母菌的优势乳杆菌菌株,此菌株经鉴定为Lactobacillus crispatus.结论 本实验从健康人体阴道内分离、筛选并鉴定出的1株可抗真菌性能优良乳杆菌菌株SQ004,具有制备预防和治疗人体真菌性阴道炎症微生态制剂主要菌株的条件.

通过简并引物和TAIL-PCR技术从青霉Penicillium sp.C1菌株的基因组DNA中克隆得到一个新的植酸酶基因,命名为phyC1.其结构基因全长1477 bp,5'端包含58 bp的内含子序列,该基因编码472个氨基酸和一个终止密码子,前23个氨基酸为信号肽.将PhyC1的成熟蛋白的编码基因在毕赤酵母菌GS115中高效分泌表达,重组蛋白经硫酸铵沉淀和阴离子交换柱和分子筛纯化后达到电泳纯.对其酶学性质分析表明:重组植酸酶PhyC1最适pH为6.5,在pH5.0-10.0的条件下具有较好的稳定性;重组植酸酶PhyC1最适温度为50℃.与现有商品植酸酶相比,PhyC1具有两个显著的特性,如低温条件下具有高活性,尤其是在低于20℃时;在中性pH 7.0条件下仍具有90％ 以上的相对酶活性,因此,植酸酶PhyC1的优良特性为其在水产行业的应用奠定基础.

为筛选出适合无花果酒发酵的菌株,选用五株商业酵母通过对发酵性能、理化指标、总酚、甲醇、感官评定进行比较分析.实验表明,菌株KD主发酵CO2失重量为14.85 9,酒精度可达11.52％ (V/V),透光率(96.7 T％)显著高于其它菌株(p＜0.05),总酸为3.55g/L酒中总酚含量为0.37 mg/L,甲醇含量为297.19 mg/L显著低于其它菌株(p＜0.05).菌株KD发酵的无花果酒感官评分高于其它菌株发酵的酒,其风格独特,典型优雅.本试验通过从商业酵母中筛选出适合无花果酒发酵的优良酵母,可为无花果酒的生产提供理论依据.

为分析中国本土野生有孢汉逊酵母属Hanseniaspora酵母菌的种间差异和种内差异,构建分子指纹图谱,为优良有孢汉逊酵母资源的遗传多样性分析及开发利用提供科学依据.采用依赖于培养的经典方法包含WL营养培养基、26S rRNA基因D1/D2区域序列分析和5.8S-ITS-RFLP分析进行118株贵州紫云县刺葡萄自然发酵过程中分离的有孢汉逊酵母属酵母菌种水平的鉴定.采用Tandem repeat-tRNA (TRtRNA)指纹图谱法研究有孢汉逊酵母属酵母在两对微卫星引物扩增下的分子指纹图谱,并利用DPS软件分析不同分子指纹图谱类别之间的遗传发育关系.结果 表明,118株贵州紫云县刺葡萄自然发酵过程中分离的野生有孢汉逊酵母属酵母菌,经依赖于培养的经典方法鉴定为3个种,包括Hanseniaspora opuntiae、H.uvarum和H.occidentalis.TRtRNA指纹图谱法的引物对一TtRNASC和5CAG扩增出5类图谱,而引物对二TtRNASC和ISSR-MB扩增出10类图谱,可以表现出所测118株有孢汉逊酵母属的种间差异和种内差异.其中种内差异主要表现在H.uvarum中.总体而言,贵州紫云县刺葡萄自然发酵过程中分离的有孢汉逊酵母属主要为H.opuntiae、H.uvarum和H.occidentalis,其中H.opuntiae和H.uvarum内部表现了不同的TRtRNA分子指纹图谱,表征了种内遗传多样性.