目的 检测不同程度颈动脉狭窄患者动脉粥样硬化斑块与龈下菌斑中的牙周致病菌分布.方法 选取需要进行颈动脉内膜剥脱术的患者50例,按照颈动脉狭窄程度分为重度狭窄组(36例)和完全闭塞组(14例).收集术中分离的颈动脉粥样硬化斑块和龈下菌斑,采用16S rRNA PCR检测伴放线聚集杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,A.actinomycetemcom-itans)、福赛坦纳菌(Tanerella forsythia,T.forsythia)、齿垢密螺旋体(Treponema denticola,T.denticola)、具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,F.nucleatum)和牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)5种牙周致病菌的分布.结果 P.gingivalis、T.denticola、T.forsythia、F.nucleatum在完全闭塞组颈动脉粥样硬化斑块的检出率分别为71.4％、64.3％、42.9％和14.3％,高于在重度狭窄患者中的检出率,其中两组间P.gingivalis、T.denticola检出率差异具有统计学意义(P＜0.05);A.acti-nomycetemcomitans在完全闭塞组斑块中未检出,低于在重度狭窄组的检出率,但差异无统计学意义.P.gingivalis、T.denticola、T.forsythia在完全闭塞组患者龈下菌斑中的检出率分别为85.7％、71.4％和64.3％,同样高于在重度狭窄患者中的检出率,但差异无统计学意义(P＞0.05).此外,P.gingivalis、T.denticola、T.forsythia在颈动脉粥样硬化斑块和龈下菌斑中的检出率均显著高于F.nucleatum和A.actinomycetemcomitans(P＜0.05).结论 在颈动脉粥样硬化斑块和龈下菌斑中P.gingivalis、A.actinomycetem-comitans、F.nucleatum、T.denticola、T.forsythia分布具有差异性.P.ginglvalis和T.denticola在颈动脉完全闭塞患者的颈动脉粥样硬化斑块中检出率明显较高,可能与颈动脉粥样硬化的严重程度密切相关.

伴放线聚集杆菌是一种革兰氏阴性兼性厌氧菌,是牙周炎的主要致病菌之一,具有多种毒力因子,不仅能损害牙龈上皮细胞(HGECs)屏障结构,逃避宿主的免疫防御,还能向深层组织入侵,破坏牙周膜和牙槽骨.而伴放线聚集杆菌与HGECs的相互作用是细菌入侵牙周组织的第一步,也是菌体引起机体免疫反应的关键.本文就伴放线聚集杆菌在HGECs上的黏附与定植,与HGECs的相互作用两方面的研究作一综述.

目的:探究褪黑素与盐酸米诺环素联合使用对牙周致病菌混合生物膜的抑制作用,探索牙周抗菌斑药物治疗的新方法.方法:通过微量液体稀释法分别测定褪黑素和盐酸米诺环素对牙周主要致病菌,戈登链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),应用微量棋盘稀释法检测药物联合应用对各致病菌的抑菌浓度分数指数(FICI),采用结晶紫染色法评估药物联合应用对单菌及混合菌生物膜的影响.应用激光共聚焦扫描显微镜评估药物联合应用对混合菌生物膜的抑制及离散作用.结果:褪黑素对戈登链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌、伴放线聚集杆菌均具有显著抑制作用,其MIC值均为1%,MBC值均为2%;对上述混合菌的MIC值为2%,MBC值为 4%.褪黑素联合盐酸米诺环素对牙龈卟啉单胞菌和伴放线聚集杆菌生长的抑制表现为协同作用,对戈登链球菌、具核梭杆菌和混合菌悬液均表现为相加作用.与对照组相比,褪黑素与盐酸米诺环素联合应用可显著提高对牙周各致病菌和混合菌种生物膜的抑制和离散效果,其中实验组浓度为 1%+1/2MIC时,对单菌种和混合多菌种生物膜的抑制作用提高最显著(P<0.05),当药物浓度为 1%+MIC时,对生物膜的离散作用增长最显著(P<0.05),其抑制和清除效果均高于单独应用浓度为 2MIC的盐酸米诺环素.结论:褪黑素联合盐酸米诺环素可显著提高对牙周致病菌斑生物膜的抑制能力,有望在牙周炎的辅助治疗中发挥作用.

目的:探讨非手术治疗对侵袭性牙周炎不同牙周袋深度位点的影响及可疑致病微生物特性分析.方法:以笔者医院2017年5月-2018年5月收治的30例侵袭性牙周炎患者为对象,均展开非手术治疗,每个象限取1个位点,分析治疗前后不同位点疗效及可疑致病微生物的特性.结果:30例患者,共取1 20个位点,治疗6个月后牙周袋深度减少＞2mm的位点牙周袋深度、邻面附着丧失、出血指数均较牙周袋深度减少≤ 2mm的位点高,差异有统计学意义(P＜0.05),两者菌斑指数对比差异无统计学意义(JP＞0.05);治疗6个月后,牙周袋深度减少＞ 2mm的位点琥珀酸、乙酸、丙酸、丁酸浓度较牙周袋深度减少≤2mm的位点高,差异有统计学意义(P＜0.05),有机酸比较则差异无统计学意义(P＞0.05);治疗6个月后,牙周袋深度减少＞ 2mm的位点齿垢密螺旋体检出率较牙周袋深度减少≤2mm的位点高,差异有统计学意义(P＜0.05),红色复合体微生物牙龈卟啉单胞菌、福赛坦氏菌、核梭杆菌、中间普氏菌、伴放线聚集杆菌检出率比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:侵袭性牙周炎疗效受牙周袋深度影响,经非手术治疗后牙周袋较深的位点仍然有感染存在,需持续抗感染治疗.

目的 探讨乳腺肉芽肿性小叶性乳腺炎的临床病理学特征.方法 收集上海中医药大学附属龙华医院2015年1月至2017年11月病理诊断为肉芽肿性小叶性乳腺炎手术切除标本300例及患者资料.常规石蜡制片,HE染色,116例行革兰染色.采用免疫组织化学EnVision法检测CD3、CD20、CD68、IgG、IgG4、CD38、CD138的表达.结果 本组患者年龄23～47岁,中位年龄32岁.患者均为女性,96.7%(290/300)有哺乳史.病变发生于左乳143例,右乳138例,双侧乳腺19例.39.7% (119/300)患者血清泌乳素升高,37.0%(111/300)红细胞沉降率升高,15.7%(47/300)合并下肢结节性红斑或关节肿痛.组织学形态为以小叶为中心的化脓性肉芽肿性炎,可伴随小叶内及小叶间导管扩张,合并导管扩张症者16例.肉芽肿病变中中性粒细胞聚集带外周CD3+淋巴细胞多于CD20+淋巴细胞.51.7%(60/116)病灶可见革兰阳性杆菌.结论 肉芽肿性小叶性乳腺炎有其独特的组织学特征,该病可能与棒状杆菌感染有关,患者可伴随血清泌乳素及红细胞沉降率升高.发病年龄、部位及病史对其诊断及鉴别诊断有重要意义.

目的:研究赤藓糖醇对牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)、伴放线聚集杆菌(Aggrgatibacter actinomycetemcomitans,Aa)和粘性放线菌(Actinomyces viscous,Av)生长的影响,探讨不同浓度赤藓糖醇作用后的Pg对牙周膜细胞炎症相关细胞因子mRNA表达水平的影响.方法:将Pg、Aa、Av3种致病菌接种于0、2、4、8、16、32、64、128 g/L的赤藓糖醇-BHI液中,37℃厌氧培养一定时间,检测其最低抑菌浓度.将Pg分别接种于MIC、1/2、1/4、1/8MIC 4个赤藓糖醇质量浓度的培养基以及不含赤藓糖醇的培养基,离心并清洗后,加入细胞DMEM培养基重悬,与培养至第4代的人牙周膜细胞共培养24 h,弃上清,裂解细胞,提取总RNA,反转录,实时荧光定量PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA相对表达量.采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析.结果:赤藓糖醇对3种细菌的最低抑菌浓度分别为Pg:64 g/L,Aa:128 g/L,Av:128 g/L.不同浓度赤藓糖醇条件下培养的细菌,刺激牙周膜细胞产生IL-1β、IL-6、TNF-α的能力不同.赤藓糖醇浓度为8 g/L时,炎症因子量与不加赤藓糖醇的对照组无显著差别;浓度升高达到16 g/L时,IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的相对表达量有所降低,且浓度越高,炎症因子释放越少;但所有实验组炎症因子量始终高于未加细菌的空白对照组(P＜0.05).结论:赤藓糖醇对Pg、Aa、Av的生长能力有抑制作用,且在一定范围内,赤藓糖醇质量浓度越高,抑制效果越明显.赤藓糖醇还可通过某种方式对致病菌毒力因子起抑制作用,进而降低Pg的牙周致炎性,减少牙周膜细胞IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA相对表达量.

目的:本课题通过制备氧化石墨烯GO(Graphene oxide)并将其与伴放线聚集杆菌细菌(actinobacillus actino-mycetemcomitans,Aa)共培养,观察细菌的生长与增殖等情况,了解不同浓度及横向尺寸对GO抗菌效果的影响.方法:采用改良Hummers法将石墨制备成GO,配置溶液进行超声震荡,通过原子力显微镜、拉曼光谱等技术表征GO.将Aa分别与不同浓度和不同横向尺寸的GO溶液进行共培养2 h.通过MTT实验,菌落计数,活死细菌染色等方法,对GO的抗菌效果进行评估.结果:横向尺寸相同时,高浓度的GO溶液处理组的细菌失活率,明显高于低浓度处理组,差异具有统计学意义;相同浓度,不同横向尺寸的GO溶液处理细菌2 h后,细菌的失活率无明显差异.结论:GO的抗菌作用呈现浓度和处理时间依赖性,GO横向尺寸对其抗菌效果影响较小.

目的:制备抗伴放线聚集杆菌的卵黄抗体,研究其体外生物活性,为卵黄抗体被动免疫治疗牙周疾病提供依据.方法:用甲醛灭活的伴放线聚集杆菌免疫产蛋母鸡,收集卵黄液,用水稀释法提取卵黄抗体,采用二步盐析和超滤的方法对其进行纯化,SDS-PAGE分析卵黄抗体的相对分子量,ELISA检测卵黄抗体的效价,间接免疫荧光检测卵黄抗体的特异性,通过伴放线聚集杆菌凝集实验和生物被膜形成实验分析卵黄抗体的活性.结果:卵黄抗体具有较高效价和纯度,卵黄抗体的效价在初次免疫48 d后达到峰值(1:10240)并持续30 d.间接免疫荧光表明卵黄抗体与伴放线聚集杆菌的结合具有特异性.特异性卵黄抗体可使伴放线聚集杆菌的菌群产生共凝集现象,特异性卵黄抗体以一种剂量依赖性的方式抑制伴放线聚集杆菌形成生物被膜.结论:本实验制备一种高效价和高纯度的卵黄抗体,能有效抑制伴放线聚集杆菌生物被膜的形成.

目的:研究血链球菌细菌素分别对单独培养及混合培养的伴放线聚集杆菌(A.a)和白色念珠菌(C.a)生物膜的最小抑菌浓度(MIC).利用激光共聚焦显微镜研究血链球菌细菌素对A.a及混合培养的A.a和C.a生物膜活性的影响.方法:通过低温高速离心,细胞破碎,盐析等方法提取血链球细菌素—血链素.采用二倍稀释法,测定血链素对单独和混合培养的A.a及C.a的MIC;血链素作用于A.a及混合培养的A.a和C.a后,利用激光共聚焦显微镜分别在2 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h观察生物膜活性的变化.结果:血链素对单独培养的A.a的MIC为0.25 g/L;血链素对单独培养的C.a的MIC为0.125 g/L;血链素对混合培养的A.a及C.a的MIC为0.5 g/L.通过激光共聚焦显微镜观察,血链素对A.a生物膜活性有较强的抑制作用,最显著的时间在72 h;血链素对混合培养的A.a及C.a生物膜活性同样具有较强的抑制作用,最显著的时间在48 h.结论:血链素对A.a及混合培养的A.a及C.a生物膜活性均有抑制作用.

目的:研究一种经聚多巴胺(PDA)改性后的纳米氧化锌(nano-ZnO-PDA)对体外龈下菌斑中细菌的抑制效果,与口腔中常用的普通氧化锌(ZnO)做对比,并探讨nano-ZnO-PDA的生物安全性.方法:利用水浴法合成直径为50 nm左右的球状na-no-ZnO(nano-ZnO组),经盐酸多巴胺(DA)在弱碱条件下发生自聚作用,产生PDA包裹在球状nano-ZnO上,形成nano-ZnO-PDA(nano-ZnO-PDA组),透射电镜观察改性前、后的纳米结构变化,检测其对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、牙龈卟啉单胞菌和伴放线聚集杆菌的体外抗菌效果:并与口腔治疗中常用的ZnO(ZnO组)做对比;同时,检测这3种ZnO对人成纤维细胞的毒性以及进行小鼠灌胃实验以进一步验证该材料对小鼠的组织毒性.结果:nano-ZnO以及nano-ZnO-PDA的抗菌效果优于普通ZnO(P＜0.05),对于牙龈卟啉单胞菌和伴放线聚集杆菌,nano-ZnO与nano-ZnO-PDA比较,差异有统计学意义(P＜0.05).na-no-ZnO-PDA的体外细胞毒性低于普通ZnO和nano-ZnO(P＜0.05),3种ZnO对小鼠的体内组织没有产生明显的毒性作用.结论:nano-ZnO-PDA对龈下菌斑中的体外抗菌效果优于普通ZnO,且对人成纤维细胞和小鼠组织并未表现出明显的毒性作用.