目的:比较侵袭性牙周炎（aggressive periodontitis，AgP）、慢性牙周炎（chronic periodontitis，CP）与牙周健康者（periodontally healthy，PH）龈下菌群的差异，为牙周病的病因学研究及基于菌群调控的牙周病新疗法提供参考。方法:按纳入标准收集2013年12月至2014年12月在南京大学医学院附属口腔医院·南京市口腔医院牙周病科门诊就诊的AgP（AgP组）、CP（CP组）患者和PH受试者（PH组）各10例，根据X线片和口内情况初步预估取样位点后，收集各组龈下菌斑并记录各项牙周临床指数，提取龈下菌斑样本中的DNA，PCR扩增、构建DNA文库并对16S rDNA测序。最终可成功构建文库并测序者包含：8例AgP患者的18个样本，10例CP患者的31个样本和8名PH志愿者的10个样本。对各组样本的α多样性和β多样性以及菌群构成进行分析和比较，并采用Pearson相关性分析评价细菌与探诊深度的相关性。结果:菌群分析显示，AgP组龈下菌群的α多样性显著低于其他两组（ P<0.05）。在门水平，AgP和CP组拟杆菌门丰度[分别为（36.8±7.4）%、（37.2±6.3）%]、螺旋体门丰度[分别为（16.0±5.4）%、（11.8±3.6）%]均显著高于PH组[分别为（27.5±11.2）%、（5.2±4.4）%]（ P<0.05），而放线菌门和变形菌门丰度[AgP组分别为（4.2±3.3）%、（12.9±5.1）%；CP组分别为（6.1±2.6）%、（12.1±4.0）%]均显著低于PH组[分别为（19.3±13.1）%、（23.0±10.1）%]（ P<0.01）；AgP组龈下菌群中螺旋体门和柔壁菌门的丰度[分别为（16.0±5.4）%、（1.7±1.2）%]均显著高于CP组[分别为（11.8±3.6）%、（0.7±0.6）%]（ P<0.05）。在属水平，AgP组龈下菌群中棒状杆菌属、放线菌属、 Saccharibacteria_norank、月形单胞菌属、 Oribacterium的丰度显著低于CP组，而产线菌属、 Lentimicrobiaceae_norank、 Defluviitaleaceae_UCG_011、 Family_XI_unclassified的丰度显著高于CP组( P<0.05）。主坐标分析显示，各组样本存在聚类现象。线性判别分析显示，AgP组富集菌包括螺旋体科等，CP组富集菌包括拟杆菌科等。相关性分析显示，AgP组中密螺旋体属、 Defluviitaleaceae_UCG_011、支原体属、卡氏菌属、 Fretibacterium的丰度与探诊深度呈显著正相关（ r=0.525~0.750， P<0.05），丛毛单胞菌科-未分类的属、链球菌属、二氧化碳噬纤维菌属、奈瑟菌属、普雷沃菌属、消化球菌属、劳尔菌属、 Bergeyella和放线菌属的丰度与探诊深度呈显著负相关（ r=-0.617~-0.490， P<0.05）；CP组小类杆菌属、 Family_XI_unclassified、卡氏菌属、消化链球菌属、 Pelospora和理研菌科_RC9_肠组的丰度与探诊深度呈显著正相关（ r=0.430~0.533， P<0.05）。 结论:牙周炎症和健康时其龈下菌群存在明显不同；AgP和CP的龈下菌群也存在明显差异，提示这可能是两种不同的疾病。

目的:研究白细胞介素-22（IL-22）在牙周炎症环境下对牙龈上皮屏障的调控作用及其可能机制。方法:构建IL-22敲除小鼠，采用混合菌液口腔灌洗法构建牙周炎模型。收集同窝生野生型牙周炎组及IL-22敲除牙周炎组小鼠（每组7只）口腔菌斑并提取DNA，建立牙周炎相关风险微生物数据库“PD-RiskMicroDB”并结合16S rRNA测序结果，测定两组小鼠口腔菌群变化和微生物功能的关系。通过改良胰酶消化法培养牙龈上皮细胞（GEC），以100 μg/L IL-22、感染复数为100的牙龈卟啉单胞菌（Pg）分别或联合刺激GEC，实验分组为：对照组（细胞未加刺激）、IL-22组、Pg组及Pg+IL-22组，处理时间为3和12 h；采用细胞免疫荧光、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）及蛋白质印迹法检测各组细胞3 h后上皮屏障蛋白E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达；通过异硫氰酸荧光素-葡聚糖（FITC-D）介导的上皮细胞通透性实验明确各组GEC 3和12 h细胞通透性的变化。RT-qPCR检测同窝生野生型牙周炎组及IL-22敲除牙周炎组小鼠牙龈上皮E-cadherin表达水平。将15只C57BL/6野生型小鼠按随机数字表法随机分为对照组、牙周炎组和牙周炎+IL-22处理组，每组5只。RT-qPCR及免疫组织化学（IHC）染色法检测各组小鼠牙龈上皮E-cadherin的表达水平。结果:16S rRNA测序结果显示，与同窝生野生型牙周炎组小鼠相比，IL-22敲除牙周炎组小鼠口腔菌群组成发生改变，其中与牙周组织侵袭相关的菌属丰度显著增高（线性判别分析得分为2.22， P=0.009）。体外细胞实验显示，Pg感染GEC 3 h后，Pg组GEC的细胞连接中断，Pg组E-cadherin荧光强度较对照组减弱，E-cadherin的mRNA（0.69±0.12）和蛋白（0.60±0.12）表达水平均显著低于对照组（分别为1.00±0.00、1.04±0.08）（ P=0.043， P=0.003）；而Pg+IL-22组的E-cadherin荧光强度较Pg组稍增强，Pg+IL-22组E-cadherin的mRNA（1.16±0.10）和蛋白（0.98±0.07）表达水平均显著高于Pg组（分别为0.69±0.12、0.60±0.12）（ P=0.005， P=0.007）；上皮通透性实验结果显示，Pg处理GEC 3 h后，对照组、IL-22组、Pg组及Pg+IL-22组各组间总体比较上皮屏障通透性差异无统计学意义（ F=0.20， P=0.893）；处理12 h后，相较于对照组（1.00±0.00），Pg组GEC上皮屏障通透性（1.39±0.15）显著增加（ P=0.027），而Pg+IL-22组上皮屏障通透性（1.02±0.18）显著低于Pg组（ P=0.034）；体内RT-qPCR结果显示，IL-22敲除牙周炎组小鼠牙龈上皮E-cadherin的mRNA表达水平（0.32±0.21）显著低于同窝生野生型牙周炎组（1.01±0.01）（ t=5.70， P=0.005）。RT-qPCR及IHC染色结果显示，牙周炎组小鼠牙龈上皮组织E-cadherin的mRNA表达水平（0.40±0.07）和E-cadherin阳性表达吸光度值（0.02±0.00）均显著低于对照组（分别为1.00±0.00、0.04±0.01）（ P=0.005， P=0.006）；牙周炎+ IL-22处理组E-cadherin的mRNA表达水平（1.06±0.24）和E-cadherin阳性表达吸光度值（0.03±0.01）均显著高于牙周炎组（ P=0.003， P=0.039）。 结论:IL-22可能通过调节口腔菌群的侵袭性以及宿主屏障蛋白表达，发挥其对炎症环境下牙龈上皮屏障的保护作用。

目的:探索机械治疗同期全身辅助应用抗生素对广泛型侵袭性牙周炎（generalized aggressive periodontitis，GAgP）患者第一磨牙的临床治疗效果和口内牙周致病微生物的影响。方法:收集2006年1月至2009年12月就诊于北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科的23例GAgP患者，按随机数字表将其随机分为两组：未用药组[12例，年龄（24.5±3.3）岁]和用药组[11例，（26.5±4.0）岁]，未用药组进行洁治、刮治和根面平整术，用药组洁治后口服阿莫西林和甲硝唑1周，再行刮治和根面平整术。两组治疗前和治疗后2、4和6个月分别进行牙周临床指标检查和唾液、集合龈下菌斑（来源于4颗第一磨牙近中颊侧位点）采集，治疗后2周仅采集唾液。应用PCR方法检测样本中8种牙周致病微生物并对红色复合体微生物[牙龈卟啉单胞菌（ Porphyromonas gingivalis，Pg）、福赛坦菌（ Tannerella forsythia，Tf）和齿垢密螺旋体（ Treponema denticola，Td）]进行半定量分析。 结果:两组患者治疗后不同时间第一磨牙近中菌斑指数、探诊深度和出血指数与治疗前相比均显著改善，用药组治疗后2、4和6个月探诊深度[分别为（4.21±1.50）、（4.00±1.54）、（3.84±1.89） mm]均显著低于未用药组[分别为（5.29±1.27）、（5.30±1.34）、（4.98±1.36） mm]（ P<0.05）。用药组治疗后不同时间龈下菌斑（治疗后2、4和6个月Pg、Tf和Td的中位数均降为0.0 ng）和唾液中Pg、Td和Tf含量（治疗后2、4和6个月Tf和Td的中位数均降为0.0 ng，Pg分别为16.3、59.6和22.4 ng）均显著低于治疗前（ P<0.05）。未用药组唾液中Td和Tf含量治疗后各时间点与治疗前相比差异均无统计学意义（ P>0.05），龈下菌斑中Td和Tf含量仅在治疗后2个月与治疗前相比显著下降（ P<0.05）。 结论:机械治疗同时辅助全身应用抗生素能更好地降低第一磨牙的探诊深度，控制GAgP患者唾液和龈下菌斑中红色复合体微生物的含量，疗效可以维持到治疗后6个月。

目的:探索表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）rs2237051及过氧化物酶增殖物激活受体-α（peroxidase proliferators activate receptor-α，PPAR-α）rs4253623基因多态性与广泛型侵袭性牙周炎（generalized aggressive periodontitis，GAgP）易感性的相关性及其交互作用，为筛选GAgP的高危人群提供遗传学依据。方法:纳入219例于2001年1月至2015年12月在北京大学口腔医学院·口腔医院就诊的GAgP患者（GAgP组）和138名年龄、性别匹配的全身及牙周健康的北京大学口腔医学院·口腔医院职工和学生作为健康对照者（对照组），采用基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术进行EGF rs2237051及PPAR-α rs4253623基因型检测，使用多重逻辑回归模型分析不同基因型与GAgP易感性的关系，采用似然比检验对两个基因多态性位点在GAgP易感性方面是否存在交互作用进行分析，交互作用模型采用相乘模型。结果:GAgP组年龄为（27.3±4.5）岁，男性87例，女性132例；对照组年龄为（27.1±4.2）岁，男性53人，女性85人，两组人群年龄、性别构成比差异均无统计学意义（ P>0.05）。EGF rs2237051位点中，AA基因型频率在GAgP组[49.5%（107/216）]显著高于对照组[37.7%（52/138）]，AG/GG基因型频率在GAgP组[50.5%（109/216）]显著低于对照组[62.3%（86/138）]（ P<0.05）。调整年龄、性别后，与AA基因型相比，AG/GG基因型个体患GAgP风险显著降低39%（ OR：0.61，95 %CI：0.40~0.95， P<0.05）。PPAR-α rs4253623位点中，AA基因型频率在GAgP组[76.2%（160/210）]显著高于对照组[65.9%（81/123）]，AG/GG基因型频率在GAgP组[23.8%（50/210）]显著低于对照组[34.1%（42/123）]（ P<0.05）。调整年龄、性别后，与AA基因型相比，AG/GG基因型个体患GAgP风险显著降低40%（ OR：0.60，95 %CI：0.36~0.98， P<0.05）。EGF rs2237051及PPAR-α rs4253623在GAgP易感性方面存在显著交互作用，两个位点均为AG/GG基因型个体与均为AA基因型的个体相比，患GAgP风险降低66%（ OR：0.34，95 %CI：0.17~0.66， P<0.01）。 结论:EGF rs2237051及PPAR-α rs4253623位点与GAgP易感性相关，两者在GAgP易感性方面存在显著交互作用，两个位点中等位基因G在GAgP患病方面具有保护作用。

目的:探讨lncRNA LINC01133在侵袭性牙周炎中的作用及机制.方法:用qRT-PCR检测不同正常人群及侵袭性牙周炎患者中不同炎症状态下牙龈组织中LINC01133、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达,并用ELISA法检测其白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)炎症细胞因子.构建侵袭性牙周炎细胞模型,通过大肠杆菌脂多糖刺激人牙龈成纤维细胞(HGFs),体外培养检测 HGFs 细胞中LINC01133表达水平的变化.构建LINC01133过表达载体,转染HGFs,用qRT-PCR和免疫印迹检测载体相关mRNA及蛋白表达水平的变化.结果:侵袭性牙龈炎患者牙龈组织中LINC01133呈现低表达,MMP-9、IL-6、TNF-α呈现高表达,且LINC01133、MMP-9两者呈负相关.经过炎症细胞模型构建,HGFs LINC01133呈现低表达,且经过转染后上调LINC01133的表达,可以抑制MMP-9、IL-6、TNF-α的表达,从而减轻炎症的发生,改善侵袭性牙周炎的进展.结论:炎性牙龈组织中的 LINC0113低表达,提示其参与侵袭性牙周炎的发病过程,且LINC01133可调控MMP-9、IL-6、TNF-α的表达,以调控侵袭性牙周炎的变化.

目的 探讨微型种植体支抗治疗对侵袭性牙周炎合并牙槽骨缺损患者的临床效果.方法 选取侵袭性牙周炎合并牙槽骨缺损患者86例,随机分为对照组与实验组,各43例.所有患者均给予侵袭性牙周炎基础治疗,对照组给予口外弓加强支抗正畸治疗,实验组给予微型种植体支抗治疗治疗,比较两组患者预后情况.结果 治疗后1个月,实验组的总有效率显著高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);实验组并发症发生率显著低于对照组(P＜0.05);两组的血清基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9含量均明显高于治疗前,且实验组高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);实验组的各项生活质量评分均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 微型种植体支抗治疗侵袭性牙周炎合并牙槽骨缺损能促进血清MMP-2、MMP-9的释放,提高患者的治疗效果与生活质量,减少并发症的发生.

目的·观察牙龈素提取物对口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)细胞HN6生物学特性的影响.方法·选取人OSCC细胞系HN6,加入牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)牙龈素提取物进行培养.根据牙龈素提取物的蛋白浓度不同分为对照组(control组),及牙龈素提取物蛋白浓度3.125 μg/mL组、6.25 μg/mL组、12.5 μg/mL组、25 μg/mL组、50 μg/mL组和100 μg/mL组,培养24、48 h后,采用细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)检测牙龈素提取物对HN6细胞增殖活性的影响.后续其他实验,分为control组、25 μg/mL组和50 μg/mL组进行.通过流式细胞术检测牙龈素提取物对细胞周期的影响,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR(real-time PCR,RT-PCR)和Western blotting检测细胞E-cadherin和N-cadherin蛋白和基因的表达.结果·在牙龈素提取物刺激HN6细胞24 h时,相比较control组,牙龈素提取物蛋白浓度25 μg/mL组(P=0.025),50 μg/mL组(P=0.000)和100 μg/mL组(P=0.049)的HN6细胞增殖活性显著增加;当刺激48 h时,6.25 μg/mL组(P=0.024)、12.5 μg/mL组(P= 0.006)、25 μg/mL组(P=0.000)、50 μg/mL组(P=0.000)和100 μg/mL组(P=0.000)均较control组HN6细胞增殖活性有显著增加.细胞周期检测结果显示,与control组相比,经牙龈素提取物刺激24 h,HN6细胞G1期比例下降,S+G2期比例显著性上升(25 μg/mL组:P=0.024;50 μg/mL组:P=0.001).细胞迁移实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,划痕愈合的百分比显著增加(P=0.001).细胞Transwell侵袭实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度升高,细胞穿过小室底部的数量显著性增加.RT-PCR和Western blotting实验结果显示,与control组相比,随着牙龈素提取物浓度增加,HN6细胞中N-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性增加,E-cadherin mRNA和蛋白表达量显著性减少.结论·牙龈素提取物对OSCC细胞HN6的增殖、迁移和侵袭有促进作用.

目的 观察滋肾清胃解毒方治疗侵袭性牙周炎(AgP)的疗效并探讨其作用机制.方法 92例患者以随机数字表法分为对照组与治疗组各46例.对照组给予西医常规治疗(基础治疗+甲硝唑),治疗组在对照组基础上辅以滋肾清胃解毒方.两组均治疗2周.比较两组治疗前后中医证候评分、AgP检测指标、外周血中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)标志物cf-DNA、MPO-DNA、NE及外周血白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化.分析NETs标志物与AgP检测指标相关性,并观察临床疗效.结果 治疗组总有效率为91.30％,高于对照组的76.09％(P＜0.05).两组治疗前中医证候评分,AgP检测指标,外周血NETs标志物cf-DNA、MPO-DNA、NE,炎症因子IL-6、IL-8、IL-1 β、TNF-α水平比较,差别均不大(均P＞0.05).两组治疗后中医证候评分,AgP检测指标,外周血NETs标志物cf-DNA、MPO-DNA、NE,炎症因子IL-6、IL-8、IL-1 β、TNF-α水平与治疗前比较均降低(P＜0.05),且治疗组上述指标除IL-6、IL-8水平外均优于对照组(均P＜0.05);NETs标志物与AgP检测指标之间呈正相关.结论 滋肾清胃解毒方联合常规西医治疗AgP(肾阴虚胃火盛证)疗效确切,可改善患者的牙周状况,减轻机体炎症反应.

目的:分析血清热休克蛋白27(HSP27)、人软骨糖蛋白(YKL-40)与侵袭性牙周炎(AgP)患者辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)的关系及对牙周-正畸联合治疗后预后的影响.方法:选取2020年5月-2022年4月河北北方学院附属第一医院收治的98例AgP患者为AgP组,另选取同期于医院检查的60例牙周健康志愿者作为对照组.采用酶联免疫法检测血清HSP27、YKL-40水平,流式细胞仪检测外周血Th17、Treg百分比,计算Th17/Treg比值;Pearson法分析血清HSP27、YKL-40与Th17、Treg细胞的相关性.AgP患者经牙周-正畸联合治疗6个月后,复诊检查时根据牙周探针深度(PD)将患者纳入预后良好组(PD＜4mm)和预后不良组(PD≥4 mm).采用Logistic回归模型分析AgP患者牙周-正畸联合治疗后预后不良的影响因素.结果:AgP组血清HSP27水平低于对照组,YKL-40水平高于对照组(P＜0.05).AgP组外周血中Th17细胞百分比、Th17/Treg比值高于对照组,Treg细胞百分比低于对照组(P＜0.05).Pearson法显示,Th17细胞百分比、Th17/Treg比值与HSP27表达呈负相关,Treg细胞百分比与其呈正相关(P＜0.05);Th17细胞百分比、Th17/Treg比值与YKL-40表达呈正相关,Treg细胞百分比与其呈负相关(P＜0.05).复查结果显示,预后良好患者共61例,预后不良共37例.预后良好组与预后不良组在患牙上下、前后分布、根形态、患牙PD最深值、牙槽骨高度、菌斑指数及HSP27、YKL-40水平方面比较差异有统计学意义(P＜0.05).Logistic回归显示,根形异常、患牙PD深、牙槽骨高度高、菌斑指数大、HSP27水平下降、YKL-40 水平上升为AgP患者牙周-正畸联合治疗后预后不良的危险因素(P＜0.05).结论:AgP患者血清HSP27水平下降、YKL-40水平上升,与Th17、Treg细胞表达密切相关,是影响患者牙周-正畸联合治疗后预后不良的危险因素.

慢性牙周炎(CP)为口腔科常见的导致牙缺损的牙周炎性疾病,约占牙周炎患者的95％[1].多由牙菌斑细菌侵袭、定植、损害牙周组织等局部因素和遗传,免疫功能缺陷、性激素紊乱、系统性疾病、吸烟、精神压力等全身因素引发.若不及时治疗,严重影响患者口腔健康[2-3].随着病情发展,相继出现牙龈红肿,牙周袋溢脓,牙齿松动,严重时牙齿脱落,丧失咀嚼功能[4-5].目前,临床治疗多采取抗生素结合牙周基础治疗,短期治疗效果较好,但抗生素长期使用易产生耐药性,预后效果较差[6].该病属中医"齿衄""牙宣"等范畴,多由胃火炽盛,壅结阳明经,上攻口齿所致,治疗应以清胃凉血为主.本研究采用自拟三黄清火固齿汤配合替硝唑胶囊治疗57例慢性牙周炎,并与替硝唑胶囊治疗的57例患者进行对比观察,具体内容报道如下.