目的:评价血红素氧合酶-1 (HO-1)在七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病中的作用。方法:成年雄性C57BL/6J小鼠136只，体重20～25 g，6～8周龄，采用随机数字表法分为4组( n＝34)：假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)、脓毒症相关性脑病+七氟烷组(SAE+Sevo组)和脓毒症相关性脑病+七氟烷+HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ组(SAE+Sevo+ZnPPⅨ组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+Sevo组和SAE+Sevo+ZnPPⅨ组分别于造模成功后立即吸入2%七氟烷-33%氧气2 h，Sham组和SAE组吸入33%氧气2 h。SAE+Sevo+ZnPPⅨ组于造模前30 min时腹腔注射HO-1抑制剂ZnPPⅨ 25 mg/kg。于造模后6、12和24 h时处死6只小鼠，采用ELISA法检测皮层组织TNF-α、IL-1β、高迁移率族蛋白1(HMGB1)和HO-1水平，采用Western blot法检测皮层组织HO-1表达。于造模后24 h时处死6只小鼠，采用TUNEL染色检测皮层细胞凋亡情况，计算细胞凋亡指数。每组取10只小鼠，分别于造模后3、5、7和14 d时行Y迷宫实验，计算自发交替百分比。 结果:与Sham组比较，SAE组、SAE+Sevo组及SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平、细胞凋亡指数、HO-1活性及其表达水平升高，自发交替百分比降低( P<0.05)。与SAE组比较，SAE+Sevo组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平和细胞凋亡指数降低，HO-1活性及其表达水平、自发交替百分比升高，SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β及HMGB1水平降低( P<0.05)，其余指标差异无统计学意义( P>0.05)。与SAE+Sevo组比较，SAE+Sevo+ZnPPⅨ组皮层组织TNF-α、IL-1β、HMGB1水平和细胞凋亡指数升高，HO-1活性及其表达水平、自发交替百分比降低( P<0.05)。 结论:七氟烷改善小鼠脓毒症相关性脑病的机制与提高皮层组织HO-1活性，减轻炎症反应有关。

目的:探讨微小RNA-21-5p（miR-21-5p）是否通过激活磷脂酰肌醇3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶（PI3K/Akt）信号通路调控Ⅱ型肺泡上皮细胞（AECⅡ）凋亡减轻高氧性急性肺损伤（HALI）。方法:将72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为常氧对照组、HALI组、PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002+HALI组（LY+HALI组）、miR-21-5p过表达+LY294002+HALI组（miR-21-5p+LY+HALI组）、miR-21-5p过表达+HALI组（miR-21-5p+HALI组）及二甲基亚砜（DMSO）+ HALI组，每组12只。用95%氧气制备HALI动物模型；常氧对照组动物在常氧状态下正常饲养。制模前3周经气管导管滴入200 μL滴度（1×10 12 TU/mL）的miR-21-5p腺相关病毒载体AAV6-miR-21-5p转染肺组织；DMSO及LY294002均以0.3 mg/kg于制模前1 h经尾静脉给药。制模后48 h，取颈动脉血检测氧合指数（OI）及呼吸指数（RI），采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测miR-21-5p表达；取肺组织，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测炎症因子〔肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素（IL-6、IL-1β）〕水平，测定肺湿/干质量（W/D）比值，苏木素-伊红（HE）染色后光镜下观察肺组织病理学改变并进行病理学评分。每组取6只大鼠提纯AECⅡ细胞，应用流式细胞仪检测凋亡率，采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）和PI3K/Akt信号通路蛋白的表达水平。 结果:与常氧对照组比较，高氧暴露后可见肺泡间隔增厚，大量炎症细胞浸润，RI、炎症因子、肺W/D比值、病理学评分，以及AECⅡ细胞早期凋亡率、PTEN蛋白表达和Akt磷酸化水平均升高，而OI及miR-21-5p表达降低，说明模型制备成功。LY294002预处理后，可进一步加重HALI大鼠肺组织病理损伤，RI、炎症因子、肺W/D比值均较HALI组进一步升高，OI进一步降低，同时可促进AECⅡ细胞凋亡，进一步上调PTEN蛋白表达，并抑制Akt磷酸化；而miR-21-5p预处理可负向调控PTEN，激活PI3K/Akt信号通路，抑制AECⅡ细胞凋亡，减轻HALI，与LY+HALI组比较，炎症因子水平降低〔TNF-α（μg/L）：100.33±3.48比116.55±2.53，IL-6（ng/L）：141.06±3.70比161.31±3.59，IL-1β（μg/L）：90.82±3.69比112.23±2.87，均 P<0.05〕，RI、肺损伤病理学评分、肺W/D比值及AECⅡ细胞早期凋亡率明显降低〔RI：0.81±0.02比1.05±0.07，病理学评分（分）：0.304±0.008比0.359±0.007，肺W/D比值：5.29±0.03比5.52±0.08，细胞凋亡率：（27.20±2.34）%比（34.17±1.49）%，均 P<0.05〕，OI、miR-21-5p表达均明显升高〔OI（mmHg，1 mmHg≈0.133 kPa）：266.71±2.75比230.12±4.04，miR-21-5p（2 -ΔΔCt）：2.21±0.13比0.33±0.03，均 P<0.05〕，且AECⅡ细胞PTEN蛋白表达显著降低（PTEN/GAPDH：0.50±0.06比0.93±0.06， P<0.05），Akt磷酸化明显增加〔磷酸化Akt（p-Akt）蛋白（p-Akt/GAPDH）：0.86±0.05比0.56±0.06， P<0.05〕。 结论:miR-21-5p可能通过负向调控PTEN激活PI3K/Akt信号通路，从而抑制AECⅡ细胞凋亡，减轻HALI。

目的:研究Notch1信号通路抑制剂γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对氧诱导视网膜病变(OIR)小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用及其可能机制。方法:将SPF级出生后第7天(P7)的幼鼠与C57BL/6J母鼠共同饲养于含75%氧气的氧箱中5 d，然后放回正常氧气环境下饲养，以制备OIR模型。采用随机数表法将54只OIR小鼠分为OIR组、OIR+DMSO组和OIR+DAPT组，每组18只，所有小鼠右眼作为实验眼。OIR+DAPT组和OIR+DMSO组在P14小鼠玻璃体腔内分别注射10 mmol/L DAPT和DMSO溶液1 μl，OIR组不予注射。P17时处死各组小鼠，摘出眼球后分离视网膜，采用Western blot法测定Notch1信号通路蛋白及其下游Hes1蛋白、视网膜小胶质细胞M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和M2型标志物精氨酸酶-1(Arg-1)蛋白的相对表达量；制备视网膜铺片，采用同工凝集素(IB4)染色视网膜血管，计算小鼠视网膜新生血管相对面积，定义为新生血管面积/视网膜总面积×100%；采用苏木素－伊红染色法观察突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数量。结果:OIR+DAPT组、OIR组和OIR+DMSO组小鼠视网膜中Notch1蛋白相对表达量分别为0.68±0.06、1.00±0.00和1.03±0.08，Hes1蛋白相对表达量分别为0.70±0.08、1.00±0.00和1.02±0.07，组间总体比较差异有统计学意义( F＝70.62、53.65，均 P<0.01)。OIR+DAPT组小鼠视网膜中Notch1和Hes1蛋白相对表达量均明显低于OIR组和OIR+DMSO组，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。OIR+DAPT组、OIR组和OIR+DMSO组小鼠视网膜中Arg-1蛋白相对表达量分别为1.49±0.12、1.00±0.00和0.94±0.07，iNOS蛋白相对表达量分别为0.74±0.07、1.00±0.00和1.04±0.10，组间总体比较差异均有统计学意义( F＝89.32、31.63，均 P<0.01)，与OIR组和OIR+DMSO组比较，OIR+DAPT组小鼠视网膜中Arg-1蛋白相对表达量明显升高，iNOS蛋白相对表达量明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。OIR+DAPT组、OIR组和OIR+DMSO组小鼠视网膜新生血管相对面积分别为(8.82±2.71)%、(22.32±5.34)%和(20.27±3.36)%，突破内界膜的血管内皮细胞数分别为38.17±3.29、60.83±5.11和58.67±4.75，总体比较差异均有统计学意义( F＝33.72、39.44，均 P<0.01)。与OIR组和OIR+DMSO组比较，OIR+DAPT组小鼠视网膜新生血管相对面积缩小，突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数较少，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。 结论:玻璃体腔注射DAPT可抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成，其作用主要是通过抑制Notch1信号通路活化，进而促使M1型视网膜小胶质细胞向M2型转化来实现。

目的:建立高海拔低压低氧环境大鼠心搏骤停模型，探讨低压氧舱处置时间对建立高海拔大鼠心搏骤停模型的影响。方法:以SPF级健康雄性SD大鼠作为研究对象，实验分别在2个不同海拔地区开展。将中山大学心肺脑复苏研究所高原分所（青海西宁）的实验大鼠称重、编号，放入低压氧舱中饲养（模拟海拔高度3 000 m，升降速15 m/min，温度20 ℃，舱内压力69.5 kPa，舱内氧气压力14.5 kPa），饲养30 d后按照随机数字表法选取30只大鼠，采用窒息法制备心搏骤停模型，作为低压低氧30 d组；饲养60 d后再次随机选取40只大鼠制备心搏骤停模型，作为低压低氧60 d组。中山大学心肺脑复苏研究所（广东广州）采用相同方法随机选取30只大鼠制备心搏骤停模型，作为平原对照组。比较各组大鼠制模前体质量及制模过程中窒息诱导时间的差异。结果:最终低压低氧30 d组有16只大鼠完成心搏骤停模型制备，低压低氧60 d组有22只大鼠完成心搏骤停模型制备。平原对照组、低压低氧30 d组与低压低氧60 d组大鼠制模前体质量差异无统计学意义〔g：429.00（389.25，440.75）、440.00（415.50，486.25）、440.00（400.00，452.50），均 P>0.05〕。低压低氧60 d组大鼠窒息诱导时间较低压低氧30 d组明显延长（s：294.59±75.39比234.31±93.86， P<0.01），甚至约为平原对照组的1.4倍（s：294.59±75.39比208.73±30.88， P<0.01）；而低压低氧30 d组大鼠窒息诱导时间与平原对照组差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:低压氧舱处置60 d的大鼠更适用于制备高海拔心搏骤停模型，也符合高海拔大鼠氧储备和耐缺氧的机体特点。

目的:观察脑死亡引发的肺脏损伤性改变，探讨吸入氢气的脑死亡大鼠的肺相关功能的保护机制。方法:郑州大学基础医学院实验动物中心提供的成年、雄性Wistar大鼠21只，体重200～300 g，将其随机分成3组：脑死亡组(BD组， n＝7)，用缓慢颅内加压的相关研究方法对其建立脑死亡的模型，模型成功后吸入氮气、氧气混合的气体(50%O 2＋50%N 2)90 min；假手术组(S组， n＝7)，除了不给予硬脑膜外的颅内加压外，其他处理同脑死亡组；脑死亡吸入氢气组(BDH 2组， n＝7)，脑死亡模型制备成功后吸入氮气、氧气、氢气混合的气体(2%H 2＋50%O 2＋48%N 2)90 min。大鼠脑死亡成功后(0、30、60、90 min)测定动脉血气值，收集对应的动脉血和肺组织，检测其血浆中白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度，测定其肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的浓度、髓过氧化物酶(MPO)的活性、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白的表达，苏木精-伊红(HE)行肺损伤程度观察，计算肺组织损伤评分(LIS评分)。血气分析组间比采用重复测量设计的方差分析，其他指标组间比采用单因素方差分析。 结果:与S组比较，BD、BDH 2组氧合指数(PaO 2/FiO 2)值(301.3±31.0、352.9±29.0)、肺组织中SOD活性[(10.64±1.25)、(12.8±2.17) U/mg蛋白]、ICAM-1和Caspase-3蛋白的表达降低(4.76±0.89、2.89±0.65、5.92±1.03、3.01±0.94)，差异有统计学意义( F＝27.440、4.983、3.732、4.237， P<0.05)，BD、BDH 2组肺组织中MDA含量[(7.52±1.34)、(5.99±0.64) nmol/mg蛋白]、血浆IL-8[(538±140)、(423±64) pg/ml]及TNF-α的浓度[(796±213)、(569±158) pg/ml]、LIS评分升高[(9.28±2.25)、(4.70±2.10)分]，差异有统计学意义( F＝6.053、10.079、9.759、4.021， P<0.05)；与BD组比较，BDH 2组PaO 2/FiO 2、肺组织SOD活性、ICAM-1和Caspase-3蛋白的表达升高，差异有统计学意义( F＝27.440、4.983、3.732、4.237， P<0.05)，肺组织中MDA含量、血浆IL-8及TNF-α的浓度、LIS评分降低，差异有统计学意义( F＝6.053、10.079、9.759、4.021， P<0.05)。 结论:脑死亡使大鼠肺脏发生损伤性的改变，而吸入2%氢气能够减轻脑死亡所诱发的肺脏损伤。

目的:评价高氧诱发幼鼠急性肺损伤时Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路及与自噬的关系。方法:清洁级健康雄性SD幼鼠24只，14日龄，体质量40~50 g，采用随机数字表法分为4组( n＝6)：对照组(C组)、高氧诱发急性肺损伤(HALI)组、HALI+IWP-2组(HI组)和HALI+DMF组(HD组)。采用吸入高浓度氧气(氧浓度>90%)72 h的方法制备HALI模型。于制模前30 min，HI组腹腔注射IWP-2 15 mg/kg，HD组腹腔注射相同容量DMF溶剂，C组与HALI组腹腔注射相同容量生理盐水。各组于每日同一时间点给药，连续给药3 d。制模结束后，经颈总动脉取血标本行血气分析，计算氧合指数(OI)；然后深麻醉下处死幼鼠，取肺组织，测定湿重/干重(W/D)比值，光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分，采用ELISA法测定IL-6、IL-1β和TNF-α的含量，Western blot法检测Wnt3a、β-catenin、微管相关蛋白轻链3(LC3)、Beclin1和p62的表达，计算LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。 结果:与C组比较，HALI组、HI组和HD组OI降低，肺组织W/D比值、肺损伤评分、IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高，Wnt3a、β-catenin和Beclin1表达上调，p62表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)；与HALI组比较，HI组OI降低，肺组织W/D比值、肺损伤评分、IL-6、IL-1β和TNF-α含量升高，Wnt3a、β-catenin和p62表达下调，Beclin1表达上调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高( P<0.05)，HD组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与HI组比较，HD组OI升高，肺组织W/D比值、肺损伤评分、IL-6、IL-1β和TNF-α含量降低，Wnt3a、β-catenin和p62表达上调，Beclin1表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低( P<0.05)。 结论:Wnt/β-catenin信号通路可能通过对自噬的负向调控参与幼鼠HALI的过程。

目的:为弥补低压舱及抗荷缺氧训练仪在飞行员缺氧耐力检查中应用存在的不足,研制一种低氧混合气体制备装置.方法:该装置采用气体分离原理制备低氧气体,硬件主要由盛源OLF1100D-220AF空气压缩机、SMC IDG75SAM4-03 过滤器、缓冲罐、AIR Products PA3010 一体化集成高分子膜、控制盒、传感器与调压阀等部件组成.其中,传感器包括压力传感器、流量传感器、浓度传感器和露点温度传感器,控制盒由主控板、电源模块、变送模块、通信模块、显示屏以及外壳组成.控制软件为嵌入式软件,采用KEIL5开发,采用C++编写.结果:该装置可以制备体积分数为4％～18％的低氧气体,体积分数最大误差为0.05％,而且制备气体的主要成分满足GB 8982-2009《医用及航空呼吸用氧》中规定的医用氧技术要求.结论:该装置制备的低氧气体体积分数控制精确,可用于飞行员缺氧耐力检查及缺氧习服训练.

目的 比较氢棒在不同溶质溶液中的产氢速率,并明确溶液中氢和含氧量的相关性以及氢与氧化还原电位的关系.方法 采用含有金属镁的氢棒与水反应产氢的方法制备富氢溶液,具体分为:NaCl、Na2SO3、Na2SO4、CH3COOH和CH3COONa溶液组,分别配制0％、0.2％、0.9％和3％的不同浓度上述溶液,并依次分别在0、2、4、6、8、10 h后测定各溶液的含氢量、含氧量、氧化还原电位和pH值.结果 在制备时间相同时,NaCl溶液浓度越高其产氢速率越高.溶液中氢气与氧气的含量呈显著负相关(R2=0.9306),含氢量越高含氧量越低;溶液中随含氢量的增加氧化还原电位逐渐降低,而pH值则逐渐升高.在不同溶质溶液中,氢棒的产氢速率顺序为Na2SO3>NaCl>Na2SO4(P<0.05或P<0.01).在乙酸溶液中,与钠盐溶液相比,其氢棒的产氢速率显著高于钠盐溶液(P<0.05),含氢量随时间延长而逐渐增加;氧浓度显著低于钠盐溶液(P<0.05),含氧量随时间增加逐渐减少.结论 溶液中溶质的种类和浓度以及溶液的含氧量和酸碱度对氢棒的产氢速率具有显著影响,提示可通过调整溶液中溶质的种类和浓度,制备所需要的不同氢浓度含量的富氢溶液,为氢棒制氢在临床以及日常生活中的应用提供参考依据.

目的 探讨HET0016对延迟性亚低温保护氧糖剥夺-复氧复糖(oxygen-glucose deprivation and restoration,OGD/R)离体神经元的强化效应.方法 新生24～48 h的SD大鼠12只,随机分为对照组、氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)组、OGD/R-亚低温(OGD/R-mild hypothermia, OGD/R-HM)组、OGD/R-HM-HET0016(OGD/R-HM-HET)组各3只,均分离海马神经元细胞培养7d,制备海马神经元OGD/R模型.对照组应用3 mL含葡萄糖earle's平衡盐溶液正常条件下培养2h后更换正常培养液继续培养28 h;OGD组应用3 mL无葡萄糖平衡盐,37℃、体积分数1％氧气培养箱中培养2h后更换正常培养液继续培养28 h;OGD/R-HM组应用3 mL无葡萄糖培养液、体积分数1％氧气培养箱培养2h后更换正常培养液,37℃、体积分数5％CO2培养箱中复氧4h后亚低温处理24 h;OGD/R-HM-HET组于复氧前加入HET0016,调整终浓度1μmol/L,余处理同OGD/R-HM组.应用流式细胞仪检测4组细胞凋亡率.结果 流式细胞仪检测结果显示,神经元细胞凋亡率在OGD组[(29.59±0.60)％]、OGD/R-HM组[(19.89±0.39)％]、OGD/R-HM-HET组[(14.17±o.25)％]均高于对照组[(1.63±o.42)％](P＜0.05),且OGD组高于OGD/R-HM组和OGD/R-HM-HET组(P＜0.05),OGD/R-HM组高于OGD/R-HM-HET组(P＜0.05).结论 HET0016对缺血缺氧4h后实施的亚低温保护离体OGD/R神经元具有一定的强化效应.

目的 探讨炯酸酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NAADP)对大鼠缺氧心肌细胞自噬流的影响及机制. 方法 取5只SD大鼠乳鼠,处死后取心脏,制备原代心肌细胞用于以下实验.(1)取原代心肌细胞,按随机数字表法分为常氧组、缺氧9h组、缺氧9 h+NAADP组,每组各5孔.常氧组细胞置于37℃恒温培养箱中常规培养9h;缺氧9h组和缺氧9 h+NAADP组细胞置于缺氧培养箱(含体积分数94％氮气、体积分数5％二氧化碳及体积分数1％氧气)培养9h,缺氧9 h+NAADP组细胞缺氧处理前加入终物质的量浓度10 μmol/L NAADP.细胞计数试剂盒8检测细胞活力.(2)取原代心肌细胞,按随机数字表法分为常氧组、缺氧9h组、缺氧9h+NAADP组、缺氧9 h+trans-Ned-19组及缺氧9 h+ trans-Ned-19+ NAADP组,每组各2孔.常氧组细胞置于37℃恒温培养箱叶常规培养9h;余4组细胞同实验(1)行缺氧处理.缺氧处理前,缺氧9h+NAADP组细胞加入终物质的量浓度10 μmol/L NAADP,缺氧9 h+trans-Ned-19组细胞加入终物质的量浓度1 μmol/L trans-Ned-19,缺氧9 h+ trans-Ned-19+ NAADP组细胞加入终物质的量浓度10 μmol/L NAADP和1μmol/L trans-Ned-19.蛋白质印迹法检测微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型和P62的表达量.(3)取原代心肌细胞,同实验(1)进行分组及处理.免疫荧光法检测溶酶体的酸碱度.对数据行单因素方差分析和LSD检验. 结果 (1)常氧组细胞活力为1.114±0.024,明显高于缺氧9h组的0.685±0.079,P＜0.01.缺氧9h+NAADP组细胞活力为0.886 ±0.061,明显高于缺氧9h组(P＜0.05).(2)与常氧组比较,缺氧9h组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型及P62表达量明显升高(P＜0.01).与缺氧9h组比较,缺氧9h+NAADP组细胞P62表达量明显下降(P＜0.01),微旨相关蛋白 1轻链3-Ⅱ型表达量无明显变化(P＞0.05);缺氧9 h+ trans-Ned-19组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型及P62表达量均无明显变化(P＞0.05).与缺氧9h+NAADP组比较,缺氧9 h+trans-Ned-19+ NAADP组细胞微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ型表达量无明显变化(P＞0.05),P62表达量明显升高(P＜0.01).(3)常氧组细胞绿色荧光强度大,与红色荧光共染好,溶酶体内环境酸性较强.缺氧9h组细胞绿色荧光强度明显低于常氧组,溶酶体内环境酸性较常氧组减弱.缺氧9 h+NAADP组细胞绿色荧光强度较缺氧9h组明显增强,溶酶体内环境酸性较缺氧9 h组强,但仍低于常氧组. 结论 NAADP通过酸化缺氧后心肌细胞溶酶体内环境,促进自噬体降解,减少自噬溶酶体堆积,修复受损自噬流从而改善心肌细胞活力.