目的:探讨亚低温对脑缺血再灌注损伤的治疗作用及其分子机制。方法:30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和亚低温组，亚低温组大鼠采用头部亚低温(33 ℃~35 ℃)预处理3 h，假手术组和模型组不做处理。采用苏木精-伊红(HE)染色分析大鼠脑组织形态变化；采用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法分析梗死面积；采用原位缺口末端标记法(TUNEL)染色法测定大鼠脑组织细胞细胞凋亡；采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析自噬相关基因Beclin1、Atg7和Atg5表达水平；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析自噬底物p63和LC3-Ⅱ表达水平。计量数据采用单因素方差分析。结果:亚低温组大鼠神经功能评分[(1.90±0.74)分]明显低于模型组[(3.40±0.70)分]，差异有统计学意义( t＝4.666， P<0.05)。亚低温组大鼠运动功能评分[(6.40±0.97)分]明显低于模型组[(3.60±1.17)分]，差异有统计学意义( t＝5.846， P<0.05)。亚低温组大鼠脑组织梗死百分比[(24.79±2.57)%]明显低于模型组[(46.91±5.79)%]，差异有统计学意义( t＝4.855， P<0.05)。亚低温组大鼠脑组织细胞凋亡比例[(28.04±7.19)%]明显低于模型组[(63.76±5.79)%]，差异有统计学意义( t＝12.110， P<0.05)。亚低温组大鼠脑组织Beclin1和Atg7 mRNA表达水平(1.96±0.08；1.83±0.14)明显高于模型组(1.44±0.08；1.65±0.97)，差异有统计学意义( t＝14.550、9.849， P<0.05)。亚低温组大鼠脑组织p62和LC3-Ⅱ相对表达水平(1.40±0.09、1.39±0.11)明显低于模型组(0.84±0.04、0.88±0.07)，差异有统计学意义( t＝18.200、12.210， P<0.05)。 结论:亚低温处理可显著促进脑组织细胞自噬基因表达，促进细胞自噬，对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。

目的:采用微电极阵列标测技术测定，评价七氟烷预处理心脏成纤维细胞来源外泌体对低温缺血再灌注大鼠离体心脏心室肌电传导的影响。方法:SPF级SD大鼠乳鼠，雌雄不拘，差速贴壁法提取原代心脏成纤维细胞。2~4代心脏成纤维细胞用2.5%七氟烷持续处理1 h，继续培养24~48 h后提取外泌体。SPF级健康雄性SD大鼠，2~3月龄，体重280~320 g，按照随机数字表法分为3组( n＝8)：对照组(C组)、缺血再灌注组(IR组)和七氟烷预处理心脏成纤维细胞源性外泌体＋缺血再灌注组(S＋IR组)。C组平衡灌注110 min；IR组和S＋IR组平衡灌注20 min，停灌60 min后再灌注30 min。S＋IR组于术前48 h尾静脉注射七氟烷预处理心脏成纤维细胞分泌的外泌体1 ml(200 μg)，C组和IR组分别注射生理盐水1 ml。于平衡灌注20 min(T 0)、再灌注15 min(T 1)和再灌注30 min(T 2)时采用微电极阵列在离体心脏左心室表面，获取心脏传导速度(CV)、传导绝对不均一性(P 5-95)和不均一性指数(P 5-95/P 50)。 结果:与C组比较，S＋IR组T 1时CV降低，P 5-95和P 5-95/P 50增加( P<0.05)，T 2时差异无统计学意义( P>0.05)，IR组T 1，2时CV减慢，P 5-95和P 5-95/P 50升高( P<0.05)；与IR组比较，S＋IR组T 1，2时CV增加，P 5-95和P 5-95/P 50降低( P<0.05)。 结论:七氟烷预处理心脏成纤维细胞源性外泌体可改善低温缺血再灌注大鼠离体心脏心室肌的电传导。

目的:观察亚低温（hypothermia）预处理对不安全大深度快速上浮脱险（AFBAE）大鼠生存率的影响。方法:选取120只9周龄健康雄性SD大鼠，按照随机数字表法分为正常室温组（CON组）、亚低温再恢复组（H/R组）和持续亚低温组（H组），每组40只。CON组大鼠暴露于正常室温环境［（24.0±2.0）℃］；H/R组大鼠暴露于低温环境［（18.0±2.0）℃］10 min，然后回复到正常室温环境10 min；H组大鼠暴露于低温环境10 min。暴露结束后，3组大鼠均接受150 m的AFBAE模拟实验，并观察出舱30 min后的大鼠存活情况。选取不同环境温度，检测大鼠的肛温和心率。结果:CON组大鼠出舱30 min后的存活率为40%，明显低于H/R组（75%）和H组（80%），差异有统计学意义（ P<0.05）。H/R组和H组之间的大鼠存活率差异无统计学意义（ P>0.05）。环境温度20.0 ℃以下时大鼠肛温为31.0～36.0 ℃，明显低于环境温度20.0 ℃以上时大鼠肛温［（35.0～38.0）℃］，差异有统计学意义（ P<0.05）。环境温度为19.6 ℃时大鼠的心率显著高于正常室温（23.5 ℃）的大鼠，差异有统计学意义（ P<0.05）。 结论:亚低温预处理可提高AFBAE大鼠的存活率，可能与亚低温导致的大鼠心率加快有关。

目的 分析DNase Ⅰ预处理和样本储存时间对血浆样本中性粒细胞胞外诱捕网(NET)检测结果的影响.方法 随机筛选无基础疾病且无吸烟史的4名体检健康者,采集其外周血,提取血浆,检测NET的4个代表性指标[双链DNA(dsDNA)、瓜氨酸化组蛋白3(citH3)、核小体、髓过氧化物酶(MPO)-DNA复合物].分析DNase Ⅰ预处理血浆对MPO-DNA复合物检测结果的影响.将样本采集2.5 h的检测结果作为基线值,比较样本于4℃低温冰箱放置12、24、48h后,4项指标检测结果的差异.结果 经DNase Ⅰ预处理和未经DNase Ⅰ预处理血浆MPO-DNA复合物检测结果差异无统计学意义(P＞0.05).血浆样本于4℃低温冰箱放置12、24、48 h,dsDNA、MPO-DNA复合物含量稳定,各时间点检测结果差异无统计学意义(P＞0.05);citH3在样本放置24 h时有所升高,核小体在样本放置12 h时有所降低,但各时间点检测结果差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 DNase Ⅰ预处理血浆对MPO-DNA复合物的检测结果无影响.血浆样本在4℃低温冰箱放置48 h NET的4个代表性指标均相对稳定,但建议在样本采集12 h内尽快冻存血浆样本.

目的:观察桃金娘小孢子不同发育时期的花器外部形态及细胞学特征,找出小孢子发育时期与花器相关性,为花药培养提供细胞学依据,同时探究低温预处理时间和植物生长调节剂组合对花药愈伤组织形成的影响.方法:用游标卡尺测量花蕾形态特征,用显微镜观察小孢子发育时期.接种前低温预处理花蕾0、12、24、48、72 h,采用L9(33)2,4-D(1.0、2.0、3.0 mg/L),6-BA(0.5、1.0、1.5 mg/L),NAA(0.1、0.2、0.3 mg/L)正交实验诱导花药愈伤组织.结果:小孢子处于单核靠边期时,花蕾横径为7.877±0.374 mm,纵径为7.167±0.340 mm,花瓣露出花萼,花药黄色,有浓烈芳香气味.4℃低温预处理花药24 h,诱导率为23.78％,显著高于其他处理.2,4-D是影响桃金娘花药愈伤组织形成的主要因子,配方MS+2.0 mg/L 2,4-D+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA诱导率为30.82％,显著高于其他处理.结论:桃金娘小孢子各发育时期与花萼位置、花药颜色、花蕾大小密切相关,低温预处理可以提高花药愈伤组织诱导率,适宜的生长调节剂浓度和组合有利于提高花药愈伤组织诱导率.

以丝状产油微藻段殖黄线藻(Xanthonema hormidioides)作为实验材料,经过低温(5℃)预处理后的藻种与常温(25℃)条件下的藻种进行对比实验,研究段殖黄线藻在不同温度(5℃、10℃、15℃、20℃、25℃)和高、低氮浓度(18和3 mmol/L)条件下的生长和油脂积累及低温(5℃)对这两种状态下的藻种光合活性和抗氧化酶系统的影响.结果显示:低温预处理后的段殖黄线藻在各温度下积累的生物量要高于常温条件下的段殖黄线藻,在15℃时可达到最高生物量为10.1 g/L,20℃条件下可获得最高油脂和脂肪酸绝对含量,分别占干重的64.20％和49.05％(3 mmol/L),蛋白质含量在15℃时达到最高为43.5％(18 mmol/L),总碳水化合物则基本维持在10％-25％.5℃下段殖黄线藻对光的利用率(a)及最大电子传递速率(ETRmax)均受到明显抑制,低温预处理后的段殖黄线藻叶绿素a含量、Fv/Fm和Fv/Fo值均在第9天后超过常温实验组,最高分别可达9.98 mg/g、2.99和0.75(3 mmol/L).与常温实验组相反,低温预处理后段殖黄线藻在5℃下ETRmax和对强光的耐受能力(IK)均有所升高.此外,低温预处理后段殖黄线藻超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的最大活性可达65.6和0.56 U/mg protein,均显著高于常温段殖黄线藻(P＜0.05).综上,低温预处理后的段殖黄线藻生长和代谢产物的积累更具优势,并且在低温适应性、光合效率及抗氧化应激方面的能力也得到显著提升.

目的:建立党参花药培养的植株再生体系,为党参单倍体育种提供基础研究.方法:以党参花药为外植体,研究不同浓度 2,4-D、低温预处理对愈伤组织诱导的影响,并对愈伤组织进行继代培养及体细胞胚胎发生再生植株研究.结果:确定了花粉发育时期与花蕾外部形态的相关性,药瓣比(花药长/花瓣长)为0.83～0.89 的党参花蕾,其花粉处于单核中央期或单核靠边期;党参花药愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+1.0～2.0 mg/L 2,4-D+蔗糖30 g/L+琼脂 8 g/L,诱导率为 37.50%～47.50%;低温预处理对愈伤组织诱导的效果不明显;合适的愈伤组织继代、胚状体分化再生植株的培养基分别为MS+0.5 mg/L 2,4-D+蔗糖30 g/L+琼脂8 g/L、MS+0.5 mg/L 2,4-D+椰乳100 g/L +蔗糖 30 g/L+琼脂 8 g/L.结论:初步建立了通过体细胞胚胎发生再生植株的党参花药培养技术体系,为党参新品种选育奠定了基础.

目的 观察大黄萃取液对兔心肺复苏(CPR)后脑组织中炎症因子表达水平的影响,探讨大黄萃取液保护日本大耳兔CPR后脑损伤的可能作用机制.方法 选择日本大耳白兔 60 只,按随机数字表法分为正常对照组、模型组、大黄萃取液组、亚低温处理组、大黄萃取液联合亚低温处理组,每组 10 只.另取 10 只备用.采用经皮电刺激心肌诱发心室纤颤(室颤)复制兔心搏骤停模型,心搏骤停 6 min后严格参照Utstein模式及时行CPR术.复苏有效后亚低温处理组和大黄萃取液联合亚低温处理组立即给予控温仪头部保护,温度维持在 33～36℃;正常对照组、模型组、亚低温处理组均给予 0.9%氯化钠溶液 10 mL·kg-1·d-1 灌胃;大黄萃取液组、大黄萃取液联合亚低温处理组则给予 5 mL·kg-1·d-1 大黄萃取液灌胃预处理.复苏有效后继续维持呼吸生命支持处理,2 h后处死兔取脑组织,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定脑组织中促炎因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和抗炎因子白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β1(TGF-β1)含量;采用蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定脑组织中白细胞三烯通路相关因子 5-脂氧合酶(5-LOX)、半胱氨酰白细胞三烯受体(CysLT1、CysLT2)的蛋白表达水平.结果 与正常对照组比较,模型组TNF-α、IL-6 含量和 5-LOX、CysLT1、CysLT2 的蛋白表达水平均明显升高[TNF-α(μg/L):355.70±42.67 比 197.99±55.78,IL-6(μg/L):196.80±54.38 比 90.06±30.33,5-LOX/GAPDH:0.84±0.02 比 0.32±0.02,CysLT1/GAPDH:0.91±0.02比0.19±0.02,CysLT2/GAPDH:0.90±0.02比0.32±0.02,均P＜0.05],而IL-4和TGF-β1含量均明显降低[IL-4(μg/L):6.12±1.72比17.11±2.90,TGF-β1(μg/L):101.52±27.10比220.85±59.80,均P＜0.05];与模型组比较,大黄萃取液组、亚低温处理组、大黄萃取液联合亚低温处理组TNF-α、IL-6 和 5-LOX、CysLT1、CysLT2 的蛋白表达水平均明显降低[TNF-α(μg/L):238.60±47.69,251.53±51.77,223.58±32.85 比 355.70±42.67,IL-6(μg/L):104.72±28.50,121.46±36.02,138.27±34.27 比 196.80±54.38,5-LOX/GAPDH:0.63±0.02,0.55±0.04,0.44±0.02 比 0.84±0.02,CysLT1/GAPDH:0.53±0.02,0.60±0.02,0.32±0.02 比 0.91±0.02,CysLT2/GAPDH:0.53±0.02,0.60±0.02,0.45±0.02 比 0.90±0.02,均P＜0.05],IL-4 和TGF-β1 含量均明显升高[IL-4(μg/L):7.85±2.42,7.69±2.32,11.86±2.87 比 6.12±1.72,TGF-β1(μg/L):201.75±55.91,200.07±46.82,218.62±51.25比 101.52±27.10,均P＜0.05].大黄萃取液组、亚低温处理组、大黄萃取液联合亚低温处理组TNF-α、IL-6、IL-4、TGF-β1 含量和CysLT1、CysLT2 的蛋白表达水平比较差异均无统计学意义,对 5-LOX蛋白表达水平的影响以大黄萃取液联合亚低温处理组较大黄萃取液组和亚低温处理组更显著.结论 大黄萃取液及亚低温脑保护治疗均能降低兔CPR术后脑组织中TNF-α、IL-4 含量及 5-LOX、CysLT1、CysLT2 的蛋白表达水平,二者效果相当,但联用不能增强这种作用.大黄萃取液与低温脑保护的这种保护作用可能与抑制 5-LOX白细胞三烯受体通路相关因子介导的炎症反应有关.

为了探讨外源ABA对火龙果苗活性氧(ROS)代谢的调控作用,阐明ABA提高火龙果耐寒性的机理,以'台湾6号'红心火龙果扦插苗为材料,用150 mg/L的ABA预处理后,进行10 d的低温胁迫(8 ℃/0 ℃,12 h/12 h),测定火龙果苗相关生理指标.结果表明,(1)低温胁迫后,火龙果苗出现水渍状斑点及萎焉黄化等寒害症状,寒害指数达0.52,而外源ABA处理使寒害指数降低至0.20.(2)低温胁迫使火龙果苗O2-产生速率和H2O2含量显著增加,丙二醛(MDA)含量及相对电导率(REC)也显著升高;外源ABA显著降低了 H2O2含量、MDA含量和REC.(3)火龙果苗SOD、POD、CAT活性在低温胁迫下显著增强,外源ABA使这些酶活性进一步增强.(4)低温胁迫使火龙果苗APX、DHAR、GR及MDHAR活性显著增加,AsA、GSH、DHA、GSSG含量也显著提升,但AsA/DHA和GSH/GSSG比值下降;外源ABA可显著提高APX、GR及MDHAR活性,增加AsA、GSH含量,并提高AsA/DHA、GSH/GSSG比值.可见,外源ABA处理能增加火龙果苗抗氧化酶活性和AsA-GSH循环的代谢活性,增强ROS的清除能力,减轻膜脂过氧化程度和电解质外渗,有效缓解火龙果苗受到的寒害.

目的 选择适合可抛弃便携式支气管镜的高水平消毒方法,探索三磷酸腺苷(ATP)生物荧光检测技术在消毒效果评价中的应用价值.方法 将 10 根全新的可抛弃便携式支气管镜随机分为对照组(n=1)及次氯酸组(n=3)、过氧乙酸组(n=3)、低温等离子组(n=3)3 个实验组.对照组不做任何处理;将各实验组支气管镜模拟临床吸痰操作后进行预处理并采用非完全浸泡方式洗消,次氯酸组、过氧乙酸组及低温等离子组分别采用次氯酸浸泡法、过氧乙酸浸泡法及低温等离子灭菌法进行消毒,消毒时间分别为 3、5、45 min.应用ATP生物荧光检测技术和细菌培养法评价消毒效果.结果 ATP生物荧光检测显示,次氯酸组、过氧乙酸组 5 轮次消毒后支气管镜管腔采样液的相对发光单位(RLU)值为 16～179,均＜200,两组的消毒合格率均为 100%;低温等离子组 2轮次消毒后支气管镜管腔采样液的RLU值为675～4532,均＞200,消毒合格率为0.细菌培养法检测结果显示,次氯酸组、过氧乙酸组支气管镜5轮次消毒后管腔采样液的菌落计数为0～6 cfu/件,消毒合格率为100%;低温等离子组支气管镜 2 轮次消毒后管腔采样液的菌落计数均＞20 cfu/件,消毒合格率为 0.与对照组相比,所有实验组每轮次消毒后支气管镜的图像质量、插入部远端弯曲度、负压吸引力均未见明显差异.结论 将可抛弃便携式支气管镜预处理后,使用次氯酸浸泡消毒法及过氧乙酸浸泡消毒法均能达到高水平消毒的目的,且不影响支气管镜的使用性能.ATP生物荧光检测技术与细菌培养法检测结果一致性高,可快速评判可抛弃便携式支气管镜的消毒效果.