目的:观察大鼠多系分化持续应激(Muse)细胞对肠上皮细胞间紧密连接结构的保护作用。方法:贴壁筛选法自大鼠(6只，购自中国食品药品检定院)股骨内分离大骨髓间充质干细胞(BMMSCs)，长时间胰蛋白酶孵育法(LTi)自BMMSCs中分离大鼠Muse细胞，流式细胞术标记如白细胞分化抗原(CD)29、CD34、CD90等及特异阶段胚胎抗原-3(SSEA-3)抗体；免疫组织化学法标记Nanog同框蛋白(NANOG)等抗体，定向诱导分化后标记α-甲胎蛋白(AFP)等鉴定其多能分化能力；重组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)建立体外肠上皮细胞损伤损伤模型；与Muse细胞共培养后检测细胞增殖能力及桥接蛋白-1(ZO-1)的表达水平及形态，组间比较采用 t检验。 结果:LTi后，大鼠BMMSCs中(2.57±0.57)%能够形成特征性的Muse细胞簇；流式细胞术结果表明，Muse细胞保留了BMMSCs表面分子特征，SSEA-3的阳性细胞比例[(73.2±1.4)%]显著高于BMMSCs[(2.3±0.3)%]；免疫荧光实验表明，培养的Muse细胞阳性表达NANOG等多能分化标记，定向诱导分化后分别能够表达AFP等分化标记；Muse细胞与TNF-α炎症损伤的肠上皮细胞共培养后，其增殖细胞比例[(40.06±1.04)%]高于损伤[(23.10±2.05)%]组的细胞( t＝12.79， P<0.05)及ZO-1蛋白的相对表达水平(0.55±0.03、0.27±0.01， t＝13.03， P<0.05)。 结论:大鼠Muse细胞具有更加理想的保护炎症损伤肠上皮细胞紧密连接结构的作用。

目的:探讨人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN）对子宫内膜腔上皮细胞极性的调控及对胚胎着床的影响。方法:通过实时荧光定量PCR、Western blotting、细胞免疫荧光实验比较非容受态子宫内膜腔上皮细胞HEC-1A与容受态子宫内膜腔上皮细胞RL95-2之间PTEN的表达及定位差异；PTEN干扰质粒转染HEC-1A细胞，检测紧密连接相关蛋白质表达水平，透射电子显微镜检测紧密连接结构，Transwell实验检测细胞运动能力，与绒毛膜癌细胞JAR共培养检测HEC-1A细胞与JAR细胞之间的黏附水平；向体外培养的HEC-1A细胞分别加入二甲基亚砜、17β-雌二醇、孕酮、17β-雌二醇+孕酮，检测卵巢激素对PTEN表达的影响。结果:相较HEC-1A细胞，RL95-2细胞 PTEN基因及蛋白质表达水平均显著降低（ P均=0.003）；PTEN主要定位于RL95-2细胞核，而在HEC-1A细胞中，PTEN主要定位于细胞质；与质粒载体对照组相比，敲降 PTEN基因后，HEC-1A细胞紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-4表达水平显著降低（ P<0.001， P=0.038， P<0.001），细胞间紧密连接长度降低（ P=0.046），迁移与侵袭能力增强（ P均<0.001），与JAR细胞之间黏附率增强（ P=0.016）；与空白对照组（二甲基亚砜组）相比，17β-雌二醇组、孕酮组及17β-雌二醇+孕酮组的PTEN蛋白表达水平均显著降低（ P均<0.001），17β-雌二醇+孕酮组的PTEN蛋白表达水平显著低于17β-雌二醇组和孕酮组（ P均=0.001），孕酮组与雌二醇组的PTEN蛋白表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:不同容受状态的子宫内膜细胞PTEN表达存在差异，雌二醇和孕酮可能通过抑制PTEN在子宫内膜的表达，进一步调控子宫内膜上皮细胞间紧密连接结构及细胞极性，从而增强子宫内膜容受性。

目的:探讨影响体外受精-胚胎移植（ in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）中单胚胎移植（single embryo transfer，SET）妊娠结局的因素。 方法:回顾性队列分析南方医科大学南方医院妇产科生殖医学中心2013年9月1日至2019年12月31日期间行SET共2734个周期的患者资料，根据胚胎移植时机的不同，分为第3日（day 3，D3）移植组（D3组）、第4日（day 4，D4）移植组（D4组）、第5日（day 5，D5）移植组（D5组）、第6日（day 6，D6）移植组（D6组）。分析对比患者不同年龄段、不同移植时机、不同胚胎评分的SET临床妊娠情况。结果:SET周期总临床妊娠率为39.8%（1098/2734），总活产率为30.5%（842/2734）。D3组、D4组、D5组、D6组的临床妊娠率分别为33.3%（264/793）、36.4%（142/390）、52.5%（492/937）、32.6%（200/614），活产率为25.6%（203/793）、30.5%（119/390）、40.9%（383/937）、22.3%（137/614），组间比较差异均有统计学意义（ P均<0.001）。D3组形态学评分8-细胞I级、7-细胞I级、8-细胞II级的胚胎总临床妊娠率［41.7%（207/496）］和总活产率［32.1%（159/496）］均高于其他非优质卵裂期胚胎［19.2%（57/297）， P<0.001；14.8%（441/297）， P<0.001］；D4组发生融合（融合期及早期囊胚）的胚胎的临床妊娠率［40.4%（134/332）］和活产率［34.0%（113/332）］均高于未发生融合的胚胎［13.8%（8/58）， P<0.001；10.3%（113/332）， P=0.001］；对于发育缓慢的囊胚，将其培养至D6囊胚移植和在D5移植2期囊胚的临床妊娠率［32.6%（200/614）比30.6%（22/72）］和活产率［22.3%（137/614）比27.8%（20/72）］相比差异均无统计学意义（ P均>0.05）。 结论:选择D5优质囊胚和D4融合期以上的桑椹胚进行单胚胎移植能在获得最佳妊娠结局的同时降低多胎妊娠发生率；对于整体D5发育缓慢的胚胎，继续培养至D6完全扩张囊胚再行移植，可能是一种改善妊娠结局的策略；对于卵裂期胚胎，采用8-细胞I级、7-细胞I级和8-细胞II级的优质胚胎移植标准更能确保D3单胚胎移植的成功率，获得满意的妊娠结局。

目的:分析不育症男性患者血清降钙素基因相关肽（CGRP）水平和体外受精胚胎培养结局的相关性。方法:对2019年7至10月于福建医科大学附属第一医院生殖医学中心就诊患者中随机抽样25例接受体外受精胚胎移植辅助生殖治疗的男性患者进行研究，以血清CGRP对数转化指标、受精方式、是否取精困难、年龄、不育年限、泌乳素等为自变量，以总受精率、正常受精率、D3优质胚胎率、囊胚形成率为因变量，运用Pearson相关分析和多元回归法，进行相关性分析。结果:Pearson相关分析显示，原发不育组中D3优质胚胎率与精子正常形态率相关（ r=0.537， P=0.048），囊胚形成率与精子密度相关（ r=0.760， P=0.002），CGRP对数与总受精率相关（ r=0.693， P=0.006）。在继发不育组中，总受精率及正常受精率与精子总数相关（ r=0.614， P=0.042； r=0.611， P=0.046）。多元回归分析显示，在继发不育组中，正常受精率与精子总数、血清CGRP对数转换指标、精子正常形态率之间有线性关系，且精子总数、CGRP对数转化指标与精子正常形态率的标准化回归系数分别为0.2、-72.9、6.8。 结论:男性的血清CGRP、精子总数和精子正常形态率共同影响正常受精率。

目的:探讨多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）患者血清及卵泡液氧化应激水平与卵子及胚胎质量的关系。方法:采用前瞻性随访研究分析2019年1月至2020年10月期间在浙江省人民医院生殖医学中心行体外受精治疗的67例PCOS患者（PCOS组）和66例单纯输卵管因素行体外受精的患者（对照组）的临床资料。采集患者取卵日血清及直径大于18 mm卵泡的卵泡液。比色法检测总抗氧化能力（total antioxidant capacity，TAC）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平，分析氧化应激指标与卵子质量、胚胎培养结局和移植后临床结局的相关性。结果:PCOS组血清SOD水平［（22.11±3.70）U/mL）］显著低于对照组［（25.70±3.32）U/mL， P<0.001］；PCOS组的卵泡液TAC水平［（0.62±0.05）mmol/L］、MDA水平［（16.64±3.85）nmol/mL］和血清MDA水平［（18.20±4.68）nmol/mL］显著高于对照组［（0.53±0.04）mmol/L， P<0.001；（13.74±2.28）nmol/mL， P<0.001；（15.37±5.34）nmol/mL， P=0.008］；PCOS组优质胚胎率［34.1%（341/1 000）］、着床率［49.5%（54/109）］、临床妊娠率［60.9%（39/64）］和活产率［50.0%（32/64）］均低于对照组［41.7%（306/733）， P=0.013；58.7%（54/92）， P=0.023；70.3%（45/64）， P=0.006；59.4%（38/64）， P=0.007］，差异均有统计学意义；卵泡液TAC水平与优质胚胎率呈显著负相关（ β=-1.83， P=0.012）；各氧化应激指标与临床结局无显著相关性。 结论:PCOS患者卵泡液TAC水平升高，过高的卵泡液TAC水平可能是胚胎质量低下的危险因素之一。

目的:研究应用胚胎外胚层发育(EED226)抑制组蛋白甲基化过度修饰是否具有抗癌活性并研究相关分子机制。方法:体外培养肝癌细胞株BEL-7402和SMMC7721，用不同浓度的EED226处理肝癌细胞4、6、8 d，细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活性；5 μmol/L的EED226或者二甲基亚砜(DMSO)处理肝癌BEL-7402和SMMC7721细胞株48 h，分别采用蛋白质印迹(Western blot)检测EED226对肝癌细胞组蛋白3上的第27位赖氨酸的三甲基化(H3K27me3)的表达水平的影响和定量反转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot检测EED226对肝癌细胞株的Bcl-2相互作用细胞死亡介导因子(Bim)和细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子1A(p21)的表达水平的影响。组间比较采用 t检验。 结果:EED226能强效抑制肝癌细胞株BEL-7402和SMMC7721的增殖，抑制效应呈现明显的时间、浓度依赖作用。处理8 d后，EED226在两个细胞株中的半数细胞活性抑制率(IC 50)分别为0.8 μmol/L和0.9 μmol/L。分子机制研究结果显示，2个肝癌细胞株分别经EED226处理与DMSO处理后H3K27me3的表达相比较显著下降。在BEL-7402和SMMC7721细胞中，EED226处理组H3K27me3的下游基因Bim和p21的mRNA相对表达水平高于DMSO组[1.00±0.15比5.67±1.53( t＝-5.266， P<0.01)，1.00±0.05比6.67±1.53( t＝-6.422， P<0.05)和1.00±0.25比6.30±1.50( t＝-5.968， P<0.05)，1.00±0.10比6.00±1.00( t＝-8.617， P<0.05)]，差异有统计学意义；相应的Bim和p21蛋白质水平均显著升高。 结论:表观遗传调控新型抗癌制剂EED226能够抑制肝癌细胞中组蛋白三价甲基化过度修饰，进而解除对Bim和p21表达的抑制，达到抑制肝癌细胞增殖，表明EED抑制剂具有一定的抗肝癌作用。

目的:探讨第3日（D3）4~5-细胞I、II及III级胚胎（4/I~5/III）囊胚的形成及移植对体外受精-胚胎移植（IVF-ET）临床结局的影响。方法:回顾性分析2016年1月至2019年2月期间在解放军联勤保障部队第901医院采用IVF-ET助孕患者共884个周期的临床资料。比较4/I~5/III组间囊胚形成差异；根据囊胚移植周期中D3卵裂胚的情况，将4/I~5/III胚胎来源的164个囊胚移植周期设为A组，247个优质胚胎来源的囊胚移植周期设为B组，比较两组间的临床结局并分析4/I~5/III组间不同细胞数和评级对临床妊娠率及流产率的影响。结果:4/I组的优质囊胚率（5.6%）高于4/II组（1.8%）（ P=0.003）及4/III组（0.6%）（ P<0.001）；5/I组优质囊胚率（8.3%）分别高于4/II组、4/III组及5/III组（1.6%）( P均<0.001)；5/II组优质囊胚率（8.4%）高于4/III组( P<0.001)。A组与B组在获卵数、成熟卵数、受精率、卵裂率、移植胚胎数、移植优质囊胚比、临床妊娠率、流产率、种植率及持续妊娠率差异均无统计学意义（ P>0.05）；A组D3优质胚胎率显著低于B组( P<0.001)；A组平均移植周期次数高于B组（ P=0.034）；4-细胞和5-细胞来源的囊胚移植临床妊娠率分别为51.6%和50.0%，流产率分别为15.2%和26.8%；I+II级与III级胚胎来源的囊胚移植临床妊娠率分别为53.6%和41.2%，流产率分别为22.4%和21.4%，组间差异均无统计学意义（ P>0.05）。 结论:4/I~5/III来源的囊胚能够获得与优质卵裂胚来源囊胚相近的临床结局；在4/I~5/III组间，细胞数和评级不会影响其囊胚的临床妊娠率及流产率，但5-细胞胚胎的囊胚形成率高于4-细胞胚胎。

目的:评估时差成像培养系统（time-lapse imaging，TLI）对小鼠胚胎发育潜能及组蛋白表观修饰的影响。方法:选择SPF级雌性ICR小鼠，促排卵后取成熟M Ⅱ卵子进行体外受精（ in vitro fertilization，IVF），获取成功受精的合子，分别在TLI和常规培养体系（standard incubators，SI）中进行体外培养，记录两组胚胎的2-细胞率、4-细胞率、8-细胞率、桑葚胚率、囊胚率和孵出率。通过Hoechst、OCT4及CDX2抗体进行免疫荧光染色，分别统计囊胚细胞总数、内细胞团数和滋养外胚层细胞数。两组囊胚移植入第2.5天代孕母鼠子宫，统计植入率及活胎率。通过对组蛋白H3第4位赖氨酸三甲基化（H3K4me3）、组蛋白H3第9位赖氨酸二甲基化（H3K9me2）和组蛋白H3第9位赖氨酸乙酰化（H3K9ac）的免疫荧光染色，评估两组胚胎组蛋白表观修饰情况。 结果:TLI组和SI组的早期胚胎发育情况、内细胞团和滋养外胚层细胞数、植入率和活胎率比较差异均无统计学意义（均 P>0.05）。两组囊胚的组蛋白H3K4me3、H3K9me2和H3K9ac的表达水平差异均无统计学意义（均 P>0.05）。 结论:利用TLI体外培养不会影响胚胎的发育潜能以及组蛋白修饰。

目的:检测体外培养不同级别早期人胚胎的培养液中氨基酸和肉碱水平，探讨基于质谱的微量分析技术用于评价胚胎体外发育潜能的可行性。方法:从2022年6至12月在临沂市人民医院生殖医学科接受体外受精-胚胎移植治疗的不孕夫妇中，收集女方年龄31.5（26.5，33.25）岁，且获卵数在8~20个的不孕夫妇，从中随机挑选30对不孕夫妇收取其第3天细胞胚的培养液共126份，依据其所对应的胚胎的形态级别分为优（ n=43）、中（ n=49）和差3（ n=34）组。通过液相色谱-质谱联用检测不同培养液中氨基酸和肉碱水平。通过方差分析比较不同组间氨基酸与肉碱水平的差异，通过Pearson相关分析氨基酸与肉碱水平的关联，偏最小二乘法分析氨基酸和肉碱水平与胚胎评估级别的关联。 结果:甲硫氨酸/苯丙氨酸（比值）在优胚、中胚和差胚3组间分别为3.09±1.67、4.00±1.19和4.99±2.04，差异有统计学意义（ F=7.09， P<0.05），优胚与中胚间（ t=-0.91， P<0.05）、优胚与差胚间（ t=-1.91， P<0.05）及中胚与差胚间（ t=-0.99， P<0.05）差异均有统计学意义。不同氨基酸之间，苯丙氨酸与酪氨酸的正相关性最强（ r=0.99， P<0.01）；不同肉碱之间，辛酰肉碱与葵酰肉碱比值（C 8/C 10）与（戊二酰肉碱+3-羟基己酰肉碱）/棕榈酰肉碱比值［（C 5DC+C 6OH）/C 16］的正相关性最强（ r=0.44， P<0.001）；偏最小二乘法拟合模型计算氨基酸/肉碱水平与胚胎级别相关的权重：亮氨酸（异亮氨酸）为2.22，精氨酸为1.99，缬氨酸/苯丙氨酸为1.65，甘氨酸为1.54，酪氨酸为1.21，（戊二酰肉碱+3-羟基己酰肉碱）/辛酰肉碱（C 5DC+C 6OH）/C 8为1.15。 结论:胚胎培养液中亮氨酸、精氨酸、缬氨酸/苯丙氨酸比值、甘氨酸、酪氨酸以及肉碱比值（C 5DC+C 6OH）/C 8与体外培养人早期胚胎级别显著相关。

疾病细胞模型是了解疾病发病机制以及筛选治疗药物的重要工具之一。从活体组织或者体液分离获取的原代细胞与患者基因型相同，是构建疾病细胞模型的重要细胞来源之一。尽管原代细胞具有诸多的优点，但是原代细胞分离费时费力且难以在体外培养扩增。干细胞具有持续增殖以及分化成其他细胞类群的潜能，相比于原代细胞，其在疾病细胞模型的构建更具有潜力。根据干细胞的来源不同，可将其分为成体干细胞和胚胎干细胞。目前已有胚胎干细胞用于构建疾病细胞模型的相关报道，但是该项技术涉及的伦理道德问题相对复杂，其发展前景并不理想。诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells，iPSCs)技术的出现解决了胚胎干细胞引起的人伦道德问题，为疾病细胞模型的构建提供了新方法。本文主要对诱导多能干细胞在神经退行性疾病、心律失常以及石骨症等人类遗传性疾病研究中的应用进展进行综述。